糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D与白血病类型、CD24表达及细胞黏附功能的关系

糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D(GPI-PLD)在特定的情况下能通过特异性水解糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白中的肌醇磷酸酯键来调节细胞膜上的锚定蛋白表达。在人的造血细胞上有一些GPI锚定蛋白(如CD24、CD87等)属于黏附分子,在肿瘤细胞的转移中发挥重要作用。我们检测了急性白血病患者骨髓细胞GPI-PLD基因表达水平及其活性,探讨其与白血病类型,肝、脾、淋巴结肿大,CD24表达及白血病细胞对纤维连接蛋白(Fn)黏附率的关系。     

急性髓系白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D mRNA的表达与意义

本研究探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)在急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞中的表达及其意义。采用半定量RT-PCR和酶转化底物的百分率的方法检测急性髓系白血病初发组、难治复发组、缓解组与正常对照组骨髓单个核细胞GPI-PLD酶活性和mRNA表达,并比较它们之间的差异。结果显示:急性髓系白血病初治组骨髓单个核细胞GPI-PLD mRNA表达和GPI-PLD活性分别为1.86±0.32、(46.96±7.15)%;缓解组分别为1.26±0.29和(33.36±5.13)%;难治复发组分别为1.79±0.19和(44.31±7.22)%;而正常对照组分别为1.27±0.23和(35.38±5.15)%。初治组和难治复发组的GPI-PLD活性与mRNA表达均明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(p0.01);而缓解组与正常对照组之间比较,差异无统计学意义(p0.05)。结论:GPI-PLD活性和mRNA表达水平变化一致;初治组和难治复发组急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞GPI-PLD活性与mRNA表达水平明显高于正常组。GPI-PLD是否在白血病的发生、发展过程中发挥一定作用,有待进一步研究。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D对髓系白血病骨髓细胞黏附功能的影响及其机制(英文)

背景: 据作者查新检索medline,cnki等数据库,鲜见国内外有关体外研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)对白血病细胞黏附功能影响方面的报道.目的:观察GPI-PLD对髓系白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制.设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2004-01/06在湘雅医院血液实验室完成.对象:骨髓标本来自于髓系白血病患者,由湘雅医院血液科提供.方法:利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶做底物,通过TX-114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPI-PLD活性,利用1,10-二氮杂菲抑制GPI-PLD的活性,实验分2组:处理组加二氮杂菲,使其终浓度为1 mmol/L,对照组加入等量的PBS.用MTT方法检测处理组和对照组骨髓细胞对纤维连接蛋白的黏附率、免疫组织化学方法检测GPI-锚定蛋白CD24的表达.主要观察指标:髓系白血病细胞GPI-PLD活性,细胞黏附率及CD24的表达.结果:1 mmol/L 1,10-二氮杂菲作用髓系白血病骨髓单个核细胞5 h细胞的GPI-PLD活性较对照组降低[(5.40±2.96)%,(42.08±7.21)%,P < 0.01];GPI-PLD的活性被抑制后处理组细胞的黏附率较对照组增加[(61.19±29.14)%,(49.78±26.73)% ,P < 0.01],同时CD24的表达率上调[(18.5±11.14)%,(16.02±9.68),P < 0.01].结论:降低GPI-PLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤维连接蛋白的黏附率,同时骨髓单个核细胞上GPI-锚定蛋白CD24表达增强.     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)对髓性白血病骨髓细胞黏附功能的影响及机制探讨

为了探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPIPLD)对髓性白血病骨髓单个核细胞黏附功能的影响及其机制,利用具有完整糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX114分相,定量检测骨髓单个核细胞中GPIPLD活性,用1,10二氮杂菲抑制GPIPLD的活性,用MTT方法检测抑制组和非抑制组骨髓细胞对纤连蛋白的黏附率,用免疫组织化学方法检测GPI锚定蛋白CD24的表达。结果显示:1,10二氮杂菲(1mmol/L)作用骨髓单个核细胞5小时可使细胞的GPIPLD的活性由(42.08±7.21)%降为(5.4±2.96)%,GPIPLD活性被抑制后细胞的黏附率增加,由(49.78±26.73)%升为(61.19±29.14)%,与此同时,CD24的表达率上调,由(16.02±9.68)%升为(18.5±11.14)%。结论:降低GPIPLD活性能增加骨髓单个核细胞对纤连蛋白的黏附率,与此同时,骨髓单个核细胞上GPI锚定蛋白CD24的表达增强。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达在肺癌诊断中的意义

目的:探讨肺癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(CPI-PLD)的活性变化,为肺癌患者预后判断提供依据.方法:利用具有糖基化磷脂酰肌醇(GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过TX-114分相,定量检测外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD活性,并采用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中GPI-PLDmRNA水平,分析其表达量与肺癌之间的关系.结果:肺癌患者外周血单个核细胞和血浆中GPI-PLD酶活性分别为(24.15±2.33)%和(29.71±1.32)%,明显低于正常人(P＜0.001),且肺癌患者单个核细胞GPI-PLD活性仅为其血浆中酶活性水平的81.29%,两者之间差异有显著性(P＜0.05);肺癌患者外周血单个核细胞中GPI-PLD mRNA表达平均值为0.44±0.11,明显低于正常人(P＜0.001).结论:GPI-PLD在肺癌患者中的活性及表达明显降低,有可能作为肺癌预后判断的指标之一.     

急性髓系白血病中uPA和uPAR的表达及意义

目的观察急性髓系白血病人骨髓单个核细胞uPAR（CD87）的表达及血浆uPA的水平,并探讨其临床意义。方法用ELISA法测定22例急性髓系白血病患者（观察组）及34例良性血液病患者（对照组）血浆中uPA表达水平,用流式细胞学技术测定骨髓单个核细胞uPAR水平,比较两组之间的表达差异。结果血浆中uPA水平和骨髓单个核细胞uPAR水平急性髓系白血病组均高于良性血液病组,差异具有显著性（P〈0.05）;pearson相关分析显示uPA表达水平及uPAR水平之间存在正相关性（观察组r1=0.614,对照组r2=0.921;P〈0.05）。结论急性髓系白血病患者血浆uPA水平及骨髓单个核细胞uPAR表达均升高,二者具有协同表达关系,联合检测对于急性髓系白血病的病情监控和预后分析有临床指导意义。     

自噬相关基因Beclin1在骨髓增生异常综合征中的表达及其意义

本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞中自噬相关基因Beclin1的表达水平,并探讨其临床意义。收集2009年1月至2012年8月我院收治的40例MDS、14例非恶性贫血及25例急性髓系白血病(AML)骨髓液单个核细胞。采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测这些标本Beclin1 mRNA表达水平情况,Western-blot技术检测该基因蛋白表达水平,并对Beclin1 mRNA表达水平与临床预后进行相关性分析。结果显示:低危MDS及非恶性病贫血组患者Beclin1 mRNA及蛋白表达水平高于急性髓系白血病组(P<0.01),且MDS患者中Beclin1表达水平与WHO分型预后积分系统(WPSS)呈负相关(r=-0.495)。结论:MDS患者Beclin1基因表达水平较AML患者增高且与WPSS评分呈负相关,Beclin1的表达与MDS患者的预后有关。     

Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

为了探讨急性白血病（AL）患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义，对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞，用RT—PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达，并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明：免疫组织化学和RT—PCR分析显示。28例急性髓细胞白血病（AML）中的15例，18例急性淋巴细胞白血病（ALL）中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降，同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。结论：急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损，可能在白血病发病中具有重要作用。     

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。     

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景：Toll样受体9（TLR9）、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。目的：测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。方法：从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。结果与结论：在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9mRNA表达高于正常对照组（P〈0.01）,化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义（P〉0.05）;各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组（P〈0.01）。TLR9mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。     

急性白血病类胰蛋白酶与血管内皮生长因子的相关性研究

为了探讨类胰蛋白酶在急性白血病血管新生中的作用,应用免疫细胞化学方法检测了61例急性白血病患者白血病细胞的类胰蛋白酶及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并对二者之间的关系进行了分析.结果表明：51例急性髓细胞白血病中（M13例,M215例,M320例,M45例,M58例）有15例患者的白血病细胞类胰蛋白酶表达为阳性,阳性率为29.4%,其中包括M11例,M2 7例,M3 5例,M52例.10例急性淋巴细胞白血病患者类胰蛋白酶表达均为阴性.急性髓细胞白血病患者类胰蛋白酶阳性的细胞数与其年龄、外周血白细胞数、外周血和骨髓原始细胞数以及中性粒细胞过氧化物酶之间没有相关性.急性髓细胞白血病患者中有41例VEGF表达阳性（80.4%）;急性淋巴白血病患者有3例VEGF表达阳性（30%）.急性髓细胞白血病M2亚型的患者中,类胰蛋白酶与VEGF的表达均明显增高且二者之间具有显著相关性（r=0.65,P＜0.05）.结论：类胰蛋白酶可以作为急性髓系白血病的特异性标记物,它可能参与了急性髓细胞白血病M2亚型的血管新生.     

CD56在急性白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨CD56在急性白血病中的表达情况及意义。采用多色流式细胞术（FCM）对70例急性白血病患细胞表面CD56及其它白细胞分化抗原表达进行了分析，结果表明，70例中有16例（22．86％）表CD56，急性髓性白血病（AML）的CD56阳性表达率（15／31，48．39％）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）（1／35，2．86％）（P＜0．01），CD56在AML各亚型中表达也有差异，AML－M0，－M1和－M2中阳性率（11／15）明显高于AML－M3，－M4和－M5（4／16）P＝0．013）。15例CD56^ 的AML病例中表达HLA－DR13例（41．94％），两呈明显正相关（r=0.439,n=31,P=0.014,结论：CD56主要在AML中表达，对AML的诊断，预后判断及微小残留病的检测具有重要意义。     

Effect of glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D gene expression levels on complement mediated killing of leukemic cells in patients with chronic myeloid leukemia

BACKGROUND: To explore the disparity in glycosylphosphatidylinositol phospholipase D (GPI-PLD) expression levels between mononuclear cells of chronic myeloid leukemia (CML) and healthy controls, and clarify the certain relation of GPI-PLD expression levels to complement mediated killing of leukemic cells. METHODS: Competitive RT-PCR was used to detect quantitatively the GPI-PLD mRNA in mononuclear cells. GPI-anchored CD55 and CD59 were analyzed by flow cytometry and Western blotting. Complement-mediated lysis was assessed by staining method of trypan blue dye. RESULTS: The GPI-PLD activities and their mRNA copies in CML patients were significantly lower than those in healthy adults. At the tenth day after treatment with bone marrow transplantation (BMT), the GPI-PLD activities and copies of GPI-PLD mRNA almost recovered to the expression levels of healthy subjects. The expression of both CD55 and CD59 in CML patients were significantly higher than those in healthy subjects. After treatment with insulin (10(-7) mol/l) plus glucose (16.7 mmol/l) for 48 h, the cellular GPI-PLD activity and mRNA levels in K562 cells derived from the leukemic cells of a CML patient all increased about 3-fold. Simultaneously, the GPI-anchored CD55 and CD59 on cell surfaces were released into the culturing medium, and the killing rate of complement-mediated K562 cell lysis increased almost 3 times. CONCLUSION: The decreased GPI-PLD expression may reduce the release of GPI-anchored CD55 and CD59 in leukemia cells and finally decrease complement mediated killing of these cells in chronic phase of CML.     

AML1/ETO9a异构体在M2型急性髓系白血病中表达的研究

目的研究AML1／ETO9a异构体在急性髓系白血病M2型（AML—M2）中的表达。方法应用R带染色体核型分析，结合RT—PCR技术检测各型白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、白血病细胞系及正常人骨髓中AML1／ETO融合基因和AML1／ETO9a异构体的表达。结果在30例初诊AML-M2中有15例AML1／ETO9a异构体表达阳性，同时在20例AML—M2完全缓解患者、18例非M2型急性白血病患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者、3例MDS患者、3个白血病细胞系（NB4、KG-1、K562）及5份正常骨髓标本中均未检测到AML1／ETO9a异构体。15例AML1／ETO9a异构体阳性患者中有13例同时具有AML1／ETO融合基因及t（8；21），2例仅表达AML1／ETO9a异构体，AML1／ETO融合基因及t（8；21）均未检测到。结论AML1／ETO9a异构体可能与AML—M2相关，并可能与AMLI／ETO融合基因共同参与白血病的发生。     

血小板生成素及其受体在急性白血病中的改变

目的 探讨血小板生成素（Ｔｐｏ）受体Ｃ－ｍｐｌ在急性白血病中的表达主其意义以及重组人Ｔｐｏ对急性白血病细胞增殖的影响。方法 采用半定量逆转录,聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测４３例急性白血病患骨髓单个核细胞Ｃ－ｍｐｌ基因的表达,用ＭＴＴ法研究重组人Ｔｐｏ单独或联合某些造血生长因子对急性白血病细胞增殖的影响。结果 ３５例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患中有２２例表达Ｃ－ｍｐｌ,各ＦＡＢ亚型无均有表     

染色体t(8;21)急性髓系白血病cCD79a/cCD22的异常表达

目的报道新发现的4例cCD79a／cCD22异常表达的t（8；21）急性髓系白血病（AML）。方法分析4例患者的细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学（MICM）分型及临床特征。结果伴cCD79a／cCD22表达的t（8；21）（q22；q22）的AML特点：①无显著的性别差异；②发病年龄较轻；③可有髓外浸润；④外周血白细胞计数不增高；⑤骨髓细胞形态学显示为粒细胞白血病，且原始细胞显著增多；⑥免疫表型均为B淋巴系和髓系共表达，CD34表达阳性，且为高表达；⑦染色体改变除t（8；21）（q22；q22）外，亦常见性染色体缺失及复杂染色体改变；⑧AML1／ETO融合基因检测均阳性；⑨对兼顾髓系和淋巴系的联合治疗方案反应较好。结论t（8；21）AML患者易伴有B细胞表型共表达。     

初诊白血病患者溶血磷脂酸酰基转移酶基因表达研究

本研究旨在检测白血病患者溶血磷脂酸酰基转移酶-β（lysophosphatidic acid acyltransferase β,lpaat β）mRNA的表达水平,为lpaatβ靶向治疗在白血病中的应用提供理论基础。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者lpaatβ mRNA的相对表达水平,分析其在各型白血病中的表达情况。结果,急性白血病（AL）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）;急性髓系白血病（AML）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）,且lpaatβ mRNA的表达水平与外周血白细胞计数（WBC≥20.0×109/L）、白血病细胞CD34表达呈正相关（p〈0.05）,与患者的髓外侵犯无明显相关性（p〉0.05）。除外急性早幼粒细胞白血病（APL）病例之外,lpaatβ mRNA的表达水平与AML患者的化疗敏感性呈负相关（p〈0.05）。慢性髓系白血病（CML）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）患者lpaatβ mRNA的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：AML、CML患者均存在着lpaatβ基因的超高表达。AML细胞产生的lpaatβ可能在AML细胞的异常增殖及化疗耐药中起着重要作用。     

巨核细胞系抗原表达在急性髓系白血病中的意义

目的探讨急性髓系白血病（ＡＭＬ）巨核细胞系抗原（ＭＫ）表达与临床、生物学特征的关系。方法采用流式细胞仪间接免疫荧光法对成人初治ＡＭＬ患者２１１例进行检测。结果２７例（１２８％）表达ＭＫ;ＡＭＬ亚型中以杂合急性白血病（ＨＡＬ）和急性单核细胞白血病（Ｍ５）表达最高,分别为４５．５％和２４．１％。ＭＫ表达与ＣＤ３４抗原、外周血高白细胞数、多药耐药糖蛋白（Ｐｇｐ）高度相关（Ｐ＜０．０５）,与染色体核型无关。ＭＫ＋ＡＭＬ的完全缓解（ＣＲ）率为３３．３％,明显低于ＭＫＡＭＬ的７１９％。结论巨核细胞系抗原表达可能起源于较早期造血干细胞的恶性转化,可作为临床判断疗效及预后的参考指标之一。     

骨髓增生异常综合征PTEN基因表达和Akt磷酸化水平的相关性研究

目的 了解骨髓增生异常综合征（MDS）PTEN基因表达和Akt磷酸化（p-Akt）水平之间的关系，探讨MDS演进、高风险转归为急性髓系白血病的机制。方法 采用RT-PCR检测白血病细胞株K562、Jurkat，65例MDS患者骨髓细胞PTENmRNA表达情况。同时用流式细胞术检测Jurkat、HL-60细胞和30例MDS患者骨髓细胞p-Akt水平。并以21份正常人骨髓标本为健康对照。结果 ①PTEN基因阳性对照K562细胞呈阳性表达，阴性对照Jurkat细胞无表达。65例MDS患者中有27例表达阳性，阳性率41．5％，与健康对照组（85．7％）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。RAEB（39．1％）、RAEB—t（27．8％）和MDS—AML（12．5％）PTEN阳性率均低于RA／RARS（75．O％）组，各亚型组之间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。②阳性对照Jurkat细胞高表达p-Akt（86．9％），阴性对照HL-60细胞p-Akt阴性。30例MDS患者p-Akt水平升高（1．35％～58．23％），与健康组（0．54％～2．34％）比较差异有统计学意义（P〈0．01），且随着原始细胞比例增高p-Akt水平升高。MDS患者PTEN基因表达缺失率与p-Akt阳性率呈显著正相关（r=0．93，P〈0．01）。结论 MDS患者PTEN基因表达缺失是导致p-Akt高表达的关键因素之一，并且可能加速MDS病程进展及转化为急性髓系白血病。