貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定

目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。     

黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化,得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16。结论证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG和Protein G具有很高的亲和性,Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

两种抗体纯化方法对乙肝核心抗体酶标试剂盒质量的影响

采用亲和层析和离子交换层析两种方法从武汉抗乙肝病毒核心抗原鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株WHBC－3腹水中提纯抗－HBc单克隆抗体制备ELISA试剂盒。结果显示亲和层析法提纯的抗体收获率和抗体效价高于离子交换法，与Abbott ELISA试剂盒对照检测临床标本496份，两种纯化方法制备试剂盒的特异性为100％，符合率分别为99．80％和97．58％。提示采用亲和层析法纯化抗体所制备的ELISA试剂盒的特异性、敏感性和精密性均具有良好的临床应用价值。     

孕妇血清IgG抗体两种检测方法的一致性检验

目的观察微柱凝胶法和试管法检测孕妇血清IgG抗体结果的一致性,为临床提供准确、方便的检测方法。方法100例ABO血型均为O型孕妇,丈夫血型分别为A型,B型或AB型,分别采用微柱凝胶法和试管法检测其血清IgG抗体效价。结果微柱凝胶法比试管法检测凝集强度高1＋或2＋,两种检测方法结果一致性较好（χ2=184.640,P=0.000,Kappa指数=0.526）。结论微柱凝胶法检测孕妇血清IgG抗体,操作简单,重复性好,结果客观易判断,标准一致,值得临床推广。     

两种纯化大鼠毛囊干细胞方法的比较

目的:显微分离技术分别与流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法联合使用,比较不同方法的优缺点,以进一步探索毛囊干细胞的体外分选培养的条件.方法:显微分离鼠毛囊隆突部,消化成单细胞悬液.分别利用流式细胞仪和免疫磁珠分选毛囊干细胞.观察细胞形态并检测分选前后细胞的纯度,活性,回收率,进行免疫荧光鉴定.结果:两种方法均能分选出实验所需的毛囊干细胞.流式细胞仪分选细胞纯度高,活性稍弱;免疫磁珠法分选细胞纯度稍低但活性强.结论:流式细胞仪分选和免疫磁珠分选均能有效获取毛囊干细胞.显微分离技术可根据实验需求选择不同的分选方法搭配.     

几丁质亲和层析纯化蛋白的方法改良

目的探索亲和层析的方法,采用有效的方法提高几丁质树脂的使用效力和使用次数,降低成产成本使之更有利于提高产量。方法考察几丁质纯化的过程,探索出如何提高几丁质珠的重复使用次数,寻找出适合工业生产的纯化步骤。结果用高浓度的碱液进行洗柱,并延长浸泡时间到1h,可以使几丁质珠使用次数由原来的4～5次增加到7～8次。结论实验结果证实采用提高碱液浓度并延长浸泡时间可以增加几丁质树脂的使用次数,有利于指导实验室实验和药物开发。     

ELISA法检测脑囊虫病患者血清特异性IgG及IgG4的比较

目的：探讨IgG及IgG4在抗囊尾蚴感染中的作用。方法：用分子筛分离提纯猪囊尾蚴囊液粗抗原，用ELISA法检测未经治疗和经1－3，4－6和7－9疗程治疗的4组确诊脑囊虫病患血清中的总IgG和IgG4。结果：总IgG抗体在治疗前组和疗后组之间没有显性差异（P＞0．05），而IgG4在2组间有显性差异（P＜0．01）。总IgG在疗后3组之间没有明显差异（P＞0．05），IgG4抗体在疗后3组间则有显性差异（P＜0．01）。IgG4的特异性为98．4％，高于总IgG的94．0％。结论：IgG4不仅可用于囊虫病诊断，而且有望成为判定疗效的参考指标。     

总IgG和特异性IgG相关性初探

为探讨特异性ＩｇＧ和ＩｇＧ的相关性,用常规方法检测多份血清总ＩｇＧ,抗核抗体（ＡＮＡ）,抗双链ＤＮＡ抗体（ｄｓＤＮＡ）,抗盐水可提取核抗原（ＥＮＡ）抗体、巨细胞病毒（ＣＭＶ）特异性抗体、单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）特异性抗体及抗链球菌溶血素“０”抗体（ＡＳＯ）和抗“Ｈ”。结果显示：两种自身抗体（ＡＮＡ,抗ＥＮＡ抗体）及ＣＭＶ抗体各阳性组总ＩｇＧ水平明显高于各阴性组,有显著性差异;Ｓｍ和（或）ｄｓ     

两种方法测定孕妇血清IgG抗A（抗B）效价的比较

目的分析比较Biovue柱凝法与经典抗人球蛋白法测定孕妇血清IgG抗A(抗B)效价的方法学差异.方法两种方法随机测定妊娠4个月以后,妻O型、夫非O型者血样本,采用四格表卡方(χ2)检验,对其进行评价.结果分析测定94例样本,经统计学处理,其一致性Kappa值为0.50,χ2=22.04,P《0.005.结论Biovue柱凝法在测定IgG抗-A(抗-B)效价时,效价明显高于经典抗人球蛋白法,其升高不成线性关系.Biovue柱凝法是否适用于孕妇血清效价测定还有待于进一步探讨.     

食物不良反应患者血清中20种食物特异性IgG、IgG4的检测分析

目的 探讨食物特异性IgG（sIgG）和特异性IgG4（sIgG）检测在筛查食物不良反应患者问题食物的应用和临床意义。方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）对284例食物不良反应患者血清中20种食物sIgG抗体和sIgG4抗体进行平行检测。结果 食物sIgG总体阳性率55.8%,sIgG4总体阳性率44.0%,sIgG总体阳性检出率极显著高于sIgG4（P<0.01）。食物不良反应患者的sIgG和sIgG4的阳性率均明显高于健康对照组的sIgG和sIgG4（P<0.05）。小麦、大豆、花生、牛奶、鸡蛋、鳕鱼、榛子、腰果的sIgG和sIgG4检测结果的一致性较好。20种项目中,除蘑菇、花生外,其余18项食物的sIgG和sIgG4阳性率性别间差异均无统计学意义（P>0.05）。儿童组小麦、大豆、西红柿、牛奶、鸡蛋、鳕鱼、榛子、腰果和桃的sIgG阳性率均极显著高于青少年及成人组（P<0.05）,小麦、鸡蛋、牛奶、鳕鱼、腰果的sIgG4阳性率均极显著高于青少年及成人组（P<0.05）。结论 检测食物不良反应患者尤其是儿童血清中食物sIgG和sIgG4对于指导剔除问题食物,缓解食物不良反应症状具有较大的临床意义。     

支气管哮喘患者血清IgG1表达及临床意义

目的:观察IgG1在不同严重程度支气管哮喘患者外周血清中的表达水平,并探讨其与B细胞分化水平及肺功能之间的相关性。方法:观察健康志愿者、哮喘患者及其治疗后外周血清中IgG1水平变化;比较不同严重程度哮喘患者血清中IgG1水平;统计学分析IgG1与B细胞分化及肺功能指标(FEV1/FVC、FEV1/Pre)之间的相关性。结果:哮喘患血清中IgG1水平显著高于正常对照组(P<0.01),治疗后哮喘患者IgG1水平显著下降(P<0.05);轻度、中度及重度哮喘患者IgG1水平有显著差异;IgG1水平与外周血淋巴细胞中B细胞分化水平存在正相关,与肺功能指标FEV1/FVC、FEV1/Pre均存在负相关。结论:IgG1在哮喘中分泌增加,治疗后下降,可能参与了哮喘B细胞的细胞免疫功能,并可能反映患者气流受限程度及疾病严重程度。     

应用辛酸硫酸胺法提取小鼠腹水和血清中的IgG抗体

目的：从小鼠腹水和血清中纯化 IgG抗体。方法：首先用辛酸沉淀小鼠腹水和血清中的非免疫球蛋白,然后用固体硫酸胺提取抗人 T和 B细胞白血病单克隆抗体 (IgG1和 IgG2b)和多克隆 IgG抗体。结果：经 SDS-PAGE和活细胞免疫荧光法鉴定,获得了纯度高、活性好的抗体,腹水中单抗的回收率达 80％以上。结论：本方法是一种简单、价廉且有效的纯化小鼠腹水和血清 IgG抗体的方法。