未损伤背根神经节GABAA受体在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价未损伤背根神经节(L4 背根神经节)γ氨基丁酸A受体(GABAA受体)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 成年雌性SD大鼠30只,体重200～250 g,随机分为3组(n=10):对照组(C组)、蝇蕈醇组(M组)和荷包牡丹碱组(B组).采用结扎L5脊神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型.C组于L4 背根神经节局部注射生理盐水50μl;M组于L4背根神经节局部注射GABAA受体激动剂蝇蕈醇50μl;B组于L4背根神经节局部注射GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱50μl;各组注射时间均大于1 min.于术前1 d至术后10 d,每天测定大鼠的热痛阈和机械痛阈.结果 与C组比较,M组热痛阈差异无统计学意义(P＞0.05),机械痛阈升高,B组热痛阈和机械痛阈均降低(P＜0.05).结论 未损伤背根神经节GABAA受体激活参与了神经病理性痛大鼠机械痛敏的发生发展,对热痛敏的发生发展可能不起主导作用.     

咪达唑仑对大鼠离体主动脉的舒张作用

目的观察咪达唑仑对血管张力的直接影响,并探讨其作用机制.方法采用内皮完整和去内皮的大鼠离体主动脉环,首先观察咪达唑仑在3×10-6,10×10-6,30×10-6,100×10-6mol/L浓度时,对去氧肾上腺素(10-6mol/L)引起收缩的血管环等长张力的影响.然后观察咪达唑仑对经亚甲蓝(10-5mol/L)孵浴处理的内皮完整血管环和分别经过维拉帕米(5×10-6mol/L)和四乙胺(5×10-3mol/L)孵浴处理的去内皮血管环张力的影响.结果以上浓度的咪达唑仑对去内皮和内皮完整血管环均有舒张作用.去内皮血管环的舒张反应低于内皮完整血管环(P＜0.05).用亚甲蓝处理的内皮完整环的舒张反应与未经处理时比较无显著性差异(P＞0.05).四乙胺可增强咪达唑仑对去内皮血管环的舒张作用(P＜0.05).维拉帕米不影响咪达唑仑对去内皮血管环的舒张(P＞0.05).结论咪达唑仑对血管具有内皮依赖性和非内皮依赖性的舒张作用,其内皮依赖性的舒张反应与NO-sGC-cGMP途径无关.     

咪达唑仑对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响

目的 评价咪达唑仑对新生猪缺氧缺血性脑损伤的影响.方法 雄性新生猪24头,日龄3～7 d,体重1.8～3.0 kg,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺氧缺血性脑损伤+盐水组(HI-S组)和缺氧缺血性脑损伤+咪达唑仑组(HI-M组).HI-S组和HI-M组采用窒息性心跳骤停后心肺复苏的方法 制备缺氧缺血性脑损伤模型.自主循环恢复(ROSC)后3 h,各组均静脉输注芬太尼10～30 μg·kg-1·h-1和泮库溴铵0.1～0.2 mg·kg-1·h-1,HI-M组同时静脉输注咪达唑仑0.05 mg·kg-1·h-1至ROSC后24 h,HI-S组和S组静脉输注等容量生理盐水.于模型制备前(基础状态)、低氧37 min、吸入空气5 min、窒息5 min、ROSC后6、12和24 h时取动脉血样行血气分析,并记录各时点MAP;于ROSC后48、72、96及240 h时行神经行为学评分(NVS),于ROSC后240 h时取脑组织,计数纹状体(壳状核和尾状核)存活神经元,计算存活神经元密度.结果 与S组和基础值比较,HI-S组和HI-M组低氧窒息期间动脉血氧分压降低,窒息5 min时动脉血二氧化碳分压升高,pH值和MAP降低(P<0.05),HI-M组和HI-S组各时点上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).与S组比较,HI-S组和HI-M组壳状核和尾状核存活神经元密度降低(P<0.01),ROSC后48996 h时NBS评分升高(P<0.05);与HI-S组比较,HI-M组壳状核和尾状核存活神经元密度明显增加,ROSC后72和96 h时NBS评分降低(P<0.05).结论 心肺复苏早期应用咪达唑仑可减轻新生猪缺氧缺血性脑损伤.     

咪达唑仑对大鼠海马CA1区突触传递的影响

目的 探讨咪达唑仑对大鼠海马CA1区突触传递的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠35只,体重190～220 g,随机分为7组(n=5),单刺激下4组:对照组(C_1组)、荷包牡丹碱组(B_1组)、咪达唑仑组(M_1组)和荷包牡丹碱+咪达唑仑组(BM组);配对刺激下3组:对照组(C_2组)、荷包牡丹碱组(B_2组)和咪达唑仑组(M_2组).单刺激条件:刺激方波波宽0.1 ms、频率0.033 Hz,配对刺激条件:刺激方波波宽0.1 ms、频率0.033 Hz,两个配对刺激间隔30 ms,刺激强度为诱发兴奋性突触后电位(EPSP)峰值刺激强度的50%.C_(1,2)组和M_(1,2)组记录EPSP幅值的基础值,随后分别腹腔注射生理盐水3 ml/kg和咪达唑仑3 mg/kg;B_(1,2)组和BM组记录EPSP幅值的基础值,随后腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg,20 min后BM组腹腔注射咪达唑仑3 mg,/kg.各组给药结束后再记录60 min,每10 min为一时段.单刺激下计算各时间段EPSP幅值与基础值的比值即相对幅值,配对刺激下记录两个配对刺激下的EPSP幅值(分别为E_1和E_2),计算E_2/E_1.结果 与C_1组比较,M_1组EPSP相对幅值降低(P<0.05或0.01),B_1组和BM组差异无统计学意义(P>0.05);与C_2组比较,B_2组E_2及E_2/E_1升高(P<0.05),E_1差异无统计学意义(P>0.05),M_2组E_1、E_2及E_2/E1_均降低(P<0.05);与B_2组比较,M_2组E_1、E_2及E_2/E_1均降低(P<0.05).结论 咪达唑仑可抑制大鼠海马CA1区兴奋性突触传递,呈可逆性,其机制可能与增强γ-氨基丁酸(GABA)能性突触前抑制性回路的兴奋性有关,而非直接影响GABA_A受体功能状态.     

咪达唑仑临床麻醉应用进展

咪达唑仑用于成人麻醉前给药时于入手术室前１５ｍｉｎ根据年龄计量肌注,男性的性减量。与巴比妥本盐及异丙酚联合给药可用于麻醉诱导。持续静注并伍用芬太尼施行全凭静脉麻醉,中稳定循环动力。腰麻及硬膜外麻醉时,表中发挥缓解紧张及镇静作用。用于心内手术时,对心功能影响小,可防止术中清醒对高龄及肝、肾机能季低者应该注意作用增强的可能性。     

咪达唑仑对大鼠慢性心理应激反应的影响

目的评价咪达唑仑对慢性心理应激大鼠行为、神经内分泌激素水平及延髓腹外侧区心血管中枢内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠40只,体重150-200 g,行心理应激训练:先经7 d适应期(25 min／d暗盒适应)后,进入7 d复合应激期(给予不规则光-电刺激训练),最后进入1 d慢性心理应激期。实验大鼠随机分为5组(n=8),NS正常对照组和M正常对照组:在实验中仅接受25 min／d暗盒适应,分别于最后1 d暗适应前10min腹腔注射生理盐水1 ml和含咪达唑仑1．5 mg·kg-1的生理盐水溶液1 ml;根据刺激前10 min给予不同干预措施分为3组:安慰剂对照组、低剂量M实验组和高剂量M实验组,分别于刺激前10min腹腔注射生理盐水1 ml、含咪达唑仑0．75、1．5 mg·kg-1的生理盐水溶液1 ml。观察大鼠应激训练过程中行为的变化,实验结束后进行旷场行为测定并检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)浓度,原位杂交法检测延髓腹外侧区心血管中枢ET-1 mRNA的表达。结果与两正常对照组相比,安慰剂对照组行为评分增高,实验结束探查行为次数减少,ACTH和CORT浓度增高,延髓腹外侧区ET-1 mRNA表达下调;与安慰剂对照组相比,高剂量M实验组行为评分降低,低剂量和高剂量M实验组ACTH和CORT浓度均降低,ET-1 mRNA的表达均上调。结论咪达唑仑可减轻慢性心理应激引起的大鼠行为及神经内分泌的改变,并一定程度地抑制慢性心理应激诱发的延髓腹外侧区ET-1 mRNA的表达下调。     

DAGO及可乐定对大鼠背根神经节神经元GABAA受体介导膜电流的影响

γ-氨基丁酸(13ABA)是中枢神经系统一种重要的抑制性神经递质，其递质／受体系统在脊髓伤害性信息调制中起着重要的作用。背根神经节(Dorsal Root Ganglion，DRG)是伤害性感受传入的初级感觉神经元，其胞体膜受体通道可反映脊髓突触前膜的功能。本研究拟采用全细胞膜片钳技术研究μ阿片受体激动剂DAGO及α2受体激动剂可乐定对DRG细胞GABA电流的影响，以探讨DAGO及可乐定是否经GABA递质／受体系统产生外周镇痛作用。     

咪达唑仑对七氟烷麻醉诱发新生大鼠皮层异常脑电波的影响

目的 评价咪达唑仑对七氟烷麻醉诱发新生大鼠皮层异常脑电波的影响.方法 清洁级健康雄性新生SD大鼠10只,7日龄,体重12～ 16 g.正确颅骨外植入电极板后,连续监测脑电图,吸入6％七氟烷3 min麻醉诱导.第1阶段:吸入2.1％七氟烷维持30 min;第2阶段:腹腔注射咪达唑仑3μg/g;第3阶段:吸入2.1％七氟烷...     

咪达唑仑对交感神经元N-型钙通道电流的影响

目的；通过观察咪达唑仑对交感神经元全细胞N－型钙电流的影响，评价其对交感神经元的抑制作用。方法：用酶消化法获得急性分离的SD大鼠（7－10d）颈上交感神经节细胞，应用膜片钳技术记录不同浓度的咪达唑仑（0．1、0．3、3．0、10、50、100μmol/L）对N－型钙电流的影响。结果：在钳制电位（Vh)-80mV，刺激电压（Vt)-30mV- 10mV条件下，不同浓度的咪达唑仑对N－型钙电流均有抑，且呈浓度依赖性（r=0.964，P＜0．01）。临床相关浓度的咪达唑仑（0．3μmol/L）使钙通道电流峰值下降35％（P＜0．01）。50％钙通道电流峰值受抑制的μmol/L浓度（IC50）约为4．25μmol/L。结论：临床 相关浓度的咪达唑仑对交感神经元全细胞N－型钙电流有明显的抑制作用，提示咪哒唑仑的循环抑 制作用可能与抑制交感神经系统的活动有关。     

氯胺酮和咪达唑仑对谷氨酸致大鼠神经元样PC12细胞损伤的作用

目的 探讨氯胺酮和咪达唑仑对谷氨酸致大鼠神经元样PC12细胞损伤的作用。方法 培养6-7d的神经元样PC12细胞接种于培养板培养18h后随机分为正常对照组（C组），谷氨酸组（G组），0．1、0．5、1．0mmol／L氯胺酮组（K1组-K3组），1、5、10、25、50μmol／L咪达唑仑组（M1组～M5组），0．1、0．5、1．0mmol／L氯胺酮混合10μmol／L咪达唑仑组（KM1组-KM3组）。应用MTT比色法和乳酸脱氢酶（LDH）活性检测评估细胞活力及细胞损伤程度；RT-PCR法测定c-fos mRNA表达水平；细胞免疫组化法测定Fos蛋白表达水平。结果 （1）与C组比较，除K3组外，其余各组细胞活力均降低（P〈0．05）；与G组比较，K1组。K3组、M1组-15组细胞活力均增强（P〈0．05或0．01），LDH漏出率均降低（P〈0．01）；与K1组比较，KM1组细胞活力增加，LDH漏出率降低（P〈0．05）；KM2组与K2组比较，细胞活力、LDH漏出率无明显差异（P〉0．05）。与K3组比较，KM3组细胞活力降低，LDH漏出率升高（P〈0．01）。（2）与C组比较，除K3组外，其余各组c-fos mRNA的表达均上调（P〈0．05）。与G组比较，K1组-K3组、M3组、KM2组c-fos mRNA的表达均下调（P〈0．05）；与K2组、M3组比较，KM2组c-fos mRNA的表达上调（P〈0．05）。（3）与C组比较，除K3组外，其余各组Fos染色阳性胞核数目增加，平均光密度值升高（P〈0．01）。与G组比较，K1组-K3组、M3组、KM2组Fos染色阳性胞核数减少，平均光密度值降低（P〈0．05或0．01）。与K2组、M3组比较，KM2组Fos染色阳性胞核数增加（P〈0．05），平均光密度值升高（P〈0．05）。结论 氯胺酮对谷氨酸损伤的神经元样PC12细胞具有剂量依赖性的保护作用，咪达唑仑也有神经保护作用；低剂量氯胺酮和咪达唑仑混合对神经的保护作用增强，而高剂量氯胺酮和咪达唑仑有对抗作用。     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元γ氨基丁酸激活电流的改变

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG)神经元γ氨基丁酸(GABA)激活电流的改变.方法 健康成年SD大鼠20只,雌雄不拘,体重100～150g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组,假手术组(S组,n=5),神经病理性痛组(NP组,n=15)行l3脊神经结扎诱发神经病理性痛.于术后5 d处死大鼠,S组急性分离L3-5DRG神经元,NP组急性分离L5DRG神经元,建立膜片钳全细胞记录模式.通过细胞外加药排管给予GABA 100μmol/L,记录各类型DRG神经元中GABA激活电流的发生率及电流幅度,记录给GABA前、后静息电位、动作电位(基强度、阈电位和超射值).结果 细胞外给予100μmol/L的GABA后可诱发部分神经元出现快速失活的内向电流.与给GABA前比较,S组给GABA后DRG大、中神经元出现明显去极化,静息电位升高,超射值和基强度降低(P＜0.05),阈电位差异无统计学意义(P＞0.05),NP组给GABA后DRG大、中神经元静息电位升高(P＜0.05),超射值、基强度和阈电位差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,NP组DRG大、中神经元GABA激活电流的发生率和电流幅度均降低,静息电位、超射值、基强度的变化幅度降低(P＜0.05),阈电位的变化幅度差异无统计学意义(P＞0.05).S组和NP组部分DRG小神经元出现自发放电,具有自发放电的神经元上没有GABA激活电流出现.结论 神经病理性痛大鼠DRG大、中神经元上GABA介导的抑制信号的减弱,引起神经元兴奋性升高,可能是神经病理性痛的发病机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the change in GABA receptor-activated current in dorsal root ganglion (DRG) neurons in rats with neuropathic pain. Methods Twenty adult SD rats of both sexes weighing 100-150 g were randomly divided into 2 gorups: sham operation group (group S, n = 5) and neuropathic pain group (group NP, n= 15). Neuropathic pain was induced by ligation of right L5 spinal nerve. The animals were sacrificed at 5 days after operation. The L5 DRG( neurons in group NP and L3-5 DRG neurons in group S were immediately isolated. Whole-cellpatch- clamp technique was used. The extracellular solution contained GABA 100μmol/L.The frequency and amplitude of the GABA-activated current in DRG neurons and the changes in action potential (threshold potential, rheobase and overshoot) and resting potential before and after GABA administration were recorded. Results GABA 100μmol/L induced rapid inactivation of inward current in most neurons. Compared with the baseline before application of GABA, in group S GABA induced depolarization,increased resting potential and decreased amplitude and rheobase of action potential in large and medium DRG neurons, while in group NP GABA increased resting potential but induced no significant change in threshold potential and rheobase and overshoot of action potential. The frequency and amplitude of GABA-activated current and the degree of change in resting potential and rheobase and overshoot of action potential were significantly lower in group NP than in group S.Spontaneous discharge occurred in small DRG neurons in both groups. No GABA-activated current was observed in all DRG neurons with spontaneous discharge. Conclusions Neuropathic pain is induced by decreasing GABA-mediated inhibition signals in large and medium DRG neurons leading to increased excitability of neurons.     

氟哌利多对大鼠背根神经节细胞钠电流的影响

目的 研究氟哌利多对大鼠背根神经节细胞钠通道电流的影响。方法 在急性分离的大鼠背根神经节细胞标本上,应用全细胞膜片钳技术记录氟哌利多对钠通道电流的影响。结果3～300μmol·L-1的氟哌利多对钠电流的抑制率为14.12％～78.46％（P<0.01,n=7）,该抑制作用具有浓度依赖性。钳制电位不同,氟哌利多对钠电流的抑制作用亦不同,在Vh分别为-80mV与-60mV时,其IC50值分别为（48.72±10.67）μmol·L-1和（35.37±10.51）μmol·L-1（P<0.05,0=7）。30μmol. L-1的氟哌利多使电流-电压曲线峰值平均降低53.18％（P<0.01,n=7）,对激活曲线无明显影响（P>0.05,n=7）,但可使稳态失活曲线向超极化方向移动7.95mV,用药前、后的V1/2分别为-28.58mV和-36.06mV（P<0.01,n=7）。结论 氟哌利多对背根神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,提示硬膜外镇痛时应用临床浓度的氟哌利多具有增强硬膜外镇痛效果的作用。     

神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙电流的变化

目的 观察神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙通道电流的变化。方法建立改良脊神经结扎神经病理痛模型,在急性分离的神经病理痛及正常大鼠背根神经节细胞标本上,应用全细胞膜片钳技术记录钙通道电流。结果 神经病理痛组大背根神经节细胞的钙通道的电流-电压曲线峰值为(-66±lO)pA/pF(n=11),较正常组的(-105±13)pA,pF(n=9)降低(P<0.01)。神经病理痛组大背根神经节细胞的钙通道快速相失活曲线向去极化方向移动3.22 mV,疼痛组与对照组的V1/2分别为(-41.8±0.3)mV(n=11)和(-45.0±0.8)mv(n=9)(P<0.05)。两组钙电流激活曲线差异无显著性(P>0.05)。结论神经病理痛鼠大背根神经节细胞钙电流较正常降低,钙电流快速相失活曲线向去极化方向移动,这可能是痛觉过敏、痛性感觉异常等神经病理痛症状的原因。     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元电生理学的改变

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG)神经元电生理学的改变.方法 成年雄性sD大鼠20只,周龄3～4周,体重100～150 g,随机分为对照组(C组,n=5)和神经病理性痛组(NP组,n=15).采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型.于CCI前1d和CCI 后第4天测定热痛阈和机械痛阈.痛阈测定后,急性分离大鼠DRG神经元,采用全细胞膜片钳技术记录其电生理学活动.结果 与CCI前1d比较,NP组CCI后第4天热痛阈和机械痛阈均降低(P<0.05);与c组比较,NP组DRG小神经元基强度降低,膜电位、重复放电率和自发放电率均升高(P<0.05或0.01),阚电位和超射值差异无统计学意义(P>0.05),DRG中神经元膜电位、阈电位、自发放电率升高,基强度降低(P<0.05或0.01),超射值差异无统计学意义(P>0.05),DRG大神经元阈电位升高(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG神经元电生理学的改变主要发生在DRG中、小神经元上,表现为兴奋性升高、重复放电和自发放电现象增多.     

腰交感神经节射频热凝对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节TTX-R钠电流的影响

目的 评价射频热凝毁损腰交感神经节对糖尿病痛性周围神经病变大鼠的镇痛作用及对背根神经节（DRG）细胞上河豚毒素不敏感（TTX-R）钠通道电流的影响。方法 腹腔注射链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病痛性周围神经病变模型，取造模成功的大鼠20只，随机分为糖尿病对照组（D组）及交感神经节射频热凝组（R组），每组10只，另取10只同月龄大鼠为正常对照组（C组），R组大鼠行右侧L3，4椎旁射频热凝毁损腰交感神经节。于射频热凝前、射频热凝后1、2周采用von Frey纤维丝测定缩爪反应阈值（PWT）;射频热凝后2周，急性分离小DRG细胞，采用全细胞膜片钳记录方法，在电压钳制下记录TTX-R钠通道电流。结果 与C组比较，射频热凝前D组和R组PWT降低（P〈0．01），射频热凝后1、2周，R组PWT低于C组（P〈0．05），高于D组（P〈0．05）;射频热凝后2周，与C组比较， D组、R组I-V曲线向左移，R组电流密度高于C组（P〈0．01），低于D组（P〈0．05），与C组比较，D组、R组半激活电压及半失活电压升高（P〈0．01），D组和R组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 腰交感神经节射频热凝可有效缓解糖尿病痛性周围神经病变大鼠的痛觉过敏，抑制小DRG细胞TTX-R钠通道电流可能是其发挥镇痛作用机制之一。     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化

目的 观察神经病理性痛大鼠损伤和邻近未损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用结扎左侧L5脊神经的方法制备神经病理性痛模型.于结扎后14 d时采用酶消化法急性分离结扎侧邻近未损伤L4背根神经节神经元(L4组)和损伤L5背根神经节神经元(L5组),另取正常大鼠L4.5背根神经节神经元作为对照组(C组).采用全细胞膜片钳技术记录神经元高电压激活钙电流,绘制钙电流激活曲线及稳态失活曲线;记录各亚型高电压激活钙电流.结果 与C组比较,L4组和L5组峰电流密度降低,L5组钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05);与L4组比较,L5组峰电流密度降低,钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05).3组钙电流半数失活电压差异无统计学意义(P＞0.05).结论 损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流可能在诱发大鼠神经病理性痛的过程中起主要作用.     

背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用

目的 评价背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重200～220 g,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(IP组)和P2X3受体拮抗剂组(A组).IP组和A组制备大鼠左后趾部切口痛模型.模型建立后30 min,A组左后爪底皮下注射P2X3受体特异性拮抗剂TNP-ATP 200 nmol,C组和IP组注射等容量生理盐水.采用累积疼痛评分法,评定注药后1 h内大鼠疼痛行为学变化.注药后2 h时处死大鼠,取背根神经节,测定P2 X3受体表达和细胞内Ca2+浓度.结果 与C组比较,IP组和A组累积疼痛评分和Ca2+浓度升高,P2X3受体表达上调(P＜0.05);与IP组比较,A组累积疼痛评分和Ca2+浓度降低,P2X3受体表达下调(P＜0.05).结论 背根神经节P2X3受体参与了大鼠切口痛的形成,其机制可能与升高细胞内Ca2+浓度有关.     

加巴喷丁对奥沙利铂诱发神经病理性痛小鼠背根神经节神经元高电压激活钙通道的影响

目的 评价加巴喷丁对奥沙利铂诱发神经病理性痛小鼠背根神经节(DRG)神经元高电压激活钙通道的影响.方法 清洁级雄性昆明小鼠,体重20～25 g,6周龄.采用腹腔注射奥沙利铂3mg/kg的方法制备神经病理性痛模型.取模型制备成功的小鼠41只,采用随机数字表法,将小鼠随机分为神经病理性痛组(NP组,n=20)和加巴喷丁组(G组,n=21),另取10只正常小鼠为正常对照组(C组).G组于奥沙利铂给药后第3天腹腔注射加巴喷丁100mg/kg,NP组及C组给予等容量的生理盐水,每天1次,连续3 d.于加巴喷丁给药前即刻、给药后1～3 d(T1-4)时测定小鼠双后肢机械缩足阈值(MWT).于最后一次MWT测定后,取两侧L4,5节段DRG,分离DRG神经元,采用全细胞膜片钳记录峰电流密度,拟合DRG神经元高电压激活钙通道激活曲线和稳态失活曲线,计算半数激活电位(Va1/2)和半数失活电位(Vi1/2).结果 与C组比较,NP组T1～4时、G组T1时MWT降低,NP组峰电流密度和Vi1/2升高(P＜0.05),Va1/2差异无统计学意义,G组峰电流密度、Vi1/2和Va1/2差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组比较,G组T2-4时MWT升高,峰电流密度和Vi1/2降低(P＜0.05).结论 加巴喷丁减轻小鼠奥沙利铂诱发神经病理性痛的机制可能与抑制DRG神经元高电压激活钙通道电流,促进通道失活有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of gabapentin on high-voltage-activated calcium currents in dorsal root ganglion (DRG) neurons in mice with oxaliplatin-induced neuropathic pain (NP). Methods Pathogen-free male Kunming mice aged 6 weeks weighing 20-25 g were used in this study. NP was induced by injection of intraperitoneal oxaliplatin 3 mg/kg. Successful induction of NP was defined as the mechanical paw withdrawal threshold (MWT) measured at 3 d after oxaliplatin administration decreased to 40% of the baseline ( before administration of oxaliplatin). Forty-one mice in which NP was successfully induced were randomly divided into 2 groups: NP group ( n = 20) and gabapentin group (group G, n = 21 ). Another 10 normal mice served as control group (group C). At 3 days after oxaliplatin administration, gabapentin 100 mg/kg was injected intraperitoneally once a day for 3 consecutive days in group G, while C and NP groups received the equal volume of normal saline.MWT to von Fray filament stimulation was measured immediately before and 1-3 days after gabapentin administration (T1-4). After the last measurement of MWT, bilateral L4.5 DRG was collected and neurons were isolated. The high-voltage-activated calcium currents were recorded using whole-cell patch-clamp technique. The peak current density and the voltage where half of the current was activated ( Va1/2 ) or inactivated ( Vi 1/2 ) were calculated. Results Compared with group C, MWT at T1-4 was decreased, the peak current density and Vi1/2 were significantly increased in group NP, and MWT at T1 was decreased in group G ( P ＜ 0.05). There was no significant difference in the peak current density, Vi1/2 and Va1/2 between C and G groups ( P ＞ 0.05). MWT at T2-4 was significantly increased, while the peak current density and Vi1/2 were significantly decreased in group G compared with group NP (P ＜ 0.05). Conclusion Gabapentin can reduce oxaliplatin-induced NP in mice through inhibiting high-voltage-activated calcium currents and promoting the inactivation of the channels in DRG neurons.     

椎间孔注射多柔比星对神经病理性痛大鼠痛行为学及背根神经节神经元超微结构的影响

目的 评价椎间孔注射多柔比星对神经病理性痛大鼠痛行为学和背根神经节(DRG)神经元超微结构的影响.方法 健康雄性SD大鼠100只,体重200～250 g,3月龄,采用坐骨神经分支选择性损伤(SNI)的方法建立大鼠神经病理性痛模型,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=20):SNI组和不同浓度多柔比星组(A1组、A2组、A3组和A4组),于模型建立2周后,L4,5和L5,6椎间孔分别注射生理盐水、0.25％、0.50％、0.75％和1.00％多柔比星5 μl.于给药前及给药后1～28 d测定热辐射缩足潜伏期及冷刺激缩足持续时间,于给药后28 d取3只大鼠,取DRG,电镜下观察大、小神经元超微结构.结果 与SNI组比较,A1组、A2组、A3组及A4组热辐射缩足潜伏期延长,冷刺激缩足持续时间缩短,呈浓度依赖性(P＜0.05).电镜下SNI组DRG神经元超微结构未见异常,A1组、A2组、A3组和A4组DRG小神经元细胞核固缩、线粒体肿胀、溶酶体增多、染色质边集、细胞间质纤维化和细胞坏死,而大神经元线粒体肿胀及纤维增多,多数大神经元存活.结论 椎间孔注射多柔比星可减轻大鼠神经病理性痛,可导致DRG大、小神经元损伤,小神经元的损伤更明显.