半边旗提取物5F注射液对淋巴肉瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用及急性毒性研究

目的:观察半边旗提取物5F注射液体内抗肿瘤活性及急性毒性。方法:建立荷瘤鼠动物模型,采用荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率观察提取物5F注射液对小鼠移植性淋巴肉瘤抑制作用;观察5F注射液对荷艾氏腹水癌小鼠的生命延长率;小鼠腹腔注射不同剂量5F注射液,用药后观察小鼠1W的反应,用Bliss计算LD50。结果:提取物5F注射液对小鼠移植性淋巴肉瘤有抑瘤作用:对荷艾氏腹水癌的小鼠生命有延长作用;提取物5F注射液对小鼠的LD50为414.4mdkg。结论:半边旗有效成分5F具有一定的体内抗肿瘤活性;对小鼠的毒性作用较低。     

半边旗提取物5F抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察半边旗提取物5F体外、体内抗肿瘤活性及其毒性。方法:用MTT法观察5F注射液对SPCA-1,K562瘤株的体外抗肿瘤作用;采用荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率检测提取物5F对小鼠移植性肿瘤S180抑制作用;观察5F对荷艾氏腹水癌小鼠的生命延长率;胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数、白细胞数等指标观察5F对免疫器官的影响。结果:5F注射液对SPCA-1、K562瘤株有显著的体外抗肿瘤作用;对小鼠肉瘤S180也有抗肿瘤活性;对荷艾氏腹水癌的小鼠生命有延长作用;同时对免疫系统有一定抑制作用。结论:半边旗有效成分5F有一定的体内、体外抗肿瘤活性;对荷瘤小鼠功能有抑制作用。     

半边旗提取物及化学成分抗肿瘤作用的研究

目的：研究半边旗提取物及其单体化合物的抗肿瘤作用。方法：采用MTT法对半边旗提取物及其单体化合物进行抗肿瘤活性测试。结果：半边旗乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及单体化合物11-βhydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oic acid 19--βD-glucoside（化合物Ⅰ）和11-βhydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oic acid（化合物Ⅱ,即5F）均可抑制两种肿瘤细胞HepGⅡ和NCI-H460的生长,且它们对两种肿瘤细胞的抑制作用呈剂量依赖关系和时间关系,相同浓度化合物Ⅱ对两种肿瘤细胞增殖的抑制率明显高于化合物Ⅰ。结论：半边旗乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物是半边旗抗肿瘤的有效部位;半边旗中贝壳杉烷类化合物的抗肿瘤活性不仅与α,β-亚甲基环戊酮结构有关,还与是否连有糖基有关。     

半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究

 目的:半边旗的植化研究及其有效部位和有效成分的杭种瘤活性研究。方法:半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇洗脱液减压浓缩得粗提物(C)，甲醉-氛仿(2:1)洗脱液浓缩后以硅胶柱层析分离，得到一个倍半萜(B)，两个二萜(4F,SF)。 B,4F,SF的结构经光谱鉴定，尤其是用二维NMR确证了空问结构。以台盼蓝染色作活细胞计数，算出药物对细胞的生长抑制率，IC₅₀按改良Karber公式计算。结果:分离得到三个化合物，确定了结构。以HL-60细胞为筛选模型，结果表明:粗提物(C)、化合物SF明显抑制HL-60细胞增值。结论:药理实验表明，粗提物的杭种瘤活性明显高于5F,预示粗提物中仍有高活性化合物，值得进一步研究。     

半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究

目的研究半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长的抑制作用。方法采用MTT法及Trypan B lue拒染法。结果半边旗水溶性成分对求BEL-7402,A549,K562细胞生长的抑制率达到56.39%,53.85%,74.70%。结论半边旗水溶性成分对多种肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。     

半边旗二萜类抗癌化合物5F微囊的研制

目的:研究5F微囊的制备工艺.方法:用单凝聚法制备5F微囊,用正交设计法对5F微囊的制备工艺进行研究.结果:囊心、囊材比为1:3、成囊温度45℃、搅拌速度500 r/min时,包封率最高,囊径范围350～700μm.结论:本法稳定、快速、准确、简便,为半边旗剂型研究提供了参考.     

半边旗有效成分5F体内外的抗炎作用

目的:通过建立体内外炎症模型,观察半边旗有效成分5F的抗炎作用。方法:建立脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,并用不同浓度5F处理,CCK-8法检测5F的细胞毒性,采用Griess法检测上清液中一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和环氧酶-2(COX-2)表达水平。雄性ICR小鼠60只,建立巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀模型,造模后随机分为模型组、阳性组和5F组,每组10只,5F组给予100 mg·kg-15F溶液,阳性组给予地塞米松0.8 mg·kg-1或吲哚美辛1 mg·kg-1,模型组给予同体积生理盐水。各组均连续给药7 d。观察5F对小鼠耳肿胀的抑制作用。结果:5F在0~40 mg·L-1的剂量内对RAW264.7细胞无明显毒性作用,10,20,40 mg·L-1的5F可依赖性抑制LPS诱导的NO释放(P<0.01),20,40 mg·L-1的5F可以降低PGE2含量(P<0.01),40 mg·L-1的5F显著性抑制i NOS和COX-2蛋白表达(P<0.05),10,20,40 mg·L-1的5F显著降低TNF-α和IL-1β含量(P<0.01),20,40 mg·L-1的5F显著降低IL-6含量(P<0.01),100 mg·kg-1的5F对巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀都有显著抑制作用(P<0.05)。结论:5F可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,抑制巴豆油和花生四烯酸诱导的耳肿胀,其抗炎作用与抑制i NOS和COX-2表达,减少炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6,NO和PGE2含量有关。     

半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿瘤活性初步研究

 目的:对半边旗中二萜类有效成分及抗肿瘤活性作进一步研究?方法:半边旗乙醇提取物上活性炭柱,乙醇-氯仿(10∶1)洗,减压浓缩后上硅胶柱,甲醇-氯仿(90∶2)洗脱,得纯化合物,经二维核磁共振(NMR)确定了化合物的空间结构?以噻唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞存活率,?IC50按改良Karber公式计算?结果:共分得5个化合物B,4F,5F,6F及A,其中A是新化合物,6F是首次从该植物中分离得到?5F,A,6F明显抑制人白血病粒细胞HL-60,人低分化胃腺癌上皮细胞MGC-803、人低分化鼻咽癌上皮细胞CNE-2Z和人肝癌上皮细胞BEL-7402的增殖,活性依次增强?6F对HL-60细胞的活性最强[IC₅₀为(0.09±0.01)μmol·L^-1],阳性对照5Fu的IC₅₀为:(52.5±2.8)μmol·L-1?结论:从半边旗分离得到的一类二萜化合物具有显著抑制多种癌细胞增殖的活性,其中6F活性最强?     

半边旗药材超声提取工艺的研究

目的优选半边旗的超声提取工艺。方法采用L9(34)正交实验,考察乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)和料液比(D)4个影响因素,以5 F含量为评价指标,并采用薄层扫描法进行测定。结果半边旗超声提取的最佳工艺为A2B2C3D3,即加10倍量70%乙醇,超声提取3次,30 min/次。结论优选得到的工艺稳定可行。     

半边旗中二萜类化合物5F葡糖糖苷的分离鉴定及其抗肿瘤作用

目的:进一步研究半边旗的抗肿瘤活性成分。方法:运用反复硅胶柱层析的方法对半边旗中的化学成分进行分离纯化,以LC-MS及各种有机波谱法鉴定化学单体结构;并通过MTT法对分离鉴定的单体化合物及其苷元进行抗肿瘤活性研究。结果:从中分离鉴定1个二萜苷类化合物,为11β-hydroxy-15-oxo-ent-kaur-16-en-19-oic acid 19-β-D-glucoside(Ⅰ);化合物Ⅰ及其苷元5F均可抑制两种肿瘤细胞A549和CNE-2Z的生长,且它们对两种肿瘤细胞的抑制作用呈一定剂量依赖关系和时间依赖关系,化合物5F的活性强于化合物Ⅰ。结论:α,β不饱和环戊酮结构是其活性部位,5F中19位碳上的羧基与糖连接形成酯苷,成为化合物Ⅰ后,其抗肿瘤活性大大降低。     

半边旗二萜类化合物的液-质联用图谱鉴定

用高效液相色谱-大气压化学电离源质谱联用的方法建立总离子流色谱图,以色谱保留时间和色谱峰的质谱图为依据,对不同地区和不同采集时间的半边旗LC-MS图谱中的主要色谱峰进行了对比分析和质谱鉴定.色谱分析条件:色谱柱为Diamonsil ODS、4.6 mm×150mm,流动相为30%CH3CN-70%2mmol/L NH4AC、流速1.0 ml/min,进样5 μl;质谱分析条件:APCI负离子源,质谱扫描范围m/z 50～700,扫描间隔1s.以对照品为参比,鉴定出贝壳杉烷系二萜类化合物4F、5F和6F的色谱峰;根据色谱行为和质谱行为,推测出6F的16位饱和态化合物以及4F和5F的甙.对不同地区和采集时间的半边旗LC-MS指纹图谱中的主要色谱峰进行比较分析得出,广州市郊和湛江地区以及在11～12月采集的半边旗中5F含量较高.本法简便、快速,可为半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和新药资源的开发提供参考.     

高效液相色谱法分析测定半边旗中黄酮类化合物

目的分析测定半边旗中木犀草素和芹菜素的含量。方法采用ODS-C18分析柱(25 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.4%的磷酸水溶液(1∶1);检测波长345 nm,流速1 ml.min-1,柱温为25℃。结果木犀草素线性范围0.02~0.4μg,r=0.9999,平均回收率为96.39%(RSD=1.95%);芹菜素线性范围0.02~0.4μg,r=0.9996,平均回收率为98.10%(RSD=0.96%)。结论此法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可以作为半边旗中两种黄酮的测定方法。     

半边旗二萜类活性成分的提取分离研究

 目的　建立一种高效的提取和富集分离半边旗中二萜类活性成分的方法。方法 用超临界CO₂与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类活性成分,采用正交实验法优化萃取条件;采用D101大孔吸附树脂吸附、乙醇阶梯洗脱的方法分离富集半边旗中二萜类活性成分;以高效液相色谱(HPLC)-大气压化学电离源(APCI)-质谱(MS)联用的分析方法跟踪检测,以主要的二萜类活性成分5F为监测目标,采用准分子离子[M-H]^-1为选择离子监测离子,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果 超临界流体萃取的最佳条件为25MPa,60℃,15％甲醇,流量3.0mL·min^-1;采用35％乙醇洗脱D101大孔吸附树脂可除极性杂质,45％～55％乙醇洗脱流份可富集分离半边旗中二萜类活性成分。结论　采用超临界CO₂萃取与大孔吸附树脂吸附分离相结合,提取分离半边旗中二萜类活性成分,具有效率高、不使用有毒有害溶剂、环境污染程度低的特点,该方法易于工业化。     

半边旗二萜类化合物5F对人翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：观察中药半边旗二萜类化合物5F对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的影响。方法：用噻唑蓝比色法（MTT）观察不同浓度梯度，（4、8、16、32、64、128μg/ml)的5F在不同作用时间内（24，48，72，96小时）对HPF增殖的抑制作用。结果：用药24小时浓度16μg/ml开始明显抑制（P＜0．05），48小时8μg/ml抑制作用更强（P＜0．01），50％抑制率（IC50）浓度32μg/ml，同一浓度各时间组抑制率（IR）与对照组更强（P＜0．01），50％抑制率（IC50）浓度32μg/ml，同一浓度各时间组抑制率（IR）与对照组比较，在4μg/ml作用24、48及72小时IR与对照组比较差异均无显著性（P＞0．05），持续作用96小时差异有显著性（P＜0．01）；16μg/ml以上24－96小时各时间组IR与对照组比较差异均有显著性（P＜0．01），结论：体外培养HPF具较强增殖能力，5F对HPE的增殖具明显抑制作用。并与用药剂量和持续时间有相关性。     

半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法以台盼蓝活细胞计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用FCM检测5F对细胞周期和凋亡的影响;用PI/Hoechst33258荧光双染法和DNA ladder检测凋亡。结果 5F作用后,生长曲线测定和MTT比色法实验结果显示,5F对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪、DNA ladder和荧光双染法结果提示5F可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论半边旗提取物5F能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。