受体TLR4在血管平滑肌细胞上的表达意义

目的研究受体TLR4在血管平滑肌细胞上的表达意义。方法培养入主动脉平滑肌细胞(HASMCs),传到7-9代,以10 ng／mL脂多糖(LPS)作用于HASMCs24h。应用琼脂糖电泳鉴定基质金属蛋白酶(MMP)-2、9的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)产物:Western-印记法测定LPS作用24h后,MMP-2、9蛋白表达量的变化:明胶酶谱法测定MMP-2、9的活性; EMSA法测定动脉平滑肌细胞核因子-κB(NF-κB)的结合活性、抗受体TLR4抗体抑制LPS激活受体(TLR4)及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制NF-κB的结合活性。结果LPS通过其受体TLR4调节MMP-9 mRNA的表达,上调的MMP-9 mRNA同时能够翻译表达更多量的MMP-9蛋白;而对MMP-2蛋白的表达无影响。LPS通过其受体TLR4使血管平滑肌细胞内MMP-9表达增加的同时,使MMP-9酶解活性相应增加;而LPS对MMP-2的酶解活性也没有产生影响。LPS能够通过其受体TLR4影响血管平滑肌细胞内NF-κB的结合活性。受体TLR4依赖NF-κB激活途径调节MMP-9的表达。结论LPS通过TLR4-NF-κB途径调节血管平滑肌细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及其活性;而激活受体TLR4对MMP-2 mRNA和蛋白表达及其活性无影响。     

BRG1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制探讨

目的探讨沉默BRG1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法体外化学合成BRG1小干扰RNA（siRNA）和Control siRNA（si—Ctr1）,脂质体介导转染乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞,Transwell迁移实验和侵袭实验观察沉默BRG1基因对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）变化,Westernblot检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2）及MMP-2蛋白表达。结果转染BRG1 siRNA可以有效减少乳腺癌MDA—MB-231和BT-549细胞BRG1的表达,细胞迁移和侵袭能力下降。BRG1沉默后TIMP-2表达升高,MMP-2表达下降且酶活性降低。结论BRG1沉默后通过上调TIMP-2抑制MMP-2的表达,破坏TIMP-2／MMP-2平衡,最终抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭能力。     

冲击波对糖尿病慢性创面微环境下HaCat细胞增殖及迁移的影响

背景体外冲击波疗法可促进糖尿病慢性创面愈合,其机制有待深入研究。目的 观察不同剂量冲击波干预对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响,尝试从细胞水平揭示体外冲击波疗法促进糖尿病慢性创面愈合的作用机制。方法 以人表皮角质形成细胞(HaCat细胞)为研究对象,分为对照组、糖尿病慢性创面模型(chronic diabetic wound,CDW)组以及不同剂量冲击波(shock wave, SW)干预组(SW1组：0.05 mJ/mm2,500脉冲;SW2组：0.10 mJ/mm2,500脉冲;SW3组：0.10 mJ/mm2,1 000脉冲),通过高糖低氧孵育条件建立糖尿病慢性创面细胞模型,采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,观察不同能流密度和脉冲输出的冲击波对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响。结果 与对照组比较,冲击波干预后HaCat细胞形态未见明显改变。CCK-8实验显示,HaCat细胞增殖活性呈现“先增加、后下降”的趋势,其OD450值：Day6>Day4>Day8>...     

大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响,从而探讨其降眼压机制。方法采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养,应用免疫组化方法（NSE,Ⅷ因子相关抗原染色）鉴定细胞,应用透射电镜对细胞进行形态学及生长特性观察;对传3代的小梁细胞分别施加含大麻素WIN55,212-2终浓度为0（对照组）、1、10、20、40μmol/L的培养液,48h后行MMP-3和MMP-9免疫组化SP染色,结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。提取上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化。结果体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9,大麻素WIN55,212-2可促进MMP-3及MMP-9的表达,并抑制TIMP-1的表达。结论一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达（P〈0.05）,并抑制TIMP-1的表达（P〈0.01）,从而达到降低眼压的目的。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-2、9及TIMP-1、2的影响

目的 探讨脂多糖(1ipopolysaccharides，LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)表达基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase-2，-9；MMP-2，MMP-9)及其组织抑制因子1、2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1，-2；TIMP-1，TIMP-2)的影响。方法 贴块法进行血管平滑肌细胞培养，细胞免疫化学检测基质金属蛋白酶及其抑制剂的蛋白表达，原位分子杂交分析MMP-9 mRNA表达。结果 LPS是MMP-9的强诱导物。可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达，同时LPS可诱导TIMP-1的表达，作用较对MMP-9减弱。LPS对二者诱导作用强度与LPS的浓度及作用时间呈正相关。LPS降低TIMP-2的表达，其表达与LPS的浓度及作用时间呈负相关。LPS对MMP-2的表达没有明显作用。结论 LPS诱导平滑肌细胞MMP-9、TIMP-1表达的同时可降低TIMP-2的表达，其作用呈浓度时间依赖性，在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对洋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕，早孕蜕膜细胞的方法制备DCM，然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞，用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2，MMP-9，基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1），尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA)mRNA均有表达；而TIMP-2，纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1)mRNA未见表达，早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2，MMP-9，uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕，晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2，MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡，而影响滋养细胞的侵袭能力。     

赤芍总苷对人黑色素瘤A375细胞迁移及侵袭活性的影响

目的观察赤芍总苷(total paeonyglucosides,TPG)对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响,探讨TPG抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的相关机制。方法体外培养黑色素瘤细胞,分别加入5、15、20、25 mg/LTPG,细胞划痕实验测定迁移力;Transwell小室侵袭实验测定侵袭活性。RT-PCR和Western bolt方法检测黑色素瘤细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-2 mRNA和蛋白的表达。结果 TPG能显著抑制黑色素瘤A375细胞的迁移和侵袭,与对照组比较,TPG组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达明显下降,TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论 TPG可通过下调MMP-2、MMP-9,上调TIMP-2,调节MMP-TIMP平衡,发挥抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的作用。     

脂多糖通过诱导NLRP3表达促进膀胱癌细胞侵袭迁移的机制研究

目的采用脂多糖（LPS）处理膀胱癌（BC）5637细胞以模拟炎症微环境，研究炎症对BC细胞侵袭迁移的影响及由NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）介导的调控机制。方法将5637细胞分为LPS组、MCC950组、LPS/MCC950组和空白对照组4组，采用CCK-8实验检测细胞增殖活力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，qRT-PCR检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadhjerin）、波形蛋白（Vimentin）、NLRP3mRNA表达水平，Westernblot检测MMP-2、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、E-cadherin、Vimentin、NLRP3蛋白表达水平。结果LPS可显著增强5637细胞的增殖活力，促进其侵袭迁移及上皮间充质转化，并上调NLRP3mRNA和蛋白的表达；MCC950可显著下调NLRP3蛋白的表达，并抑制LPS促进5637细胞侵袭迁移的效应。结论LPS可通过诱导NLRP3表达来促进BC细胞侵袭迁移，NLRP3炎症小体可能是炎症状态下促进BC进展的重要因子。     

胰岛素对表皮角质形成细胞的作用

目的 观察胰岛素对大鼠烫伤创面以及体外培养的表皮角质形成细胞（KCs）的作用,探讨其促进创面愈合的可能机制。方法水浴法致SD大鼠背部深Ⅱ度烫伤,局部创面下浸润注射生理盐水（对照组）或0．1U长效混悬锌胰岛素（胰岛素组）,记录创面再上皮化时间;RT-PCR测定KCs表皮生长因子（EGF）mRNA表达;Western blotting检测KCs层粘蛋白（LN）表达。计算体外培养的人KCs经胰岛素作用后的细胞黏附率。结果 胰岛素组创面再上皮化时间较对照组明显缩短。胰岛素组大鼠KCs烫伤后第4、6d的EGFmRNA表达以及第14d和创面再上皮化当日的LN表达,均较对照组明显增强（P〈0．05）。体外培养的人KCs经胰岛素作用后,在不同细胞外基质上的黏附率均明显增加。结论胰岛素提高体外培养KCs的黏附能力并增强刨面局部KCs分泌EGF和LN的功能,是其促进创面愈合的可能机制。     

下瘀血汤含药血清对脂多糖诱导活化的RAW264.7细胞表达MMP2,9/TIMP1,2的调控作用

目的:观察下瘀血汤药物血清对脂多糖(LPS)诱导活化后RAW 264.7细胞表达基质金属蛋白酶(MMP-2,9)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1,2)的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:100 g/L LPS刺激RAW264.7细胞,ELISA法分别测定0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,选择模型时间点;生化法测定RAW264.7细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,分析10%和20%的正常大鼠血清和下瘀血汤药物血清的细胞毒性;Western blot法检测RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的蛋白表达。结果:与10%浓度的正常大鼠血清相比,10%下瘀血汤药物血清对RAW264.7细胞的无毒性作用。LPS刺激细胞培养1 h时,细胞培养上清中TNF-α含量开始增加;4 h时达到最高;6 h时开始下降。与相应时间点正常组相比,4 h、6 h模型组RAW 264.7细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达均显著升高(P0.01);与相应时间点模型组相比,4 h、6 h下瘀血汤药物血清组上述指标均降低,其中6 h组RAW 264.7细胞MMP-2蛋白表达、4 h与6 h细胞MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:下瘀血汤可能通过抑制枯否细胞(KCs)活化,抑制其MMP2,9/TIMP1,2的表达而发挥抗肝纤维化的作用。     

TLR4信号通路与炎性反应

Toll样受体(TLR)是一类天然免疫受体,最早发现其与果蝇胚胎背、腹侧的发育有关。随着研究的深入,哺乳动物体内也发现有类似同源性受体,并统一称TLR家族。TLR的分布十分广泛,可以识别某些病原体或其产物所共有的特定结构。TLR4是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,而TLR4/CD14信号通路是介导内毒素诱导的炎性反应的重要通路。营养性肥胖、动脉粥样硬化、心肌梗死、哮喘等所引起的非细菌性炎性反应也与TLR4相关。本文就TLR4信号通路与炎性反应的研究进展进行综述。     

中药复方银屑1号对HaCaT细胞影响的代谢组学分析

目的 研究中药复方银屑1号对HaCaT细胞的总代谢产物的影响.方法 用银屑1号的含药血清体外干预HaCaT细胞株,采用超导核磁共振波谱仪进行检测,筛查中药复方银屑1号影响HaCaT细胞增殖有关的差异性代谢物.结果 与生理盐水组比较,中药复方银屑1号组的代谢物具有明显差异,其中对羟基苯乙酸、胆固醇、脱氧次黄苷含量降低,而甘油磷酸胆碱、碘化酪氨酸、7-去氢胆固醇、醛固酮含量增高.结论 基于核磁共振氢谱的代谢组学研究可显示中药复方银屑1号对HaCaT细胞的代谢表型影响及作用靶点,为银屑1号治疗寻常型银屑病机理研究提供代谢水平上的依据.     

TLR4在KSHV感染的卡波西肉瘤中表达的研究进展

TLR4（Toll—like receptor4）是T0ll样受体的一个重要的组成成员,是革兰氏阴性细胞壁成份脂多糖（LPS）的识别受体。活化TLR4将诱导产生一系列炎症介质,包括细胞因子、趋化因子等从而产生强有力的炎症反应,TLR4在抗细菌,抗病毒的炎症反应中,以及在应激状态下均发挥重要作用。TLR4在KSHV（Kaposi＇s sarcoma-associated herpesvirus,卡波西肉瘤相关疱疹病毒）感染的卡波西肉瘤中也有表达,本文就TLR4在KSHV感染的卡波西肉瘤中的信号转导机制及研究进展做一综述。     

TGF-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基质金属蛋白酶抑制剂-1蛋白表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对绒毛膜癌JEG-3细胞系基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases,MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达的影响。方法：体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同浓度及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,Western Blotting法检测MMP-9、TIMP-1蛋白的表达变化。结果：与对照组相比,100、200μg/L TGF-β1作用后,检测各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.01）;与0h比较,12、24、48、72h各组细胞MMP-9及TIMP-1蛋白的相对表达量均增加（P〈0.05）,且各组MMP-9/TIMP-1大于1。结论：绒癌的浸润转移与MMP-9及TIMP-1的表达变化密切相关。     

平突散系列复方对CD40L刺激后人球后成纤维细胞的MMP和TIMP表达的影响

背景　尽管目前关于甲状腺相关性眼病（TAO）在基础和临床研究方面已取得了一些进展,同时积累了一定量的关于发病机制的材料和证据,但目前国内外关于TAO的研究仍然很少,临床仍缺少有效的治疗方法和药物。与此同时,在传统中医领域,中医药辨证治疗TAO疗效肯定、不良反应少且复发率低,但其作用机制不明确,药物作用靶点不明。目的　观察CD40L对人球后成纤维细胞（RFs）表面基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-2、MMP组织抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2表达的影响以及平突散系列中药复方的干预效果。方法　2016年9月选取35只SPF级SD雄性大鼠用于制备泻火平突散、活血平突散、养目平突散含药血清。实验中所用的人眼球后结缔组织来源于2例眼创伤患者（2014年取材于郑州大学第一附属医院眼科）,体外培养RFs成功后,随机分为7组,其中空白组：给予正常培养液;血清组：给予含10%正常大鼠血清的培养液;CD40L组：给予含100 ng/ml CD40L的培养液;CD40L+血清组的培养液：给予含100 ng/ml CD40L和10%正常大鼠血清的培养液;泻火平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L和10%含药血清的培养液;活血平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L与10%含药血清的培养液;养目平突散组：给予含有100 ng/ml CD40L与10%含药血清的培养液。免疫细胞化学染色法检测各组MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达。结果　CD40L组MMP-1、MMP-2活性低于空白组,CD40L+血清组MMP-1、MMP-2活性低于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组MMP-1、MMP-2活性高于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组MMP-1、MMP-2活性高于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。CD40L组TIMP-1、TIMP-2活性高于空白组,CD40L+血清组TIMP-1、TIMP-2活性高于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组TIMP-1、TIMP-2活性低于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组TIMP-1、TIMP-2活性低于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。CD40L组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2低于空白组,CD40L+血清组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2低于血清组（P<0.05）;泻火平突散、活血平突散、养目平突散组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2高于CD40L+血清组（P<0.05）;养目平突散组MMP-1/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2高于泻火平突散组、活血平突散组（P<0.05）。结论　平突散系列复方可能通过阻断CD40-CD40L共刺激信号通路导致MMP/TIMP的失衡,而达到治疗TAO的目的。     

丹红注射液对脂多糖诱导THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响及机制

目的观察丹红注射液对脂多糖（LPS）诱导的THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响,并探讨其机制。方法160nmol／L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24h后分为对照组、脂多糖组、丹红组和脂多糖＋丹红组,酶联免疫吸附法检测培养液中促炎因子的含量,Western blot检测核因子κB（NF—κB）、p65和rroll样受体4（TLR4）的蛋白表达水平。结果丹红注射液明显抑制LPS诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）释放,下调核因子NF—κB和TLR4的表达。结论丹红注射液抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其抑制TLR4和NF—κB的表达有关。     

软脂酸对肾小管上皮细胞TLR4表达的影响

目的通过研究软脂酸(PA)对肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,初步探讨游离脂肪酸(FFA)在引发肾脏微炎症反应的相关作用机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),采用不同浓度软脂酸进行干预,用RT-PCR法检测12 h、24 h后肾小管上皮细胞TLR4 mRNA水平,ELISA方法检测24 h后IL-6、TNF-α的表达。结果软脂酸组的TLR4、IL-6、TNF-α表达较对照组均明显升高,且呈现一定的浓度依赖趋势(P<0.05)。结论软脂酸可能是通过刺激肾小管上皮细胞表达TLR4而促进肾脏炎症反应。