不同浓度曲马多或吗啡预先给药对成人静脉血辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的观察不同浓度曲马多和吗啡预先给药对成人静脉血辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的影响。方法采集无免疫性疾病的15例门诊小手术病人外周静脉血20ml,进行全血和外周血单个核细胞(PBMCs)培养。随机分为空白对照组(C组)、不同浓度吗啡组[10ng·ml-1(M1组)、100ng·ml-1(M2组)、1000ng·ml-1(M3组)]及不同浓度曲马多组[50ng·ml-1(Q1组)、500ng·ml-1(Q2组)、5000ng·ml-1(Q3组)]。培养的全血和PBMCs在体外均用相应浓度药物预先作用24h,随后用刺激剂刺激。24h后采用三色流式细胞术检测各组全血及PBMCs中20000个淋巴细胞中Th1细胞及Th2细胞百分率,并计算Th1细胞与Th2细胞的比值(Th1/Th2)。结果Th1细胞百分率及Th1/Th2:与C组比较,M1、M2、M3、Q1、Q2、Q3组均降低(P<0.05);与M1组比较,M2、M3组降低,Q1组升高(P<0.05);与M2组比较,M3组降低,Q2组升高(P<0.05);与Q1组比较,Q2、Q3组降低(P<0.05)。与Q2组比较,Q3组降低(P<0.05)。Th2细胞百分率:与C组比较,M1、M2、M3、Q1、Q2、Q3组均升高;与M1组比较,M2、M3组升高,Q1组降低(P<0.05);与M2组比较,M3组升高,Q2组降低;与Q1组比较,Q2、Q3组升高。与Q2组比较,Q3组升高(P<0.05)。结论在体外曲马多和吗啡均可抑制细胞免疫功能,并呈浓度依赖性,曲马多的抑制作用弱于吗啡。     

不同浓度氯胺酮对成人辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的 探讨不同浓度氯胺酮对成人辅助性T淋巴细胞(TH细胞)分化的影响.方法 择期手术患者20例,年龄20～60岁,ASA分级Ⅰ级,麻醉前从每位受试者肘静脉抽取血样20ml,分离外周血单个核细胞(PBMCs).采用随机区组设计,将每份血样分离出的PBMCs随机分为3组(n＝20):氯胺酮不同终浓度组(K1组和K2组终浓度分别为2.5、25.0 μg/ml),正常对照组(C组)加入等容量0.9％NaC1.24h后分别加入植物血凝素刺激,继续孵育48 h后收集细胞.采用流式细胞小球微阵列术检测细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL- 10、干扰素-γ(IFN-γ)和TNF-α的浓度;采用四色荧光流式细胞技术(CD3+ CD8- IFN-γ+标识Thl细胞,CD3+ CD8- IL-4+标识TH2细胞)测定Thl及Th2细胞亚群比例,并计算二者比值(Th1/Th2).结果 C组、K1组和K2组Th1及Th2细胞亚群比例、Th1/Th2、细胞培养上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镇静浓度和麻醉浓度的氯胺酮在体外环境下对成人Th细胞分化无影响.     

T淋巴细胞亚群分布在良性前列腺增生患者中的检测意义

目的 探讨良性前列腺增生(BPH)患者外周血T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8)和辅助性T细胞(Th1、Th2)的分布及临床检测意义.方法 应用基因富集分析(GSEA)方法探究BPH免疫细胞功能的变化.收集2018年4月至2019年2月本院行尿道前列腺电切术的35例BPH患者的术前外周血标本;另选取20例健康男性作...     

血必净促进内毒素/脂多糖刺激调节性T淋巴细胞凋亡并介导辅助性T淋巴细胞漂移的作用

目的 了解血必净注射液促进LPS刺激CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)凋亡过程及介导辅助性T淋巴细胞(Th)漂移的调节作用.方法 免疫磁珠法分选获得大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,分为常规培养对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+LPS组、抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组,培养3 d后应用流式细胞术检测Treg细胞凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达.将CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25+T淋巴细胞1:1培养,伴刀豆球蛋白A刺激68 h,检测上清液中Th1分泌的γ干扰素(IFN-γ)、Th2分泌的IL-4、Th17分泌的IL-17水平.结果 抗CD3/CD28+LPS+血必净组Treg细胞凋亡率为(45.1±2.7)%,明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.4±1.6)%,P＜0.01];2组Foxp3平均荧光强度分别为95±9、140±18,差异有统计学意义(P＜0.01).同时,抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ分泌水平显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01),IL-4则呈相反变化(P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ/IL-4较对照组升高(P＜0.01);抗CD3/CD28+血必净组IL-17分泌水平较抗CD3/CD28组明显下降(P＜0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞活化介导了Th1向Th2功能性极化;血必净对LPS诱导的T淋巴细胞免疫功能有重要调节作用,可促进CD4+CD25+Treg细胞凋亡并介导Th2向Th1漂移,从而缓解细胞免疫抑制状态.     

不同的免疫抑制方案对肾移植受者免疫调节性T细胞及表面因子的影响

目的比较钙调磷酸酶抑制剂[环孢素A（CsA）和他克莫司（FK506）]与西罗莫司（SRL）对CD4^＋CD25^＋免疫调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tregs）及其细胞表面标志性因子细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）和叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的影响，为临床合理选择免疫抑制方案提供依据。方法选择2004年1月至4月行。肾移植的患者30例，男女不限，年龄20～50岁，随机分为3组，每组10例。（1）CsA组：免疫抑制方案为CsA＋霉酚酸酯（MMF）＋泼尼松（Pred）；（2）FK506组：免疫抑制方案为FK506＋MMF＋Pred；（3）SRL组：免疫抑制方案为SRL＋MMF＋Pred；3组的免疫诱导治疗方案均相同。各组分别于术前、术后半年、1年、2年取血样检测CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率；比较3组治疗方案对各项指标的影响。结果应用3种不同的免疫抑制方案后，各组受者CD4^＋CD25^high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率均明显低于术前，虽然半年后有所上升，但CsA和FK506组各项指标上升明显较SRL组慢，SRL组各项指标恢复水平明显优于钙调磷酸酶抑制剂组。结论SRL与钙调磷酸酶抑制剂比较，对CD4^＋CD25^＋Treg细胞影响明显较轻，可能对器官移植术后移植免疫耐受的诱导和维持有促进作用。     

慢性乙型肝炎病毒感染者T淋巴细胞和NK细胞T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达与肝脏炎症和纤维化相关性分析

目的:探究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者T淋巴细胞及自然杀伤(NK)细胞T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)表达及其在评估肝纤维化程度中的潜在价值。方法:选取2016年6月1日至2018年6月1日于中山大学附属第三医院感染性疾病科门诊就诊的320例慢性HBV感染者,将其分成免疫耐受期组(31例),免疫活动期...     

不同浓度异丙酚对体外人辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的 探讨不同浓度异丙酚对体外人辅助性T淋巴细胞(Th细胞)分化的影响.方法 健康志愿者20名,男性9名,女性11名,年龄20～50岁,体重50～70 kg,每名健康志愿者分别采集外周静脉血20ml,进行全血培养,采用随机区组设计,分别接受下述处理:空白对照组(C组)、不同浓度异丙酚组[P1组(1 μg/ml)、P2组(4 μg,ml)、P3组(16 μg/ml)]、不同浓度异丙酚赋形剂组[I1 组(0.1μl/ml)、I2组(0.4μl/ml)、I3组(1.6 μl/ml)].每份血样培养于无菌24孔培养板中,依次加入上述药物培养24 h后加入氟波醇乙酯、离子霉素及蛋白质转运抑制剂刺激4 h,采用三色流式细胞技术检测全血中Th1细胞及Th2细胞的亚群比例,并计算Th1细胞与Th2细胞比值(Th1/Th2).结果 与C组比较,P3组Th1细胞亚群比例和Th1/Th2升高,I3组Th2细胞亚群比例降低(P＜0.05),其余组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与P1组比较,p3 组Th1细胞亚群比例和Th1/Th2升高(P＜0.05);与I3组比较,p3 组Th1细胞、Th2细胞的亚群比例升高(P＜0.05).结论 异丙酚16 μg/ml可使Th细胞向Th1细胞分化增加,1.4 μg/ml对Th细胞分化无影响.     

动脉粥样硬化患者外周血CD4 T 细胞及CD4+CD25highCD127- 调节性T 细胞的变化

目的：探讨动脉粥样硬化（AS）患者外周血CD4 T细胞及调节性T细胞（CD4+CD25highCD127- Treg）比例及功能的变化。 方法：选择AS患者（AS组）及健康体检者（健康对照组）各40例,抽取外周静脉血,用流式细胞术测定CD4 T细胞、CD8 T细胞、IFN-γ+ CD4 T细胞、IFN-α+ CD4 T细胞和CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例,以及各自的CD4+CD25highCD127- Treg细胞与CD4 T细胞共培养后,CD4 T细胞增殖能力以及CD4 T细胞分泌炎症因子能力的变化。 结果：与健康对照组比较,AS组外周血CD4 T细胞比例及CD4 T/CD8 T比值明显升高、IFN-γ+ CD4 T及IFN-α+ CD4 T细胞比例明显升高（均P<0.05）,而CD8 T细胞比例与CD4+CD25highCD127- Treg细胞比例差异无统计学意义（均P>0.05）。健康对照组CD4 T细胞的增殖能力、IFN-γ及IFN-α分泌能力在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培养后较其单独培养均明显降低（均P<0.05）,而AS组CD4 T细胞的以上指标在与CD4+CD25highCD127- Treg细胞共培与单独培养间差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：AS患者外周血CD4+CD25highCD127- Treg细胞功能的丧失,导致外周血CD4 T细胞比例升高、分泌炎症因子能力增强,从而引发AS的炎症状态。     

肾小球内T-bet或GATA3表达可辅助诊断排斥反应类型

T-bet和GATA3分别是促进辅助性T细胞（Th）向Th1和Th2分化的关键转录因子。抗体介导的慢性排斥反应和移植肾肾小球病患者肾小球内T-bet表达为主。那么,T-bet和GATA3表达水平的改变与肾移植后抗体介导的排斥反应（ABMR）和T细胞介导的排斥反应（TCMR）是否有关联？南京大学医学院附属金陵医院肾脏病研究所对此进行了相关研究。     

舒芬太尼或氯胺酮预先给药对成人静脉血辅助性T淋巴细胞分化的影响

目的 观察不同浓度舒芬太尼或氯胺酮预先给药对成人静脉血辅助性T细胞（Th细胞）分化的影响。方法 采集22名健康志愿者外周静脉血20ml。进行全血和外周血单个核细胞（PBMCs）培养。每一份血样均用于下列各组研究：空白对照组（C组）、不同浓度舒芬太尼组[0．05ng／ml（S1组）、0．5ng／ml（S2组）、5ng／ml（S3组）]及不同浓度氯胺酮组[100ng／ml（K1组）、500ng／ml（K2组）、2500ng／ml（K3组）]。培养的全血和PBMCs在体外均用相应浓度药物预先作用24h，然后加入相应的刺激剂（全血：氟波醇乙酯、离子霉素及蛋白质转运抑制剂，刺激4h；PBMCs：植物血凝素，刺激48h）。刺激结束后，采用流式细胞技术测定全血及PBMCs中20000个淋巴细胞中Th1及Th2亚群比例，并计算Th1细胞与Th2细胞的比值（TM／Th2）。结果 与C组比较，S2组及S3组Th1亚群比例下降，Th2亚群比例升高，S3组Th1／Th2下降；K2组及K3组Th1和Th2亚群比例均下降，K3组Th1／Th2升高（P〈0．05）。S1及K1组两种药物的上述作用均不明显。结论 舒芬太尼可促使111细胞向Th2细胞分化，氯胺酮则对Thl和Th2细胞的分化均有抑制作用，且以抑制Th2的程度更明显，以上作用均呈剂量依赖性。     

氯胺酮对人Th细胞分化及其转录因子GATA-3和T-bet表达的影响

目的 观察氯胺酮对体外培养的人Th细胞分化的过程及其核蛋白转录因子GATA-3和T-bet表达的影响.方法 利用体外细胞培养技术建立人Th细胞培养体系,根据加入药物的不同分为六组:对照组(C组)、氯胺酮50 μg/ml组(K组)、氯胺酮50 μg/ml+N-甲基-D门冬氨酸(NM-DA)50 μg/ml组(KN1组)、氯胺酮50 μg/ml +NMDA 100 μg/ml组(KN2组)、氯胺酮50 μg/ml+NMDA 150 μg/ml组(KN3组)、NMDA 150 μg/ml组(N组).淋巴细胞经过PHA刺激48 h后,检测淋巴细胞中Th1细胞、Th2细胞亚群及其比值(Th1/Th2)、培养上清液中干扰素(INF)-γ和白细胞介素( IL)-4的含量及淋巴细胞中核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的表达.结果 与C组比较,K、KN1、KN2和KN3组Th1、Th2细胞亚群减少,但K、KN1组Th1/Th2升高(P＜0.05或P＜0.01);与K组比较,KN3组Th1、KN2和KN3组Th2细胞亚群增多,KN2和KN3组Thl/Th2降低(P＜0.05或P＜0.01).与C组比较,K、KN1、KN2和KN3组IFN-γ和IL-4含量均降低(P＜0.05或P＜0.01);与K组比较,KN2和KN3组IFN-γ和IL-4含量增高(P＜0.05或P＜0.01).K、KN1、KN2和KN3组GATA-3和T-bet表达明显低于C组,且KN2和KN3组GATA-3和T-bet表达高于K组(P＜0.01),并且呈现剂量依赖性.结论 氯胺酮通过作用于NMDA受体对Th1和Th2细胞的分化产生抑制作用,这种抑制作用是通过抑制核蛋白转录因子GATA-3和T-bet的表达来实现的.     

转录因子T-bet与GATA结合蛋白3的比值在大鼠肺移植急性排斥反应中的mRNA表达及其意义

目的 探讨T-bet(T-box expression in T cells)和GATA结合蛋白3(GATA-3)在大鼠肺移植急性排斥反应中的mRNA表达及其意义.方法 建立同种异体大鼠肺移植模型,实验分为正常对照组(n=5只)、同种异体移植3 d组(n=4只)和5 d组(n=6只),用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测移植后肺组织中T-bet和GATA-3的mRNA表达.结果 实时荧光定量RT-PCR检测T-bet和GATA-3的扩增效率为78%～85%,批内和批间实验循环阈值(Ct)变化均＜0.15.与止常对照和右侧非移植肺比较,同种异体移植术后3 d组,T-bet和GATA-3无显著性改变,但其比值明显高于右侧肺;同种异体移植术后5 d组,T-bet表达增高(9.31拷贝/106 18 S拷贝),但差异无统计学意义(P＞0.05),GATA-3表达下降(0.88拷贝/105 18 S拷贝),T-bet/GATA3的比值增高(1.12),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 实时荧光定量RT-PCR检测T-bet和GATA-3结果准确可靠.在急性排斥反应中,T-bet表达升高,GATA-3表达降低,其中GATA-3的表达起主导作用.T-bet/GATA-3的比值比单独检测T-bet或GATA-3更能客观地评价大鼠肺移植急性排斥反应.     

不成熟树突状细胞体外诱导T细胞表达转录因子Foxp3

目的探讨不成熟树突状细胞（imDCs）能否在体外诱导T细胞高表达转录因子Foxp3。方法体外无菌培养BALB／c小鼠骨髓来源的不成熟树突状细胞，并通过脂多糖（LPS）刺激诱导其分化为成熟树突状细胞（mDCs）。在96孔细胞培养板中分别以不成熟树突状细胞（imDCs）2×10^4／孔和成熟树突状细胞（mDCs）2×10^4／孔与C57BL／6小鼠的脾淋巴细胞以1：5、1：10、1：50、1：100的比例共同培养6d。流式细胞术检测混合培养6d后的淋巴细胞CD4、CD25及转录因子Foxp3的表达。结果imDCs及mDCs和淋巴细胞混合培养6d后，淋巴细胞表面CD25的表达水平较正常淋巴细胞明显升高（P〈0．05）；mDCs与淋巴细胞混和培养6d后，淋巴细胞表达Foxp3的水平与正常淋巴细胞差异无统计学意义（P〉0．05），而用imDCs诱导则可使淋巴细胞表达Foxp3显著升高（P〈0．05）。结论imDCs可以在体外诱导T细胞上调转录因子Foxp3的表达。     

吗啡硬膜外镇痛剂量与患者术后尿潴留的关系

目的 评价吗啡硬膜外镇痛剂量与患者术后尿潴留的关系.方法 择期行膝关节镜手术的患者60例,年龄20～56岁,体重49～76 kg,性别不限,ASA Ⅰ级,随机分为3组(n=20),对照组(C组)硬膜外腔注射生理盐水5 ml;M1,2组硬膜外腔分别注射吗啡1和3 mg.采用Micro Maxx便携式超声仪测量患者膀胱尿量,记录术后产生排尿冲动时的膀胱尿量和首次排尿时间;于麻醉前和术后记录视觉模拟评分(VAS评分);记录术后尿潴留(膀胱尿量≥600 ml且30min内不能自行排尿)、恶心呕吐及瘙痒的发生情况.结果 与C组比较,M2组尿潴留发生率升高,VAS评分降低,M1,2组首次排尿时间延长,产生排尿冲动时的膀胱尿量增多,瘙痒发生率升高(P<0.05或0.01);与M1组比较,M2组尿潴留发生率升高、首次排尿时间延长,产生排尿冲动时的膀胱尿量增多,术后瘙痒发生率升高(P<0.05),VAS评分和镇痛有效率差异无统计学意义(P>0.05).结论 吗啡硬膜外剂量与患者术后尿潴留的发生有关,呈剂量依赖性,1 mg为推荐剂量.     

Effect of different concentrations of morphine and tramadol on the differentiation of human helper T cells in vitro

Editor—We investigated the effect of different concentrationsof morphine and tramadol on the differentiation of human adulthelper T cells in vitro. Twenty outpatients without any immunediseases were selected and their peripheral blood was collected.Whole blood or peripheral blood     

Apoptosis of allospecifically activated human helper T cells is blocked by calcineurin inhibition

BACKGROUND: Classical transplantation immunosuppression relies heavily upon the interruption of interleukin-2 (IL-2) signaling by calcineurin inhibition. However, recent evidence in murine models suggests that IL-2 is necessary for activation-induced cell death (AICD) of allograft-specific lymphocytes. METHODS: We examined the apoptotic effects of the calcineurin inhibitor cyclosporine A and mTOR inhibitor rapamycin on the apoptotic alterations that occur in allospecifically activated human lymphocytes in a one-way mixed lymphocyte culture (MLC). RESULTS: Cyclosporine increased caspase-3 activation in MLC, which corresponded with a decrease in lymphocyte apoptosis in MLC. Cyclosporine also reduced apoptosis in the CD4+ helper T cell subset, while CD8+ cells had similar or increased apoptosis when compared to controls. In contrast, rapamycin-treated cultures had normal levels of CD4+ T cell apoptosis when compared to control MLC, with decreases seen in CD8+ T lymphocytes. CONCLUSIONS: In humans, blockade of IL-2 receptor signal with rapamycin allows apoptosis of allospecifically activated CD4+ lymphocytes to occur, while blockade of IL-2 production with cyclosporine results in decreased apoptosis in this T cell subset. As helper T cells are integral to the immune response, these results may explain the tolerogenic effects of rapamycin.     

沉默STAT3基因对人胰腺癌细胞体内生长能力的影响

Objective To investigate the effect and mechanism of RNAi-mediated STAT3 gene silence on human pancreatic cancer cells growth in vivo. Methods STAT3 shRNA expression vector was stably transfected to SW1990 cells. STAT3 and p-STAT3 protein was examined using Western blot. The growth ability of SW1990 cells in vivo was determined in a subcutaneous tumor model of nude mice. Western blot was performed to detect the protein expression of Bcl-xL and cyclin D1. Results The protein expression of STAT3 and p-STAT3 decreased by 90% and 92% by stable transfection of STAT3 shRNA expressing vectors(P ＜0. 05). Inhibition of STAT3 with RNAi significantly inhibited the growth ability of SW1990 cells in vivo( P ＜ 0. 05 ). The tumor weight significantly decreased( P ＜ 0. 05 ). Moreover, the relative Bcl-xL and cyclinD1 protein expression in SW1990-RNAi cells reduced by 56% and 50% compared with that of the parental SW1990 cells, respectively (P ＜ 0. 05). Conclusions Inhibition of STAT3 with RNAi significantly inhibits the growth ability of pancreatic cancer cells through down-regulating Bcl-xL and cyclin D1.