脑源性神经营养因子与睡眠呼吸暂停综合征的相关性

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSA HS）是一种严重危害人类健康的慢性睡眠呼吸疾病,可累及心血管、神经、代谢及内分泌等全身多个系统及器官,引起一系列的并发症。脑源性神经营养因子（B DNF）是由脑组织合成的一种蛋白质,在神经营养因子家族中含量最多、分布最广,近年来研究较多。越来越多证据表明,B DNF在OSA HS很多并发症中表达常有异常。论文总结最新的研究成果,对B DNF在OSA HS并发的多个系统及器官疾病中的可能作用机制进行综述,为后续研究拓宽可能存在的线索。     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞在受损耳蜗内的生存和分化

目的探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor gene,BDNF)基因转染的骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSC)在受损耳蜗内的生存和分化情况。方法将转染了BDNF基因并在体外诱导分化的BMSC(BDNF-BMSC)标记后,通过鼓阶注射植入阿米卡星致聋的豚鼠耳蜗内(BDNF-BMSC组,18只),并设注射未诱导分化的BMSC的豚鼠为对照组(BMSC组,18只)。在注射后1、2、4w取耳蜗组织石蜡切片,HE染色和荧光染色观察注射细胞的分布;神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protien,GFAP)抗体免疫组化染色观察注射细胞在耳蜗内的分化。结果 BDNF-BMSC和BMSC在耳蜗内均能成活并分布到一定的区域,鼓阶和前庭阶较多,中阶和蜗轴较少。NSE和GFAP免疫化学可见BDNF-BMSC部分细胞阳性染色,而BMSC阳性细胞较少。BDNF-BMSC在1、2w时平均光密度(AOD)值较高,在4w时显著下降(P<0.05);在各时间点,BDNF-BMSC组AOD值均显著高于BMSC组(P<0.01)。结论诱导分化前后的BMSC耳蜗移植后均能成活并分布到一定的区域,在耳蜗内BDNF-BMSC分化能力明显强于BMSC,但随时间延长分化能力下降。     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的 观察腺疾病携带的脑源性神经营养因（brain derived neurotrophic factor,BDNF）在豚鼠耳蜗中的表达，及噪声损伤后螺旋神经节的保护作用。方法 27只白色纯豚鼠，暴露于135dBSLP，4kHz的窄带噪声4h。7d后，12只经圆注入腺病毒携带BDNF（adenoviral-mediated BDNF,ad-BDNF），12只经圆窗注入ad-LacZ,3只注入人工外淋巴液。分别于1、4、8周后取材，石蜡包埋中轴切片后，用免疫组化方法（ABC法）检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果 在耳蜗各回中BDNF均有表达，4、8周组动脉较1周组织动物表达弱。在8周，注入ad-BNDF组较adLacZ组和人工淋巴组螺旋神经发生退行性病变的数目少，螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验，P＜0．01，差异有显著性。结论 腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达，在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础。     

脑源性神经营养因子和神经生长因子对顺铂诱导的内耳毒性的保护作用

目的研究豚鼠耳蜗内脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)在顺铂致耳中毒后的表达,并探讨其对内耳的保护作用。方法将豚鼠分成对照组、顺铂组,分别给生理盐水、顺铂腹腔注射,于注射后3、5、7天取豚鼠耳蜗行石蜡切片,进行BDNF和NGF免疫组织化学染色,观察螺旋神经节BDNF和NGF蛋白表达。结果对照组耳蜗螺旋神经节细胞中BDNF几乎不表达,NGF呈中度阳性表达。顺铂组BDNF在3天时达到高峰,以后减弱;NGF在5天时达到高峰,以后减弱。结论正常豚鼠耳蜗有中度NGF的表达,表明NGF可能对内耳的正常生理功能起重要作用。顺铂干预后螺旋神经节BDNF和NGF出现高表达,提示BDNF和NGF对顺铂诱导的螺旋神经元损伤有保护作用。     

脑源性神经营养因子促进鼻咽癌细胞CNE-2迁移的分子机制

目的 检测脑源性神经营养因子BDNF对鼻咽癌细胞CNE-2迁移过程的影响,以探讨BDNF对无TrkB表达的鼻咽癌细胞促进迁移的作用及其机制.方法 应用免疫印迹方法检测CNE-2细胞BDNF和TrkB蛋白的表达,采用细胞划痕实验检测BDNF对CNE-2细胞迁移能力的影响.结果 CNE-2细胞中高表达BDNF但不表达TrkB.BDNF依然能够促进CNE-2细胞迁移而且具有剂量依赖性,其中25 ng/mL BDNF促细胞迁移的作用具有明显的统计学差异(P＜0.01).K252a抑制Trk激酶活性不影响BDNF促细胞迁移作用(P＜0.01).结论 BDNF在不表达其高亲和力受体TrkB的鼻咽癌细胞中依然能够发挥促细胞迁移的作用,而且这一作用的机制很可能是通过其他受体及通路进行介导的.     

非病毒载体介导脑源性神经营养因子基因的体外转染小鼠耳蜗螺旋神经节细胞实验研究

目的　探究经聚醚酰亚胺（polyetherimide,PEI）表面修饰后的纳米羟基磷灰石载体介导脑源性神经营养因子（derived neurotrophic factor,BDNF）体外转染效率,表达产物对庆大霉素所致小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）细胞损伤的保护作用。方法　构建经PEI表面修饰的纳米羟基磷灰石载体和BDNF基因真核表达质粒,体外培养并转染小鼠耳蜗SGCs细胞;分别采用实时定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）、蛋白质免疫印迹和细胞计数试剂盒kit-8（cell counting kit-8,CCK-8）细胞毒实验,检测体外培养小鼠耳蜗SGCs细胞及纳米羟基磷灰石载体介导BDNF基因的体外转染及表达效率,对耳毒性药物庆大霉素所致SGCs细胞损伤的保护作用。结果　DNA核酸电泳结果显示成功构建带有巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子的BDNF真核表达质粒;qRT-PCR和蛋白质免疫印迹结果显示与转染空质粒对照组相比,转染BDNF表达载体构建后SGCs原代细胞中BDNF的mRNA水平显著上调4.19倍（t =5.744,P <0.05）,蛋白水平显著上调3.03倍（t =6.627,P＜0.05）,差异有统计学意义。此外,蛋白质免疫印迹和CCK8细胞毒实验结果表明,庆大霉素处理可显著抑制小鼠耳蜗SGCs细胞内BDNF基因表达,加剧细胞毒性,转染纳米羟基磷灰石载体介导qRT-PCR BDNF基因可明显逆转庆大霉素对SGCs的细胞毒作用,差异有显著统计学意义（t =10.015,P <0.01）。结论　经PEI表面修饰的纳米羟基磷灰石载体可显著增强BDNF基因的跨膜能力,显著上调SGC细胞内BDNF表达产物的表达及对庆大霉素所致SGCs细胞损伤的保护作用,为内耳基因治疗的临床开展及应用提供实验和理论依据。     

脑源性神经营养因子延迟应用对感音神经性聋影响的实验研究

目的探讨药物致聋后,延迟给予脑源性神经营养因子(brain-drived neurotrophic factor,BDNF)对耳蜗病理及听觉生理的影响。方法药物致聋大鼠20只,随机平均分为人工外淋巴液(artifical perilymph,AP)组和BDNF组。左侧耳蜗为实验侧,右侧耳蜗为对照侧。致聋30天后通过微渗透压泵向鼓阶内持续灌注AP或BDNF,期间进行电诱发听性脑干反应(electrically auditory brainstem response,EABR)阈值检测。持续给药28天后取耳蜗进行病理检查,观察Rosenthal管内螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)胞体密度及骨螺旋板缰孔内神经纤维密度。结果EABR阈值AP组持续升高,BDNF组阈值初期上升缓慢,后期开始下降,用药治疗14～28夭阈值低于AP组(P<0.01);耳蜗病理变化,SGC胞体密度及神经纤维密度左右侧对比,AP组双侧无差异(P>0.05),BDNF组左侧明显高于右侧(P<0.01);两组左侧比较,BDNF组高于AP组(P<0.01)。结论大鼠药物致聋30天后,鼓阶内BDNF持续给药对SGC胞体及树突均有保护作用,并可以相应改善电听觉敏感性。     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入腺病毒携带BDNF(adenoviral mediatedBDNF ,ad BDNF) ,12只经圆窗注入ad LacZ ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中BDNF均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物表达弱。在 8周 ,注入ad BDNF组较ad LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验 ,P <0 0 1,差异有显著性。结论　腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达 ,在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础     

大鼠变应性鼻炎鼻黏膜中脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在大鼠变应性鼻炎发病中的作用。方法:选健康SD大鼠30只,雌雄不限,随机分为实验组20只,对照组10只。实验组用卵清蛋白行腹腔注射基础致敏,继之鼻局部激发建立大鼠变应性鼻炎模型;对照组以生理盐水代替卵清蛋白。采用RT-PCR方法检测实验组和对照组大鼠鼻黏膜中BDNF mRNA的表达。结果:实验组大鼠鼻黏膜中BDNF/β-actin(内参照)为0.49±0.07,对照组大鼠鼻黏膜中BDNF/β-actin(内参照)为0.28±0.01,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BDNF在大鼠变应性鼻炎的发病中具有重要作用。     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞初步观察

目的探讨骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesenchymal stem cells,BMscs）转染人脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）基因后在体外分化为神经元样细胞的功能。方法克隆人BDNF基因并构建其真核表达载体;分离培养5只豚鼠BMscs,观测其形态并用流式细胞仪鉴定;将人BDNF基因电穿孔法转染BMscs,G418筛选后用维甲酸诱导分化,免疫细胞化学法对分化细胞进行鉴定。结果分离培养的细胞具有典型的BMSCs形态和标志,转染诱导后的细胞表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白（Nestin）和胶质纤维酸性蛋白,并能分泌BDNF。结论BDNF基因转染的BMscs在体外能分化为神经元样细胞,电穿孔法能提高转染率,RA有促诱导作用。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征儿童认知行为异常与血清BDNF的相关性研究

目的 通过研究儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)认知行为异常与血清BDNF的关系,阐释儿童OSAHS认知行为异常可能的发病机制。方法 选择经整夜多导睡眠监测诊断的40例OSAHS及22例单纯鼾症的4～12岁儿童为研究对象,并以22例健康儿童为对照组。采用Conners简明症状问卷评定儿童行为问题,酶联免疫吸附方法检测各组儿童血清中脑源性神经营养因子(BDNF)的浓度。结果 OSAHS及单纯鼾症组存在行为问题的比率高于健康对照组(P<0.01), 而两组之间无统计学差异(P>0.05)。OSAHS组、单纯鼾症组BDNF水平低于健康对照组(P<0.01), 而两组之间无统计学差异(P>0.1)。OSAHS组伴有行为异常者BDNF水平低于不伴有行为异常者(P<0.01) ;单纯鼾症组伴有行为异常者BDNF水平低于不伴有行为异常者(P<0.05)。结论 OSAHS及单纯鼾症儿童较健康儿童有较高的认知行为异常发生率。血清BDNF水平的降低与OSAHS及单纯鼾症儿童的认知行为问题具有相关性。     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞对豚鼠受损耳蜗螺旋神经节细胞的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因转染的骨髓间充质干细胞(bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSC)对氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotics,AmAn)损伤的耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC)的保护作用.方法 采用兔抗鼠巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体免疫组化检测在体外转染了BDNF基因的BMSC(BDNF-BMSC)分化结果 .将BDNF-BMSC植入阿米卡星致聋豚鼠的耳蜗,并设单纯植入人工外淋巴组、BMSC植入组及BDNF基因植入组作为对照.分别在移植后1、2及4周取耳蜗组织,石蜡包埋切片,HE染色观察耳蜗病理改变、计算SGC密度;免疫组化染色计算相对吸光度值,比较各组对耳蜗SGC的保护作用.结果 转染后BDNF-BMSC的Nestin、NSE、GFAP阳性率均高于未转染的BMSC(P值均<0.01).耳蜗注射后在相同时间点各组间SGC密度和吸光度值差异均具有统计学意义(P值均<0.05),其中BDNF-BMSC组SGC密度最大、吸光度值最大;各组SGC密度和吸光度值在术后4周时比术后1周和2周时下降(P值均<0.05).结论 豚鼠耳蜗内移植BMSC、BDNF基因、BDNF-BMSC均可拮抗阿米卡星对SGC的损伤,其中BDNF-BMSC的保护作用最强.     

重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清同型半胱氨酸及脑源性神经营养因子水平与认知功能的相关性研究

目的探讨重度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)血清中同型半胱氨酸(Hcy)和脑源性神经营养因子(BDNF)水平与认知功能的关系。方法随机抽取60例重度OSAHS患者,使用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估认知功能,根据评估结果分为认知障碍组(18例)和认知正常组(42例),30例健康体检者为对照组。利用ELISA法测定各组血清中Hcy和BDNF水平。结果认知障碍组与认知正常组和对照组比较,MoCA总分、视空间与执行能力、注意力、抽象及延迟回忆存在差异(P < 0.01),而命名、语言能力及定向评分无明显差异(P>0.05)。认知障碍组血清Hcy水平(34.12±2.85)较认知正常组(30.88±2.10)增高,而血清BDNF水平(9.00±1.67)较认知正常组(11.64±1.73)降低。认知障碍组最低动脉血氧饱和度(LSaO₂)、睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)与认知正常组存在差异(P < 0.01)。认知障碍组血清Hcy与MoCA总分(r=-0.880, P=0.000)、LSaO₂(r=-0.595, P=0.009)及BDNF(r=-0.818, P=0.000)呈负相关,与AHI(r=0.681, P=0.002)呈正相关;血清BDNF与MoCA总分(r=0.751, P=0.000)及LSaO₂(r=0.521, P=0.026)呈正相关,与AHI(r=-0.553, P=0.017)呈负相关。血清Hcy和BDNF水平预测认知功能障碍ROC曲线下面积分别为0.902和0.927。结论OSAHS患者血清Hcy和BDNF水平的改变与认知障碍的形成有一定相关性,可作为生物标志物用于认知障碍的早期诊断和预测。     

The relationship between tinnitus pitch and the audiogram

We studied the relationship between tinnitus pitch and the audiogram in 195 patients. Patients with tone-like tinnitus reported a higher pitch (mean = 5385 Hz) compared to those with a noise-like quality (mean = 3266 Hz). Those with a flat audiogram were more likely to report: a noise-like tinnitus, a unilateral tinnitus, and have a pitch < 2000 Hz. The average duration of bilateral tinnitus (12 years) was longer than that of unilateral tinnitus (5 years). Older subjects reported a less severe tinnitus handicap questionnaire score. Patients with a notched audiogram often reported a pitch ≤8000 Hz. Subjects with normal hearing up to 8000 Hz tended to have a pitch ≥8000 Hz. We failed to find a relationship between the pitch and the edge of a high frequency hearing loss. Some individuals did exhibit a pitch at the low frequency edge of a hearing loss, but we could find no similar characteristics among these subjects. It is possible that a relationship between pitch and audiogram is present only in certain subgroups.     

脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞在药物致聋豚鼠内耳的表达及保护作用

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在药物致聋豚鼠内耳的表达及对螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)的保护作用.方法 阿米卡星致聋的豚鼠随机数字表法分为两组,治疗组经鼓阶开窗注射BDNF基因修饰的MSC,对照组注射外淋巴液.各组分别在术后7 d及28 d处死动物,荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测耳蜗组织中BDNF mRNA的表达,耳蜗切片计算SGC细胞密度,末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测SGC凋亡情况.结果 治疗组在术后7 d和28 d的BDNF mRNA相对表达量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P值均＜0.01).治疗组术后7 d及28 d的SGC密度均高于对照组,并且治疗组术后7 d及28 d的SGC凋亡指数也比对照组明显下降,差异具有统计学意义(P值均＜0.01).结论 BDNF基因修饰的MSC在致聋豚鼠内耳中的表达时间超过28 d,对SGC具有保护作用.     

新疆喀什地区变应性鼻炎与STAT6基因多态性关联研究

目的通过研究信号转导和转录激活因子6（STAT6）基因多态性与变应性鼻炎的相关性,探讨STAT6链上1570C/T位点基因多态性与变应性鼻炎发病之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法（PCR-RFLP）检测92例变应性鼻炎患者（病例组）和422例健康人群（对照组）的STAT6基因1570C/T位点多态性,比较两组的基因型和等位基因的分布频率。结果病例组TT、CT和CC基因型分布频率分别为5.43%、70.65%和23.91%;而对照组TT、CT和CC基因型分布频率分别为4.48%、75%和20.05%,两组的基因型分布频率和T1570和C1570等位基因分布频率均无差异（P=0.644、P=0.724）。结论病例组和对照组之间的STAT6基因1570C/T多态性基因型频率差异无统计学意义,提示STAT6（1570C/T）基因多态性与变应性鼻炎可能没有相关性。     

OSAHS与耳鸣的相关性研究现状

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)是睡眠障碍性疾病的常见类型,长期的呼吸暂停和低通气可引起不同程度的低氧血症,继发组织缺血缺氧,引起中枢及周围听觉系统损伤,使听觉传导通路异常、中枢听觉皮层产生适应性变化,进而导致耳鸣的感知。OSAHS患者体内5-羟色胺(5-HT)神经递质增多,激活受5-HT控制的听觉核团,影响听觉核团的神经电活动,继发耳鸣的产生。OSAHS患者自主交感神经系统兴奋,刺激耳蜗神经纤维诱发耳鸣;同时激活边缘系统和自主植物神经系统,进而产生焦虑、抑郁等不良情绪加重耳鸣。OSAHS患者长期睡眠结构紊乱形成睡眠剥夺,大脑内有毒代谢物质堆积,使耳鸣的中枢代偿障碍,继发耳鸣的产生。