逆转录病毒表达载体N2A／hGM－CSF的构建及其在COS－7细胞的初步表达

用特异性核酸内切酶ＢａｍＨＩ剪切质粒ｐＣＤ／ｈＧＭ－ＣＳＦ，制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段，低融点胶回收后，连接至Ｎ２Ａ载体ＢｇｌⅡ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒Ｎ２Ａ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。利用ＤＥＡＥ－葡聚糖介导该重组质粒转化ＣＯＳ－７细胞，收集４８ｈ培养上清液，免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然ＧＭ－ＣＳＦ的活性，而用质粒Ｎ２Ａ转化ＣＯＳ－７细胞，培养上清中未检测出ＧＭ－ＣＳＦ活性。     

逆转录病毒表达载体N2A／hGM—CSF的构建及其在COS…

用特异性核酸内切酶Ｂａｍ Ｈｉ剪切质粒ｐＣＤ／ｈＧＭ－ＣＳＦ，制备人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因片段，低融点胶回收后，连接至Ｎ２Ａ载体Ｂｇ１Ⅱ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，经快提质粒进行酶切鉴定和核酸打点杂交筛选出重组质粒Ｎ２Ａ／ｈＧＭ－ＣＳＦ。利用ＤＥＡＥ－葡聚糖介导该重组质粒转化ＣＯＳ－７细胞，收集４８ｈ培养上清液，免疫学和生物学活性检测表明该上清中表达产物具有天然ＧＭ－ＣＳＦ的活性，而用质粒     

人CASK/LIN-2下游信号分子的初步研究

目的：揭示人类新基因ＣＡＳＫ／ＬＩＮ－２的生物学功能,运用酵母要效ＬｅｘＡ系统寻找与ｈＣＡＳＫ的鸟苷酸激酶结构域（ｇｕａｎｙｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ－ｌｉｋｅ,ＧＫ）相互作用的蛋白信号分子。方法：将ｈＣＡＳＫ的ＧＫＤＮＡ片段亚克隆ｐＬｅｘＡ融合表达质粒,得到的重组质粒ｐＬｅｘＡ－ＧＫ转化酵母ＥＧＹ４８。经证实该重组质粒无转录活性并能进入胞核,结合ＬｅｘＡ操纵基因。将人胎脑文库质粒转化ＥＧＹ４８（ｐＬｅｘＡ－ＧＫ,ｐ８０ｐ－ｌａｃＺ）,在Ｇａｌ／Ｒａｆ ｈｉｓ－ｔｒｐ－ｕｒａ－ｌｅｕ－和Ｇａｌ／Ｒａｆ ｈｉｓ－ｔｒｐ－ｕｒａ－Ｘ－ｇａｌ条件下筛选ｌｅｕ＋和ｌａｃＺ＋酵母克隆,提取上述阳性酵母质粒转化大肠杆菌ＫＣ８,分离出文库质粒;再将这些文库质粒转化ＥＧＹ４８（ｐＬｅｘＡ－ＧＫ,ｐ８０ｐ－ｌａｃＺ）,     

抗人肺癌mAb LC—1的人—鼠嵌合Fab片段基因表达质粒的构 …

表达抗人肺癌单克隆抗体ＬＣ－１的人－鼠嵌合基因工程抗体。方法将ｍＡｂ ＬＣ－１的ＶＬ和ＶＨ基因插入质粒ｐＳＷ１中,构建成表达ｍＡｂＬＣ－１人－鼠嵌合Ｆａｂ片段基因的质粒ｐＬＣ－１,转化大肠杆菌ＴＧ－１并在其中表达。结论成功地表达了具有较高亲和活性的人－鼠嵌合抗人肺癌的基因工程抗体。     

人重组IL—1受体拮抗剂在大肠杆菌的高效表达

利用ＰＣＲ技术从分裂素刺激的人外周血细胞ｃＤＮＡ文库扩增出人白细胞介素－１受体拮抗剂（ｈＩＬ－１ｒａ）的成熟分子编码区ｃＤＮＡ，将其克隆化插进高效表达的质粒载体ｐＫｐＬ－３α后，在大肠杆菌中高效表达出ｒｈＩＬ－１ｒａ，其Ｎ端序列与预期结果一致。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ｒｈＩＬ－１ｒａ的表达量占菌体蛋白的３０％以上。体外试验证明，该表达产物对单核细胞衍生的ＩＬ－１活性有明显抑制作用。     

人类G6PD顺德型〔Gd（－）Shunde〕基因在大肠杆菌中的表达

为了证明一种人类新突变型Ｇ６ＰＤ顺德型，ｃＤＮＡ５９２Ｃ→Ｔ与酶活性降低和其生化特性改变有关，将正常Ｇ６ＰＤｃＤＮＡ，插入人工诱变载体ｐＡＬＴＥＰＲ－１中，用体外定点诱变技术，将ｃＤＮＡ５９２位的Ｃ置换为Ｔ，然后再插入ｐＡＣＩ，在其本身无Ｇ６ＰＤ活性的大肠杆菌ＨＢ３５１突变株中进行表达。实验证明，从ＨＢ３５１株表达出的人Ｇ６ＰＤ，酶活性降低，ＫｍＧ６Ｐ降低，三种底物同类物利用率明显增高，与人类Ｇ６ＰＤ顺德型的生化参数完全一致，表明５９２Ｃ→Ｔ是引起Ｇ６ＰＤ活性降低和生化特性改变的直接原因。     

人IL-12的克隆、表达及生物活性的鉴定

目的：克隆中国人ＩＬ－２ｐ４０基因,构建ＩＬ－１２的真核基因表达载体。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ从北京地区人脐血树突状细胞（ＤＣ）中克隆ＩＬ－１２ｐ４０ｃＤＮＡ基因,并进行序列分析。利用ｐｃＤＮＡ３．１和ｐＬＸＰＸＳＮ构建ＩＬ－１２表达载体,转染人肝癌细胞后对其进行生物学和免疫学分析。结果：北京地区人ＤＣ中ＩＬ－１２ｐ４０ｃＤＮＡ基因２１０位密码子有独特的结构,为ＧＣＣ（Ａｌａ）。并且２３９和２９１位     

人类G6PD顺德型〔Gd（—）Shunde〕基因在大肠杆菌中的表达

为了证明一种人类新突变型Ｇ６ＰＤ顺德型，ｃＤＮＡ５９２Ｃ→Ｔ与酶活性降低和其生化特性改变有关，将正常Ｇ６ＰＤ ｃＤＮＡ，插入人工诱变载体ｐＡＬＴＥＲ－１中，用体外定点诱变技术，将ｃＤＮＡ５９２位的Ｃ置换为Ｔ，然后再插入ｐＡｃｌ，在其本身无Ｇ６ＰＤ活性的大肠杆菌ＨＢ３５１突变株中进行表达。实验证明，从ＨＢ３５１株表达出的人Ｇ６ＰＤ，酶活性降低，ＫｍＧ６Ｐ降低，三种底物同类物利用率明显增高，与人类Ｇ６     

结核杆菌HSP70在耻垢分枝杆菌中的表达及其免疫原性研究

目的在重组分枝杆菌中表达编码人结核杆菌（ＴＢ）热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的ＤｎａＫ基因，并观察其对小鼠的免疫效应。方法采用基因工程和免疫学技术将ＤｎａＫ基因及其两侧的表达调控区一起从质粒ｐＭＴ－７０中切出，经末端修饰后装入大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中，构建成新的重组质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０，并用以转化耻垢分枝杆菌及大肠杆菌，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的ＨＳＰ７０；以重组耻垢分枝杆菌分别经皮下及腹腔免疫小鼠，用淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）反映细胞增殖能力，以ＮＯ法检测巨噬细胞吞噬活性，并检测血清中特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体。结果ＴＢＨＳＰ７０能在分枝杆菌中表达，表达量占菌体总蛋白量的１０％，不能在大肠杆菌中表达；重组耻垢分枝杆菌以１０６ＣＦＵ的剂量经皮下免疫小鼠后，可使小鼠脾淋巴细胞刺激指数（ＳＩ）和腹腔巨噬细胞吞噬活性增高（Ｐ＜０．０５），并能刺激机体产生特异性抗ＴＢＨＳＰ７０的抗体，腹腔免疫激发的抗体滴度较皮下免疫为低，而ＳＩ无明显改变。结论构建的表达质粒ｐＢＣＧ－ＴＢ７０能在耻垢分枝杆菌中表达ＨＳＰ７０，该重组菌具有较强的免疫原性。     

恶性疟原虫疫苗研究VIPfCMR基因与人白细胞介素-2基因的连接与克隆

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ｐＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点。重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出正向插入的重组载体ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

汽车驾驶员腰椎保护带的振动防护效应测试及其生物力学作用分析

通过对汽车驾驶员腰部振动的测试 ,了解腰椎保护带对振动的防护效应并对其生物力学作用进行分析。以日本产五十铃八吨载重卡车 (TDG72 )为测试车型。在装载六吨货物以三种不同车速 (10、30、6 0 km/ h)行进在柏油公路时 ,分别在佩带和不佩带腰椎保护带的情况下 ,对驾驶员腰椎部位垂直振动和水平纵向振动进行实时测量 (传感器安置于裤腰带和保护带的背外侧 )。结果显示 :1驾驶员腰部振动频率多为 10 Hz以下 ,属低频振动 ;2垂直振动大于水平纵向振动 ;3系腰椎保护带时的振动测量值大于不系腰椎保护带的测量值。由于腰椎保护带改变了脊柱的生物力学和振动特性 ,从而起到了保护腰椎的作用。我们认为它是防治汽车驾驶员腰痛的良好方法之一。     

心音图运动试验的精密度和准确度的分析

“心音图运动试验”(PCGET)是新近提出的一项心肌收缩能力以及心血管病人和健康人的心力储备评估方法。为了验明 PCGET方法的可信度 ,我们进行了该方法的精密度和准确度的研究。对 30个志愿者进行了PCGET,不同检查者对同一受试者同一心动周期中 S1幅值测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=5 .0 5 0 .0 45 1,检查者 B的一组数据的 x± s=4.95± 0 .0 34 6 ,F=1.6 99,P>0 .0 5。不同检查者对同一受试者同一心动周期测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=0 .789± 0 .0 0 18,检查者 B的一组数据的 x± s=0 .787± 0 .0 0 17,F=1.16 7,P>0 .0 5。对 PCGET运动前后心脏变力性状态评估的准确度为 10 0 %。结果表明 ,PCGET的精密度和准确度高 ,可作为心力储备的无伤性、简便、经济的量化测评方法。     

新生儿心肺功能监护仪的设计与新生儿生理参数的确定

本文介绍了新生儿心肺功能监护仪的软硬件设计,该仪器具有体积小,功能全面,适用性广,操作简单等特点,能可靠地实现对新生儿的监护,用该仪器对新生儿的血氧饱各度和心率这两个最重要的生理参数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率这两个最重要热处理到达数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率都属于正态分布,并依此给出了中国新生婴儿的这两个参数的分布范围。     

医学图像非刚性配准研究进展

医学图像非刚性的配准在医学诊断和治疗计划中起着重要的作用,学者们为此提出了各种非刚性配准算法.本文首先分析了非刚性配准的必要性;接着介绍了近年来提出的典型非刚性配准算法,给出了这些方法的基本原理及研究进展,最后对非刚性配准的发展方向进行了展望.     

骨的应力适应性

加载骨细胞或成骨细胞膜上的力传导器,通过对第二信使、生长因子、骨基质、原癌基因等的作用,促进骨代谢。骨的应力反应与骨所受应力大小成正比,应力的大小、性质、作用时间与骨的应力适应性均有关系。     

微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及应用

目的介绍微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及临床应用.方法根据慢性细菌性前列腺炎的病理特点,在临床实验的基础上,结合生物医学工程技术和现代中医药理论,研制出微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪.试用于治疗慢性细菌性前列腺炎病人600例.结果临床治愈459例(76.5%),显效101例(16.8%),好转40例(6.7%).无任何副作用.结论微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪对慢性细菌性前列腺炎是一种良效、安全、舒适而科学的治疗新途径.     

重组人宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体重链可变区基因的高效表达及纯化

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从人源噬菌体抗体库中筛选出的宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体基因扩增了重链可变区基因，将其克隆到表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ内，转化大肠杆菌ＤＨ５α，获得高效表达，表达量占全菌总蛋白质的４０％左右，表达出的融合蛋白分子量为４×１０４，以包涵体形式存在。将此融合蛋白包涵体变性、复性后通过谷胱甘肽亲和层析柱（ＧＳＴＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱），得到电泳纯的融合蛋白，每升培养物能纯化到２０～３０ｍｇ融合蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明宋内痢疾杆菌脂多糖鼠单抗（５Ｂ１２）能特异地结合到分子量４×１０４的融合蛋白的带上。ＥＬＩＳＡ试验显示融合蛋白与宋内痢疾杆菌脂多糖单抗（５Ｂ１２）有结合活性，而与无关单抗，如大肠杆菌Ｊ５株单抗（Ｅ３）、炭疽杆菌单抗（Ｆ８ＦＡ）、鼠伤寒沙门氏菌单抗（Ｍ４６７）及乙肝病毒单抗（Ｍ１１）不结合。     

半环平面可调试外固定架的设计原理与力学性能分析

对所研制的半环平面可调式外固定架从结构原理及力学性能方面作了较详细的介绍与分析,该固定架在设计上,由于采用了有活动关节的双向移动连杆机构、因而通过调节各连杆长度,不但能使与之相连的两半环钢板间距相对改变,实现固定骨折与延长肢体的功能,而且还可改变一端钢板的平面角度,实现对畸形骨干的矫形功能。     

DICOM医学图像的存储与管理

随着数字化医学成像设备在医院的广泛使用,对医学图像及相关数据的存档管理以及在不同科室之间的数据共享的要求越来越迫切,这就需要建立PACS(图像存档和通讯系统),这方面国外已经发展了很多年,我国目前处于起步阶段.本文参照PACS系统的一个已经被国际认可的医学图像标准即医学成像和通讯标准DICOM(digital imaging and communication in medicine),研究了标准的各个部分,特别是兼容性、信息对象定义(IOD)、服务对象对类(SOP)、数据编码等部分,就具体实现PACS系统的一个重要方面即医学图像的存档和管理做了深入的探讨,在此基础上建立了医学图像数据库系统,为实现医学图像信息的网络共享打下了基础.     

在体实时血液粘度的测量研究

传统的血液粘度测定方法均采用离体测量方式、存在着测量时间长，测量过程中干扰困素多，测量后的血样被破坏等缺点，因此在测量速度、精度及重复性方面均不令人满意。为此我们提出了一种快速实时测量新鲜血液粘度的新方法，即利用特制针头作为测量毛细管，在采血过程中实现血液粘度的测量。这种新方法具有用血量少、测量快速，重复性好的优点，具有很重要的临床应用价值。