改良的ApoE基因多态性检测方法在健康人群的应用

目的应用改良的ApoE基因多态性检测方法快速、准确的筛查体检除外冠心病的健康人群的ApoE基因型，并以已知基因型的质粒作准确对照，证实改良的ApoE基因多态性检测方法的有效性和可靠性。方法采集健康体检者清晨空腹血，用试剂合提取白细胞基因组DNA，设计引物，应用聚合酶链式反应（PCa），扩增包括编码112位和158位氨基酸的ApoE基因片段，用限制性内切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR产物，经琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统扫描电泳结果，在标准分子量对照下鉴定不同个体的ApoE基因型。同时以已知的ApoE2，E3，FA质粒为模板扩增ApoE基因片段，内切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR产物进行对照。结果ApoE2，ApoE3，ApoFA经AflⅢ酶切分别得到231bp、231bp、231bp＋295bp片段；经HaeⅡ酶切，分别得到267bp、231bp、231bp片段。结论改良的ApoE基因多态性检测方法在保持准确性的同时，与传统的PCR—RFLP方法相比耗时少，成本低，毒性小，是对传统方法有益的改良。     

应用微流控电泳联合检测载脂蛋白C3基因型

目的 建立应用微流控电泳联合检测载脂蛋白C3(APOC3)启动子区2种基因型的方法.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增APOC3基因启动子区包含T-455C和C-482T多态性在内的DNA片段,产物分别用限制性内切酶BseGⅠ和MspⅠ酶切后同时进行微流控电泳,分析APOC3基因启动子区这2位点的基因型.结果 成功联合检测APOC3启动子区C-482T和T-455C多态性基因型.结论 应用微流控电泳联合检测APOC3启动子区2位点基因型方法可行,适合应用于常规实验或科研工作.     

连接酶反应技术检测冠心病三个相关基因的单核苷酸多态性

目的 利用聚合酶链反应-连接酶反应（polymorphism chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR）技术检测瘦素受体基因Lys109Arg （A/G）、Gln223Arg （A/G）,脂联素基因G276T、T45G,护骨素基因T950C、G1181C六个多态性位点的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）.方法 参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成一对引物及3条探针,先通过PCR反应获得含有待检测突变位点的基因片段,再进行LDR,根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片段长度来判断基因型别.结果 采用PCR技术成功扩增出包含瘦素受体基因（110 bp,130 bp）、脂联素基因（400 bp）、护骨素基因（118 bp,163 bp）多态性位点的基因片段.根据LDR产物片段长度不同进行基因分型,纯合子只有一种片段长度,杂合子包含两种纯合子的片段长度,如瘦素受体基因SNP Lys109Arg （A/G）的PCR产物长度为110 bp,LDR产物片段的长度为110 bp时则判断为AA基因型,112 bp则判断为GG基因型,AG基因型则具有110 bp、112 bp两种片段长度.PCR-LDR基因分型结果与DNA测序技术的检测结果一致（Kappa=1,P=0.00）.结论 PCR-LDR技术简单、快速、准确、成本低,适用于大批量SNP检测.     

江苏地区汉族人群载脂蛋白E基因多态性和表型分布

目的探讨江苏地区汉族人群载脂蛋白E (APOE) 基因多态性和表型分布的特征.方法选择168名江苏地区无血缘关系健康汉族人,聚合酶链反应(PCR)扩增ApoE基因第4外显子包含编码第112位和第158位氨基酸碱基的基因序列,cfoI限制性内切酶酶切后电泳,经银染色后分析ApoE基因型.计算各基因型及等位基因频率分布.结果江苏地区汉族健康人群载脂蛋白E各基因型频率分别为:ε2/2=0.60%,ε2/3=11.90%,ε2/4=1.20%,ε3/4=10.70%,ε3/3=75.00%,ε4/4=0.60%;各等位基因频率分别为:ε2=7.14%,ε3=86.31%,ε4=6.55%.频率分布在不同年龄、性别无显著差异.中国人群ε3等位基因频率明显高于欧美人群,而ε4等位基因频率明显低于欧美人群.结论江苏地区汉族健康人群载脂蛋白E等位基因频率分布与其他地区中国人群频率分布相似,与欧美人群不同.     

HLA-DPB1等位基因与四川汉族人哮喘的相关性研究

目的:探讨HLA-DPB1等位基因与哮喘之间是否存在相关性,从基因水平探讨支气管哮喘的发病机制。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析法,检测四川汉族人HLA-DPB1基因多态性。用PCR技术对HLA-DPB1基因第2外显子(exon 2)进行体外扩增;然后用Ban II、Fok I、Dde I、Rsa I、EcoN I、BstU I 6种限制性内切酶对扩增产物进行酶切,电泳分离酶切片段,根据片段格局确定相应基因型别。结果:PCR扩增在327 bp有HLA-DPB1 exon 2目的基因产生。限制性内切酶酶切HLA-DPB1后,共检测到12种等位基因。HLA-DPB1*0201在哮喘患者组的出现频率显著低于对照组(P<0．05,RR=0．115<1)。结论:HLA-DPB1* 0201可能为支气管哮喘的抗性基因。     

载脂蛋白E基因多态性与代谢综合征的关联

目的:探讨载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)基因多态性与代谢综合征(metabolicsyndrome,MS)之间的关联。方法:将203例原发性高血压、糖尿病或原发性高血压合并糖尿病的患者分为MS组(n=96)和对照组(n=107),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)确定特定ApoE片段基因型,应用莹光标记自动测序法测定PCR产物,确认单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms,SNPs)位点。结果:①MS组ApoEε4等位基因频率高于对照组(15.6%,8.9%,P=0.038)。②将PCR扩增产物直接测序,共检出2个SNP,均为T→C碱基转换,分别位于E4/4PCR扩增产物序列的137和210碱基处。与RFLP法检测ApoE基因型相符。③MS携带ε4的三酰甘油水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoprotien-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoprotien-cholesterol,LDL-C)水平均降低,其中HDL-C的ε4犤(0.97±0.20)mmol/L犦与ε3犤(1.14±0.26)mmol/L犦比较,差异有显著性意义(P=0.0009)。通过Logitic多因素回归分析发现,三酰甘油是MS独立危险因素。结论:ApoE基因的ε4等位基因是MS危险因子,ApoE可能是MS候选基因之一。     

Alzheimer‘s disease患者载脂蛋白E多态性的检测

人类ＡｐｏＥ基因型存在多态性，这种多态性是老年性痴呆发病的易和危险因子之一，可为临床诊断提供重要的实验指标和信息。方法，本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术，Ｈｈａｌ酶切ＰＣＲ扩增产物后的片段经１０％ＰＡＧ电泳和４％琼脂糖电泳，分析了ＡｐｏＥ基因型。在此基础上，我们分析了４０名ＡＤ患者和３５名正常对照者。结果实验显示：ＡＤ组和正常对照组的ＡｐｏＥ基因型有显著的差异，且ＡＤ组中ε４等位基因明显高于对照组，分     

新疆石河子地区哈萨克族载脂蛋白E基因多态性的检测

目的初步了解新疆石河子地区哈萨克族自然人群载脂蛋白E（apo E）基因多态性和表型分布特征,建立石河子地区哈萨克族apo E基因遗传资源库,并建立一种快速、敏感的apo E基因多态性分析的方法,为临床今后开展apo E基因分型提供实验室依据。方法采用聚合酶链反应（PCR）特异性扩增apo E基因含编码112位和158位氨基酸的基因序列,用限制性内切酶Hha I酶切,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳观察其片段长度多态性（RFLP）,确定PCR产物的基因型。结果新疆石河子地区哈萨克族自然人群apo E基因型频率分布分别是E3/3 65%、E3/4 17%、E2/3 16%、E2/4 1%、E4/4 1%;ε2、ε3、ε4等位基因频率分别是9.0%、81.5%、9.5%。其中ε2等位基因频率明显高于维吾尔族,ε4等位基因频率明显低于维吾尔族,但差异无统计学意义。结论PCR-RFLP简便、敏感、准确,适合一般实验室开展检测及大规模人群调查。     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测雌激素受体基因型

目的建立一种简便、实用、准确的人雌激素受体(ER)基因型的检测方法以利于了解基因对骨量变异的调节。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)来扩增ER基因序列,用限制性内切酶PvuII对223例健康妇女和49例男性的ER基因扩增产物酶切,测定ER基因限制性片段长度多态性(RFLP)。结果汉族妇女ER基因pp、Pp、PP基因型频率分列为0.33、0.47和0.202;男性分别为0.429、0.469和0.102。结论该方法简便、准确、重复性好,适用于常规实验。ER基因(PvuII)多态性分布有一定的种族差异性。     

载脂蛋白E：老年痴呆患者基因多态性的研究

人类载脂蛋白E（ApoE)基因具有多态性,存在着三种常见的等位基因（ε2,ε3,ε4）,它们分别编码三种异构体（E2,E3,E4）,三种异构体的区别在于彼此之间的单个氨基酸的替换,ApoE多态性是老年痴呆（Alzheimer‘s disease,AD)疾病危险性的重要决定因子,携带ε4等位基因患此类疾病普遍增多,ApoE基因型检测可望为临床提供有意义的实验诊断信息,ApoE基因型检测方法需要引入临床实验室,而方法的选择应依据检查的需要,其中毛细管凝胶电泳（CGE）又是较为先进的检测方法之一,很具吸引力。     

产前超声诊断胎儿半椎体畸形

目的 探讨胎儿半椎体畸形产前超声检查的声像图特征。方法 回顾性分析29胎于经引产或产后影像学检查证实的半椎体畸形胎儿的产前超声资料。结果 胎儿脊柱矢状位示脊柱失去正常生理弯曲,病变椎体排列不整齐,较正常椎体小;冠状位示病变椎体呈三角形或楔形,脊柱侧弯或成角畸形;轴位示病变椎体变小,形态不规则。半椎体14胎（14/29,48.28%）发生于胸椎、13胎（13/29,44.83%）发生于腰椎、2胎（2/29,6.90%）发生于骶尾椎。12胎（12/29,41.38%）合并共15种其他系统畸形,先天性心脏病最为常见。结论 胎儿半椎体畸形超声具有一定特征,先天性心脏病为常见合并畸形。