星形胶质细胞培养方法的改进

目的改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养方法,为研究星形胶质细胞的生物学作用提供实验模型。方法新生1～3d的大鼠,无菌操作下取双侧大脑皮质,机械吹打使细胞分散成悬液,差速粘附处理以去除成纤维细胞成分,细胞悬液原代培养9～14d,待细胞融合成单层并铺满瓶底后,4次消化传代,GFAP免疫组化染色鉴定星形胶质细胞。结果这种改进的星形胶质细胞培养方法,分离培养出星形胶质细胞,纯化率达95%以上。结论采用本实验改进的方法,培养的大鼠星形胶质细胞生长良好,纯度高,为后续实验对星形胶质细胞的生物学作用研究奠定实验基础。     

氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞凋亡和细胞周期的影响

目的研究不同浓度的氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨氯化镧所致神经损伤的机制。方法取新生大鼠大脑皮质进行原代星形胶质细胞分离和培养。在纯化及鉴定细胞后,用0,0.25,0.5,1.0 mmol/L氯化镧(LaC l3)处理24 h后,应用MTT法检测细胞活力,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放,应用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪法检测细胞凋亡和细胞周期。结果随着LaC l3暴露浓度的增加,细胞活力明显降低,LDH释放明显增加,细胞形态出现不同程度的损伤,细胞凋亡率从0.72%上升至11.6%(P<0.05),G1期细胞指数从78.35%上升至92.11%(P<0.05),S期细胞指数从6.19%下降至1.53%(P<0.05),G2期细胞指数从15%下降至7.09%(P<0.05),均呈现剂量-效应关系。结论氯化镧可诱发原代大鼠星形胶质细胞凋亡,改变细胞周期,从而产生神经毒性。 更多还原     

铅诱导的大鼠脑星形胶质细胞内质网应激反应

目的研究慢性铅暴露对原代培养的大鼠脑星形胶质细胞增殖、形态、细胞周期以及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated proteins,GRP78)、生长抑制DNA损伤诱导因子(growth arrest and DNA damage inducible gene,GADD153)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的影响,探讨脑星形胶质细胞中铅所诱导的内质网应激反应。方法出生1～4d Wistar大鼠脑星形胶质细胞原代培养并传代,分为对照组和染毒组。分别应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)、流式细胞术、倒置显微镜观察1.0μmol/L乙酸铅染毒细胞增殖率、细胞周期和形态的变化。利用Western blotting检测乙酸铅对星形胶质细胞GRP78、GADD153和CylcinD1表达的影响。结果染铅30d后细胞增殖率下降50.8%。染铅8、12、15和30d后,停留在G1期的细胞数由(58.64±1.75)%分别增加至(69.81±1.56)%、(70.80±1.27)%、(90.59±1.25)%和(80.9±1.11%)。1.0μmol/L乙酸铅呈时间依赖性促进GRP78表达,抑制CyclinD1表达,差异有统计学意义(P0.05),而GADD153的表达无显著性改变。结论铅可使原代培养的大鼠脑星形胶质细胞发生增殖抑制、细胞周期停滞、GRP78表达上调、CyclinD1表达下调等一系列应激反应。     

氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞内钙稳态和线粒体功能的影响

目的研究不同浓度的氯化镧对原代大鼠星形胶质细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位、线粒体及胞浆中细胞色素C的影响,探讨氯化镧所产生神经毒性的机制。方法取新生大鼠大脑皮质进行原代星形胶质细胞分离和培养。在纯化及鉴定细胞后,用0、0.25、0.5、1.0mmol/L氯化镧(LaCl3)染毒24h后,应用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,以荧光探针法测定细胞内钙([Ca2+]i)的变化,以流式细胞仪法测定线粒体膜电位,以化学比色法测定线粒体和胞浆中细胞色素C含量。结果与对照组相比,随着氯化镧暴露浓度的增加,细胞存活率从100%逐渐下降至53.31%,有统计学意义(P0.01),细胞内[Ca2+]i从(129.45±1.09)nmol/L逐渐升高至(224.84±5.51)nmol/L,有统计学意义(P0.05),细胞线粒体膜电位从(159.16±4.76)逐渐降低至(85.70±5.94),有统计学意义(P0.05),细胞线粒体中细胞色素C含量从(3.71±0.33)μmol/mg Pro逐渐降低至(2.55±0.08)μmol/mg Pro,有统计学意义(P0.05),胞浆中细胞色素C含量从(0.31±0.19)μmol/mg Pro逐渐升高至(1.72±0.31)μmol/mg Pro,有统计学意义(P0.05),并呈剂量-效应关系。结论氯化镧可致原代大鼠星形胶质细胞内钙稳态失衡,线粒体功能障碍,从而产生神经毒性。     

氯化镧对原代培养的星形胶质细胞的氧化损伤作用

目的研究氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)对原代培养的星形胶质细胞的氧化损伤作用。方法原代培养的星形胶质细胞经0、0.25、0.5、1.0 mmol/L LaCl3处理24 h后,采用MTT法和Alamar Blue还原法检测星形胶质细胞的存活率,并测定星形胶质细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxydase,GSH-Px)活性。结果各LaCl3处理组星形胶质细胞的存活率均显著低于对照组,且具有一定的剂量-反应关系。0.25 mmol/L LaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性显著低于对照组;0.5 mmol/L LaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性显著低于对照组和0.25 mmol/L LaCl3组;1.0mmol/LLaCl3组星形胶质细胞的GSH含量和GSH-Px活性分别降低至对照组的66%和43%,均显著低于对照组、0.25和0.5 mmol/L LaCl3组。此外,各LaCl3组星形胶质细胞的MDA含量均显著高于对照组,且随...     

鱼藤酮对大鼠星形胶质细胞CaMKⅡ基因和蛋白表达的影响

目的 研究鱼藤酮对大鼠原代培养星形胶质细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)活性的影响.方法 MTT法检测染毒星形胶质细胞活力,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i),采用RT-PCR技术检测CaMK Ⅱα和CaMK Ⅱβ mRNA的表达,Western-blot技术观察磷酸化CaMK Ⅱ蛋白活性的变化.结果 1.0和2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星形胶质细胞活力明显降低,染毒星形胶质细胞[Ca2 ]i呈浓度依赖性升高,CaMK Ⅱα亚基mRNA明显下调(P<0.05),CaMK Ⅱ蛋白活性显著降低(P<0.01).结论 鱼藤酮染毒星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,CaMK Ⅱ基因表达和蛋白活性显著降低,可能是其诱导神经细胞变性损伤的重要原因之一.     

镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究氯化镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响。方法原代培养的小鼠大脑皮质星形胶质细胞分别于终浓度为0(对照)、0.25、0.5、1.0 mmol/L氯化镧无血清培养基处理24 h后,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X基因(Bcl-2-associated Xgene,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组比较,0.25、0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均显著升高,0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bcl-2 mRNA的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒剂量的升高,小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。而各组小鼠星形胶质细胞caspase-8 mRNA的表达水平间比较,差异无统计学意义。结论氯化镧对星形胶质细胞产生毒作用的机制可能与氯化镧致促凋亡基因Bax和caspase-3、caspase-9表达升高以及抑凋亡基因Bcl-2表达下降有关。     

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6～8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。     

全氟辛酸对大鼠星形胶质细胞内游离钙离子的影响

目的 探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)对新生大鼠星形胶质细胞(astrocytes,As)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 星形胶质细胞取材于新生24 h内清洁级Wistar大鼠.传代细胞达到80％融合时进行染毒(PFOA终浓度分别为0、50、100、200、500μmol/L).以Fura-2/AM荧光探针法测定PFOA染毒1、2、3h后星形胶质细胞内的([Ca2+]i).结果 星形胶质细胞内的[Ca2+]i随着PFOA剂量的增加和染毒时间的延长而增加,染毒1h时500μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i为353.57 nmol/L,染毒2h时达到528.37 nmol/L,均高于对照组(161.86、155.03 nmol/L),差异均有统计学意义(P＜0.01).当染毒3h时,50、100、200、500 μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i分别为320.93、396.43、601.26、476.20 nmol/L,均显著高于对照组(164.62 nmol/L)(P＜0.01),同时也显著高于相同剂量染毒1h的[Ca2+]i (P＜0.01).结论 PFOA可通过增加新生大鼠星形胶质细胞内[Ca2+]i而影响中枢神经系统钙平衡.     

氟对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞的毒性作用

目的探讨NaF对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞细胞周期和琥珀酸脱氢酶(SDH)、5′-核苷酸酶(5′-NT)、酸性磷酸酶(ACP)活性的影响。方法体外分离纯化培养获得纯度达98%以上的大鼠大脑皮层星形胶质细胞(特异性抗GFAP免疫化学鉴定),分别用浓度为1、2和5mmol/LNaF对星形胶质细胞染毒12、24、48和72h,FCM检测细胞周期构成比,紫外比色法检测SDH、5′-NT、ACP活性。结果FCM分析细胞周期显示:1～5mmol/L剂量范围内,NaF能够以剂量依赖方式诱导星形胶质细胞周期由S期阻滞向G2/M期阻滞转变,随着时间延长变化更明显,超出这一范围则主要为subG1期细胞。紫外比色法检测结果表明,NaF抑制SDH、ACP活性,2mmol/L范围内对5′-NT活性影响无显著性(P0.1),增加剂量5′-NT失活;SDH、ACP活性与subG1DNA期细胞相对含量显著负相关(SDH:r=-0.84148,P0.05;ACP:r=-0.90416,P0.01)。结论NaF可诱导星形胶质细胞细胞周期阻滞及凋亡,并可抑制其SDH、5′-NT、ACP活性。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。     

上海市某医院骨科平均住院日影响因素分析

对上海市某医院2003年-2007年骨科出院病人的住院日描述性分析．2003年-2007年骨科的床位利用指数与平均住院日相关性分析．2003年-2007年骨科床位与医护比例分析．2007年骨科前10大病种平均住院目影响因素分别进行单因素相关性分析和多因素逐步回归分析（STATA软件）。通过对骨科10大病种住院日影响因素分析,术前等待天数、手术类型、是否输血分别对10个、9个和8个病种的住院目有影响。输血因素和手术类型是医院不可控、由病人的病情决定的,术前等待天数是管理因素,是最值得医院重视的影响因素。