积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子及RhoA/ROCK-Ⅰ调控信号的影响

 目的 研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）的影响及RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路在其中的作用。方法 分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用积雪草苷300 μg·mL-1及RhoA的下游效应器Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对实验细胞进行干扰实验。分为对照组、积雪草苷组、Y-27632组、积雪草苷+ Y-27632组。运用荧光定量PCR（SYBR Green）及免疫荧光细胞化学的方法检测各组瘢痕成纤维细胞中RhA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA与蛋白表达。结果 积雪草苷300 μg·mL-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达,与对照组比较具有统计学意义（P＜0.05）;Y-27632能阻碍积雪草苷的作用,积雪草苷（300 μg·mL-1）+ Y-27632组,CTGF的mRNA与蛋白表达明显高于单纯积雪草苷组（P＜0.05）,与对照组及Y-27632组比较无显著性差异（P＞0.05）;Y-27632组与对照组比较RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达没有统计学意义。结论 积雪草苷300 μg·mL-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达;而且可通过RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路抑制瘢痕成纤维细胞中CTGF mRNA与蛋白表达。这可能是积雪草苷治疗瘢痕的作用机制之一。     

基于β-arrestin1沉默探讨益肾达络饮对EAE小鼠Rho/ROCK信号通路的影响

目的 基于β-抑制蛋白（β-arrestin1）基因沉默,研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠Ras同源基因家族蛋白（Rho）/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响。方法 60只C57BL/6雌性小鼠随机平均分为空白组、模型组、病毒组、益肾达络饮组（中药组）、病毒加益肾达络饮组（病毒加中药组）、醋酸泼尼松组（激素组）6组。除空白组外,每只小鼠均制备EAE模型,于免疫第4天病毒组、病毒加中药组每只小鼠尾静脉注射腺相关病毒（AAV）病毒溶液150 μL（1×10¹¹ vg·mL^-1）。造模的第8天给药,空白组、模型组、病毒组给予生理盐水10 mL?kg^-1,激素组给予醋酸泼尼松混悬液（3.9 g?kg^-1）,其他组给予益肾达络饮（20 g?kg^-1）,连续给药14 d并每日进行称重评分。免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分;苏木素-伊红（HE）染色测定小鼠脑组织、脊髓组织的炎症反应和病变位置;蛋白免疫印迹法（Western blot）测定EAE小鼠脊髓组织及脑组织中β-arrestin1、RhoA、ROCKⅠ的蛋白表达。结果 与模型组比较,病毒组、病毒加中药组的神经功能评分显著降低（P<0.01）,中药组明显降低（P<0.05）。HE结果显示,模型组中枢神经系统（CNS）存在明显炎症反应,其他各组与模型组比较均有不同程度的减轻。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组小鼠脊髓组织中β-arrestin1、RhoA及ROCKⅠ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,病毒组、中药组、病毒加中药组、激素组小鼠脊髓组织中β-arrestin1、RhoA及ROCKⅠ蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠脑组织中β-arrestin1、RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,病毒组、中药组、病毒加中药组、激素组小鼠脑组织中β-arrestin1蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）;病毒组、中药组小鼠脑组织中RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）;病毒加中药组和激素组小鼠脑组织中RhoA、ROCKⅠ蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。结论 益肾达络饮可以改善EAE小鼠的临床症状,改善CNS的炎症反应,其机制可能为益肾达络饮抑制CNS中β-arrestin1的表达,从而降低Rho/ROCK信号通路中RhoA、ROCKⅠ蛋白的表达,并且益肾达络饮与抑制β-arrestin1的基因表达可能存在协同效果。     

针刺人迎穴调控RhoA/ROCK1通路改善自发性高血压大鼠血压及血管损伤的机制研究

[目的]基于RhoA/ROCK1通路探讨针刺人迎穴对自发性高血压大鼠血压及血管损伤的作用机制。[方法] 11周龄雄性自发性高血压大鼠,随机分为模型组、针刺组和西药组,选取同周龄雄性Wistar大鼠作为正常组。针刺组和西药组分别给予针刺人迎穴和厄贝沙坦灌胃给药。观察大鼠血压变化情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和ROCK1的表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测内皮素-1(ET-1)和人血小板衍化生长因子-AA(PDGF-AA)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测颈动脉组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)和RhoA的定位及表达水平。[结果] 1)与模型组比较,西药组和针刺组在治疗3周,治疗6周时的平均动脉压有降低(P＜0.05)。2)与模型组比较,西药组和针刺组在治疗6周时ET-1和PDGF-AA的mRNA和蛋白的表达均降低(P＜0.05)。3)与模型组比较,西药组和针刺组在治疗6周时RhoA、AngⅡ和ROCK1的蛋白表达均降低(P＜0.05),针刺组在治疗6周时MMP2的蛋白表达降低(P＜0.05)。4)与西药组比较,针刺组在治疗6周时AngⅡ和ROCK1的蛋白表达均降低(P＜0.05)。[结论]针刺人迎穴可能通过下调颈动脉RhoA/ROCK1通路来改善自发性高血压大鼠血压及血管损伤。     

牛皮消中1个新C21甾体化合物

目的 研究牛皮消Cynanchum auriculatum的化学成分及其活性。方法 采用多种柱色谱对牛皮消乙醇提取物进行分离纯化;通过波谱数据对化合物进行结构鉴定;采用SRB法对所得化合物的进行细胞毒性测试。结果 从牛皮消的乙醇提取物中分离得到2个甾体类化合物,分别鉴定为3-甲酰氧基-萝藦苷元（1）和萝藦苷元（2）。结论 化合物1为新化合物,活性测试结果表明2个甾体化合物没有明显的细胞毒活性（IC₅₀>10 μmol/L）。     

填精通络方对糖尿病性勃起功能障碍大鼠组织RhoA/Rho信号通路相关因子表达的影响＊

目的 通过观察填精通络方治疗糖尿病性勃起功能障碍大鼠勃起功能的疗效及其对RhoA/Rho信号通路的影响，探讨填精通络方在治疗糖尿病性勃起功能障碍的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、对照组和填精通络组，每组10只。除正常组外，其余各组以腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，任意时间血糖 > 16.7 mmol/L为糖尿病成模标准，然后用阿朴吗啡阴茎勃起实验筛选糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型。成模后，对照组予以他达拉非灌胃，填精通络组予以填精通络方灌胃，正常组与模型组分别灌服等体积蒸馏水，干预4周后评估各组大鼠的勃起功能，HE染色法观察阴茎海绵体组织的病理变化，并采用Real-time PCR、WB的方法分别检测阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA及蛋白的表达。结果 对照组和填精通络组阴茎勃起次数显着增加，潜伏期缩短（P < 0.01和P < 0.05）。与正常组相比，模型组、对照组和填精通络组RhoA，ROCK1和ROCK2的mRNA水平显着升高（P < 0.01和P < 0.05）。与模型组相比，对照组和填精通络组RhoA，ROCK1和ROCK2 mRNA的表达显着降低（P < 0.01和P < 0.05）。结论 填精通络方可以改善糖尿病性勃起功能障碍大鼠的勃起功能，其具体机制可能是通过下调RhoA/Rho通路中的RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA及蛋白表达来实现的。     

毛萼紫薇化学成分研究

 目的 研究毛萼紫薇（Lagerstroemia balansae Koehne）的化学成分。方法 采用各种色谱技术分离纯化化合物,并通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 从毛萼紫薇茎的95%乙醇提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为ficuscarpanoside A (Ⅰ)、反式-阿魏酸二十八烷酯 (trans-ferulic acid octacosyl ester, Ⅱ)、lyoniside (Ⅲ)、gomisin N (Ⅳ)、正-三十烷醇 (n-triacontanol,Ⅴ)、β-谷甾醇 (β-sitosterol,Ⅵ) 和胡萝卜苷 (daucosterol, Ⅶ)。结论 以上化合物均为首次从该植物中获得,其中化合物Ⅰ～Ⅴ为首次从紫薇属植物中分离得到。同时本实验还在2D-NMR的基础上对化合物Ⅰ在DMSO-d₆中的1H-NMR和13C-NMR数据以及化合物Ⅰ在DMSO-d₆中的1H-NMR数据进行了全归属,并纠正了文献中化合物Ⅲ 13C-NMR数据的错误归属。     

HPLC测定祖师麻不同部位紫丁香苷的含量

目的：研究匙羹藤Gymnema sylvestre（Retz.）Schult叶中化学成分。方法：应用硅胶、ODS柱色谱和制备HPLC等方法进行分离纯化,应用化学方法结合¹H-NMR和¹³C-NMR波谱技术鉴定化合物结构,测定化合物的体外蛋白非酶糖基化抑制活性,其中化合物 4 在50 mg·L^-1时有较好抑制作用,抑制率为42.11%。结果：从匙羹藤叶中分离得到5个化合物,分别为灰毡毛忍冬皂苷乙（1）、灰毡毛忍冬皂苷甲（2）、lonimacranthoide Ⅲ（3）、朝霍定C（4）、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基-常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃葡萄糖基酯（5）。评价了化合物1~5的体外蛋白非酶糖基化抑制活性。结论：化合物 1~5均为首次从本属植物中分离得到,体外活性筛选表明化合物4在高浓度时具有一定的蛋白非酶糖基化抑制作用。     

淫羊藿苷通过调节RhoA/ROCK信号通路改善AD神经元和树突损伤的机制

目的 观察淫羊藿苷对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠Ras同源基因家族成员A（RhoA）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）信号通路的作用，并探讨其改善神经元和树突损伤的作用机制。方法 通过对大鼠双侧侧脑室注射β样淀粉蛋白1-42（Aβ_1-42， 2.5 g·L^-1）建立AD模型，并将大鼠分为模型组，淫羊藿苷低、中、高剂量组（0.03、0.06、0.09 g·kg^-1），另设空白组。空白组和模型组按10 mL·kg^-1的剂量灌胃等体积的生理盐水。采用Morris水迷宫评估大鼠的认知功能。采用尼氏染色观察大鼠海马CA1区病理形态。采用高尔基染色观察大鼠海马CA1区树突棘密度和树突长度。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、RhoA、ROCK1和ROCK2的mRNA表达水平。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著增加（P<0.01），穿越平台次数和目标象限驻留时间显著减少（P<0.01）。与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠逃避潜伏期减少（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数和目标象限驻留时间增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度显著减少（P<0.01）。与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量、树突棘密度和树突长度增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，淫羊藿苷中、高剂量组大鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01）。结论 淫羊藿苷改善AD认知功能、神经元和树突损伤可能与抑制RhoA/ROCK信号通路相关。     

滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达

目的 从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达。方法 根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta（DE3）中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论 克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。     

稳定表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建

 目的 建立能稳定表达人有机阳离子转运体1（human organic cation transporter1, hOCT1）野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮（Madin-Darby canine kidney, MDCK）细胞模型。方法 从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1_P341L,hOCT1_M420del两个突变型基因,构建表达质粒pcDNA3.1(+)-hOCT1,pcDNA3.1(+)-hOCT1_P341L,pcDNA3.1(+)-hOCT1_M420del。将质粒转染MDCK细胞,通过G418筛选获得抗性克隆,并通过hOCT1的荧光底物(4-二甲氨基苯乙烯基)-N-甲基吡啶 (ASP+)筛选得到具有较高活性的MDCK-hOCT1细胞。经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及经典底物N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的摄取实验,鉴定筛选得到的单克隆细胞株hOCT1 mRNA的表达及功能。结果 本实验获得的hOCT1野生型及2个突变体细胞模型与转染空载体的MDCK细胞相比,其 hOCT1 mRNA表达量显著增高,对经典底物MPP+的摄取为转染空载体细胞的12.5,13.7,12.0倍,hOCT1抑制剂可显著抑制细胞对MPP+的摄取。结论 建立的细胞模型可用于hOCT1抑制剂及底物的筛选。     

血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

 目的 利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂。方法 使用20 μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而评价待测样品的抑制活性。模型建立的体系优化包括如下实验步骤：酶浓度及反应时间优化,ATP和底物米氏常数测定,质控实验包括反应体系信噪比实验、抑制剂SU5416的IC₅₀测定,Z′因子的测定。在建立稳定模型检测体系之后,对本中心化合物库提供的10 560个样品进行活性筛选,并对部分活性化合物进行IC₅₀的测定。结果 在血管内皮生长因子受体-2活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体-2激酶最适反应酶浓度为0.10 ng·μL^-1,最适反应时间为15 min,ATP K_m=0.75 μmol·L^-1,底物K_m=94.90 nmol·L^-1,信噪比底物：SA=2∶1,Z′值为0.85,阳性药IC₅₀=1.03 μmol·L^-1。通过部分初筛活性样品进行复筛研究,得到3个活性化合物S2-14,S2-16、S2-38 IC₅₀分别为1.01×10^-4,6.04×10^-5,7.23×10^-6 mol·L^-1。结论 利用均相时间分辨荧光技术成功建立了血管内皮生长因子受体-2激酶高通量筛选模型,并进行了一定量的定向筛选研究,发现了若干先导化合物。本实验体系方法可靠,结果稳定,可作为抗血管新生天然产物筛选体系进行应用推广。     

Acylated Iridoids and Rhamnopyranoses from Premna odorata (Lamiaceae) as Novel Mesenchymal–Epithelial Transition Factor Receptor Inhibitors for the Control of Breast Cancer

Phytochemical investigation of Premna odorata Blanco, Lamiaceae, leaves afforded three new acylated iridoid glycosides 1–3 and two new acylated rhamnopyranoses 9 and 10, in addition to ten known compounds. The structures of the new compounds were confirmed using extensive 1D and 2D NMR analysis. Molecular modeling study suggested the potential of the acylated rhamnopyranoses to bind at the c‐Met kinase domain. Cell‐free Z′‐LYTE? assay testing revealed the good c‐Met phosphorylation inhibitory activity of 9, followed by 8, and 10, with IC₅₀ values of 2.5, 6.9, and 12.7 μM, respectively. The (3‐(4,5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2,5‐diphenyltetrazolium bromide (MTT) cell proliferation assay testing against the human c‐Met expressing highly invasive MDA‐MB‐231 suggested compound 9 as the most active with IC₅₀ value of 13.3 μM. Testing of compound 9 against multiple phenotypic breast cancer cell lines including MCF‐7, BT‐474 cells, and MDA‐MB‐468 proved enhanced activity against the highly c‐Met expressing triple‐negative breast cancer cell lines. Acylated rhamnopyranoses are potential novel c‐Met inhibitors appropriate for future optimizations to control c‐Met‐dependent breast malignancies. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

 目的观察3,6二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ³²P]ATP的[³²P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。3,6二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC₅₀为1393μmol·L^-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为10.67μmol·L^-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数K_i值为17.34μmol·L^-1。结论3,6二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

人胰激肽原酶的表达

 目的克隆人胰腺组织激肽原酶基因，构建分泌型原核表达载体。方法使用RT-PCR的方法扩增人胰腺组织cDNA，从中扩增出激肽原酶基因。将扩增的激肽原酶基因用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后，连接到同样双酶切处理的pET-20b(+)载体上，酶切鉴定后，进行核苷酸序列分析和融合蛋白的表达。结果将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE，在相对分子质量31.4×103处可见明显的高表达带。蛋白质免疫印迹实验表明，重组蛋白具有激肽原酶的抗原性。结论成功克隆人胰腺组织激肽原酶基因，并高效表达融合蛋白，为进一步开发基因工程药物打下基础。     

BAP-SRC-1融合蛋白的表达及其在药物代谢酶调控研究中的应用

 目的获得活性表达的细菌碱性磷酸酶(bacterial alkaline phosphatase,BAP)基因和人甾体受体辅活化因子-1(steroid recep- tor coactivator-1,SRC-1)的融合蛋白,应用于辅活化因子与核受体的结合研究。方法从Escherichia coli JM83基因组和人肝总RNA中分别扩增获得BAP基因和SRC-1的186个氨基酸对应的基因序列(简称SRC186)。用重组技术,构建BAP-SRC186- pET28a融合基因表达载体,在Escherichia coli Rosetta(DE3)中,以IPTG低温诱导表达。以对硝基苯磷酸盐(p-nitrophenyl-phos- phate,PNPP)为底物进行活性测定。活性表达的BAP-SRC186融合蛋白被应用于辅活化因子与核受体的结合研究。结果获得可溶性融合蛋白BAP-SRC186。该融合蛋白的BAP比活为(0.176±0.013 4)μmol·min^-1·mg(pro)^-1 在利福平存在的情况下,BAP-SRC186能与孕烷X受体配体结合域(pregnane X receptor ligand binding domain,PXRLBD)发生利福平剂量依赖性的相互作用,作用强度通过BAP的显色反应可方便地检测结论BAP融合蛋白与核受体的结合研究为药物代谢酶调控的体外研究开辟了新的思路。     

Isolates from Alpinia officinarum Hance attenuate LPS‐induced inflammation in HepG2: Evidence from in silico and in vitro studies

In an attempt to connect the legacy of centuries of invaluable knowledge from traditional medicine and the current understanding to the molecular mechanism of diseases, we took the advantage of the emergence of in silico screening as a promising tool for identification of potential leads from libraries of natural products. Traditional Chinese Medicine database was subjected to structure based virtual screening for identification of anti‐inflammatory compounds using the 3D crystal structure of p38 alpha mitogen activated protein kinase. The molecular docking studies revealed the potential activity of several classes of compounds known to be the constituents of the rhizomes of Alpinia officinarum Hance (Lesser galangal). Five compounds, galangin, kaempferide, isorhamnetin, and two diarylheptanoids, were isolated from the rhizomes of the plant using vacuum liquid chromatography and flash chromatography techniques. The anti‐inflammatory activity of these compounds was investigated on HepG2 cells stimulated by lipopolysaccharide. The latter induced the gene expression of proinflammatory cytokines; interleukin‐1β, interleukin‐6, tumor necrosis factor alpha. Addition of the 5 isolated compounds downregulated this increased gene expression in a dose dependent manner. Thus, these results indicate that the isolated compounds from A. officinarum could be used as a beneficial source for preventing and treating inflammatory diseases.     

补阳还五汤对动脉粥样硬化模型主动脉Rho激酶,PAl-1及eNOSmRNA表达的影响

目的:通过运用益气活血法的代表方剂补阳还五汤对动脉粥样硬化模型的干预,观察主动脉组织Rho激酶,纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA的表达、血脂等指标的变化,揭示该方药抗动脉粥样硬化作用的新靶点和新途径。方法:60只大鼠随机分为正常组,模型组,补阳还五汤低、高剂量组(10,20 g·kg-1),辛伐他汀组(0.6 mg·kg-1),补阳还五汤预防组(10 g·kg-1),除正常组外,其余各组维生素D3加高脂饮食诱导大鼠动脉粥样硬化模型,分别ig给予相应药物,补阳还五汤预防组给药的同时造模,造模成功后干预28 d,检测主动脉Rho激酶,PAl-1及e NOS mRNA表达,血脂水平总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。结果:与正常组比较,模型组大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平明显升高,e NOS mRNA表达量水平明显降低及血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平明显升高(P0.01),HDL水平明显降低,均具有明显统计学差异(P0.01),补阳还五汤低、高剂量治疗组、辛伐他汀组、补阳还五汤预防组明显降低大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平,明显升高e NOS mRNA表达量水平,明显降低血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平,明显升高HDL水平,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补阳还五汤可以下调Rho激酶,PAl-1 mRNA的表达,同时,上调e NOS mRNA的表达水平、降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用,抑制Rho激酶mRNA,PAl-1 mRNA表达及上调e NOS mRNA表达水平可能是其作用机制之一。     

6‐Acetoxy Cyperene,a Patchoulane‐type Sesquiterpene Isolated from Cyperus rotundus Rhizomes Induces Caspase‐dependent Apoptosis in Human Ovarian Cancer Cells

Cyperus rotundus (Cyperaceae) has been widely used in traditional medicine for the treatment of various diseases, including cancer. Although an anti‐tumour effect has been suggested for C. rotundus, the anti‐tumour effects and underlying molecular mechanisms of its bioactive compounds are poorly understood. The n‐hexane fraction of an ethanol extract of C. rotundus rhizomes was found to inhibit cell growth in ovarian cancer (A2780, SKOV3 and OVCAR3) and endometrial cancer (Hec1A and Ishikawa) cells. Among the thirteen sesquiterpenes isolated from the n‐hexane fraction, some patchoulane‐type compounds, but not eudesmane‐type compounds, showed moderate cytotoxic activity in human ovarian cancer cells. In particular, the patchoulane sesquiterpene 6‐acetoxy cyperene had the most potent cytotoxicity. In this regard, propidium iodide/Annexin V staining and terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP (deoxynucleotide triphosphate) nick end labeling assay were performed to study cell cycle progression and apoptosis. 6‐acetoxy cyperene induced apoptosis, as shown by the accumulation of sub‐G1 and apoptotic cells. Furthermore, treatment with 6‐acetoxy cyperene stimulated the activation of caspase‐3, caspase‐8 and caspase‐9 and poly(ADP‐ribose)polymerase in a dose‐dependent manner. Pretreatment with caspase inhibitors neutralized the pro‐apoptotic activity of 6‐acetoxy cyperene. Taken together, these data suggest that 6‐acetoxy cyperene, a patchoulane‐type sesquiterpene isolated from C. rotundus rhizomes, is an anti‐tumour compound that causes caspase‐dependent apoptosis in ovarian cancer cells. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

In vitro antimicrobial and antioxidant activities of anthrone and chromone from the latex of Aloe harlana Reynolds

In the search for new antimicrobial and antioxidant compounds from plants, the latex of the medicinal plant Aloe harlana Reynolds from Ethiopia was subjected to bioassay‐guided fractionation, which led to the isolation of two known compounds, anthrone (aloin) and chromone (7‐O‐methylaloeresin A). The latex and its two constituents were assessed for their possible antimicrobial activities against 23 bacterial and four fungal strains using the disc diffusion method and their antioxidant activity by two complementary test systems, namely 2,2‐diphenyl‐1‐picrylhydrazyl (DPPH) and 2‐deoxyribose degradation assay methods. The isolated compounds showed promising results against various pathogenic bacterial and fungal strains in comparison with standard drugs. Moreover, 7‐O‐methylaloeresin A exhibited good activity against multiple drug resistant Staphylococcus aureus (NCTC 11994) and Salmonella typhimurium (ATCC 1255) with MIC values of 0.72 and 0.18 mm , respectively. Among the fungal strains tested, Candida albicans (ATCC 10231) was the most susceptible organism to the latex and the two isolated compounds. The latex and isolated compounds also showed significant activities on both antioxidant assays with the highest activity being observed for 7‐O‐methylaloeresin A, which gave IC₅₀ values of 0.026 mm and 0.021 mm for DPPH and 2‐deoxyribose degradation assay, respectively. These findings support the traditional uses of the plant for the treatment of various infectious and inflammatory diseases. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.