层粘连蛋白总糖肽抑制小鼠黑色素瘤肝转移

层粘连蛋白总糖肽抑制小鼠黑色素瘤肝转移刘艺萍，周柔丽，张莎（北京医科大学细胞生物教研室１０００８３）在肿瘤转移过程中，癌细胞至少３次穿越基膜，癌细胞通过与基膜的主要功能成份层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）的识别、粘着并铺展于基膜是癌转移的关键环节之...     

层粘连蛋白总糖肽抗癌细胞转移机制的研究

目的：从癌细胞增殖、凋亡和基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）的分泌等方面研究层粘连蛋白总糖肽（ｌａｍｉｎｉｎ－ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ,ＬＮ－ＧＰｓ）抗癌细胞转移的机制。方法：将人肝癌细胞系Ｂｅｌ７４０２细胞于层粘连蛋白基质上孵育一定时间后,蓝比色法测活细胞群体总数。＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法测癌细胞ＤＮＡ的合成,我素活化的细胞分拣术（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ     

层粘连蛋白总糖肽抗癌细胞转移机制的研究

从癌细胞增殖、凋亡和基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinases,MMPs)的分泌等方面研究层粘连蛋白总糖肽 (laminin glycopeptides,LN GPs)抗癌细胞转移的机制。 方法 :将人肝癌细胞系Bel740 2细胞于层粘连蛋白基质上孵育一定时间后 ,噻唑蓝比色法测活细胞群体总数。3H TdR参入法测癌细胞DNA的合成 ;荧光素活化的细胞分拣术 (fluorescentactivatedcellsorting ,FACS)测定细胞周期 ;细胞经吉姆萨染色后计数有丝分裂指数 ;FACS和丫啶橙染色法检测细胞的凋亡。明胶酶谱分析法检测无血清培养上清中癌细胞分泌MMPs的水平。糖肽组加LN GPs (5 0mg·L-1)。结果 :癌细胞孵育后 ,活细胞群体总数增加 ,3H TdR的参入升高 ,G1期细胞减少而S期细胞增加。相反 ,加LN GPs组活细胞群体总数明显降低 ,3H TdR的参入下降 ,G1期细胞增加而S期细胞减少 ,与未包被组结果相近。但两种方法均未检测到明显的癌细胞凋亡。LN GPs组人肝癌细胞系Bel740 2细胞和高转移潜能的人巨细胞肺癌细胞系PG细胞的MMPs分泌和活化明显降低。结论 :LN可促进癌细胞的增殖 ,而LN GPs能抑制这一作用 ,并可明显抑制癌细胞MMPs的分泌 ,这可能是其抑制癌细胞侵袭和转移的重要环节。     

层粘连蛋白总糖肽的抗癌细胞转移作用及其作用机制

增殖失控及侵袭与转移是恶性肿瘤细胞的根本特性,也是夺去癌患者生命的根本原因。不单在癌症发展过程中可自发的发生广泛转移,而且在癌症常规诊疗过程中也有可能人为的促进癌细胞的转移(医源性转移),如诊疗操作中的种植及对患者免疫功能的损伤等。癌细胞转移是一个多步骤的复杂过程。然而,大量动物实验证明只要阻断转移过程中     

层粘连蛋白总糖肽对小鼠巨噬细胞功能的影响

观察层粘连蛋白总糖肽对小鼠腹腔巨噬细胞杀伤黑色素瘤Ｂ１６细胞及噬抗体包被的羊红细胞作用的影响。将ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔Ｍψ体外培养４８ｈ后，再分别与０，５０，１００，２００μｇ／ｍｌ终浓度的ＬＮ－Ｇｐｓ预温３０ｍｉｎ，用噻唑蓝比色法检测Ｍψ对Ｂ１６细胞的杀伤作用，用联苯胺氧化比色法检测Ｍψ吞噬ＥＡ的功能。     

黄芪多糖对小鼠B16-BL6黑色素瘤肺转移的影响

目的 探讨不同剂量的黄芪多糖对小鼠B 16-BL6黑色素瘤肺转移的影响及机制.方法 采用B 16-BL6小鼠人工肺转移模型研究不同剂量黄芪多糖对黑色素瘤肺转移的影响;测量给药后小鼠免疫器官指数的变化探讨其可能的机制.结果 高剂量组的黄芪多糖能够显著抑制小鼠B16-BL6黑色素瘤肺转移,并能增加小鼠脾脏指数.结论 高剂量黄芪多糖可能通过增强免疫达到抗黑色素瘤细胞肺转移的作用.     

层粘连蛋白对小鼠肺癌细胞移动性及粘连性的影响

探讨内源性和外源性层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）对癌细胞粘连性及移动性的影响。方法通过体外实验，利用外源性ＬＮ作用于小鼠肺腺癌细胞系高、低转移亚系细胞，比较这两种细胞的移动性和粘连性，并观察其细胞骨架改变及内源性ＬＮ的表达。结果无外源性ＮＬ时，具有转移特性的小鼠肺腺癌细胞亚系体内转移潜能与其体外移动性、粘连性呈负相关。但当外源性ＬＮ作用４８小时后，高转移亚系细胞形态发生改变，在细胞骨架重组的同时其移动性和粘连性明显加强，这一变化与细胞转移行为呈正相关。高转移亚系细胞较低转移亚系细胞的细胞骨架网络分布不均匀不规则，并且其内源性ＬＮ呈高表达。结论癌侵袭、转移行为与癌细胞ＬＮ受体含量、内源性ＬＮ的分布以及癌细胞外ＬＮ的存在与否密切相关。     

髓清丸清对裸小鼠黑色素瘤B16自发性肺转移影响的研究

目的研究中药活血化瘀复方瘀毒清对肿瘤生长和转移的影响.方法采用BALB/C无胸腺裸小鼠右侧腋窝皮下接种造成黑色素瘤B16自发转移模型,观察小鼠实体瘤瘤重抑瘤率、肿瘤平均直径倍增时间、肺部转移率、淋巴结转移等指标的变化.结果瘀毒清高、低剂量组的瘤重均较对照组小,尤以低剂量组明显,抑瘤率达到41.95%;瘀毒清高、低剂量组的肿瘤平均直径倍增时间均较对照组延长,瘀毒清高、低剂量组的肺部转移结节均较对照组少,转移率也较对照组低;同侧和对侧腋窝淋巴结重量瘀毒清高、低剂量组均较对照组小.结论瘀毒清对黑色素瘤Bi6有一定的抑瘤作用和一定的抗转移的作用.     

心房钠尿肽在基因敲除小鼠黑色素瘤肺转移中的作用

目的探讨心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)对黑色素瘤肺转移的作用。方法将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞株通过尾静脉注射到心房钠尿肽敲除小鼠(ANP-/-小鼠)和C57BL/6J小鼠的体内,建立黑色素瘤肺转移模型,模型建立后第21天计数转移到肺表面的结节数目,并把肺组织包埋固定、切片、HE染色后,确定肺转移结节并计数。结果 ANP敲除小鼠肺表面转移的黑色素瘤结节数明显比C57BL/6J小鼠少,差异有显著性;ANP敲除小鼠肺微转移结节数目也明显比C57BL/6J小鼠少,差异有显著性。结论 ANP敲除显著抑制了黑色素瘤的肺转移。     

IL-24对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用

[目的]研究携带IL-24基因的真核表达质粒对小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡和体外增殖的影响.[方法]采用重组DNA技术构建含有IL-24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞,用荧光显微镜观察其表达,在生物显微镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）法检测细胞凋亡,用MTT比色法检测B16细胞的体外增殖能力.[结果]荧光显微镜下观察到pEGFP-N1-IL-24可在B16细胞中表达;生物显微镜下显示转染IL-24基因的B16细胞皱缩、成团;AO/EB法检测显示转染IL-24的B16细胞核染色质着橘黄色或橙红色,并呈固缩状;MTT比色法显示IL-24明显抑制B16细胞的生长,与对照组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）.[结论]外源性IL-24基因在体外对小鼠黑色素瘤B16细胞有显著的诱导凋亡和抑制增殖的作用.     

层粘连蛋白,纤粘连蛋白对两株小鼠肝癌细胞实验粘附的影响

本文探讨了层粘连蛋白（ＦＮ）和纤粘连蛋白（ＬＮ）对两株细胞休外粘附的影响，以及与其转移能力的相关性，结果显示ＬＮ和ＦＮ对高转移的Ｆ细胞的附壁及淋巴结组织的粘附均有促进作用，而低转移和Ｐ细胞ＦＮ对基初期（３小时）附壁和淋巴结组织的占附有一定影响，提示瘤细胸质膜受体蛋白的表达与其转移能力密切相关。     

SEA基因修饰抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞肺转移

超抗原 (superantigen)是一组细菌或病毒编码的新型蛋白质分子,它以完整的蛋白质分子形式分别直接与抗原提呈细胞(APC)膜上MHCⅡ类分子抗原结合槽外侧及T细胞表面抗原识别受体TCRVβ区直接结合,不需要APC处理,即可激活比普通抗原多达数千乃至数万倍的T淋巴细胞,并促使活化的T细胞分泌多种足量的细胞因子如TNF-α、TNF-β、TNF-γ、IL-2、IL-6等,产生强烈的抗肿瘤免疫效应,直接或间接地杀伤肿瘤细胞[1～3].作为超抗原的一种,金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal-enterotoxin A,SEA)近年来受到国内外学者广泛关注,大量研究表明[2,4],SEA在肿瘤的导向免疫治疗中具有巨大的潜力和良好的应用前景.本研究通过用SEA对小鼠黑素瘤细胞B16进行修饰,实现了抗肿瘤效果作用,现将结果报告如下.     

高强度聚焦超声抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-F10在体内的转移

目的在黑色素瘤的小鼠模型上,探讨高强度聚焦超声（HIFU）处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小
鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7~10 mm时进行HIFU处理,并设置实验对
照组（荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭,即假照组）;治疗后每3 d测量肿瘤长径和短径,共观察3周,绘制肿瘤曲
线,统计生存率和转移率,并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色
素瘤细胞的数量,它们分别是黑色素瘤相关抗原A3（MAGE-A3）、T细胞1识别的黑色素瘤抗原（MART1）以及同源转化成对框
基因转录因子PAX3);在HIFU治疗后14 d,通过尾静脉注射再次移植B16-F10细胞,观测其肺转移率。结果（1）各自的中位生
存时间及95 %可信区间（CI）：假照组分别为19.00 d和17.14~20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76~27.25 d,生存率差异显
著（P<0.01）;从治疗后第20天起,两组小鼠的肿瘤体积差异明显,从HIFU处理后第20天开始,包括处理后第23、26天,辐照组
小鼠肿瘤体积明显小于假照组（P<0.05）;（2）实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3、MART1
和PAX3三个指标都明显低于假照组（P<0.05）,在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组（P<0.05）;（3）在
HIFU治疗后14 d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞,HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组（P<0.05）,肿瘤转移抑制率为
42.4%。结论HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生,其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在
肺部的定植能力。
     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mGM-CSF基因转染

目的探讨小鼠粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(mGM-CSF)基因转导对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制效果.方法应用脂质体将含有mGM-CSF基因的真核表达载体转染B16小鼠黑色素瘤细胞,经G418加压筛选后,挑选表达mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞.观察转导或未转导mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞在Balb/c小鼠体内的肺转移.结果转导mGM-CSF基因的B16黑色素瘤细胞可以稳定表达mGM-CSF,在小鼠模型上其肺转移灶数目显著少于未转染基因的黑色素瘤细胞对照组,二者差异显著(n=5,125.8±34.3vs27.8±24.0,P<0.01).结论mGM-CSF转导可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的肺转移,提示GM-CSF具有治疗黑色素瘤的临床应用前景.     

糖基在小鼠Lewis肺癌细胞与层粘连蛋白识别及结合中的作用

培养的小鼠Lewis肺癌细胞可粘着于固化在玻璃表面的层粘连蛋白(Laminin,LN)基质上。此过程可分别被抗LN兔血清和抗LN受体(LN-R)兔血清阻断,说明二者的结合是LN与细胞表面LN-R的作用结果。几种外源性单糖如唾液酸,α-甲基甘露糖等可抑制Lewis肺癌细胞与LN相结合,且有剂量依赖性。一种混合糖肽可分别与Lewis肺癌细胞和LN结合,而阻断二者的结合。     

金属蛋白酶类及层粘连蛋白受体与人黑色素瘤细胞侵袭转移 …

目的：揭示金属蛋白酶类（ＭＭＰｓ）及层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）与人黑色素瘤细胞侵袭转移的关系，并探讨ＭＭＰｓ及ＬＮ－Ｒ用以判断肿瘤细胞侵袭转移的可能性。方法：通过流式细胞术（ＦＣＭ）定量研究和蛋白酶活性分析，对具有不同潜在转移能力的人黑色素瘤细胞系（ＷＭ３５，ＷＭ１３４１ｂ，ＷＭ９８３ａ，ＷＭ４５１）进行ＭＭＰｓ及瘤细胞表面６７０００ＬＮ－Ｒ的荧光阳性率和全部细胞的平均荧光强度测定。结果：早期ＷＭ