雌激素受体真核表达质粒对乳腺癌耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响

目的　研究雌激素受体 (ER )表达质粒对MCF 7/ADR乳腺癌阿霉素耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响。方法　Westernblot法检测MCF 7细胞和MCF 7/ADR细胞ER状态。构建ER的真核细胞表达质粒 pCER ,导入MCF 7/ADR细胞 ,流式细胞仪检测细胞周期分布 ,MTT法检测细胞生长。结果　MCF 7细胞ER为阳性 ,MCF 7/ADR细胞ER为阴性。成功构建真核细胞表达质粒 pCER ,转染MCF 7/ADR细胞 ,获得阳性克隆MTER/ADR。与对照组相比 ,MTER/ADR生长速度增快 ,S期细胞为 17.2 3 % (对照组为 14 .66% ) ,细胞对阿霉素的耐药性下降 ,阿霉素为 3mg/L时对细胞的抑制率为 45 % ,大于对照组细胞的抑制率 (为 2 4% ) ;且雌二醇 (E2 )能增加阿霉素对MTER/ADR细胞生长的抑制作用。结论　MCF 7/ADR乳腺癌耐药细胞的耐药性与其雌激素受体的表达缺失有一定关系。     

乳腺癌组织多药耐药相关蛋白表达及其与化疗敏感性关系的研究

目的：探讨3种耐药相关蛋白P-gp、GST-π和TopoⅡ在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌新辅助化疗敏感性的相关性。方法：乳腺癌患者80例,随机分为应用新辅助化疗（CEF）组（A组）和未化疗组（B组）,A组应用新辅助化疗2周期,化疗前后分别行B超检查测量肿瘤大小。采用S-P免疫组织化学法检测80例乳腺癌组织中P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达情况。结果：P-gp的表达在A组较B组有显著升高（P〈0.05）;GST-π和TopoⅡ的表达在A组及B组的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。A组P-gp的表达情况与乳腺癌肿瘤的缩小呈直线相关（P〈0.05）;GST-π、TopoⅡ的表达情况与乳腺癌瘤体的缩小无明显相关（P〉0.05）。P-gp的表达与腋窝淋巴结阳性有显著相关;GST-π的表达与肿瘤的分级有显著相关,与雌激素受体呈负相关;TopoⅡ的表达与肿瘤的分级呈正相关。结论：P-gp的表达可能与乳腺癌的获得性耐药有关,GST-π和TopoⅡ的表达可能与乳腺癌的天然耐药有关。     

乳腺癌干细胞含量及其耐药相关蛋白表达的临床病理意义

目的：探讨乳腺癌中癌干细胞含量与临床病理参数的关系,以及P-糖蛋白（P-gp）,谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）,肺耐药蛋白（LRP）和拓扑异构酶II（TOPO-II）在乳腺癌干细胞和分化细胞中的表达及其意义。 方法：选取乳腺浸润性导管癌新鲜标本30例制备成单细胞悬液,通过免疫磁珠两步法从中分离出癌干细胞（CD44+/CD24-细胞）和分化细胞（CD24+和CD44-CD24-细胞）并计数,分析癌干细胞含量与乳腺癌患者临床病理参数的关系;应用免疫细胞化学方法检测以上两种细胞P-gp,GST-π,LRP和TOPO-II的表达情况。 结果：乳腺癌干细胞含量与患者的年龄、肿块大小、组织学分级及淋巴结转移均无明显关系（均P>0.05）。乳腺癌干细胞P-gp的阳性表达率明显高于分化细胞（73.3% vs. 40.0%）,而TOPO-II的阳性表达率明显低于分化细胞（40.0% vs. 76.7%）（P<0.05或P<0.01）;GST-π和LRP的表达在两种细胞间无统计学差异（均P>0.05）。 结论：乳腺癌干细胞含量与患者的临床病理参数无关,但乳腺癌干细胞中P-gp高表达与TOPO-II低表达可能是导致乳腺癌化疗失败和复发的重要原因。     

Ad-p53对乳腺癌阿霉素耐药细胞株多药耐药基因1/P-gp表达的影响

目的 观察腺病毒介导的p53基因(Ad-p53)逆转乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药作用及其对MDR1 mRNA/P-gP表达的影响.方法 以人乳腺癌MCF-7细胞及其阿霉素耐药株MCF-7/Adr为实验对象,以50 MOI Ad-p53感染MCF-7/Adr细胞,CCK-8法观察Ad-p53对多药耐药的逆转作用,实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1 mRNA变化,免疫荧光组织化学及Western blot检测P-gP蛋白表达的变化.结果 50 MOI Ad-p53能使MCF-7/Adr细胞阿霉素IC50由(4.54±0.91)mg/L降到(0.26±0.11)mg/L,逆转耐药倍数为18.1倍(P《0.01);MDR1 mRNA相对表达量由1.32下降至0.85(P《0.01),P-gP蛋白表达量亦下降.结论 Ad-p53具有对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr多药耐药的逆转作用,其可下调MDR1 mR-NA/P-gP表达.     

CD133与胃癌细胞化疗耐药的关系及其机制

目的探讨CDl33阳性胃癌起始细胞对常规化疗药物氟尿嘧啶（5．FU）的敏感性及其耐药机制。方法免疫磁珠法分选KATO—III、SGC7901和MKN-45胃癌细胞株并分为未分选组、CDl33＋组及CDl33一组。Westernblot法和RT—PCR法分别检测分选后胃癌细胞CDl33、P—gP、Bax和Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组细胞P-gP及Bcl-2蛋白的表达。CCK-8法和Hoechest染色检测各组细胞对5．FU的敏感性。siRNA干扰MKN45细胞CDl33表达后，检测CDl33、P-gP、Bcl-2、Akt及p-Akt蛋白及mRNA表达。结果CDl33＋组胃癌细胞中CDl33、P—gP及Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著高于未分选组及CDl33-组（均P〈0．05），而促凋亡因子Bax的表达水平则明显降低（P〈0．05）。在相同药物浓度下，5-Fu对CDl33＋组的抑制率显著低于CDl33一组（P〈0．05）。5-FU处理胃癌细胞后，CDl33＋组胃癌细胞中凋亡细胞比率明显低于CDl33-组及未分选组（P〈0．05）。CDl33特异siRNA干扰胃癌细胞后，干扰组P—gP、Bcl-2和p-Akt蛋白及mRNA表达显著降低（均P〈0．05），而Bax表达水平则显著增加（P〈0．05）。结论CDl33可能通过调节P-gp和Bcl-2的表达来促进胃癌的化疗耐药；在胃癌化疗耐药产生中，CDl33＋细胞可通过P13K／Akt通路起作用。     

Notch1在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌耐药的关系

目的 检测乳腺癌细胞株MCF-7与MCF-7/ADR的 Notch1 表达、成球能力、干细胞池比例及干细胞内Notch1的表达,探讨Notch1 在逆转乳腺癌化疗耐药中的意义.方法 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot 法检测乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADR 及表型为ALDH1+/CD44+/CD24- 乳腺癌干细胞中Notch1 的表达;无血清培养检测MCF-7及MCF-7/ADR 的成球能力;流式细胞仪检测MCF-7与MCF-7/ADR的干细胞比例并分选干细胞.结果 MCF-7/ADR的Notch1 的表达明显高于MCF-7(0.0748±0.0043比0.0461±0.0022,P＜0.05),微球体形成能力也明显高于MCF-7 (P＜0.05);流式细胞仪检测干细胞比例,MCF-7/ADR高于MCF-7(11.40％比1.89％);分选出的干细胞Notch1 的表达明显高于非干细胞(0.3096±0.0324比0.0428±0.0061,P ＜0.05).结论 Notch1 在乳腺癌及乳腺癌干细胞中高表达,干预Notch1 可能可以逆转乳腺癌治疗的耐药.     

肺耐药蛋白在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的探讨肺耐药蛋白(lungresistanceprotein,LRP)在胰腺癌细胞株中的表达及意义。方法采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测8株胰腺癌细胞株(SW1990、PCT-2、PCT-3、PCT-4、Aspc-1、Capan-1、Mia-PaCa-2及Panc-1)中LRP在基因水平和蛋白水平的表达。结果RT-PCR结果显示,在胰腺癌细胞株PCT-2中未检测到LRPmRNA的表达,在PCT-4、Aspc-1和Panc-1中,LRPmRNA表达条带较强;在SW1990、PCT-3、Capan-1和Mia-PaCa-2中LRPmRNA表达条带较弱;半定量平均表达水平为0.56±0.33。免疫细胞化学结果证实,在PCT-2细胞中无LRP蛋白表达,PCT-3细胞中LRP蛋白弱表达,SW1990、Aspc-1和Capan-1细胞中LRP蛋白中度表达,而在PCT-4、Mia-PaCa-2和Panc-1细胞中可见LRP蛋白的过度表达。结论在胰腺癌细胞中存在LRP的先天性表达,LRP过表达可能是介导胰腺癌细胞先天性耐药的重要机理之一。     

Cdc42在人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株中的表达

目的探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在乳腺癌细胞MCF-7阿霉素敏感株和耐药株MCF-7/Adr中表达的变化以及对细胞耐药性的影响。方法将Cdc42 siRNA转染MCF-7/Adr细胞株后,用RT-PCR和Weastern Blot方法检测MCF-7组,MCF-7/Adr组,MCF-7/Adr siRNA干扰组细胞Cdc42的转录以及蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定siRNA处理后阿霉素(ADM)对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用;用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果 MCF-7/Adr细胞中Cdc42 mRNA及蛋白表达量显著高于MCF-7细胞(P0.05);siRNA干扰后Cdc42表达受到明显抑制(P0.05),并显著提高细胞内ADM的浓度(P0.05)。结论特异性siRNA能明显抑制Cdc42 mR-NA及蛋白表达,并逆转细胞耐药性。     

p-JNK在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的 研究c-jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化活性形式p-JNK在乳腺癌组织中的表达及其在乳腺癌耐药中的作用.方法 通过免疫组化法研究60例乳腺癌和20例乳腺癌旁组织切片中p-JNK的表达,并探讨p-JNK与P糖蛋白(p-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)表达的相关性.结果 p-JNK在乳腺癌中的阳性表达率为70.0%,高于癌旁组织的35.0%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).P-gp,MRPP1,LRP在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为36.7%,81.7%,83.3%,均高于癌旁组织.LRP与腋窝淋巴结转移有关;该指标分组间差异有显著性(P＜0.05).p-JNK表达与P-gp和MRP1表达呈正相关(r=0.272,0.348;P＜0.05),与LRP表达无关(P＞0.05).结论 p-JNK高表达在乳腺癌发生中发挥了作用,与P-gP和MRP1的协同表达提示p-JNK与乳腺癌多药耐药有关.     

多药耐药基因与膀胱癌

多药耐药基因与膀胱癌吴长利，马腾骧肿瘤化疗是肿瘤临床治疗的一个重要治疗手段。然而肿瘤细胞对化疗药物产生的抗药性是癌症化疗失败的重要因素［１］。肿瘤细胞抗药类型较多，至少涉及以下几种抗药机制［２］：（１）多药耐药基因（ＭＤＲｇｅｎｅ）的过度表达；（２）...     

CD44与乳腺癌化疗耐药的关系研究

目的 CD44是细胞表面黏附分子,与乳腺癌的转移和预后关系密切,但其与乳腺癌化疗耐药的关系尚未明确。本研究主要探讨CD44与乳腺癌化疗耐药的关系。方法采用SP免疫组化的方法检测73例乳腺癌患者肿瘤组织CD44的表达,分析新辅助化疗敏感患者与耐药患者化疗前后CD44的表达情况;用RT-PCR和流式细胞免疫的方法检测乳腺癌细胞株MCF-7与其对应的阿霉素耐药细胞株MCF-7／ADR在mRNA和蛋白水平CD44的表达,并分析其差异。结果乳腺癌新辅助化疗耐药患者化疗前肿瘤组织CD44表达强于化疗敏感患者（X^2=4．22,P〈0．05）;耐药患者化疗后肿瘤组织CD44表达亦强于敏感患者（X^2=9．954,P〈0．01）;化疗前后比较发现化疗后肿瘤组织CD44表达较化疗前增高（t=3．43,P〈0．01）;耐药细胞株mRNA和蛋白水平CD44表达都升高。结论CD44表达与乳腺癌化疗耐药密切相关,可作为乳腺癌化疗耐药的预测指标,化疗可富集CD44阳性表达的肿瘤细胞。     

CD24在肝癌中的表达及其与PCNA、CD34的关系

目的 探讨CD24表达在肝细胞癌(hepataellular carcinoma,HCC)发生、发展中的作用及与细胞增殖、血管生成的关系.方法 运用流式细胞术检测40例HCC、26例癌旁肝硬化、7例肝硬化、5例正常肝组织CD24表达量.运用免疫组织化学法检测该40例HCC增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)、CD34表达情况,根据CD34染色情况计算HCC微血管密度(microvessel density,MVD),根据PCNA染色情况计算PCNA指数.结果 在HCC中,CD24阳性表达率及平均荧光强度均明显高于癌旁肝硬化、肝硬化和正常肝组织(P＜0.05);CD24表达与HCC组织分化程度,HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜及有否肝内转移有关,与HCC患者性别、肿瘤大小、癌肿数目无关;HCC中随着CD24表达水平增加,PCNA也随之升高,两者呈正相关;HCC中CD24表达与MVD未见明显相关.结论 CD24过表达与HCC的发生、发展密切相关,并可促使肝癌细胞增殖,使肝癌细胞具有更强的侵袭力.     

腹主动脉瘤与CD40的关系

目的 探讨腹主动脉瘤(AAA)发病与患者血清CD40及其配体(CD40L)浓度的相关性.方法 对30例诊断明确的腹主动脉瘤患者(病例组)与26例健康人群(正常组)进行对照研究,酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法测定标本中CD40和CD40L水平,应用统计学独立样本t检验分析CD40/CD40L与腹主动脉瘤的关系.结果 病例组血清CD40浓度为(96.20±26.26) ng/L,高于正常组的(76.22±6.39) ng/L,两者差异有统计学意义(P＜0.05).病例组血清CD40L浓度为(746.20±215.46) ng/L,明显高于正常组的(503.07±75.32) ng/L,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AAA患者血清CD40和CD40L浓度明显高于健康人群,提示CD40/CD40L可能参与了AAA的发病.     

大肠癌hTERT、c-myc的表达及相关性的研究

端粒酶（telonerase）与细胞恶变、肿瘤的发生发展密切相关。而端粒酶催化亚单位（hTERT）可能在端粒酶活性调节中起重要作用。目前研究发现c-myc过度表达对激活hTERT基因的表达可能起关键作用。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞株RhoC、CD44v6及Ezrin基因表达的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞中RhoC、CD44v6和Ezrin表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制.方法 采用RT-PCR法检测As2O3作用后RhoC、CD44v6及Ezrin mRNA表达水平的变化.以Western blot方法检测RhoC基因蛋白表达.结果 0.25mg/L As2O3作用4、6、8d后HepG2细胞RhoC mRNA及蛋白、CD44v6 mRNA表达水平较药物作用前均有不同程度降低(P<0.05),Ezrin mRNA表达水平均无明显变化(P＞0.05).结论 As2O3并非通过单一靶点发挥抗肝癌侵袭转移作用,可能与下调RhoC及CD44v6基因的表达有关.     

原发性胆囊癌CD44v6、Survivin的表达与临床病理的相关性

目的 探讨CD44v6和Survivin蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系,以及CD44v6与Survivin表达之间的相关性.方法 应用免疫组化方法检测52例胆囊腺癌、20例胆囊腺瘤和20例慢性胆囊炎组织中CD44v6和Survivin表达水平.结果 胆囊癌组织中CD44v6和Survivin阳性表达率分别为80.8%(42/52)和67.3%(35/52),均明显高于胆囊腺瘤(分别为45.0%和30.0%,P<0.05),并随着胆囊癌的分化程度减低、病理分级增高和转移而明显增高(P<0.05).同时,CD44v6表达与Survivin表达呈明显正相关(X2=5.19,P<0.05).结论 CD44v6和Survivin均是胆囊癌高度恶化和预后不良的重要指标.胆囊癌CD44v6表达与Survivin表达可能具有协同作用.     

CD44v6和组织蛋白酶D表达与食管癌预后的关系

目的　研究CD4 4v6和组织蛋白酶D(cathepsinD ,CD)表达与食管癌生物学行为的关系。方法　应用免疫组化法 ,检测 6 5例食管鳞状细胞癌组织中CD4 4v6和CD表达水平。结果　在食管癌中CD4 4v6和CD表达阳性率分别为 5 8.5 %和 6 4 .6 %。CD4 4v6和CD表达均与肿瘤分级、浸润、淋巴结转移和预后相关。结论　CD4 4v6和CD异常表达与食管癌的病理生物学行为密切相关 ,可作为是预测食管癌转移潜能和评估食管癌预后的客观指标     

乳腺癌组织CD44+CD24-/low细胞含量检测及其临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中CD44+CD24-/low干细胞比例与各项临床指标的相关性.方法 新鲜乳腺癌组织标本68例.机械-酶法制成细胞悬液,流式细胞术检测CD44+CD24-/loe细胞的含量,探讨其含量与肿瘤分期、免疫组织化学、远处转移等的相关性.结果 (1)68例乳腺癌组织中的CD44+CD24-/low腺癌干细胞比例为0.1%～15.2%.(2)除ER组和远处转移组CD44+CD24-/low细胞的含量差异有统计学意义(P<0.05)外,年龄、肿瘤分期、腋窝淋巴结转移等组别,CD44+CD24-/low细胞的含量差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞比例与ER阴性表达、癌肿侵袭性和预后等临床指标明显相关.     

乳腺癌组织CD44+CD24-/low细胞含量检测及其临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中CD44+CD24-/low干细胞比例与各项临床指标的相关性.方法 新鲜乳腺癌组织标本68例.机械-酶法制成细胞悬液,流式细胞术检测CD44+CD24-/loe细胞的含量,探讨其含量与肿瘤分期、免疫组织化学、远处转移等的相关性.结果 (1)68例乳腺癌组织中的CD44+CD24-/low腺癌干细胞比例为0.1%～15.2%.(2)除ER组和远处转移组CD44+CD24-/low细胞的含量差异有统计学意义(P<0.05)外,年龄、肿瘤分期、腋窝淋巴结转移等组别,CD44+CD24-/low细胞的含量差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞比例与ER阴性表达、癌肿侵袭性和预后等临床指标明显相关.