耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗生素耐药和耐药基因的检测

目的探讨北京地区社区感染和院内感染中金黄色葡萄球耐药情况变化。方法用琼脂稀释法检测了471株从北京地区收集的金黄色葡萄球菌对11种抗生素的敏感水平(其中422株菌株从1993年至2000年门诊脓疱疮患儿分离获得,49株从2000年烧伤病房住院患者分离获得)。用聚合酶链反应方法对上述菌株进行了mecA耐药基因的检测。结果引起社区感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的比率由1993年的12.2%上升至2000年的29.8%,对甲氧西林均表现为低度耐药。引起院内感染的金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药率为63.3%,表现为高度耐药。所有的金黄色葡萄球菌对青霉素100%耐药,对红霉素、四环素、克林霉素和氯霉素的耐药率分别约80%、70%、60%和50%。引起社区感染的金黄色葡萄球菌中未发现庆大霉素和利福平耐药菌株,对环丙沙星的耐药率由1993年的2.4%上升至2000年的21.3%;引起院内感染的金黄色葡萄球菌中对庆大霉素、环丙沙星和利福平的耐药率分别为63.3%、63.3%和57.1%。所有的金黄色葡萄球菌均对夫西地酸和万古霉素敏感。2000年分离的多重耐药菌株比例较1993年有所增加。PCR对mecA耐药基因的测定结果显示,所有对甲氧西林高度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阳性;对甲氧西林低度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阴性。结论在本实验所及范围内,北京地区金黄色葡萄球菌的耐药率逐渐上升,mecA耐药基因测定是筛选耐药MRSA菌株的快速、简易手段。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及SCCmec 基因分型研究

目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药性及SCCmec 基因分型,探讨临沂市人民医院MRSA 菌株的流行趋势,为临床预防和有效治疗MRSA 感染提供理论依据。方法 选取2018 年2 月—10 月临沂市人民医院门诊及住院患者的各类送检标本,从中分离得到MRSA 菌株47 株,剔除同一患者多次分离得到的菌株,仅留取第1 次分离的菌株,采用VITEK-2 Compact 全自动微生物分析仪对收集的菌株进行细菌鉴定和药敏试验。采用聚合酶链反应对SCCmec 基因分型进行研究。结果 47 株MRSA 分离菌株中SCCmec Ⅱ型9 株（19.15%）,SCCmec Ⅳ a 型35 株（74.47%）,另有3 株未分型（6.38%）。MRSA 分离菌株对青霉素、苯唑西林及头孢西丁等β- 内酰胺类抗菌药物全部耐药,对奎奴普汀/ 达福普汀、利奈唑胺、万古霉素、替加环素、呋喃妥因、利福平及庆大霉素敏感率为100% ;SCCmec Ⅱ型对环丙沙星、左氧氟沙星及莫西沙星的耐药率高于SCCmec Ⅳ a 型（P <0.05）。SCCmec Ⅳ a 型对红霉素、克林霉素耐药率高于SCCmec Ⅱ型（P >0.05）。结论 分离的MRSA 菌株以SCCmec Ⅳ a 型为主,不同SCCmec 基因型的耐药谱有差异,临床医生应根据药敏结果合理使用抗菌药物。     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA/B的检测

消毒和灭菌是控制医院感染的重要方法,随着消毒剂的广泛使用,临床上逐渐产生对消毒剂不敏感或常规消毒剂浓度不能有效杀灭的细菌.同抗生素对细菌的作用一样, 细菌对消毒剂产生耐药性将是不可避免的.金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌之一,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)在医院内感染和社区感染占有较大的比例,其检出率逐年增高.因MRSA具有耐多药特征,已成为临床抗感染治疗的难题.为了解MRSA菌中耐消毒剂基因的qacA/B存在状况,对2005年2月～2005年10月临床分离的20株MRSA菌进行消毒剂基因qacA/B的检测,报告如下.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ的耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印迹杂文（ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３’寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份常规培养法ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩增阳性的标本，常规培养ＭＲＳＡ为阴性。作者认为，由于ＰＣＲ对检测ＭＲＳＡ的ｍｅｃＡ基因具有快速、较强的特异性和敏感性等特点，作为检测临床标本中的ＭＲＳＡ的方法是可行的。     

新疆乌鲁木齐市耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及 PV L基因检测

目的了解乌鲁木齐市临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对常用抗菌药物的敏感和耐药情况及杀白细胞素(PVL)基因的携带率,为临床治疗及控制MRSA感染提供依据。方法采用K-B纸片扩散法进行药敏试验分析耐药性,采用PCR法检测PVL基因。结果 49株MRSA对青霉素G和苯唑西林均耐药,对利福平、阿奇霉素、红霉素、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和克林霉素的耐药率分别为95.9%、77.8%、77.8%、88.9%、86.7%、83.67%和67.35%;对呋喃妥因耐药率为2.2%,未发现对万古霉素耐药的菌株;PVL基因阳性率为63.3%。结论乌鲁木齐地区MRSA的耐药性比较严重,应加强监测,合理使用抗菌药物。     

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌57株的葡萄球菌染色体mec基因盒基因分型及耐药性分析

目的 了解上海长征医院临床分离的医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)的葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)的基因分型及耐药状况.方法 收集上海长征医院2010年8月-2011年8月从医院获得性肺炎下呼吸道分离的57株HA-MRSA.应用聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,多重PCR方法对HA-MRSA进行SCCmec基因分型.采用标准的K-B纸片扩散法测定HA-MRSA对β内酰胺类抗生素(青霉紊、苯唑西林、头孢西丁、头孢曲松)和非β内酰胺类抗生素[环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、克林霉素、利福平、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺和复方磺胺甲基异(哑)唑(TMP-SMZ)]的敏感性.结果 57株HA-MRSA的mecA基因均为阳性,有39株明确分型,其中SCCmec Ⅱ型11株(19.3％),SCCmec Ⅲ型19株(33.3％),SCCmec Ⅳ b型1株(1.7％),SCCmec Ⅳ c型1株(1.7％),SCCmec Ⅳ d型7株(12.3％),未发现SCCmec Ⅰ型和SCCmec Ⅴ型.另有18株(31.6％)mecA基因阳性菌株未能分型.全部57株对青霉素、苯唑西林、头孢西丁、头孢曲松耐药;55株(96.5％)对左氧氟沙星耐药,1株中度敏感,1株敏感;56株(98.2％)对环丙沙星耐药,1株敏感;54株(94.7％)对红霉素耐药,1株中度敏感,2株敏感;47株(82.5％)对克林霉素耐药,2株中度敏感,8株敏感;25株(43.9％)对TMP-SMZ耐药,1株中度敏感,31株敏感;10株(17.5％)对利福平耐药,47株敏感;57株对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺均敏感,耐药率为0.结论 上海长征医院临床分离HA-MRSA的SCCmec基因型以Ⅲ型、Ⅱ型为主,除1株携带SCCmecⅣb型的HA-MRSA外,其余56株(包括SCCmec Ⅱ、Ⅲ、Ⅳc、Ⅳd型)均具有多重耐药的特征.     

45株MRSA消毒剂的最小杀菌浓度和耐消毒剂基因的检测

目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)对洗必泰、新洁尔灭消毒剂的耐药性和消毒剂耐药基因的检出情况.方法 收集2007年1月-2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用稀释中和法测定细菌对洗必泰、新洁尔灭、碘伏的最小杀菌浓度;采用聚合酶链式反应对45株MRSA的消毒剂耐药基因qacA进行检测.结果 MRSA对洗必泰、新洁尔灭消毒剂产生了抗药性,消毒剂耐药基因qacA的检出率为40%.结论 MRSA对洗必泰、新洁尔灭等临床常用消毒剂多重耐药,消毒剂耐药基因qacA是MRSA对消毒剂耐药的重要机制.     

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究

目的 使用基因芯片结合仪器法液体快速培养分析耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交法检测耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)菌株中利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对RFP和INH的敏感性.结果 以MGIT960药敏结果作为参考标准,34株MDR-TB中,基因芯片检测MTB对RFP、INH药的符合率分别为85.29%和94.11%;32株RFP耐药突变株中22株为rpoB 基因531位密码子突变,29株INH耐药突变株中24株为katG基因315位密码子突变.结论 基因芯片技术可快速、有效地检出MDR-TB,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.     

急性白血病多药耐药基因检测及其临床意义

应用原位杂交方法检测多药耐药基因（Ｍｄｒｌ）表达，观察其与临床耐药的关系，探讨Ｍｄｒｌ检测的临床应用价值。方法自行构建ＲＮＡ探针直接在骨髓涂片上行原位杂交，检测４５例急性白血病ＭｄｒｌｍＲＮＡ表达。对部分高表达者调整临床治疗方案。结果复治组中Ｍｄｒｌ阳性占８８％，初治组４２．８％，有极显著差异。经标准化疗２个疗程后初治组中Ｍｄｒｌ阳性者完全缓解率（ＣＲ）２２％，阴性者ＣＲ６３．６％，Ｐ＜０．００１。对Ｍｄｒｌ阳性病例通过调整化疗方案或加用逆转剂可改善预后。结论Ｍｄｒｌ高表达确为白血病不良预后的主要指标，原位杂交检测Ｍｄｒｌ表达对临床治疗有指导意义。     

凝固酶阴性葡萄球菌医院内感染与耐药性研究

对２８例院内甲氧西林耐药的凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）感染病例及３７例院内甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＳＣＮＳ）感染病例，进行了临床和细菌学研究。结果显示，ＭＲＣＮＳ感染病例包括呼吸道感染、尿路感染、败血症、皮肤软组织感染等疾病，它们多发生在有基础疾病患者，表现为发热、纳差等症状，病死率较高。致病细菌包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等８个菌种的葡萄球菌。耐药性研究表明，ＭＲＣＮＳ菌株占４３．１％，其对大多数抗菌药物的耐药率都比较高，但对万古霉素全部敏感。建议可选择万古霉素治疗院内ＭＲＣＮＳ感染患者。     

2型糖尿病口服耐药者血清GAD抗体的检测及意义

目的：探讨2型糖尿病口服耐药现象与血清谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）产生的相关性。方法：将72例2型糖尿病患者根据降糖药治疗效果分成口服耐药组和口服药有效组,检测两组患者血中GADA,血糖及餐后空腹和C肽水平。结果：C肽水平口服耐药组明显低于口服药有效组（P〈0．005）,血糖水平口服耐药组明显高于口服药有效组（P〈0．001）,口服耐药组GADA检出率明显高于口服药有效组（p〈0．05）。结论：GADA在2型糖尿病口服耐药人群检出率较高,提示2型糖尿病人口服降糖药耐药现象可能与胰岛β细胞功能的免疫损伤有关。     

医院内铜绿假单胞菌耐药基因分布特点的研究

目的分析山东省两所三级甲等医院铜绿假单胞菌药物敏感性以及耐药基因分布特点。方法采用ATB系统进行细菌分离鉴定及药物敏感试验;聚合酶链反应检测三类耐药基因分布情况。结果 A医院菌株对哌拉西林-他唑巴坦和亚胺培南耐药性较高,B医院菌株对阿米卡星和妥布霉素耐药性较高。两所医院铜绿假单胞菌aac(3)-Ⅱa、ac(6′)-Ⅰa、ac(6′)-Ⅱ和parC耐药基因检出率差异有显著性(χ2=7.57~10.27,P<0.05);oprD2耐药基因缺失率均较高,差异无显著性(P>0.05)。黏液型和非黏液型菌株耐药基因检出率差异无显著性(P>0.05)。结论不同医院铜绿假单胞菌临床分离菌株均表现出多重耐药,但其耐药基因分布以及耐药情况有所不同。     

NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达

目的：研究nucleostemin(核干细胞因子，NS)基因在人成骨肉瘤细胞(0S-732)和人胚胎肾细胞(HEK-293)的表达情况，井克隆该基因的部分片段。方法：以0S-732细胞和HEK-293细胞为实验材料，进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果：(1)提取的总RNA质量很高，基本上无降解；(2)0S-732细胞和HEK-293细胞中均有NS基因的表达，并且在相同量底物的情况下，0S-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞；(3)将PCR产物成功地与pGEM-T克隆载体连接，构建为FGEM-T-NS质粒，测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论：本成功地从0S-732细胞和HEK-293细胞克隆到NS基因片段，0S-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞。     

174例小儿细菌性腹泻病的病原菌及其耐药性分析

目的：了解本地区细菌性腹泻病的病原菌及耐药情况；方法：对2001年1月-2003年1月我院收治的334例腹泻患儿粪便中分离出细菌的174例病历的临床资料、粪便培养及药敏试验结果进行分析；结果：栓出细菌168例(革兰氏阴性杆菌155株，革兰氏阳性球菌13株)、真菌6例，检出率为52．1％，分属于13属17种174株菌。药敏结果显示：一线抗菌素耐药率高，革兰氏阴性杆菌对亚胺培南、丁胺卡那、氨曲南、第三代头孢菌素、复方青霉素耐药率低，革兰氏阳性球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁耐药率低，白色假丝酵母菌对制霉菌素均敏感；结论：小儿腹泻病检出细菌谱广，脓血便者细菌培养阳性率高．致泻性大肠埃希氏菌肠炎为主．耐药谱广．敏感药物少．临床医生可选药谱窄。     

鲍曼不动杆菌的分离及耐药分析

①目的监测我院近年临床标本鲍曼不动杆菌的分布特点及其耐药情况，以指导临床合理用药。②方法从临床标本中分离鲍曼不动杆菌，用K-B方法行药敏试验，按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）2001年制定最新规则及标准进行结果判读。③结果2001年1月～2003年6月，我院共分离出不动杆菌356株，其中鲍曼不动杆菌279株，占不动杆菌的78．37％，痰标本中分离出214株，占76．70％；尿标本分离出20株，占7．16％；分泌物标本分离出35株，占12．54％；脑脊液标本分离出4株，占1．43％；胸腔积液标本分离出6株，占2．15％。鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素交叉耐药严重，除亚胺培南外，其他药物耐药率均高于60％。④结论鲍曼不动杆菌在临床的分离率逐年增加，耐药性逐渐增强，应引起重视。     

青海地区胃癌组织中耐药基因P-糖蛋白的表达及其意义

目的研究耐药基因P-糖蛋白(P-gp)在青海地区胃癌患者肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学链霉菌素-生物素法(S-P法),对56例胃癌组织进行P-gp检测,并与正常胃黏膜组织对比。结果P-gp在胃癌组织中的阳性表达明显高于正常胃组织(P<0.01),在低分化胃癌组织的阳性表达率明显高于高、中分化型胃癌组织(P<0.05)。P-gp阳性表达与胃癌浸润深度有明显关系(P<0.05)。结论P-gp表达与胃癌浸润深度、细胞分化程度有密切关系。