低剂量棉酚与甾体激素联合应用对生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的影响

目的 研究低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸生精细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响. 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg.d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg.d)+炔雌醇25μg/(kg.d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d)]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过原位缺口末端标记(TUNEL)染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化. 结果 TUNEL染色显示,在正常对照组,阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中.棉甾联合用药组和激素组,阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01).iNOS免疫组织化学显示,在正常对照组,在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性.在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在IX-XII期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达.在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05).iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至最低,3时间点表达量无统计学差别. 结论 iNOS蛋白在低剂量棉酚加甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;生精细胞凋亡数增加,可能与iNOS的表达增多有关.     

低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响

采用检测细胞凋亡的微核 (MN)、原位末端标记检测 (ISEL)及单细胞凝胶电泳 (SCGE)等方法 ,研究低剂量棉酚与激素组合用药对大鼠生精细胞凋亡的影响 ,分析不同剂量棉酚 (高剂量 10 0mg/(kg·d)、中剂量 6 0mg/(kg·d)及低剂量 12mg/(kg·d) )及维持量棉酚对生精细胞凋亡及DNA的作用。结果表明不同剂量的棉酚G与单剂量激素H(甲基睾丸素 2 0mg/(kg·d)、炔雌醇 10 0 (g/(kg·d) )合并用药 6周后 ,生精细胞的凋亡系数和微核率随棉酚剂量的增大而增加。高和中剂量棉酚组的凋亡系数分别为 3 5 2 0± 0 4 6 5和 2 0 2 0± 0 0 17,显著高于对照组 (0 2 33± 0 0 88)(P <0 0 5 )。微核率在高剂量组为 2 7 6 33± 3 75 5 ,显著高于对照组 (5 6 0 0± 1 137) (P <0 0 5 ) ;而低剂量组 (3 5 6 7±0 86 9)反而显著低于对照组。服低剂量棉酚G +H 6周后继续服单独低剂量棉酚 (12mg/(kg·d) ) 12周 ,单细胞凝胶电泳未见生精细胞出现DNA单链断裂的彗星状细胞核 ,与高、中剂量组较多的出现率形成明显对照。结果提示低剂量棉酚与甾体激素组合用药在睾丸生精过程中互为调节 ,棉酚引起的生精细胞凋亡效应可在甾体激素的调节下降低而起保护作用     

低剂量棉酚与甾体激素联合用药抗男性生育协同作用

目的 探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药发挥抗男性生育的药物协同作用.方法 采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯125μg(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,应用形态学观察、半定量检测和体视学睾丸组织结构定量研究的方法,探讨低剂量棉酚和甾体激素抗生育的药物协同作用. 结果 在睾丸重量、附睾重量、睾丸精子产量和睾丸组织结构定量方面,低剂量棉酚和甾体激素无药物协同作用;在降低附睾精子计数和精子活动度方面,联合用药组的效果强于其他3组,低剂量棉酚和甾体激素具有药物协同作用.结论与单用低剂量棉酚和甾体激素比较,两者联合用药可以更快地减少附睾精子的数量和活动度,从而快速达到避孕效果.     

低剂量棉酚和甾体激素联合用药对精母细胞凋亡和支持细胞吞噬作用的影响

目的 探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药对睾丸精母细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用的影响。 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式［棉酚125mg/（kg&#8226;d）+去氧孕烯125μg/（kg&#8226;d）+炔雌醇25μg/（kg&#8226;d）+十一酸睾丸酮100mg/（kg&#8226;d）］,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,用药4、6和8周取睾丸组织,应用体视学、原位缺口末端标记(TUNEL)和油红O染色的方法,观察精母细胞和球形精子细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用。 结果 联合用药中,甾体激素成分可明显减少精母细胞和球形精子细胞的数量,精母细胞凋亡增加并同时伴有生精上皮油红O染色的增强。 结论 精母细胞凋亡并被支持细胞吞噬是联合用药抗生育机制之一。     

低剂量棉酚甲基睾丸酮和炔雌醇联合用药作为男性避孕药的安全性检测

目的 探讨低剂量棉酚12mg/(kg·d)、甲基睾丸酮20mg/(kg·d)和炔雌醇100μg/(kg·d)联合用药24周,能否影响大鼠生精干细胞的功能.方法 采用生精细胞原位凋亡、生精干细胞移植和生殖能力自主恢复实验.结果 联合用药24周后,在大鼠睾丸组织切片中发现了凋亡信号阳性细胞,凋亡信号阳性细胞主要是精母细胞和精子细胞,没有发现精原细胞出现凋亡阳性信号.当把用药组大鼠的生精干细胞移植进入受体裸鼠的曲细精管内2～3个月后,在受体裸鼠的曲细精管中观察到了来自供体大鼠的长型精子细胞.停止用药6周后,用药组大鼠的生殖能力与对照组相比完全恢复.由恢复生殖能力的用药组大鼠产生的F1代仔鼠在经过一系列的检测后被证明为身体机能和智力水平正常.结论 此联合用药在24周内没有影响到用药大鼠生精干细胞的生存和分化功能.     

低剂量棉酚与激素联合应用的抗生育作用位点的研究

目的 探讨低剂量棉酚与激素联合应用在8周内使大鼠达到不育效果的作用位点.方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg·d) 去氧孕烯125μg/(kg·d) 炔雌醇25μg/(kg·d) 十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)的联合用药方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,通过一系列形态学观察和半定量检测,探讨联合用药的具体作用环节.结果 无论在睾丸组织形态还是睾丸精子数量,联合用药组的变化趋势都与单独应用激素组的相似,而不同于单独应用棉酚组和对照组.而在附睾中,3个用药组在精子活力和精子形态方面,都与对照组有显著差异.结论 联合用药组中激素主要使睾丸精子数量迅速下降;而在精子数量大大下降的基础上,棉酚和激素又对已成熟精子的结构和运动能力进一步破坏,从而使雄性大鼠受精能力迅速下降,联合用药组比单独应用其中一种成分更快、更有效地达到使大鼠不育的目的.     

光照应激对SD大鼠胃促性腺激素释放激素受体表达的影响

目的 观察光照应激状态下SD大鼠胃内促性腺激素释放激素受体（GnRHR）的表达变化。 方法 建立SD大鼠光照应激模型(共64只,实验组与对照组各32只),24h持续光照,分别取光照1d、2d、3d、4d、1周、2周、3周、4周和相应对照组大鼠的胃,采用免疫组织化学、Western blotting和实时PCR法检测GnRHR在各时间段大鼠胃黏膜中的定位及蛋白和mRNA的表达变化。 结果 GnRHR阳性细胞广泛分布于大鼠胃底腺壁细胞中,在对照组和实验组中的定位无差异。实验组大鼠的GnRHR蛋白表达水平高于其相应的对照组。持续光照1～4周后,实验组与其对照组相比差异显著（P<0.05）;当持续光照2周时,GnRHR的表达至最高水平,与其对照组相比,差异极显著（P<0.01）。实验组大鼠胃GnRHR mRNA表达水平高于对照组,持续光照3～4周后,实验组大鼠胃GnRHR mRNA表达水平显著增加（P<0.05）。 结论 光照应激可以影响消化道内GnRHR的表达,提示GnRH通过其受体介导,对消化功能具有潜在的生理调节功能。GnRH除参与消化道正常生理功能外,可能还是一种参与应激反应的激素。     

贵州某白酒对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白表达及血清睾酮水平的影响

目的探讨摄入贵州某54°白酒后,不同时程及不同剂量对大鼠睾丸间质细胞内类固醇激素急性调节蛋白(St AR)表达及血清睾酮水平的变化,以期为科学饮酒提供基础资料。方法正常成年雄性SD大鼠69只,随机分为正常对照组(n=15)及实验组(n=54)。实验组分为低剂量组0.8ml/(kg·d)、中剂量组1.6ml/(kg·d)及高剂量组2.4ml/(kg·d),实验组大鼠每日灌胃2次。分别于第4周末、第8周末、第12周末采血清,取睾丸组织。采用免疫组织化学SABC法、图像分析、Western blotting检测睾丸组织St AR的表达,采用化学发光法检测大鼠血清睾酮水平。结果各实验组的血清睾酮水平与正常对照组比较未见明显异常,差异无统计学意义(P0.05)。St AR免疫组织化学阳性产物存在于睾丸间质细胞胞质内;与正常对照组比较,4周、8周、12周各剂量组St AR免疫染色及平均吸光度均有所增强(P0.05);Western blotting检测,4周、8周、12周各剂量组St AR蛋白表达水平增强(P0.05)。结论在本实验设定的剂量和时程内用该白酒灌胃后,大鼠睾丸间质细胞内St AR表达水平有所增强,血清睾酮水平并无明显变化。     

醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后凝血酶受体-1表达的影响

目的 探讨醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内凝血酶受体-1（PAR1）表达的影响。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为脑出血组（ICH）、生理盐水组（NS）、醒脑静合生脉注射液治疗组（XNJSM）、水蛭素治疗组（HIR）,每组10只大鼠。采用自体不凝血注入法建立脑出血模型。术后72h取脑组织,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组织化学方法及Western blotting法检测各组血肿周围脑组织PAR1的表达。结果 脑出血后血肿周围脑组织PAR1表达增强,XNJSM组、HIR组脑组织病理形态明显改善,脑组织PAR1表达减少,与ICH组比较差异有显著性（P<0.05）。 结论 醒脑静合生脉注射液可能通过凝血酶受体-1途径有效抑制大鼠脑出血后PAR1蛋白表达,对脑出血后脑组织发挥保护作用。     

三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸组织雄激素受体和c-kit表达的影响

目的 通过检测三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸生精小管的形态学变化和睾丸组织雄激素受体(AR)和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达,验证三七复方合剂对慢性甲醛熏染的疗效。 方法 将18 只SD 雄性大鼠随机均分为对照组、甲醛组和治疗组,其中甲醛组和治疗组在甲醛熏染箱内熏染8周（8h/d）,治疗组自第5周起每天给予三七复方合剂灌胃治疗,持续4周。实验结束时,所有大鼠称量体重和睾丸重量,组织切片行HE染色和免疫组织化学检测,观察睾丸生精小管的形态学变化及睾丸组织AR和c-kit的表达。 结果 甲醛组鼠重和睾丸重量明显下降;经三七复方合剂治疗后,鼠重和睾丸重量较甲醛组明显增加（P<0.05）。甲醛组大鼠的睾丸生精小管萎缩,小管上皮层细胞排列紊乱,精子明显减少;三七复方治疗4周后基本恢复正常,管腔内可见大量精子。甲醛组睾丸组织ＡＲ和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显减弱,治疗组生精上皮细胞的雄激素受体和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显增强（P<0.05）,达到正常水平。 结论 较长时间甲醛熏染可使大鼠的体重和睾丸重量下降,生精小管损伤,睾丸组织中多种细胞AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达下降,三七复方合剂的应用有较明显治疗效果。     

白蛋白结合型紫杉醇调控SLC25A25-AS1对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨白蛋白结合型紫杉醇是否调控SLC25A25-AS1影响肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭.方法 将A549细胞分为对照组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组、高剂量药物+si-NC组、高剂量药物+si-SLC25A25-AS1组.细胞计数试剂盒(CCK-8)法、集落形成实验检测细胞增殖;划痕实验和Tran...     

Ah receptor, CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 gene polymorphisms are not involved in the risk of recurrent pregnancy loss

The etiology of recurrent pregnancy loss (RPL) remains unclear, but it may be related to a possible genetic predisposition together with involvement of environmental factors. We examined the relation between RPL and polymorphisms in four genes, human aryl hydrocarbon (Ah) receptor, cytochrome P450 (CYP) 1A1, CYP1A2 and CYP1B1, which are involved in the metabolism of a wide range of environmental toxins and carcinogens. All cases and controls were women resident in Sapporo, Japan and the surrounding area. The Ah receptor, CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 genotypes were assessed in 113 Japanese women with recurrent pregnancy loss (RPL) and 203 ethnically matched women experiencing at least one live birth and no spontaneous abortion (control). No significant differences in Ah receptor, CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 genotype frequencies were found between the women with RPL and the controls [Ah receptor: Arg/Arg (reference); Arg/Lys and Lys/Lys, odds ratio (OR)=0.67; 95% confidence interval (CI)=0.40-1.11, CYP1A1: m1m1 (reference); m1m2 and m2m2, OR = 0.86; 95% CI = 0.53-1.40, CYP1A2: C/C and C/A (reference); A/A, OR = 1.16; 95% CI = 0.71-1.88, CYP1B1: Leu/Leu (reference); Leu/Val and Val/Val, OR = 1.18; 95% CI = 0.68-2.02]. The present study suggests that the Ah receptor, CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 gene polymorphisms are not major genetic regulators in RPL.     

灭活HIV-1颗粒对人CD4+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用

目的 通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB.MCs)来源的CIM+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制.方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ns/mL;然后按照p24抗原量为0.1 as/mL(记作HIV.11/500组)、1 as/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ns/mE(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CIM+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率.结果 24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-11/500组为(14.89±2.53)%,HIV-11/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-11/500组为(11.70±2.34)%,HIV-11/50组为(18.45±3.19)%,HIV-11/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-11/500组为(14.52±1.68)%,HIV-11/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%.结论 AT-2灭活的HIV-1ⅢB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的燃料细胞.     

人参皂苷Rg1与Rh1对树突状细胞表达HLA-DR、CD25、CD44、CD54、CD11c及E-selectin的影响

目的：观察人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞（Dendritic cell，DC）表面分子CD25、HLA-DR、CD44、ICAM-1、CD11c及E-sclectin表达的影响。方法：用不同浓度的Rg1和Rh1分别加入成熟DC中，刺激一定时间后，用免疫组化法观察，并用图像分析法分析结果。结果：除E-selectin外，Rg1和Rh1均可不同程度地促进HLA—DR、CD25、CD11c、CD44和ICAM-1的表达。结论：Rg1、Rh1可增强DC表面促进T细胞活化的第一、二类信号系统分子的表达，提高其抗原递呈能力，并促进DC—T细胞簇的形成而活化初始T细胞。     

Regulatory role of 1, 25-dihydroxyvitamin D3 and vitamin D receptor gene variants on intracellular granzyme A expression in pulmonary tuberculosis

Vitamin D receptor (VDR) genotypes have been shown to be associated with differential susceptibility or resistance to tuberculosis. The influence of FokI, BsmI, ApaI and TaqI variants of VDR gene on 1, 25(OH)₂ D₃ modulated granzyme A expression of cytotoxic lymphocytes induced by culture filtrate antigen (CFA) of Mycobacterium tuberculosis was studied in 40 pulmonary tuberculosis (PTB) patients and 49 normal healthy subjects (NHS) by flow cytometry. In both the study groups, addition of 1, 25(OH)₂ D₃ (10^− 7M) significantly reduced the percentage of granzyme A positive cells in both unstimulated (NHS, p < 0.0001; PTB, p = 0.02) and stimulated culture conditions (CFA, NHS, p < 0.0001; PTB, p = 0.0001) which correlated positively with the IFN-γ levels (unstimulated, p = 0.01; CFA stimulated, p = 0.004) in NHS. The ApaI aa genotype and bbaaTT extended genotype were associated with a significantly decreased percentage of granzyme A positive cells in NHS (p < 0.05). Our results suggest that 1, 25(OH)₂ D₃ suppresses granzyme A probably by down-regulating Th1 cytokine response. Moreover, the VDR gene variants might regulate cytotoxic T-cell response via 1, 25(OH)₂ D₃ mediated suppression of granzyme A expression in tuberculosis.     

Expression of G2-M modulators in thyroid neoplasms: correlation of cyclin A,B1 and cdc2 with differentiation

Previous studies have demonstrated that cell proliferating activity accurately reflects the biological aggressiveness of thyroid neoplasms. In this study, we focused on the G2-M boundary regulators of the cell cycle and investigated the expression of three proteins, cyclin A, cyclin B1 and cdc2. The incidence of cyclin A overexpression was significantly linked to carcinoma differentiation (p < 0.0001) and, in particular, all 21 cases of undifferentiated carcinoma overexpressed this protein. On the other hand, cyclin B1 was overexpressed in four undifferentiated carcinomas (19.0%), but not in carcinomas of other types. Cdc2 overexpression was also related to carcinoma differentiation (p < 0.0001), and was directly linked to cyclin A overexpression (p < 0.0001), but not to cyclin B1 overexpression. No significant relationship could be established between the overexpression of these proteins and the histological type of follicular tumor. These results suggest that cyclin A, rather than cyclin B1, contributes significantly to the aggressive character of thyroid carcinoma, together with cdc2.     

活性维生素D3联合力学拉伸对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及OPG和RANKL表达的影响

目的体外模拟成骨细胞在体内的生存环境,考察活性维生素D3(VD3)、力学拉伸以及两者联合对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及破骨细胞抑制因子(OPG)和破骨细胞分化因子(RANKL)表达的影响。方法将10 nmol/L VD3、间断性力学拉伸以及两者联合作用于成骨细胞。流式细胞术检测细胞增殖。荧光探针试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性。实时定量PCR检测核心转录因子Runx2、OPG、RANKL mRNA水平,Western blotting检测其蛋白表达。结果 VD3抑制成骨细胞增殖,力学拉伸不能改变这种抑制效应。力学拉伸和VD3单独作用成骨细胞均能增加ALP活性及提高ALP、Runx2 mRNA水平,但当联合刺激后这些指标均降低,且成强度依赖性。力学拉伸增加OPG/RANKL比值,增强成骨作用,联合VD3后,OPG/RANKL比值下降。结论力学拉伸能有效诱导成骨分化,增加骨形成。VD3与力学拉伸联合抑制成骨细胞增殖和分化,并通过增加RANKL表达而影响骨重建。研究结果为骨质疏松及相关骨疾病的理论和治疗提供有意义的探索。