毁损Meynert基底核造成皮层及海马的乙酰胆硷酯酶减少行为学和形态学研究(英文)

本研究通过毁损Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底核（ｎｂＭ ）建立Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ氏病（ＡＤ）动物模型。用乙酰胆硷酯酶（ＡＣｈＥ）细胞化学方法对模型动物大脑皮层及海马进行反应，评价ＡＣｈＥ 与ＡＤ 之间可能存在的关系。将４８ 只大鼠分成对照组及实验组，用Ｍｏｒｒｉｓ 水迷宫（ＭＷ Ｍ ）测定行为学变化。在实验组，以局部注射海人藻酸的方法毁损ｎｂＭ 。术后７ ｄ，再次检测其行为学变化。存活不同时间后，用ＡＣｈＥ 酶细胞化学技术染色脑切片，用图象分析系统测算海马层ＡＣｈＥ阳性神经元及纤维的体积密度。结果显示，毁损ｎｂＭ 鼠皮质及海马的ＡＣｈＥ阳性神经元纤维明显减少，其特征为片层结构缺失。这些变化在毁损ｎｂＭ 鼠３～４ 个月及９～１０ 个月组间无显著差异。本研究证明，毁损ｎｂＭ 出现的ＡＣｈＥ减少与ＡＤ 的发生关系密切，且与同一动物模型β 淀粉样蛋白及τ蛋白过度表达在时间上一致，后者是ＡＤ 病人的特征。     

巨噬细胞对A549肺泡细胞癌细胞作用的定量酶细胞化学研究

为研究巨噬细胞（ＭΦ）抑制、杀伤肿瘤细胞的机理，我们应用酶细胞化学及形态定量技术观察比较正常及活化ＭΦ分别与Ａ５４９肺泡细胞癌细胞作用后，癌细胞内细胞色素氧化酶（ＣＯ），琥珀酸脱氢酶（ＳＤ），乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性的变化。结果见活化ＭΦ（Ｅ）与癌细胞（Ｔ）比值为１０：１时，癌细胞线粒体的ＣＯ，ＳＤ，及ＬＤＨ活性降低，Ｅ／Ｔ＝２０：１时溶酶体的ＡＣＰ活性增加。提示Ｅ／Ｔ适当时，活化ＭΦ可引起癌细胞线粒体及溶酶体的损伤，影响其酶活性引起细胞呼吸和氧化磷酸化等代谢改变，可能是活化ＭΦ抑制、杀伤癌细胞的机理之一。     

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。     

乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF—7细胞活性…

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：⑴Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，Ｅ     

重症肌无力患者CD5+B细胞的变化

目的：研究ＣＤ＾＋Ｂ细胞在重症肌无力（ＭＣ）发病中的作用。方法Ｌ：采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪对３９例ＭＧ患者和１８例健康对照者周围血中ＣＤ５＾＋细胞（ＣＤ５＾＋ＣＤ１９＾＋）的百分率进行测定,同时用ＥＬＩＳＡ间接法检测ＭＣ患者血清中ＡｃｈＲａｂ。结果：在ＭＧ患者周围血ＣＤ５＾＋Ｂ细胞百分率显著高于对照组,而且在血清ＡｃｈＲａｂ阳性和阴性ＭＧ中ＣＤ５＾＋Ｂ细胞均明显高于对照组;但在血清Ａｃｈ     

骨骼肌提取液对大鼠坐骨神经损伤所致腰段脊髓腹角和背根节神…

用ＣＴ－ＨＲＰ逆行追踪法及ＣｈＡＴ单克隆抗体的ＡＢＣ免疫组织化学研究了新生大鼠骨骼肌提取液（ＭＥ，２０－５０ｋＤ）对钳夹大鼠坐骨神经所致的腰骶部脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响。实验结果显示：注射ＭＥ实验组的脊髓腹角运动神经元和背根节细胞的存活元旦数与注射直的对照组相比，其比值为６：０，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示骨骼肌提取液（２０－５０ｋＤ）对脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经细胞的溃变     

骨骼肌提取液对大鼠坐骨神经损伤所致腰段脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响

用ＣＴ－ＨＲＰ逆行追踪法及ＣｈＡＴ单克隆抗体的ＡＢＣ免疫组织化学技术研究了新生大鼠骨骼肌提取液（ＭＥ，２０～５０ｋＤ）对钳夹大鼠坐骨神经所致的腰骶部脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响。实验结果显示：注射ＭＥ实验组的脊髓腹角运动神经元和背根节细胞的存活均数与注射盐水的对照组相比，其比值为６：０，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示骨骼肌提取液（２０～５０ｋＤ）对脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经细胞的演变有明显的保护作用。     

环孢霉素A对大鼠单个核细胞雄激素和雌激素受体的影响及意义

研究了环孢霉素Ａ（ＣａＡ）、环磷酰胺（ＣＴＸ）及甲基强的松龙（ＭＰ）对大鼠单个核细胞（ＭＮＬ）雄激素受体（ＡＲ）及雌激素受体（ＥＲ）的影响。结果表明：静注ＣｓＡ２０ｍｇ／ｋｇ，ＥＲ明显降低，３ｈ作用达高峰，持续低水平达８ｈ；而ＡＲ无明显影响。静注ＣａＡ１００ｍｇ／ｋｇ用ＣＴＡ和ＭＰ使ＡＲ、ＥＲ均明显降低。而ＣＴＸ和ＭＰ使ＥＲ降低，也使ＡＲ降低，故ＣｓＡ免疫抑制作用优于ＣＴＸ和ＭＰ。     

眼肌结合抗体的测定及其致免疫损伤机制的研究

用牛和猪眼肌抗原建立了检测眼肌结合抗体（ＥＭｂ Ａｂ ） 的ＥＬＩＳＡ法。证实甲亢患者血清中存在ＥＭｂ Ａｂ。通过ＥＭｂ Ａｂ 特异免疫复合物、补体复合物解离活性抗体依赖的细胞毒或补体介导的细胞毒（ＡＤＣＣ或ＣＭＡＣ） 测定, 以及ＥＭｂ Ａｂ 与眼肌细胞抗原结合的实验观察, 表明此种ＥＭｂ Ａｂ 可能在与已受某种因素损伤后的眼肌结合时, 通过ＡＤＣＣ反应加剧眼肌损伤。     

反义Gαq/11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的影响

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ｖＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代修饰的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ），以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＴ－１刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ｖＳＭＣ。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ｖＳＭＣＤＮＡ合成、免疫细胞化学技术检测ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ｖＳＭＣＤＮＡ的合成，在１２ｈ，２４ｈ时抑制率分别为８４２％和８５３％；Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ亦明显降低ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白的表达。而相同浓度的正义Ｇαｑ／１１ＯＤＮｓ只呈现少量抑制作用。结论：本实验提示Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的ｖＳＭＣ增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治的研究     

虎杖甙对正常人血管平滑肌细胞内钙和膜电位的调节作用

目的和方法：观察虎杖甙（ＰＤ）对人脐带动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内游离钙、细胞膜电位的变化,以探讨ＰＤ对血管平滑肌的调节机制。用Ｆｌｕｏ－３－ＡＭ、ＤｉＢＡＣ４（３）标记培养的ＶＳＭＣ,在激光共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙和膜电位变化。结果：给ＰＤ（０５ｍｍｏｌ／Ｌ）１０ｍｉｎ后,ＶＳＭＣ内游离钙浓度升高５６％±５６％。当ＰＤ加入前用维拉帕米和ＥＧＴＡ预处理后,则游离钙不再升高;ＥＧＴＡ和肝素预处理也抑制ＰＤ的升钙作用,而ＥＧＴＡ和普鲁卡因预处理则使细胞内钙显著升高。ＰＤ还可使ＶＳＭＣ膜电位去极化,加入钠通道阻断剂河豚毒素（２５μｍｏｌ／Ｌ）可完全阻断ＰＤ的去极化作用：加甲氰咪胍、维拉帕米、优降糖和利及丁预处理不能阻断ＰＤ去极化作用。结论：：ＰＤ可通过细胞外钙内流来增加细胞内游离钙浓度,并促进细胞外钠离子内流而导致细胞去极化     

MTEC 1分泌的趋化因子引起特定亚群胸腺细胞的定向迁移

分析胸腺髓质上皮样细胞系ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对胸腺细胞亚群的趋化作用。方法以抗体加补体杀伤结合免疫磁珠及ｐａｎｎｉｎｇ法，将小鼠胸腺细胞分离纯化，获得ＣＤ４＋ＣＤ８＋（ＤＰ），ＣＤ４－ＣＤ８－（ＤＮ），ＣＤ４＋ＣＤ８－（ＣＤ４ＳＰ）及ＣＤ４－ＣＤ８＋（ＣＤ８ＳＰ）四亚群细胞，用Ｂｏｙｄｅｎ小室分析ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对四群胸腺细胞的趋化作用。结果ＭＴＥＣ１┐ＳＮ对ＤＰ及ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞有趋化活性（ＣＩ＝６．６±１．０及６．１±１．８）；对ＣＤ８ＳＰ细胞有中度趋化活性（ＣＩ＝３．２±１．０）；对ＤＮ趋化活性微弱（ＣＩ＝１．３±０．６）。化学趋化因子ＭＣＰ┐１纯品对ＣＤ４ＳＰ胸腺细胞显示强趋化活性（ＣＩ＝５．６），对ＤＮ胸腺细胞则无可测出趋化活性。结论ＭＴＥＣ１分泌的化学趋化因子对ＤＰ，ＣＤ４ＳＰ及ＣＤ８ＳＰ胸腺细胞有显著趋化作用，对ＤＮ胸腺细胞几乎无趋化作用。提示此类化学趋化因子有趋使胸腺发育中后期阶段的细胞向胸腺髓质区迁移和定位的作用。     

乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF-7细胞活性的作用

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激素对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：（１）Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，ＥＲ阳性１０例，阴性２例。（２）低浓度的雌激素对ＭＣＦ－７细胞的活性有加强作用，高浓度雌激素明显抑制其活性；低浓度的孕激素无明显的作用，高浓度孕激素则具有明显抑制作用，低浓度雌、孕激素共同作用时，对ＭＣＦ－７无明显抑制和加强作用，高浓度时其活性明显增加，增加程度低于单独雌激素，但稍高于孕激素对ＭＣＦ－７的作用。结论：在特异性和敏感性上，Ｃ－ＥＬＩＳＡ法检测ＥＲ优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，是一种可行定量检测ＥＲ的方法，雌激素紊乱可以导致乳腺癌的发生。     

表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血清补体的细胞毒作用

目的研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法从人胎盘组织提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白（ｈＭＣＰ）基因全长ｃＤＮＡ,将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣＩ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体和以ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体上,得到质粒ｐＣＩＭ和ｐＥＦＭ。利用电穿孔基因转移方法分别转染猪内皮细胞（ＰＥＣ）,以Ｇ４１８筛选稳定表达克隆。用正常人血清处理此转基因细胞来检测其抗补体作用。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,在ＥＦ－１α启动子引导下的ｈＭＣＰ基因得到了高效表达。死细胞计数和ＬＤＨ释放实验结果表明,表达ｈＭＣＰ基因的ＰＥＣ可有效抑制人血清补体对其的裂解作用（Ｐ＜０．０１）。结论克隆的ｈＭＣＰ基因在ＥＦ－１α启动子引导下于ＰＥＣ可高效表达,且使ＰＥＣ能够抗人补体的细胞毒作用。     

球囊损伤对动脉表皮生长因子受体表达的影响

目的;观察球囊损伤对动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达的影响,探讨ＥＧＦＲ与再狭窄的关系。方法：于兔右颈总动脉球囊损伤前及损伤后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、７天和１４天,取实验动脉段用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＥＧＦＲ的表达。结果：正常叫动脉中膜未见ＥＧＦＲ阳性表达,动脉球囊损伤后２４ｈ中膜部分ＳＭＣ显示ＥＧＦＲ阳性表达。４８ｈ中膜呈ＥＧＦＲ阳性表达的ＳＭＣ较２４ｈ增加,７２ｈ又较４     

脂质过氧化在老化大鼠急性胆源性肝细胞线粒体损害中的作用及维生素E的影响

目的：探讨脂质过氧化在老化大鼠胆源性肝细胞线粒体受损中及维生素Ｅ（ＶＥ）的保护作用。结果：老化大鼠非ＶＥ处理组（ＮＶＥＧ）肝细胞线粒体丙二醛（ＭＤＡ）含量明显高于非老化组，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＤ）活性明显低于非老化组，过氧化氢酶（ＣＡＴ）无明显变化。１８和２４月龄ＶＥ处理组（ＶＥＧ）ＭＤＡ显著低于ＮＶＥＧ，ＳＯＤ和ＧＰＤ显著高于ＮＶＥＧ，并以１８月龄组为明显。急性梗阻性左肝胆管炎（ＡＯＬＨ）后ＭＤＡ水平明显高于对照组，间接致伤肝叶（ＩＡＬ）较直接致伤肝叶（ＤＡＬ）为明显；ＩＡＬ线粒体ＳＯＤ和ＣＡＴ活性均显著高于对照组，ＤＡＬ显著降低；各叶ＧＰＤ活性均显著低于对照组，ＩＡＬ和ＤＡＬ均无显著差别；以上改变以２４月龄组为明显。各月龄ＶＥＧＡＯＬＨ２４ｈ时ＩＡＬＭＤＡ含量明显低于ＮＶＥＧ；１８月龄ＶＥＧＡＯＬＨ后ＳＯＤ水平均明显高于ＮＶＥＧ；各月龄ＶＥＧ组ＡＯＰＨ后ＧＰＤ和ＣＡＴ活性与ＮＶＥＧ比较均无明显差异。结论：脂质过氧化是老化大鼠胆源性肝细胞线粒体受损的重要机制，ＶＥ具有明显的保护作用。     

ICAM-1在着床期小鼠PBLC及EC/DC中表达的研究

目的：研究细胞间粘附因子－１（ＩＣＡＭ－１）在着床期外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）、子宫内膜及蜕膜细胞（ＥＣ／ＤＣ）中的不同表达特点及动态变化规律。方法：以着床期小鼠为动物模型,细胞分析采用单抗免疫荧光标主多参数流式细胞术分析技术。结果：发现ＩＣＡＭ－１在ＰＢＬＣ、ＥＣ／ＤＣ中的均存在明显的动态变化;其中ＩＣＡＭ－１的表达在ＰＢＬＣ中于妊娠第２天（Ｄ２）达最低小平,而在ＥＣ／ＤＣ中于妊娠第４天（Ｄ４）     

强直性肌营养不良基因CTG重复数与BAEP,TCD和ECG对比分析

目的：探讨强直性肌营养不良（ＤＭ）患及家系成员三核苷酸重复数ＣＴＧ（胞嘧啶、鸟嘌呤）的变化与ＢＡＥＰ、ＴＣ帮ＥＣＧ的关系。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增及ＤＮＡ杂交法对５例临床诊断ＤＭ患及三个家系的１６名成员进行ＤＭ基因的ＣＴＧ重复数物ＢＡＥＰ、ＴＣ帮ＥＣＧ测定。结果：１０名正常人ＣＴＧ重复数是３０个，ＢＡＥＰ、ＴＣＤ和ＥＣＧ正常，５例ＤＭ病人ＣＴＧ重复数均在８０个以上，其中２例在１６０５     

EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表达的影响

目的研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验、免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度（Ａ）比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白及阴性对照组（Ｐ＜０．０１）；细胞ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）；ＦＣＭ法测定细胞角蛋白表达，实验组比空白及阴性对照组阳性率显著降低（Ｐ＜０．０５）；ＨＬＡ免疫组化检测结果表明，ＬＭＰ表达细胞系ＨＬＡⅠ类及Ⅱ类抗原的表达都明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用且可明显抑制细胞分化，ＬＭＰ可致鼻咽癌细胞ＨＬＡ抗原的表达改变。     

肠道T细胞淋巴瘤中的EB病毒感染和T细胞内抗原1的表达

目的 探讨ＥＢ病毒感染在肠道Ｔ细胞淋巴瘤发病中的意义。方法 用ＥＢＥＲ１／２原位杂交及三步ＡＢＣ法免疫组织化学染色技术,观察２４例肠道Ｔ淋巴瘤患者中ＥＢ病毒感染及Ｑ细胞内抗原（ＴＩＡ－１）抗原表达情况,选用的抗体有ＴＬＡ－１,ＬＭＰ－１,ＣＤ３,ＣＤ２０,ＣＤ３０和ＣＤ４５ＲＯ等。