半定量RT—PCR检测内毒素休克小鼠肝脏组织S100A9的表达

目的：分析S100A9基因在内毒素休克小鼠肝脏组织中的表达情况。方法：20只SPF级BALB／c小鼠随机分为正常组（10只）和内毒素休克组（10只,LPS刺激3小时,LPS剂量为35mg／k）;采用RT—PCR方法检测两组肝脏组织中S100A9mRNA的表达水平。结果：S100A9mRNA在内毒素休克小鼠肝脏中表达增强,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：S100A9基因表达上调在内毒素休克的发生发展中可能起重要作用。     

丹参酮ⅡA抑制脂多糖诱导后巨噬细胞HMGB1的释放

目的:探讨丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导后高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的影响。方法:以100μg/L的LPS激活培养巨噬细胞株RAW 264.7和小鼠腹腔巨噬细胞,观察1、5、25μmol/L丹参酮ⅡA对巨噬细胞HMGB1释放和HMGB1 mRNA表达的影响。通过腹腔内注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,观察使用10mg/kg剂量的丹参酮ⅡA后对内毒素血症小鼠血清HMGB1水平的影响。HMGB1含量和mRNA表达分别采用酶联免疫分析和RT-PCR检测。结果:5、25μmol/L丹参酮ⅡA明显抑制LPS诱导后巨噬细胞HMGB1的释放(P<0.05,P<0.01),丹参酮ⅡA明显降低内毒素血症小鼠(注射LPS后24、48h)血清HMGB1水平(P<0.01),但丹参酮ⅡA对巨噬细胞的HMGB1 mRNA表达水平没有显著性影响。结论:丹参酮ⅡA对LPS诱导后HMGB1释放具有抑制作用。     

内毒素致大鼠急性肝损伤的机制研究

目的:观察内毒素致急性肝损伤模型大鼠不同时间点的肝脏功能及血清内毒素含量、肝脏组织中白介素6(IL-6)表达的水平、蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的相对表达情况,以及TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况,初步探讨内毒素致大鼠急性肝损伤的时效性变化及作用机制。方法:腹腔注射LPS 5mg/kg后,每0.5h测定一次动物肛温,采用断点法分别于造模后2、4、6、8、10h处死6只动物,剖取肝脏、脾脏、胸腺、肾上腺等组织,采用比色法测定采用肝脏功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及碱性磷酸酶(ALP)的活性,采用鲎试剂动态比浊法测定各组动物血清内毒素的含量,采用ELISA检测受试动物肝脏组织匀浆中IL-6的含量,运用Western Blot检测肝脏中TLR4、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的表达,采用QRT-PCR测定肝脏中TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况。结果:LPS刺激后0.5h大鼠体温升高;1²h时体温降低;4h2h时体温降低;4h¹0h体温在不断升高,其中在410h体温在不断升高,其中在4⁴.5h增幅明显;4h组大鼠肝脏系数及脾脏系数显著升高;与0h组相比,各组大鼠血清内毒素含量均显著升高(P<0.01),其中4h、6h、8h组大鼠血清内毒素含量为0h组的40倍以上;LPS刺激后各组大鼠血清ALT、AST、ALP含量均明显升高趋势,且在4h或6h时达到最高;4h组大鼠肝脏中IL-6的含量均明显高于0h组;4h组大鼠肝脏中TLR4及NFκBp65亚基磷酸化的相对表达量比0h组明显升高;8h组大鼠肝脏中TLR4 mRNA的相对表达量有一定的升高趋势,4h组、6h组、8h组、10h组大鼠肝脏中IL-6 mRNA的相对表达量均有升高,其中4h和6h组差异显著。结论:内毒素致急性肝损伤模型大鼠造模4h后IL-6分泌增加,4h组大鼠肝脏组织TLR4功能加强,转核因子NFκB p65亚基的磷酸化程度增加,表明IL-6、TLR4、NFκB p65亚基三者在内毒素致肝脏组织损伤中起重要作用,LPS致急性肝损伤的作用机制与其上调TLR4-NFκB炎症信号通路中TLR4蛋白及NFκBp65亚基的磷酸化水平、增加致炎因子IL-6的表达等环节有关。     

内毒素休克大鼠肝脏AQP1表达及人参二醇皂苷对其影响

目的:研究人参二醇皂苷(PDS)对内毒素休克大鼠肝脏AQP1表达的影响。方法:Wistar大鼠随机分为实验对照组(CTRG)、内毒素休克组(LPSG)、地塞米松组(DEXG)和人参二醇皂苷组(PDSG)。以内毒素(4mg·kg~(-1))复制内毒素休克模型,平均动脉压降至基础血压的2/3为休克状态。取肝脏组织光镜下进行形态学观察,提取肝脏总RNA,以RT-PCR检测AQP1 mRNA表达。结果:①肝脏组织的病理学变化,LPSG小叶中央静脉扩张充血,周围一些肝细胞出现早期坏死,肝细胞核溶解、消失,胞浆染色变深。肝血窦内枯否细胞增生活跃。在小叶内可见肝细胞点状坏死,以淋巴细胞浸润为主。PDSG和DEXG肝脏组织的病变显著地轻于LPSG;②肝脏组织AQP1mRNA表达丰度LPSG与CTRG、DEXG和PDSG相比明显减少(P0.01),DEXG AQP1 mRNA表达低于CTRG和PDSG(P0.01);PDSG AQP1 mRNA表达与CTRG接近(P0.05)。结论:PDS与DEX预治疗减轻了内毒素休克对肝脏AQP1 mRNA表达的抑制作用,PDS与DEX一样,对肝脏具有类似的保护作用。     

参麦对"失血加内毒素"大鼠肝脏IκB和TIMP1mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.     

山奈酚干预对D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的探讨山奈酚对D-氨基半乳糖(D-Ga IN)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝衰竭(acute hepatic failure,AHF)的干预作用。方法 37只C57 BL/6小鼠按完全随机分组法分为正常对照组(10只)、AHF模型组(13只)、山奈酚干预组(14只)。AHF模型组小鼠腹腔注射D-Ga IN(700 mg/kg)/LPS(10μg/kg),作用6 h,建立AHF模型;山奈酚干预组小鼠于建模前2 h尾静脉注射5 mg/kg的山奈酚,后腹腔注射D-Ga IN(700 mg/kg)/LPS(10μg/kg),作用6 h,建立AHF模型。正常对照组腹腔注射等量生理盐水。检测血清ALT、AST水平,观察肝脏组织病理学变化,检测肝脏组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,检测NF-κB通路相关分子表达及肝细胞凋亡情况。结果与AHF模型组比较,山奈酚干预组小鼠的生存率提高(P0.05)。与正常对照组比较,AHF模型组血清ALT和AST水平升高(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达升高(P0.05),肝脏组织中NF-κB信号通路相关分子IκB-α表达降低(P0.05),p-NF-κBp65表达升高(P0.05),肝脏病理损伤严重,细胞凋亡增多;与AHF模型组比较,山奈酚干预组血清ALT和AST水平降低(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达降低(P0.05),肝脏组织中NF-κB信号通路相关分子IκB-α升高(P0.05),p-NF-κBp65表达降低(P0.05),肝脏病理损伤减轻,细胞凋亡减少。结论山奈酚干预通过抑制炎症反应对D-Ga IN糖/LPS诱导的小鼠AHF发挥保护作用。     

参麦对“失血加内毒素”大鼠肝脏IKB和TIMP 1 mRNA的影响

目的观察参麦的抗休克效果,探讨其作用机制.方法大鼠随机分为实验对照组(control),双击组(HS+LPS),参麦注射液组(HS+LPS+SM).测定血清中NO含量,NOS活性以及肝脏IκB及TIMP 1 mRNA的表达.结果HS+LPS+SM组NOS活性,NO2/NO3含量显著低于LPS组(P＜0.05),HS+LPS+SM组IκB及TIMP1 mRNA表达明显增加.结论参麦可能是通过影响NOS活性降低NO的含量,并上调肝脏组织中IκB和TIMP 1 mRNA的表达,减轻内毒素引起的机体损伤.     

三七总皂苷对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的:观察三七总皂苷(saponins of Panax notognseng,PNS)对卡介苗(bacillus calmette guein,BCG)联合脂多糖(lipoxygenase,LPS)所致免疫性肝损伤小鼠的保护作用。方法:昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、PNS低剂量组(100 mg.kg-1)、PNS中剂量组(200 mg.kg-1)、PNS高剂量组(400 mg.kg-1)组、联苯双酯(150 mg.kg-1)组。采用BCG 2.5 mg/只iv致敏小鼠,第10天给予LPS 7.5μg/只iv攻击,复制小鼠免疫性肝损伤模型,连续给药10 d。分光光度法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;HE染色法观察肝组织病理学变化;RT-PCR技术观察肝组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-αmRNA的表达情况。结果:PNS能降低免疫性肝损伤小鼠脾脏、肝脏指数,ALT,AST,MDA含量(P<0.05或P<0.01),抑制TNF-αmRNA表达,减轻肝组织病理损伤程度,升高SOD,GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01)。结论:PNS对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用。     

凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响

目的:探讨凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体(SR)的表达的影响以及肝脏(LPS)引起损伤的影响,从细胞信号转导途径阐明中药解毒机制。方法:建立内毒素血症小鼠动物模型,同时灌服凉膈散,在内毒素给药后不同时间点(2,4,8 h)杀动物取肝组织,免疫组化法观察肝脏库普弗细胞CD14及SR表达的变化,并进行图像分析和肝组织的病理检测。结果:注射LPS 2,4,8 h后,与正常对照组相比,LPS损伤组肝脏库普弗细胞CD14的表达均呈显著升高,SR表达均呈显著降低(P<0.01)。不同剂量凉膈散组及地塞米松组均介于正常对照组与LPS损伤组之间。与LPS损伤组比较,不同剂量凉膈散组及地塞米松组在两者的表达上均有显著性差异(P<0.01),以高剂量凉膈散最为明显,呈剂量相关性。肝脏损伤主要表现为空泡变性,肝脏库普弗细胞SR,CD14的表达变化与小鼠肝损伤程度呈平行关系。结论:凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞表面CD14表达上调以及SR表达下调有明显的抑制作用,并能减轻内毒素所致的肝损伤。     

大黄酸对内毒素血症小鼠保护作用的实验研究

目的:探讨大黄酸对内毒素血症小鼠的保护作用。方法:将45只雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组和大黄酸组,每组15只。空白组腹腔消毒注射生理盐水(10mg/kg),其余各组腹腔消毒注射LPS(10mg/kg)。治疗组于攻毒前0.5h、攻毒后1h和取血前0.5h给予大黄酸1.4mg.10g-1.d-1灌胃,空白组和模型同时按比例给予等量生理盐水。8 h后在无菌条件下采集心室血0.5mL进行血浆ET检测,取部分肝脏进行免疫组化和生化检测,取肝进行组织学观察。结果:大黄酸组对小鼠内毒素、TNF-α、IL-1β、IL-10、MDA、SOD和肝组织病理炎症等改善优于其他组。结论:大黄酸对小鼠内毒素血症有显著的保护作用,其途径可能通过改善微循环,改善肝脏的能量代谢,减轻肝脏的脂质过氧化反应,降低机体的内毒素水平,从而减少炎性因子的产生,阻断内毒素血症的生物学效应。     

中药提取物连翘酯苷A对内毒素血症小鼠的免疫调节作用及相关机制研究

目的:探讨连翘酯苷A对内毒素血症小鼠的免疫调节影响及作用机制研究。方法:选择60只雄性小鼠作为研究对象,按照按照随机数字表法分为模型组(n=50)和正常对照组(A组,n=10),模型组随机分为内毒素(LPS)模型组(n=10)、抗体组(n=10)及连翘酯苷A高剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)、低剂量组(n=10)5个亚组,通过注射内毒素(LPS)建立LPS大鼠模型,通过双抗夹心ELISA法测定各组小鼠白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3m RNA表达情况,通过流式细胞技术检测CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)水平。结果:LPS模型组Treg比例、Foxp3m RNA表达及IL-10、TNF-α水平明显高于其他各组(P0.05);连翘酯苷A高剂量组Treg比例、Foxp3m RNA表达及IL-10、TNF-α水平明显低于抗体组、中剂量组和低剂量组(P0.05);高剂量组Treg比例、Foxp3m RNA表达及IL-10、TNF-α水平与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:连翘酯苷A可增强内毒素血症小鼠免疫调节作用,其机制可能与抑制TNF-α、IL-10分泌和Foxp3基因表达有关。     

升压宁对内毒素休克肝损伤大鼠肿瘤坏死因子-α和一氧化氮合酶的影响

目的 观察升压宁对内毒素休克肝损伤大鼠肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 采用一次性静脉注射内毒素(LPS)10 mg/kg复制内毒素休克模型,以升压宁预处理动物,并以地塞米松为阳性对照,免疫组化法测定肝组织中TNF-α和iNOS的表达.结果 内毒素休克模型组存在严重肝损伤,肝组织中TNF-α和iNOS表达较空白对照组显著增强(P﹤0.01),升压宁组肝损伤较模型组减轻,TNF-α和iNOS的表达与模型组比较显著降低(P﹤0.01).结论 升压宁能减轻内毒素休克肝损伤,其机理与抑制TNF-α和iNOS的表达有关.     

醒脑静注射液对七氟醚麻醉手术成年小鼠的影响及机制

目的探讨醒脑静注射液对七氟醚麻醉手术成年小鼠的影响及机制。方法选取C57BL/6小鼠50只,随机分为对照组、模型组、1 mL/kg醒脑静组、5 mL/kg醒脑静组、10 mL/kg醒脑静组,每组10只,除对照组外,其余组大鼠给予3%七氟醚持续吸入6 h,其中1 mL/kg醒脑静组、5 mL/kg醒脑静组、10 mL/kg醒脑静组在麻醉前2 h分别给予1、5、10 mL/kg醒脑静注射,采用Morris水迷宫测试小鼠学习记忆能力,qRT-PCR检测S100A8 mRNA、syt-ⅠmRNA表达,Western Blot检测S100A8、syt-Ⅰ蛋白表达。结果模型组、1 mL/kg醒脑静组、5 mL/kg醒脑静组、10 mL/kg醒脑静组逃避潜伏期、S1008mRNA和蛋白明显高于对照组(P0.05),而穿越平台次数、目标象限游泳时间、syt-ⅠmRNA和蛋白明显少于对照组(P0.05);10 mL/kg醒脑静组逃避潜伏期、S100A8 mRNA和蛋白相对表达量分别为(19.40±2.10)s、(0.320±0.113)和(0.882±0.103),明显低于模型组、1 mL/kg醒脑静组、5 mL/kg醒脑静组(P0.05),而穿越平台次数、目标象限游泳时间、syt-ⅠmRNA和蛋白相对表达量分别为(5.00±1.03)次、(13.52±1.34)s、(0.821±0.105)和(0.800±0.107),明显高于模型组、1 mL/kg醒脑静组、5 mL/kg醒脑静组(P0.05)。结论醒脑静能改善七氟醚对成年小鼠学习记忆功能的影响,可能与其提高小鼠海马组织syt-Ⅰ表达,降低S100A8表达有关。     

参附注射液抑制HMGB1核转位保护内毒素休克大鼠肺损伤

目的:探讨参附注射液保护内毒素休克大鼠肺损伤的分子机制。方法:经腹腔注射脂多糖(LPS)建立内毒素休克SD大鼠模型,用5ml/kg、10ml/kg、15ml/kg剂量参附注射液干预,观察肺组织病理改变,检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的转录、表达、亚细胞定位及血浆中HMGB1分泌水平。结果:LPS可致SD大鼠肺泡隔水肿,充血,大量粒细胞浸润;肺组织中HMGB1的转录和表达均显著上调;胞浆中HMGB1表达显著增加,而核内HMGB1则显著下调;血浆中HMGB1水平明显上升。与模型组比较,参附注射液各剂量均可减轻内毒素休克大鼠肺组织水肿、充血和炎性细胞渗出,对肺损伤具有明显的保护作用,10ml/kg组病理评分最低;抑制内毒素休克大鼠肺组织中HMGB1的转录(呈剂量依赖性)、翻译和核转位(以10ml/kg组效果最优);抑制HMGB1分泌出胞,减少血浆中HMGB1含量(呈剂量依赖性)。结论:参附注射液抑制内毒素休克大鼠肺组织中HMGB1的核转位,可能是其扶阳固脱的重要分子机制。     

BZL方对非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠肠黏膜损伤的保护作用

目的:观察中药组分复方BZL方(白术多糖、栀子苷、绿原酸)对高脂饮食诱导的小鼠脂肪性肝炎(NASH)及其肠黏膜损伤的作用。方法:C57BL/6J雄性小鼠27只,随机分为正常、模型和BZL方组,每组9只。除正常组外,其余各组均采用高脂饮食诱导NASH,第14周开始,BZL方组灌胃BZL方,其余各组灌胃等量饮用水,至17周末处死取材。观察各组小鼠体质量、进食量、肝体比,肝组织病理(HE和天狼猩红染色,SAF评分),检测血浆ALT、GGT活性、LPS水平,肝组织TG含量;肝组织胶原I型和IV型、内毒素受体CD14、TLR1、TLR2、TLR4、TLR9及炎性反应因子IL-1β、TNF-αmRNA表达(real-time PCR法);肠组织病理(HE染色);大肠组织紧密连接zo-1、occludin、claudin mRNA表达(real-time PCR法)及蛋白表达(免疫荧光染色)。结果:高脂饮食诱导NASH模型中,模型组血浆ALT、GGT、LPS及肝组织TG含量较正常组显著升高(P 0. 01);肝组织可见脂肪沉积、炎性反应、气球样变及纤维化,SAF评分显著高于正常组,肝组织胶原Col I、Col IV mRNA显著升高,CD14、TLR1、TLR2、TLR4、TLR9及IL-1β、TNF-αmRNA表达升高(P 0. 05,P 0. 01);肠组织病理变化光镜下不明显,大肠组织紧密连接zo-1、occludin、claudin mRNA表达降低(P 0. 01),zo-1、occludin免疫荧光阳性染色减少。BZL方可降低血浆ALT、GGT、LPS、肝组织TG含量(P 0. 05,P 0. 01),改善SAF评分,降低肝组织胶原Col I、Col IV mRNA表达(P 0. 01),降低CD14、TLR2、TLR4、TLR9及IL-1β、TNF-αmRNA表达(P 0. 05,P 0. 01),恢复大肠组织紧密连接zo-1、occludin mRNA表达(P 0. 01),恢复zo-1、occludin免疫荧光阳性染色。结论:BZL方有效减轻高脂饮食诱导的小鼠NASH,该作用与其保护肠黏膜、抑制LPS肠渗漏及肝组织中TLRs及炎性反应因子密切相关。     

二草清肝汤对内毒素性肝损害小鼠防护作用的实验研究

目的:探讨二草清肝汤对内毒素性肝损害小鼠的防护作用及其机制。方法:将200只BABL/c小鼠按随机数字法均分成4组各50只,正常对照组、LPS组、二草清肝汤小剂量组、二草清肝汤大剂量组。二草清肝汤剂量按人与动物体表面积和体质量换算,计算出小剂量组为3 m L/kg,大剂量组为6 m L/kg,灌胃1次/d,共12 d;正常对照组和LPS组小鼠同时予同体积的0.9%氯化钠溶液灌胃。末次给药4 h后,除正常对照组外所有小鼠均腹腔注射LPS(10 mg/kg)。记录各组小鼠存活率,光镜和电镜观察组织病理学改变,全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶水平,酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-10的浓度。结果:正常对照组、LPS组、二草清肝汤小剂量组、二草清肝汤大剂量组的存活率分别为100%、30.0%、75.0%、80.0%,与LPS组相比,正常对照组、二草清肝汤小剂量组、二草清肝汤大剂量组存活率明显升高(P0.05),肝脏病理损害程度和死亡率减轻,ALT水平明显下降;比较各模型组小鼠血清中TNF-α和IL-10的结果(同时间点比较,二草清肝汤大、小剂量组TNF-α含量低于LPS组,IL-10则相反),二草清肝汤大、小剂量组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:预防性给予二草清肝汤能抑制内毒素性肝损伤小鼠肝脏炎症反应,明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与降低TNF-α水平和增高IL-10水平有关。     

大黄-黄芩配伍对内毒素血症模型大鼠肝脏炎性损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨大黄-黄芩配伍对脂多糖(LPS)诱导的内毒素血证模型大鼠肝脏炎性损伤的保护作用及其作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、地塞米松组(0.75mg/kg)、大黄-黄芩药对(4.5、2.25g/kg)剂量组。各组大鼠连续预防性给药7 d,于末次给药0.5 h后尾静脉注射5mg/kg LPS建立内毒素血症模型。于造模后6 h处死动物并取样,分别采用ELISA和QRT-PCR法检测肝组织中白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的含量及相应mRNA相对表达量;采用Western Blot法检测肝组织中p38、ERK、JNK蛋白的磷酸化水平。结果:与空白组比较,模型大鼠肝组织中IL-1β、IL-6含量和相应的mRNA相对表达量及p38、ERK、JNK蛋白磷酸化表达水平明显升高;而大黄-黄芩药对能不同程度地降低内毒素血症模型大鼠肝脏中IL-1β、IL-6的含量及IL-6 mRNA的相对表达水平,同时也能明显抑制模型大鼠肝脏中p38、ERK、JNK等蛋白的磷酸化水平,且药对4.5g/kg剂量组的抑制作用强于药对2.25g/kg剂量组。结论:大黄-黄芩配伍后对内毒素血症模型大鼠肝脏的炎性损伤有较好的改善作用,其作用机制可能是通过阻断p38MAPK炎症通路中的p38、ERK和JNK的磷酸化作用,从而减少了细胞因子IL-1β和IL-6的释放来实现的。     

蒲公英甾醇通过NOD1/NF-κB通路对Hp相关性胃炎脾胃湿热证小鼠改善作用研究

目的:探讨蒲公英甾醇对Hp相关性胃炎脾胃湿热证(HAG)小鼠改善和炎症抑制作用及机制.方法:80只C57BL/6小鼠随机分为正常组17只和造模组63只,正常组小鼠给予正常饮食+常规环境+同步饲养,造模组小鼠给予肥甘饮食+湿热环境+Hp菌液,制备HAG小鼠模型.将48只造模成功的小鼠随机分为模型组、蒲公英甾醇组、iE-DAP组和蒲公英甾醇+iE-DAP组,每组12只.蒲公英甾醇组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5mg/kg,1次/d,连续灌胃4周;iE-DAP组小鼠腹腔注射iE-DAP,100μg/只,1次/周,连续注射4周;蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5 mg/kg,1次/d,腹腔注射iE-DAP,100 μg/只,1次/周,连续给药4周.实验过程中观察小鼠一般情况;ELISA检测小鼠血清干扰素诱导蛋白10(IP-10)和干扰素β(IFN-β)水平;快速尿素酶实验检测Hp定植;HE染色镜检小鼠胃黏膜组织病理学变化;qRT-PCR检测小鼠胃组织中核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)mRNA和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达水平;Western blotting检测小鼠胃黏膜组织p65、p-p65蛋白表达水平.结果:正常组小鼠胃黏膜组织结构完整、排列整齐、无炎症细胞浸润及充血肿胀;模型组小鼠出现脾胃湿热证症状,胃黏膜充血肿胀、结构破坏、排列无序、固有层有炎症细胞浸润;蒲公英甾醇组小鼠症状较模型组好转,胃黏膜病理损伤减轻;iE-DAP组小鼠脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤较模型组加重,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠组脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤明显减轻.与模型组比较,蒲公英甾醇组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且HP定植减少(P＜0.05),iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P＜0.05);与蒲公英甾醇组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P＜0.05);与iE-DAP组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且Hp定植减少(P＜0.05).结论:蒲公英甾醇可改善HAG小鼠脾胃湿热证症状,抑制炎症反应,作用机制可能与调控NOD1/NF-κB通路有关.     

人参二醇组皂苷对感染性休克大鼠体内血栓素B2 及6-酮-前列腺素F1α的影响

目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对感染性休克大鼠肝中血栓素B2(TXB2)及6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响,探讨其抗感染性休克的作用机制。方法:动物随机分为对照(Control)组;内毒素休克(LPS)组;地塞米松(LPS+Dex 2 mg.kg-1)组;人参二醇组皂苷(LPS+PDS)组。LPS+PDS组iv人参二醇组皂苷(22.5,45,90 mg.kg-1)葡萄糖溶液5mL.kg-1。10 min后iv细菌内毒素(LPS,5 mg.kg-1)复制感染性休克模型。颈动脉插管记录平均动脉压(MAP)。休克后4 h处死动物,称取肝20 mg匀浆后测TXB2和6-keto-PGF1α的含量。结果:注射内毒素后,LPS组的MAP迅速下降,在低水平维持,LPS+Dex组和LPS+PDS组的MAP未见明显下降;测得肝组织中TXB2和6-keto-PGF1α的含量在LPS+PDS中、大剂量组均显著低于LPS组,6-Keto-PGF1α/TXB2在中剂量组显著低于LPS组。结论:PDS可通过降低体内TXA2和PGI2的含量,调节血浆或组织中二者的平衡关系,改善内毒素休克大鼠的低血压状态,起到抗休克的作用。     

凉膈散含药血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响

目的:研究凉膈散药物血清体外对内毒素刺激小鼠RAW264.7细胞CD14mRNA表达的影响.方法:大鼠以凉膈散灌胃,制备药物血清.以凉膈散药物血清或正常血清的培养液与LPS体外共同培养RAW264.7细胞,原位杂交法检测凉膈散药物血清对内毒素刺激RAW264.7细胞CD14mRNA表达变化.结果:与LPS刺激组比较,不同剂量药物血清组CD14mRNA表达量均比它低,呈剂量依赖性;正常血清组则无显著性差异.结论:凉膈散含药血清体外对LPS刺激小鼠单核细胞CD14mRNA转录具有抑制作用.减少LPS效应细胞的CD14mRNA的表达可能是凉膈散减轻LPS对机体损伤,发挥解毒作用的机制之一.