碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及其信号机制。方法:全骨髓贴壁法培养MSCs,流式细胞仪分析其表面MSCs标记(CD45、CD34、CD90、CD29)以及成骨、成脂肪等多向诱导分化潜能,鉴定其特征。MTT法分析不同浓度bFGF对MSCs增殖的影响,确立最佳浓度bFGF诱导MSCs增殖的时间特征,分别以磷脂酰肌醇3-激酶、促分裂素原活化蛋白激酶、磷脂酶C、蛋白激酶C、钙通道和钙泵选择性抑制剂等处理P3MSCs后,观察其对bFGF介导MSCs增殖的影响。结果:培养的MSCs表现CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;bFGF诱导MSCs增殖呈时间和剂量依赖特征,5.4×10-4mol/L bFGF作用48 h时MSCs增殖达峰值;磷脂酶C阻断剂U73122、钙通道阻断剂和选择性蛋白激酶C阻断剂等明显抑制了bFGF所介导的MSCs增殖效应;尤其是非选择性PKC抑制剂Straurosporine、钙泵选择性抑制剂thapsigargin以及蓝尼定受体抑制剂Ryandoine均抑制bFGF所诱导的MSCs增殖。结论:bFGF通过Ca2+/PKC/Erk1/2途径促进MSCs的增殖。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义(P=0.067),表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。     

碱性成纤维细胞生长因子和地塞米松联合诱导骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松联合对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:以第三代BMSCs为实验材料,分别给予10%FBS的DMEM培养基,含80μg/LbFGF的10%FBS的DMEM培养基,含bFGF80μg/L+地塞米松10-8mol/L+β-甘油磷酸钠10mmol/L+维生素C50mg/L的10%FBS的DMEM培养基处理,通过计数BMSCs细胞数评价其增殖能力,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测及茜红素染色评价其成骨分化的能力。结果:与对照组相比较,bFGF可以显著提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,bF-GF和地塞米松联合不仅促进了骨髓间质干细胞的增殖,而且促进碱性磷酸酶的表达和钙结节的形成。结论:bFGF和地塞米松联合促进了骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞成骨活性的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为广泛的具有较高生物活性的生长因子之一,对骨髓间充质干细胞有广泛的作用。该文就bFGF促进间充质干细胞向成骨细胞分化方面的研究进展做一综述。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞成骨活性的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为广泛的具有较高生物活性的生长因子之一,对骨髓间充质干细胞有广泛的作用.该文就bFGF促进间充质干细胞向成骨细胞分化方面的研究进展做一综述.     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对肺微血管内皮细胞的作用

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）对肺微血管内皮细胞的作用。方法选用4周龄 SD 大鼠,分离、培养大鼠 BMSCs。实验分6组,A 组加入质粒 bFGF －pcDNA3．1, B 组加入质粒 pcDNA3．1,C 组加入转染质粒 bFGF －pcDNA3．1的 BMSCs,D 组加入转染质粒 pcDNA3．1的 BM－SCs,E 组加入 BMSCs,F 组加入 PBS 液,通过与肺微血管内皮细胞在 Transwell 体系下共培养,共培养24、48、72 h后 CCK －8检测肺微血管内皮细胞的增殖情况。 Western blot 方法检测 bFGF 蛋白的表达。结果bFGF 基因转染BMSCs 后可以大量表达 bFGF;C 组为肺微血管内皮细胞增殖率最高的组别,其与 A、B 及 F 组的细胞增殖率对比,差异均有统计学意义（P ＜0．05）;而与 D 组及 E 组相比,虽然差异无统计学意义（P ＞0．05）,但有增高趋势,且随共培养时间延长,增高趋势越明显。结论BMSCs 具有刺激肺微血管内皮细胞增殖的作用,而转染 bFGF 基因的BMSCs 具有更强刺激肺微血管内皮细胞增殖的作用且具有时间依赖性。     

碱性成纤维细胞生长因子对羊骨髓间充质干细胞体外增殖和分化的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对羊骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外增殖与分化的影响。方法：体外分离培养的羊原代BMSCs分为实验组和对照组,实验组添加bFGF(2 μg•L^-1)于L-DMED培养液中,对照组使用L-DMED常规培养液。分别测定2组BMSCs生长曲线以及碱性磷酸酶（ALP）活性。应用诱导剂对2组细胞进行成骨、成脂肪诱导,分别在显微镜下观察其分化潜能。 结果：单个核细胞接种大约1周成纤维细胞样集落开始出现,2周后形成的集落数量增加,每个集落的体积变大。当第1代BMSCs细胞生长到汇合期时,实验组细胞数是对照组的2.5倍。于第16天实验组ALP活性比对照组明显降低（P＜0.05）。2组BMSCs经成骨诱导培养3周后,经Von Kossa染色,已经成骨的细胞内均可见钙盐沉积;已经成骨的细胞内油红-“O”染色显示,成脂肪诱导培养2周后,2组BMSCs均能分化形成脂肪细胞,2组每高倍视野下脂肪细胞计数差异无显著性（P>0.05）。 结论：bFGF能提高羊BMSCs集落形成数量及扩增效率,并抑制其ALP活性,同时保持了BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞的分化潜能。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响

[目的] 研究碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞( MSC)增殖的影响.[方法] 用α- MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学 SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度 bFGF对 MSC生长曲线和克隆形成率的影响.[结果] 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落 14 d时接近融合,传代后细胞体积变大,约 5～ 7 d传代 1次;免疫组化显示 MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性.浓度 10 ng/mL和 20 ng/mL bFGF组的 MSC的细胞数和克隆形成率比 5 ng/mL bFGF组和对照组(无 bFGF)明显增加,具有高度显著性( P< 0.01).[结论] bFGF可明显促进 MSC的增殖.     

碱性成纤维细胞生长因子体外诱导犬骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的探讨不同剂量的碱性成纤维细胞生长因子体外定向诱导犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）向心肌样细胞分化的可行性。方法采用密度梯度离心法分离犬BMSCs并进行传代培养。四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞术检测第3代BMSCs的增殖及DNA周期;取第3代BMSCs设置对照组,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）10、100μg·L^-1组进行体外诱导培养,镜下观察其形态变化,细胞生长曲线法检测细胞增殖情况;免疫荧光法鉴定心肌肌钙蛋白I（TnI）、肌球蛋白重链（MHC）和波形蛋白（Vimentin）的表达。结果密度梯度离心法得到的BMSCs呈长梭形、聚集性生长,第3代BMSCs MTT法检测结果显示细胞生长阶段为潜伏期、对数生长期及平台期。DNA周期检测结果:G₀/G₁期为（91.90±1.68）%,表明绝大部分细胞处于非增殖状态。经诱导分化3周后,3组细胞经生长曲线法检测结果显示:1³ d,bFGF10、100μg·L^-1组细胞数较对照组增殖明显,差异有统计学意义（P<0.05）;4⁵ d,对照组细胞呈对数生长趋势,bFGF 10、100μg·L^-1组细胞数量减少;6⁷ d,bFGF诱导组较对照组细胞数明显减少（P<0.05）,而bFGF 10μg·L^-1组与bFGF100μg·L^-1组比较细胞数量明显偏少（P<0.05）。免疫荧光法检测结果显示:经诱导分化4周后,bFGF 10μg·L^-1组和bFGF100μg·L^-1组的细胞均表达TnI和MHC,不表达Vimentin;对照组均不表达TnI、MHC和Vimentin。结论 10μg·L^-1bFGF能够有效促进BMSCs的体外增殖,并具有向心肌样细胞分化能力。     

干细胞因子和碱性成纤维细胞生长因子在体外对间充质干细胞的作用

目的研究干细胞因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外对间充质干细胞(MSC)的作用特点,探索体外大量培养间充质干细胞的方法和条件。方法用梯度离心和贴壁培养法分离MSC,进行表面分化抗原的鉴定。培养体系中分别加入SCF、bFGF或SCF bFGF,用MTT实验和检测细胞周期来观察细胞的增殖情况。结果加入SCF和bFGF后MSC的增殖活性增强,两种因子作用强度相近,两者合用刺激增殖的效果未见增强。结论SCF和bFGF有刺激MSC增殖的作用,可以在一定程度上延迟MSC在体外培养过程中的退化现象。     

BMP/FGF对骨髓基质细胞生长作用的研究进展

骨形态发生蛋白(BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)因能够促进骨髓基质细胞的生长和分化引起广泛关注,单一或组合因子以及不同剂量、不同浓度配比的BMP/FGF发挥促进细胞生长的作用可能不同,细胞因子在骨组织工程构建中具有重要的作用,有利于诱导成骨,形成新生血管,探讨其骨生物学效应成为骨组织工程的一个重要方向。     

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞的影响

目的：观察骨髓基质细胞的培养及不同浓度碱性成纤维生长因子（bFGF）对其生长的影响。方法：采用全麻下抽取兔股骨骨髓，经体外培养的方法并在培养注保加入４种不同浓度的bFGF(0,60,120,240ng/ml)培养后经倒置显微镜观察；并用试剂盒测定细胞碱性磷酸酶的含量。结果：６０、１２０ng/ml的bFGF能明显促进骨髓基质细胞的生长（Ｐ＜0．01），其余两组无明显差异。而4组之间的细胞碱性磷酸酶含量在3天无明显差异，6天时加入bFGF组的细胞碱性磷酸酶含量明显下降。结论：bFGF对骨髓基质细胞的影响是复杂和多方面的；不同剂量浓度对骨髓基质细胞生长的影响亦不一样，并不呈正相关，合适的有效浓度为60－120ng/ml。     

骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞是一群均一的细胞，具有自身的增殖特征及组织化学特征．它在适宜的微环境中能分化为成骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞和星状神经细胞等，它易于分离、扩增，易于外源基因导入表达，有望成为细胞治疗和基因治疗的新型靶细胞，具有广阔的应用前景。     

Apelin-13促进骨髓间充质干细胞增殖

目的 探讨apelin-13是否促进骨髓间充质干细胞增殖。 方法 分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,用不同浓度apelin-13（0.1 μmol/L、1.0 μmol/L和10.0 μmol/L）处理细胞24 h后,分别用流式细胞术和噻唑蓝比色法（MTT）,观察apelin-13对骨髓间充质干细胞增殖的影响。 结果 倒置显微镜下观察到apelin-13促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,流式细胞术检测结果表明,apelin-13刺激后处于S期和G2-M期的细胞数目显著增加,G0-G1期的细胞数目显著减少。进一步MTT结果表明,apelin-13处理后大鼠骨髓间充质干细胞增殖显著增加,并呈浓度依赖性。 结论 apelin-13能促进骨髓间充质干细胞增殖。     

血管内皮细胞生长因子165在诱导骨髓间充质干细胞内皮化中的作用

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)向血管内皮细胞的诱导分化,进一步探讨血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)在细胞增殖和分化中的作用.方法 将分离纯化至第3代的MSCs作为种子细胞,对照组(A组)不加生长因子,实验组(B、C、D、E组)分别加入5、10、50和100 ng/ml VEGF165,培养24 h后各组间行细胞增殖比较,14 d后终止培养,观察各组细胞形态学改变,并对各组行血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR1/Flt1)免疫细胞化学染色.结果 培养14 d后,A、B、C、D、E组的VEGFR1/Flt1细胞染色阳性率分别为(2.159 8±0.255 5)%、(30.359 1±5.168 7)%、(44.764 3±2.101 1)%、(56.011 1±2.960 3)%和(86.243 8±0.966 3)%.结论 VEGF165对MSCs具有促进增殖和向血管内皮细胞诱导分化的作用,并且存在着量效关系.     

骨髓间质干细胞在糖尿病性骨质疏松发病中的作用

1型或2型糖尿病人患骨质疏松症和发生骨折的风险明显增加,其机制可能是由于骨髓间质干细胞(BMSCs)的耗竭。糖尿病通过高血糖等多种因素影响成骨细胞功能和骨形成,诱导骨髓细胞中脂肪累积,减少可用于骨形成的成骨细胞的数量,其中过氧化物酶体增殖物激活受体γ在BMSCs向成骨细胞或脂肪细胞分化上起着关键的闸门作用。由于糖尿病降低骨密度主要通过影响骨形成而非骨吸收,增加成骨细胞产生和禁止BMSCs流向脂肪细胞的途径,在理论上是预防和治疗糖尿病骨质疏松症的最根本方法。     

成人骨髓间质干细胞基本生物学特性

【目的】研究成人骨髓间质干细胞 (MSC)基本生物学特性。【方法】采用Ficoll Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC ,体外扩增 ,比较不同培养基和血清含量对MSC生长的影响 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达。【结果】成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 (5～ 6 )× 10 5个细胞 ,15代可获得 (3～ 4 )× 10 12 个细胞 ,随着传代次数的增加 ,细胞的增殖能力下降。L DMEM培养基有利于细胞的培养扩增。细胞流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD33、CD34、CD4 5、CD38、CD80、CD86、CD117表达为阴性。【结论】MSC有很强的自我更新能力 ,在组织工程中具有广阔的应用前景     

骨髓间充质干细胞抗肺泡上皮细胞凋亡作用研究

目的 研究骨髓间充质干细胞对LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用.方法 用人肺泡上皮细胞株(A549细胞株)与人骨髓间充质干细胞株(第3代hBMMSC株)建立Transwell非接触分层共培养体系,分4组:(1)空白对照组;PBS+A549; (2) LPS诱导组;LPS+A549; (3) BMMSC对照组:BS+A549+BMMSC; (4) BMMSC干预组:LPS+A549+BMMSC.采用Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测A549细胞凋亡率;Western blotting检测caspase 3、bcl-2和bax蛋白表达.结果 10 μg/mL LPS可体外诱导A549细胞凋亡;BMMSC干预组A549细胞凋亡率、caspase-3与bax蛋白表达水平明显低于LPS诱导组、空白对照组和BMMSC对照组(P＜0.01);bcl-2蛋白表达水平显著高于LPS诱导组、空白对照组和BMMSC对照组(P＜0.01).结论 与LPS诱导的A549细胞共培养,BMMSC能促进A549细胞表达抗凋亡蛋白bcl-2和抑制促凋亡蛋白caspase-3和bax的表达,具有抗细胞凋亡作用.     

兔腰椎融合术中BMP和bFGF对骨髓间充质干细胞的作用

目的评价骨形态发生蛋白(BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的兔骨髓间充质干细胞(MSC)复合多孔生物陶瓷对提高腰椎融合率的作用。方法将32只家兔随机分为4组(n=8),用下列移植物分别进行腰椎后外侧路融合:Ⅰ组单独应用MSC;Ⅱ组以bFGF作用MSC;Ⅲ组用BMP-2作用MSC;Ⅳ组用BMP-2和bFGF共同作用MSC。实验动物术后6周处死,利用放射学、手工生物力学和组织学方法观察和分析椎体融合的情况。结果影像学和手工力学检测,Ⅳ组椎体融合情况要比其它3组好得多;组织学检测示,在Ⅳ组中,可以看到在融合区周围出现大量的新生成的骨小梁。Ⅱ,Ⅲ组在融合区新生骨小梁较Ⅳ组少,而是新生骨小梁与纤维结缔组织混杂出现;Ⅰ组新生骨小梁显著减少,生物陶瓷微孔内多为纤维结缔组织。结论经BMP和bFGF体外培养的MSC可取得比单独应用MSC更好的融合效果。