人类血小板抗原1～4系统基因分型

目的 :建立人类血小板抗原 1～ 4系统序列特异性引物 (PCR SSP)分型方法。方法 :合成 14条引物 ,采用PCR SSP方法对 2 5名健康献血者的HPA 1～ 4系统进行基因分型 ;分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交 (PCR ASO)获得的结果进行比较。结果 :以PCR SSP方法对HPA 4个系统进行分型均取得了明确、满意的结果 ,且与PCR ASO方法获得的结果完全一致。结论 :人类血小板抗原PCR SSP基因分型方法具有简便、快速、准确等优点 ,具有广泛的应用前景。     

单采血小板献血者献血反应发生的原因及对策

血小板是临床常用的血液成分之一,以其纯度高、疗效好、输血不良反应少等优点,越来越受到临床的欢迎。单采血小板是应用血细胞分离机进行制备的,制备1个治疗单位的血小板约需50～90min,处理血量约2000~3500ml,故采集时间较长,体外循环血量较大,少部分献血者可能会发生头晕、面色苍白、皮肤湿冷、恶心、呕吐等献血反应。献血反应的发生,不仅可能影响到血小板的采集,     

用PCR方法检测献血者的HCMV感染情况

我们用PCR方法对某医院110名献血者的HCMV感染情况进行了检测和分析。结果发现,献血者中HCMV-DNA阳性率为61.8％(69/110);同时显示出HCMV-DNA阳性率随年龄增大而增高,由于献血者中存在着HCMV高带毒率的现象,建议在免疫缺陷病人,移植者及婴儿等特殊易感人群输血时,应对献血者的血液进行HCMV的检测和筛选。     

SYBR Green Ⅰ聚合酶链反应检测人白细胞抗原-DRB1*12

目的 建立一种人白细胞抗原(HLA)基因分型方法。方法 用序列特异性引物和荧光染料SYBR GreenⅠ聚合酶链式反应(PCR)方法，对1份已知HLA—DRB1*12的标本和12份未知型别的临床标本进行HLA—DRB1*12位点检测和分型。结果 12份标本的扩增产物经熔解曲线分析，有3份标本为DRB1*12，产物用离心柱纯化后，直接进行DNA测序，结果证实为DRB1*12阳性。结论 SYBR Green Ⅰ PCR操作简便，结果准确，可成为一种HLA基因分型的新方法。     

安徽合肥地区单采血小板捐献者血样的HPA基因分型

目的 检测安徽合肥地区单采血小板捐献者血样的HPA基因分型,统计本地区血小板捐献者HPA基因型分布频率.方法 ①采用多重荧光PCR的方法对1181名18-55周岁的单采血小板捐献者血样进行HPA1-6,10,15,21的基因分型检测.②采用SBT直接测序的方法对22名18-55周岁的单采血小板捐献者血样进行HPA基因型...     

Report on the 1997 International Society of Blood Transfusion Workshop for Genotyping of Platelet Alloantigens

The results from the 1997 International human platelet antigen- (HPA-) genotyping workshop are reported. Seventeen institutions participated to genotype for HPA polymorphisms of seven DNA samples. Most investigators used the polymerase chain reaction (PCR) — restriction fragment length polymorphism (RFLP) and PCR-sequence specific priming (SSP). A few participants applied both methods to confirm their results. All participants reported results for HPA-1, -2, -3 and -5 allotyping, while HPA-4 was determined in 12 and HPA-6 in nine laboratories, respectively. For HPA-1 to -6 there were 19 deviations from the consensus result. These deviations were not associated with any particular technique or allotype. Most frequently, however, deviation were reported for HPA-5 typing. These results were discussed at a meeting at the Joint Congress of the ISBT and the Deutsche Gesellschaft für Transfusionsmedizin und Immunhämatologie in Frankfurt, Germany, in September 1997. Based on the results and the comments, further workshops for HPA-allotyping are mandatory for quality assurance.     

应用PCR法对临床血标本中人微小病毒B19的检测分析

目的探讨PCR法检测临床血标本中人微小病毒B19(HPV B19)的应用价值。方法根据序列比对结果,在HPV B19核苷酸相对保守区设计引物进行PCR扩增。应用双脱氧链末端终止法对HPV B19阳性PCR产物进行克隆测序。结果应用该法最终检出HPV B19的血清稀释度为10^3。序列比较表明,用本法检出的1株HPV B19阳性标本与标准株(Au株)核苷酸序列同源性为92％。检测肝癌和肝硬化患者血清标本各14例,结果HPV B19阳性分别为8例和5例。结论本法可用于HPV B19的临床诊断和流行病学调查。     

机采血小板中游离DNA含量的测定及影响因素分析

目的测定机采血小板（AP—PCs）中游离DNA的含量，并分析其影响因素。方法从53例合格献血者各采集AP—PCs1个治疗剂量后，尽快从其中留取标本，并将其分成5份。其中1份用于血液分析仪检测，另外4份于采集后4h内、24、48和72h时，分别在过滤前后、离心前后等不同状态下进行DNA抽提，用实时定量PCR方法（RQ—PCR）对其中的人类白蛋白基因进行检测，并将结果换算成白细胞当量（WBCs／v1）。结果AP—PCs在采集后的4h内、24、48和72h时，其过滤前游离DNA的含量（WBCs／μl）分别为13．3±6．1，24．7±10．7，47．5±20．1和146．3±63．2；过滤后其相应值（WBCs／μl）则为8．1±3．7，22．2±9．4，44．7±18．7和125．8±57．9。过滤前后游离DNA含量差异无统计学意义（F=2．922，P〉0．05），不同保存时间组之间游离DNA含量差异具有统计学意义（F=512．734，P〈0．01）。ABO血型不同的AP—PCs经过相同保存时间后，其过滤前游离DNA含量差异无统计学意义（F=0．662，P〉0．05）。结论AP—PCs中游离DNA的含量随着保存时间的延长而上升，但与过滤与否及供者血型无关。     

影视片干预减轻机采血小板捐献者焦虑及疼痛的研究

目的研究用捐血者个人喜爱的影视片干预减轻机采血小板捐献者在捐血过程中焦虑、血压、心率及静脉穿刺疼痛的作用。方法将286名机采血小板捐献者随机分成观察组和对照组。观察组带耳机通过DVD观看选定的影视片。对照组不观看影视片。在捐血过程中,以状态-特质焦虑问卷的状态焦虑分量表,对两组分别进行测试,同时记录心率、血压及静脉穿刺疼痛值。结果干预前两组的心理、生理指标无显著性差异。干预后观察组和对照组焦虑评分分别为(35.65±7.59)分和(43.22±9.50)分、收缩压(15.34±0.85)kPa和(15.61±1.18)kPa、舒张压(10.32±0.53)kPa和(10.44±0.40)kPa、心率(72.43±8.15)次/min和(74.29±7.15)次/min及疼痛值(1.97±1.54)分和(2.30±0.67)分。两组5项指标相比,均有显著性差异,P<0.05。结论观看影视片可以明显减轻机采血小板捐献者捐血过程中的焦虑及疼痛反应,且对捐献者的血压、心率有正性影响。     

人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型别鉴定。方法利用ＨＰＶ通用引物介导ＰＣＲ（ＧＰＰＣＲ）扩增靶ＤＮＡ，然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰＰＥＩＱＩ），与预先包被在微孔板上的ＨＰＶ寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测。结果ＨＰＶ各型之间无交叉杂交；杂交灵敏度可达１３～７６个病毒ＤＮＡ拷贝，比ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测高１０倍；该法重复性好，阳性孔批内ＣＶ为６．３４％，批间ＣＶ为１０．５３％，阴性孔批内ＣＶ为１％，批间ＣＶ为５．７９％；而且杂交影响因素较少。结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便，无放射性和ＥＢ染料污染，杂交时间短、仪器读取结果，便于大量常规临床样本定性或定量检测。     

新疆汉族人群血小板抗原1—5、15系统基因多态性分析

目的调查研究与血小板输注无效关系密切的人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1—5及15系统基因在新疆汉族人群中的遗传多态性。方法采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法对101例无血缘关系的新疆汉族血样进行HPA基因分型。结果新疆汉族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、15a基因频率分别是0.9851、0.9208、0.5446、1、0.9505、0.4653,HPA-1b、2b、3b、4b、5b、15b基因频率分别是0.0149、0.0792、0.4554、0、0.0495、0.5347,新疆汉族HPA基因频率与维吾尔族人群相比,HPA-1a、1b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,HPA-3、15系统具有高度多态性。     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒检测的临床意义

目的探讨尖锐湿疣（CA）患者人乳头瘤病毒（HPV）DNA定量测定及HPV分型。方法用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对133例CA患者疣体组织进行HPV分型和HPV DNA定量检测。结果133例CA患者经二氧化碳激光治疗后有93例治愈,40例复发。HPV亚型分析显示,133例标本中检出HPV DNA阳性131例（98.50%）,110例（82.71%）基因型为HPV6/11,12例（9.02%）为HPV16/18,9例（6.77%）为HPV6/11合并HPV16/18。对131例HPV DNA阳性患者治疗前病毒载量进行分组比较,病毒载量为10^3-10^5拷贝/mL的患者50例,有11例患者复发;病毒载量10^5-10^7拷贝/mL的患者39例,有14例患者复发;病毒载量为〉107拷贝/mL的患者42例,有15例患者复发。HPV6/11有23例复发,HPV16/18有10例复发,HPV6/11合并HPV16/18有7例复发。结论CA检测HPV DNA能区分高危型HPV和低危型HPV感染,可对CA复发及癌变进行预测。     

多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.     

聚合酶链反应方法检测外周血淋巴细胞HLA-A mRNA方法学的建立及在肾移植中的初步应用

目的通过建立检测宿主外周血淋巴细胞(PBL)表面HLA-AmRNA表达程度的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)方法,检测肾移植患者移植后外周血淋巴细胞表面HLA-AmRNA的表达程度,探讨其在诊断移植后早期排斥反应的发生的价值及机体免疫状态的关系。方法以6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)作内参照,用Taqman探针荧光定量技术,建立检测PBLHLA-AmRNA的RT-FQ-PCR方法;并检测35例随访移植患者的不同时间的60个标本和60名正常人的阈循环数(Ct),然后用REST软件分析PBLHLA-AmRNA的表达水平。结果正常人和51个移植标本的PBLHLA-AmRNA对G6PDH的相对表达量分别为0·036±0·012和0·026±0·015(双侧t=1·981,P<0·05),提示服用免疫抑制药(目前临床用药剂量均偏大)后患者PBLHLA-AmRNA表达减弱,机体免疫状态低,无排斥反应发生但易导致感染、肿瘤等并发症的产生;其中9个移植标本的PBLHLA-AmRNA对G6PDH的相对表达量为0·042±0·017(双侧t=2·002,P<0·05),提示较其他51例移植标本患者PBLHLA-AmRNA表达增强的患者,经病例回访查询发现该5例移植患者在这期间有排斥反应(根据临床表现、肾功能检查、影像学及核医学检查的临床排斥反应期)的发生,其中1例在移植后6个不同时间的标本显示2次有增高,每次经治疗后均降低。结论建立的宿主PBLHLA-AmRNART-FQ-PCR检测方法简便、特异、重复性好、可信度高,可用于肾移植后PBLHLA-AmRNA表达水平的检测,评估机体的免疫状态,预测排斥反应的发生。     

血培养联合PCR对HIV感染者和AIDS患者分枝杆菌血症诊断的分析

目的评价应用BACTEC Myco/F Lytic（MFL）培养基血培养联合聚合酶链反应（PCR）对人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者和获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者合并分枝杆菌（MB）感染诊断的效果。方法用MFL配合BACTEC 9120血培养仪对55例可疑合并MB感染的HIV/AIDS患者血标本进行培养,联合抗酸染色和PCR对阳性标本进行菌种鉴定。结果 55例患者血培养分析显示,MFL血培养的总报阳率为32.7%（18/55）,其中7例（12.7%）报阳标本经证实为MB生长,8例（14.5%）报阳标本中未检出任何微生物,暂定为假报警,3例（5.4%）检出污染菌。其中MB的平均培养周期为746.79 h,约31.1 d。7例MB培养阳性标本经PCR鉴定,5例（71.4%）为结核分枝杆菌（TB）,2例（28.6%）为鸟分枝杆菌复合体（MAC）。结论 MFL血培养能协助临床诊断MB血症,该法操作简单、安全性高,但培养周期较长,且存在假报警及某些需氧菌污染的情况,故宜联合其他检测手段对MB血症进行检测。