中药对环氧合酶-2的作用研究

花生四烯酸在环氧合酶(COX)的作用下产生前列腺素,前列腺素是产生炎症反应的主要介质。而环氧合酶-2是分解花生四烯酸生成各种内源性前列腺素过程中重要的限速酶。大量研究表明许多中药可通过对环氧合酶-2的抑制来发挥抗炎作用。现就近年在细胞水平及不同疾病中中药对环氧合酶-2作用的相关研究进行综述。     

桂枝汤苯丙烯类化合物对APP转基因AD小鼠学习记忆障碍的影响

目的:探讨桂枝汤苯丙烯类化合物(PCGZT)对APP转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠模型记忆障碍影响及其部分作用机制。方法:按体重随机将3月龄APP695V717转基因小鼠随机分为模型组,阿司匹林组(20 mg·kg-1·d-1),脑复康组(600 mg·kg-1·d-1),石杉碱甲组(0.3 mg·kg-1·d-1)和PCGZT大、中、小剂量(64.4,32.2,16.1 mg·kg-1·d-1)组,每组10只;另取C57BL/6J小鼠10只作为空白组。各组小鼠每天给药1次,约10月龄时,进行Morris水迷宫实验和跳台实验,测定小鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9含量。结果:与模型组比较,PCGZT可以减少APP转基因AD小鼠跳台反应时间,降低错误期总时间和错误次数,提高安全期总时间(P0.05);PCGZT小剂量组提高APP转基因AD小鼠在Morris迷宫实验中站台象限路程比率(P0.01)和站台象限时间比率(P0.05)。同时,PCGZT可以降低AD小鼠脑MDA含量(P0.05)和血清中MMP-9含量(P0.05),对MMP-2含量无影响。结论:PCGZT能够明显改善APP转基因AD小鼠学习记忆障碍,其作用机制可能涉及多个药物靶点。     

双氯芬酸选择性抑制表达环氧合酶-2的肝癌细胞的增殖

 目的检测体外培养的人肝细胞癌HepG2,Hep3B细胞和正常肝细胞系QSG7701细胞内环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,观察环氧酶抑制剂双氯芬酸(diclofenac)对上述细胞增殖的作用,并检测前列腺素E₂(PGE₂)对双氯芬酸作用的影响,以探讨双氯芬酸抗增殖作用与细胞内COX-2的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2 mRNA的表达水平,免疫印迹技术检测细胞内蛋白水平,cellcounting kit-8(CCK-8)细胞计数法测定细胞增殖活性。结果肝细胞癌HepG2和Hep3B细胞均高表达COX-2 mRNA和COX-2蛋白,正常肝细胞系QSG7701微弱表达COX-2。10～200μmol·L^-1的双氯芬酸浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖(P<0.01),作用72h的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为76.41和35.21μmol·L^-1。双氯芬酸对QSG7701的抑制作用较弱,IC₅₀值为170.23μmol·L^-1。20μmol·L^-1 PGE2与50μmol·L^-1双氯芬酸共同孵育能显著削弱后者抗HepG2和Hep3B细胞增殖的作用(P<0.01)。结论双氯芬酸通过抑制COX-2活性和PGE₂的生成,特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞的增殖。     

三棱丸抑制大鼠异位子宫内膜芳香化酶及环氧合酶-2表达的研究

目的：探讨三棱丸(SLW)抑制内异症大鼠异位子宫内膜局部雌激素的生成及其作用机制。方法：采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型，将40只造模造模成功大鼠随机分为5组(n=8)：模型对照组，SLW高、中、低剂量组和阿那曲唑组，另设正常对照组。分别灌胃给药4周后，免疫组化和western blot方法检测异位内膜组织中细胞色素P450芳香化酶(P450 arom)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达，发光免疫分析法及放射免疫分析法分别检测异位内膜组织雌二醇(E₂)及前列腺素E₂(PGE₂)的含量。结果：SLW各剂量组能有效抑制异位内膜组织中P450 arom的表达，降低其表达产物雌二醇的生成水平，与模型对照组比较，差异显著(P<0.01)；SLW高剂量组能降低异位子宫内膜环氧合酶-2的表达，其产物前列腺素E₂的水平也明显低于模型对照组(P<0.05)。结论：SLW具有良好的抗EMS雌激素生成作用，其作用与抑制P450 arom表达，阻断雌激素生成的正反馈环有关。     

柴胡龙骨牡蛎汤下调星形胶质细胞环氧合酶-2/前列腺素E2的表达

目的：探讨柴胡龙骨牡蛎汤对戊四氮（PTZ）诱导的小鼠海马星形胶质细胞环氧合酶-2（COX-2）/前列腺素E2（PGE2）表达的作用。方法:分离培养小鼠海马星形胶质细胞,免疫荧光鉴定胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）表达。将细胞随机分为对照组、PTZ组、PTZ+柴胡龙骨牡蛎汤低剂量（PTZ+CLMD 10 mg/L）组、PTZ+柴胡龙骨牡蛎汤高剂量（PTZ+CLMD 20 mg/L）组,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中COX-2和PGE2的浓度;蛋白质印迹法检测细胞内COX-2、PGE2受体（PTGER2）表达水平。结果:免疫荧光显示星形胶质细胞呈现GFAP阳性表达。与对照组比较,PTZ组COX-2和PTGER2蛋白表达水平明显上调,COX-2和PGE2浓度显著升高（P<0.01）;与PTZ组比较,PTZ+CLMD 10 mg/L组和PTZ+CLMD 20 mg/L组COX-2和PTGER2蛋白表达水平显著降低,COX-2和PGE2浓度也显著下降（P<0.01）。且高剂量的柴胡龙骨牡蛎汤效果更明显（P<0.01）。结论:柴胡龙骨牡蛎汤可抑制PTZ诱导的星形胶质细胞内COX-2/PGE2炎症反应通路。     

黄连素抑制结肠癌细胞中PGE2表达作用的研究

目的:研究黄连素抑制肿瘤细胞中PGE2表达与时间及浓度的关系,探讨黄连素作为抗肿瘤药物的可能.方法:以结肠癌细胞系HT-29为研究对象,培养后加入不同浓度的黄连素,用放免法观察黄连素对PGE2的抑制作用,MTT法检测黄连素对癌细胞的杀伤作用.结果:黄连素在浓度大于1.0μmol/L时对PGE2有抑制作用,与时间、浓度正相关.在浓度大于3.0μmol/L时对癌细胞有杀伤作用.结论:黄连素可抑制PGE2合成及癌细胞生长,推测黄连素有一定的抑癌作用,可望成为一种新型的抗癌药.     

三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶-2表达的影响

目的：观察三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶-2（COX-2）的表达。方法：62只SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七大剂量组、三七小剂量组和易善复组,后4组以50%酒精灌胃和自由饮用10%酒精饮料进行酒精性脂肪肝的造模,易善复组、三七大、小剂量组大鼠在造模的同时予相应的药物进行干预,连续14周后HE染色观察肝组织病理学改变、免疫组化法测定肝组织中COX-2的表达、放免法检测血浆血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）的含量。结果：模型组大鼠肝组织出现不同程度的脂肪变,肝组织COX-2表达较正常组明显增强,血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量及TXB2/6-Keto-PGF1α值较正常组明显升高。经大、小剂量三七干预后大鼠肝组织脂肪变程度较模型组明显减轻,COX-2表达明显减少,血浆TXB2、6-Keto-PGF1α含量及TXB2/6-Keto-PGF1α值也明显降低。结论：三七能明显改善酒精性脂肪肝大鼠微循环,抑制酒精性脂肪肝大鼠肝组织COX-2表达,这可能是其抗酒精性脂肪肝的作用机制之一。     

ELISA法应用于冠状动脉粥样硬化患者的环氧合酶-2活性的检测分析

目的:探讨和研究酶联免疫吸附试验(ELISA法)应用于冠状动脉粥样硬化患者的环氧合酶-2活性的临床价值.方法:先采用塞来昔布对冠状动脉粥样硬化患者进行干预,再采用ELISA法进行分组检测,对环氧合酶-2活性进行分析.结果:观察组患者环氧合酶-2的水平显著高于对照组(P＜0.05),而再进行塞来昔布干预之后患者的环氧合酶-2水平显著降低,水平与对照组相较无明显差异(P＞0.05).结论:冠状动脉粥样硬化患者血浆环氧合酶-2水平明显升高,ELISA法进行相关检测能够有效的为临床提供依据.     

人参皂苷对重度颅脑外伤大鼠模型环氧合酶-2表达的影响

目的观察人参皂苷对重度颅脑外伤大鼠模型环氧合酶(cyclooxgenase-2,COX-2)mRNA表达的影响。方法选取健康wistar大鼠56只,分为正常对照组、模型组和人参皂苷组,Feeney法制作重度颅脑外伤模型,人参皂苷组在造模前30min按5mg/kg灌胃人参皂苷。造模后6、24、72h共3个时相点取各组大鼠脑组织,应用RT-PCR法检测各组神经细胞COX-2mRNA的表达。结果正常对照组未见COX-2mRNA的表达;模型组和人参皂苷组脑外伤后6h出现COX-2mRNA的表达,24h达到高峰,72h后明显减少;人参皂苷组各个时间点COX-2mRNA的表达明显低于模型组。结论重度脑外伤存在COX-2mRNA的异常表达,人参皂苷能抑制COX-2mRNA的表达,可能对脑外伤有一定的保护作用。     

胃黏膜病变组织环氧合酶-2和三叶因子1的表达及意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和三叶因子1(TFF1)在胃黏膜病变过程中的变化规律和所起的作用。方法用免疫组化染色法检测88例经胃镜和病理确诊的不同胃黏膜病变患者的病变组织中COX-2、TFF1的表达,探讨两者的关系及变化规律。结果COX-2从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠腺化生→异型增生→胃癌中的表达逐渐增强,而TFF1的表达逐渐减弱,COX-2与TFF1呈负相关(r=-0.397,P<0.01)。结论胃黏膜病变从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠腺化生→异型增生→胃癌的变化过程中,COX-2、TFF1表达的异常在其中发挥重要作用。     

桂枝与桂枝汤对大鼠发汗作用的比较研究

目的比较桂枝与桂枝汤对大鼠的发汗作用,为揭示桂枝汤的配伍机制提供可能依据。方法将SD大鼠随机分为空白组、桂枝组和桂枝汤组,每组20只。分别给大鼠灌服等量生理盐水、桂枝、桂枝汤,30min后观察大鼠后足跖肉垫汗腺分泌着色点数和分泌量。结果桂枝组大鼠足趾汗腺着色点数及足趾汗腺分泌量明显多于桂枝汤组及空白组(P<0.01)。结论桂枝对大鼠足趾汗腺分泌作用明显优于桂枝汤。     

逍遥散分煎与合煎药理作用比较研究

对比研究了逍遥散分煎与合煎对小鼠四氯化碳性肝损伤,脾虚胃排空,失血性贫血,自主活动、睡眠时间的影响,结果表明合煎整体效应稍优于分煎,但除ＲＢＣ外其余指标两者均无显著性差别。     

消定膏对骨折愈合过程中COX-2/PGE_2/cAMP信号通路表达的影响

目的研究消定膏(无名异、儿茶、大黄等)对兔环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(c AMP)不同时相表达的影响,探讨其对骨折愈合的作用机制。方法将128只新西兰大耳白兔随机分为空白组、模型组、青鹏膏组(棘豆、亚大黄、诃子等)和消定膏组,除空白组外,其余各组均采用骨缺损法造成尺骨3 mm骨缺损模型,造模成功后,空白组、模型组仅做外固定。用药后第3、7、14、28天各组随机抽取8只,取骨痂组织,光镜下观察病理形态学变化,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测骨痂组织COX-2 mRNA表达水平,免疫组化法检测骨痂组织PGE2、c AMP蛋白的表达。结果与模型组、青鹏膏组比较,消定膏组骨痂和胶原纤维的形成明显优于其他组,消定膏组COX-2 mRNA表达及PGE2、c AMP蛋白表达在术后7、14 d明显增强(P<0.05),且在术后14 d左右出现峰值。结论消定膏具有明显的促进骨折愈合作用,可能与其对COX-2/PGE2/c AMP信号通路的影响有关。     

雷公藤内酯醇对结肠癌细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

 目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物,同时提取各组细胞蛋白质,TransAM测定核转录因子NF-κB活性。结果TP对结肠癌细胞株COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,而且也抑制SW114细胞的NF-κB活性,这些作用与剂量呈依赖关系。结论TP对SW114细胞COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,这种作用可能通过增强TP对核转录因子NF-κB活性的抑制作用而实现,揭示了TP抗肿瘤的部分依据。     

龙胆苦苷对炎症靶点iNOS和COX-2抗炎活性研究

目的 本文旨在从中药材黄管秦艽中分离出高纯度龙胆苦苷化合物，并通过其对炎症靶点的抑制作用来考察其抗炎活性。方法 采用HPLC、IR、NMR和MS等方法对龙胆苦苷的纯度及分子结构进行了鉴定，并通过体内、体外及分子对接实验考察其抗炎活性。结果 体外实验以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象，考察不同浓度的龙胆苦苷对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞产生NO以及释放炎症因子PEG2及1L-6的抑制状况，结果表明，龙胆苦苷能够明显抑制NO及炎症因子PEG2、1L-6产生和释放。体内实验以KM小鼠为研究对象，利用二甲苯致小鼠耳肿胀实验考察龙胆苦苷对急性炎症的抑制活性，结果发现龙胆苦苷能有效的抑制小鼠耳肿胀且抑制率达34.17%。分子模拟对接实验发现龙胆苦苷中的糖片段能够与炎症靶点COX-2及iNOS中的氨基酸以氢键的形式有效的结合，进而通过对二者的抑制作用表现出其生物活性。结论 龙胆苦苷是一种潜在的且对炎症靶点COX-2及iNOS具选择性的抑制剂，具有良好的抗炎活性。     

中药方剂桂枝汤的时间药理学

研究了桂枝汤对啮齿类动物的毒性及药效作用的昼夜节律性变化。结果表明桂枝汤的毒性有明显的昼夜节律,白昼用药毒性大于夜间。同样,药效作用也因用药时间不同而不同,镇痛及解热作用夜间高于白昼。证实桂枝汤的用药时间与其作用有关,因而用药时应当考虑到时间药理学的原则。     

银翘散煎剂与颗粒剂药效学作用的比较研究

目的:对比银翘散合煎剂、分煎剂与颗粒剂药效学作用。方法:分别用二甲苯、角叉菜胶造成小鼠和大鼠的炎证模型,用兔耳缘静脉注射伤寒Vi多糖菌苗制备家兔发热病理模型,及鸡红细胞作免疫原的血清溶血素形成。观察银翘散三种不同剂型对各种炎证反应的抑制作用,对发热家兔的解热作用,及对鸡红细胞作免疫原的血清溶血素形成的影响。结果:银翘散三种不同剂型对小鼠耳廓肿胀、大鼠足趾肿胀均有抑制作用,对致热家兔有解热作用,对小鼠鸡红细胞作免疫的血清溶血素形成有促进作用(P<0.01)。但组间无差异。结论:银翘散三种不同剂型在抗炎、解热作用和对免疫功能的影响方面无明显差异。     

桂枝汤方中药对对体温双向调节的作用研究

为阐明桂枝汤对体温双向调节作用的组方配伍原理,对桂枝汤进行拆方研究,观察了桂枝汤中五个药对对高、低体温动物模型的影响,发现桂枝－芍药只有升温作用;芍药－炙甘草只有解热作用;单味桂枝和芍药均有解热和升温作用,分别伍以生姜、甘草、大枣,或桂枝芍药相伍,均未见协同相加     

桂枝汤方中药对对体温双向调节的作用研究

为阐明桂枝汤对体温双向调节作用的组方配伍原理,对桂枝汤进行拆方研究,观察了桂枝汤中五个药对对低体温动物模型的影响,发现桂枝－芍药只有升温作用,芍药－炙甘草只有解热作用;单味桂枝和芍药均有解热和升温作用,分别伍以生姜、甘草、大枣,或桂枝芍药相伍,均未见协同相加。