6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法细胞分为正常组、马兜铃酸A组、6-姜酚+马兜铃酸A共处理组,用CCK-8法及FDA活细胞荧光染色法检测细胞存活和形态,Hoechst法观察细胞凋亡,比色法检测细胞上清液SOD、 MDA、GSH、GSH-Px水平,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、caspase-3及cleaved-capase-3蛋白的表达。结果与马兜铃酸A组相比,6-姜酚+马兜铃酸A组能够升高HK-2细胞存活率,改善细胞形态,减少细胞凋亡数目,降低细胞上清液中MDA、GSH-Px的水平,并增强SOD、GSH水平,降低HK-2细胞内p-NF-κB p65、cleaved-capase-3蛋白表达。结论 6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用。     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5～200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2...     

木棉花提取物对H_2O_2诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨木棉花提取物对过氧化氢(H_2O_2)所诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECS)氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养HUVECS,采用MTT法检测木棉花提取物对正常HUVECS细胞毒性作用;给予不同浓度木棉花提取物(15,30,60 mg/L)预处理保护HUVECS 24 h后,采用0.5 mmol/L H_2O_2诱导损伤3 h建立氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量和谷胱甘肽-S转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;同时检测细胞中丙二醛(MDA)的含量及过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞内钙离子含量。结果:木棉花提取物对HUVECs细胞无毒性作用;与H_2O_2损伤模型组比较,15、30、60 mg/L剂量组的木棉花提取物能明显提高H_2O_2诱导损伤HUVECs的增殖活力,提高细胞上清液NO含量和SOD、GST活性,降低LDH漏出量;能增强细胞内CAT、GSH-Px的活性,降低MDA水平;同时能减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度。结论:木棉花提取物对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与通过抑制氧化应激、抗过氧化损伤以及清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡有关。     

马尾松树皮提取物对顺铂所致体外人胚肾细胞毒性的保护作用

目的: 体外探讨马尾松树皮提取物(PMBE)对顺铂所致肾毒性的保护作用,并初步探究其作用机制。方法: 体外培养人胚肾细胞HEK293,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)方法分别检测PMBE、顺铂对HEK293细胞生长的影响,以及PMBE对顺铂所致HEK293细胞毒性的保护作用;并检测各组细胞内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,以及过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和硫氧还蛋白酶(TrxR)的活性。结果: PMBE低浓度下促进HEK293细胞生长,较高浓度下对细胞产生轻微毒性;顺铂抑制HEK293细胞生长,使细胞内ROS,MDA含量升高,GSH含量降低,同时降低SOD,CAT和TrxR酶活性;加入PMBE预保护后,在一定范围内降低顺铂对HEK293细胞的损伤,降低ROS,MDA含量,升高GSH含量,以及提高SOD,CAT和TrxR酶活性。结论: 一定浓度的PMBE对顺铂所致人胚肾细胞的毒性有保护作用,其机制可能与PMBE的抗氧化性密切相关。     

鹿血晶通过降低肾小管上皮细胞的5-羟色胺合成及降解抑制顺铂诱导的肾损伤

目的探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制。方法人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶(160、400、1000μg/mL)组和单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)抑制剂氯吉兰(15μmol/L)组,加入药物预处理1 h后加入顺铂(20μmol/L)刺激24 h诱导细胞损伤。雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组及鹿血晶(0.78 g/kg)组,鹿血晶组预给药7 d,然后模型组及鹿血晶组ip顺铂(25 mg/kg)诱导肾损伤,继续治疗3 d后处死动物。检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,以及细胞及小鼠肾组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、...     

芳香新塔花总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(ZCF)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:采用体外培养HUVECs,分为正常组、模型组、芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和阳性药维生素C组。采用CCK-8法检测HUVECs活力,用试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。采用流式细胞术检测活性氧(ROS)和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率、GSH含量和SOD活性明显降低,MDA、LDH和ROS含量明显增加,细胞凋亡率显著上升;与模型组比较,芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和维生素C组可显著提高细胞存活率和SOD活性,明显增加GSH含量、减少MDA和LDH含量,抑制ROS的生成,显著降低细胞凋亡率。结论:芳香新塔花总黄酮对H2O2诱导的HUVECs损伤具有保护作用,机制可能与其增强抗氧化能力、降低ROS产生和抑制细胞凋亡有关。     

芳香新塔花总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(ZCF)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:采用体外培养HUVECs,分为正常组、模型组、芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和阳性药维生素C组。采用CCK-8法检测HUVECs活力,用试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。采用流式细胞术检测活性氧(ROS)和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率、GSH含量和SOD活性明显降低,MDA、LDH和ROS含量明显增加,细胞凋亡率显著上升;与模型组比较,芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和维生素C组可显著提高细胞存活率和SOD活性,明显增加GSH含量、减少MDA和LDH含量,抑制ROS的生成,显著降低细胞凋亡率。结论:芳香新塔花总黄酮对H2O2诱导的HUVECs损伤具有保护作用,机制可能与其增强抗氧化能力、降低ROS产生和抑制细胞凋亡有关。     

加味小柴胡汤对顺铂诱导大鼠肝BRL细胞过氧化损伤的保护作用

目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,观察加味小柴胡汤对顺铂诱导的BRL细胞生长、SOD、GSH-px、NOS活性、MDA、GSH、T-AOC含量的影响。结果:顺铂各剂量处理细胞OD值皆显著下降,且随剂量而加重;加味小柴胡汤大小剂量细胞OD值皆明显升高;顺铂组SOD、GSH-px、T-AOC活性、GSH含量均明显降低;MDA含量及NOS活性明显升高;两实验组SOD、GSH-px、T-AOC及GSH均较顺铂组升高,MDA及NOS降低,而以1组效果更显著。结论:顺铂可明显抑制肝细胞生长,诱致细胞过氧化损伤,加味小柴胡汤可提高细胞生长率,其作用与其明显的抗氧化能力有关,且有一定的量效关系。     

葡萄籽原花青素对原代培养海马细胞氧化应激的影响

目的:研究葡萄籽原花青素(GSP)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠原代培养海马细胞氧化应激损伤的影响。方法:采用原代培养的方法,建立H2O2致海马细胞氧化损伤模型,观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活力;化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量。结果:1 mmol/L的H2O2诱导海马细胞24 h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞内ROS和MDA含量增加,SOD、CAT及GSH-Px活性下降。而GSP可明显减少细胞损伤,使细胞内SOD、CAT及GSH-Px活性增加,并减少细胞内ROS和MDA含量。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高海马细胞的抗氧化能力有关。     

甘乐方对氧化损伤LO2细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨甘乐方对H_2O_2诱导损伤LO2细胞的护作用及其可能机制。方法:用800μmol/L的H_2O_2诱导LO2细胞,复制人正常肝细胞氧化损伤细胞模型。采用CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内MDA、GSH、CAT,荧光探针检测细胞内ROS水平和线粒体膜电位情况,ELISA法检测细胞内8-OHdG含量,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达。结果:与模型组比较,甘乐方能使H_2O_2作用下LO2细胞存活率显著升高,细胞内MDA、ROS、8-OHdG含量显著降低,GSH、CAT水平及线粒体膜电位显著升高,Caspase-3、Bax蛋白水平显著下调,G_0/G_1期细胞百分比显著降低,G_2/M期的细胞百分比显著升高(P0.05或P0.01)。结论:甘乐方对H_2O_2诱导的LO2细胞氧化损伤具有护作用。     

榭皮素对GSNO诱导损伤的内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的：考察榭皮素（Quercetin）对S-亚硝基化谷胱甘肽（GSNO）诱导损伤的内皮细胞的保护作用,探讨其保护机制。方法：内皮细胞（EA．hy926）预先给予不同浓度榭皮素,之后给予GSNO损伤,建立模型。采用：噻唑兰染色（MTT法）检测细胞存活率测定,之后通过对超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）,活性氧（ROS）,Caspase-3等指标测定进行分析。结果：榭皮素可明显提高内皮细胞内SOD,GSH—Px的活性,抑制MDA的产生,降低ROS的活性,减少细胞凋亡率,具有统计学差异（P〈0．05）。结论：榭皮素对GSNO诱导损伤的细胞具有保护作用,其机制可能与榭皮素可提高细胞内抗氧化酶活性有关。     

石斛合剂减轻H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激的研究

目的:观察石斛合剂含药血清对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激的影响及可能的机制。方法:体外培养的SH-SY5Y细胞预先予以石斛合剂含药血清(10%)孵育24 h,加入终浓度为400μmol·L-1的H_2O_2培养1 h,采用MTT法测细胞存活率、酶法测细胞内SOD活力、MDA和GSH含量、流式细胞术测细胞凋亡情况等,以观察石斛合剂含药血清对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的影响。结果:与模型组比较,石斛合剂含药血清能明显提高受H_2O_2刺激的SH-SY5Y细胞的存活率(P0.05),降低MDA水平和提高SOD和GSH活力(P0.01),并减少因H_2O_2引起的神经细胞凋亡。结论:石斛合剂可保护H_2O_2引起的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤并抑制其凋亡。     

鸡血藤黄酮类有效部位对人肺腺癌A549细胞氧化应激的影响

目的:探讨鸡血藤黄酮类有效部位( SSCE)对人肺腺癌A549细胞的杀伤活性与氧化应激反应的相关性.方法:实验分为SSCE高、中、低剂量组和正常对照组,各组分别加入不同浓度的SSCE(正常组用培养基代替)作用人肺腺癌A549细胞24 h后,采用脂质过氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测A549细胞MDA,GSH的含量;以2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针,用荧光酶标法和共聚焦荧光显微镜法检测活性氧(ROS);选择加入SSCE高浓度组同时加入抗氧化剂维生素C(Vit C),维生素E( Vit E),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),过氧化氢酶(CAT)作用细胞24 h后,采用CCK-8法检测A549细胞增殖情况及荧光酶标仪法检测ROS.结果:加入SSCE后,SSCE各组细胞MDA均含量上升(P＜0.01)、高浓度组GSH含量下降(P＜0.01);高、中浓度组细胞ROS含量上升(P＜0.01);共聚焦显示SSCE各组均有绿色荧光,其中高、中浓度组荧光较强;加入抗氧化剂后,各组细胞抑制率均降低(P＜0.05),ROS含量均下降(P＜0.01).结论:SSCE可以改变A549细胞MDA,GSH,ROS水平,其抗肿瘤作用可能是通过诱导肿瘤细胞氧化应激反应而实现的.     

绞股蓝黄酮对过氧化氢损伤A549细胞的作用

该文主要研究绞股蓝黄酮对H_2O_2氧化损伤的人肺腺癌A549细胞的修复作用并探讨其可能的作用机制。分别使用浓度为200~700μmol·L~(-1)的H_2O_2诱导A549细胞不同时间,从而建立氧化损伤模型,再用50 mg·L~(-1)绞股蓝黄酮保护10 h。利用MTT法检测6个绞股蓝黄酮化合物对H_2O_2损伤A549细胞活力修复的影响;DCFH-DA荧光探针检测细胞中ROS的含量;分别采用TBA法、NBT法和TNB法检测细胞内MDA,SOD和GSH的含量,Western blot法检测细胞内Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达。结果表明,500μmol·L~(-1)H_2O_2作用10 h,细胞存活率降低至60.4%,在50 mg·L~(-1)芦丁(1),4'-O-甲基-山柰酚-3-O-芸香糖(2),异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖(5),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(6)作用10 h后,细胞存活率显著提高。与正常组比较,H_2O_2损伤使SOD,GSH含量以及HO-1蛋白表达量降低,使ROS,MDA含量增加,引起细胞氧化损伤。与模型组比较,绞股蓝黄酮组可降低细胞内ROS,MDA的含量,提高SOD,GSH的含量,激活Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达,从而改善H_2O_2诱导的A549细胞氧化应激损伤。     

山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:将对数期生长的H9C2心肌细胞随机分为6组:空白对照组、模型组、NAC阳性对照组和山楂有机酸(浓度分别为6.25、25、100μg/m L)组。心肌细胞在100μg/m L H_2O_2作用2 h后,采用MTT法检测细胞增殖,利用试剂盒测定细胞外液LDH漏出量和GSH-Px活性及细胞内SOD、MDA水平。对心肌细胞进行HE染色,用光学显微镜观察细胞形态变化。结果:与模型组比较,山楂有机酸可促进H9C2心肌细胞增殖,使LDH漏出量和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05~P<0.001),并能明显抑制H_2O_2引起的心肌细胞形态改变。结论:山楂有机酸对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制可能和有效地改善细胞内抗氧化酶的活性,抑制氧化应激损伤有关。     

醒脑静注射液对β淀粉样蛋白25-35诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响

目的观察醒脑静注射液对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响,探讨其相关作用机制。方法用不同浓度醒脑静(5、10、20μL/m L)预处理SH-SY5Y细胞3 h,随后以25μmol/L Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞24 h制备阿尔茨海默病体外模型。实验细胞分为正常对照组、模型组和醒脑静低、中、高剂量组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,酶标法检测细胞内丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果与正常对照组比较,模型组中细胞内ROS含量明显增加,MDA水平明显升高,GSH、SOD水平明显下降(P0.05);与模型组比较,不同浓度醒脑静预处理组细胞凋亡率降低,细胞内ROS含量明显降低,MDA水平明显下降,GSH、SOD水平显著升高(P0.05)。结论醒脑静注射液预处理可抑制Aβ诱导的细胞氧化损伤,减少细胞凋亡,发挥细胞保护作用。     

栝楼桂枝汤对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究栝楼桂枝汤水提物(Glgzd)对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用。方法采用15 mmol/L谷氨酸诱导PC12细胞损伤,栝楼桂枝汤水提物干预24 h后,采用MTT法检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内ROS的表达,酶标仪检测细胞内GSH的含量。结果与对照组比较,谷氨酸诱导的PC12细胞存活率下降,ROS DCF荧光强度增强,GSH含量下降。经栝楼桂枝汤干预后,PC12细胞存活率提高,细胞内ROS表达减弱,GSH含量增加。结论栝楼桂枝汤可抑制谷氨酸引起的PC12细胞损伤,其作用机制可能是通过降低细胞内ROS的表达和增加GSH的含量这一途径。     

枸杞多糖对光诱导的人RPE细胞氧化应激的影响

目的研究不同浓度枸杞多糖(LBP)对光诱导的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞损伤的抗氧化作用。方法体外培养人RPE细胞株(ARPE-19),随机分为正常组、模型组、低剂量组、高剂量组。各光照组在培养箱内给予(16500±200)Lux的LED冷光灯光照细胞12h建立光损伤模型,正常组在暗环境中培养且不给予光照。通过线粒体绿色荧光探针观察线粒体形态;检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量。结果光照可诱导hRPE细胞线粒体形态结构改变;与正常组比较,模型组hRPE细胞SOD活力显著下降,ROS、MDA显著升高(均P0.01);与模型组比较,LBP高、低剂量组可升高SOD活力及降低ROS、MDA含量(均P0.01)。结论氧化应激在hRPE光损伤的发生中起着关键作用,枸杞多糖可以通过抗氧化功能对光诱导损伤的hRPE细胞起到保护作用。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:Aβ25-35造成PC12细胞损伤,检测细胞的存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化.采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化.Western blot法检测细胞内HO-1,Cyt C和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平.结果:芍药苷组(5,10,20 μmol·L-1)能不同程度地对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤,增加细胞存活率,减少LDH漏出率和MDA含量,增加抗氧化酶SOD,GSH-Px和HO-1的活性,减少细胞内ROS形成,提高线粒体膜电位,减少Cyt C释放和cleaved Caspase-3蛋白的表达.结论:芍药苷对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与抑制Aβ25-35诱导的氧化应激以及减轻线粒体损伤有关.     

ROS不参与Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid诱导的HepG2细胞凋亡

目的:确定活性氧(ROS)生成在Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)所诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT分析检测5F对HepG2细胞增殖的影响,再以Hoechst/PI法分析凋亡细胞的形态变化。为了评价细胞内ROS水平,采用了GENMED试剂盒。HepG2细胞经5F处理24 h,或1 mmol.L-1GSH预处理1 h再经5F处理24 h,然后以Cell Death Detection ELISA试剂盒检测胞浆核小体片段。结果:通过细胞活性分析证实,5F对HepG2的细胞毒作用随着5F浓度升高而增强。而凋亡变化,如染色质浓缩,则被Hoechst/PI染色所证实。经5F处理的HepG2细胞内ROS生成减少被观察到。5F诱导的胞浆核小体片段并不由于GSH降低ROS介导的信号转导水平而发生变化。并且,顺铂(CDDP)诱导的ROS生成可被5F清除,同时5F还显示了与CDDP协同杀伤细胞作用。结论:5F不仅能通过非ROS依赖途径诱导细胞凋亡,还可缓解氧化应激。