蜂毒素抗肿瘤作用的研究进展

蜂毒素是蜂毒的主要组成部分和药理活性成分,具有抗炎镇痛、抑制血小板聚集和抗肿瘤等药理作用。近年来蜂毒素在抗肿瘤作用方面受到人们的关注,它抗肿瘤的作用是多靶点作用于肿瘤细胞。随着蜂毒素基因工程研究的深入,在未来其可能成为一种理想的分子靶向治疗药物。现将蜂毒素通过直接杀伤、免疫调节和诱导细胞凋亡产生抗肿瘤的作用以及在基因工程的研究进展进行综述。     

蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用

[目的]观察蜂毒素对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用。[方法]肝癌细胞BEL-7402体外培养,采用MTT法检测蜂毒素对其增殖抑制作用,流式细胞术测定蜂毒素对细胞增殖核抗原表达和细胞周期的影响。[结果]蜂毒素体外能够抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖活性;并抑制细胞增殖核抗原的表达,呈剂量依赖性;干扰细胞周期,使S期细胞增加,G2/M期细胞减少。[结论]蜂毒素具有抑制BEL-7402肝癌细胞增殖的作用,机制可能与抑制细胞增殖核抗原表达和干扰细胞周期有关。     

蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的：研究蜂毒素对人肝癌细胞( HepG2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对HepG2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA 的表达变化, Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达变化,瞬时转染人mir-203 mimics 过表达 mir-203后应用实时定量 PCR 和Western blot 检测 mir-203对 PI3K/AKT 信号通路的作用。结果与正常组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈浓度依赖性;实时定量PCR结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以明显升高mir-203的表达,PIK3CA mRNA 的表达无明显改变;Western blot法结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低 PI3K 以及 P-AKT 蛋白的表达。在 HepG2和SMMC-7721细胞中过表达mir-203后,与正常组及转染阴性对照组比较,PIK3CA mRNA的表达无明显改变但PI3K以及P-AKT的蛋白表达降低。结论蜂毒素能抑制 HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,其机制可能是通过上调mir-203的表达,进而在转录后水平靶向抑制PI3K的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的活化。     

磷脂酶A_2在阿尔茨海默病发病机制中的作用

磷脂酶A2(PLA2)是一类催化甘油磷脂sn-2酯键水解生成多不饱和脂肪酸和溶血磷脂的超家族酶系。在正常细胞内,PLA2的代谢产物水平很低,作为信号分子来调节许多细胞功能,而当这些代谢产物大量积聚时,会产生神经毒性。近年来大量研究表明,PLA2可以通过以下几个环节参与阿尔茨海默病(AD)的发病机制:Aβ沉积、突触丢失、氧化应激、炎性反应和细胞凋亡,但是AD的确切发病机制目前尚不清楚,现就PLA2在AD发病中的作用予以综述。     

脂蛋白相关磷脂酶A_2与缺血性脑卒中的关系

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是磷脂酶A2超家族中的一个亚型,不仅可以水解血小板活化因子,还能水解低密度脂蛋白氧化过程中形成的氧化磷脂生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸。研究证实Lp-PLA2参与动脉粥样硬化的形成,与斑块的不稳定性密切相关。缺血性脑卒中患者Lp-PLA2活性明显升高,而且与神经功能缺损相关,提示Lp-PLA2不仅可能成为独立的缺血性脑卒中风险预测因子,还可以初步评估预后。Lp-PLA2抑制剂研制及基因治疗,为延缓动脉粥样硬化进展、稳定粥样斑块提供了可能。     

蜂毒素对骨肉瘤细胞系细胞增殖的影响

为了解蜂毒素对骨肉瘤细胞生长、增殖的作用。以骨肉瘤U2OS细胞体外培养，采用台盘蓝排染法观察蜂毒素对细胞生长的影响，MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：蜂毒素可明显抑制U2OS细胞生长、增殖，下调PCNA的表达，对细胞周期的影响表现为S期细胞的阻滞。提示蜂毒素具有抑制骨肉瘤U2OS细胞株生长、增殖的作用。     

蜂毒素诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死的实验研究

目的:研究蜂毒素是否能够诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死.方法:U2OS经不同浓度蜂毒素处理后,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖抑制率,利用单克隆抗体,通过流式细胞仪检测AnnexinV、Apo2.7及Fas蛋白的表达.结果:64 mg/L蜂毒素作用U2OS 12 h、24 h,其坏死率在80%以上.16 mg/L、32 mg/L蜂毒素对细胞增殖有明显抑制作用,并且可诱导细胞凋亡和坏死的产生,增加细胞Aap2.7及 Fas 蛋白的表达.结论:蜂毒素高剂量有明显杀伤U2OS的作用,低剂量具有促细胞凋亡作用,并能上调Fas蛋白的表达.     

脂蛋白相关磷脂酶A_2基因沉默对炎症基因表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)和脂蛋白相关磷脂酶A2(lip-oprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)短发夹RNA(shRNA)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)Lp-PLA2活性、mRNA表达及炎症基因表达的影响。方法:采用0、20、40、60和80μg/ml oxLDL刺激RAW264.7细胞并用不同剂量Lp-PLA2shRNA转染oxLDL 60μg/ml处理组,应用ELISA、逆转录-聚合酶链反应检测Lp-PLA2、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1,MCP-1)及其mRNA表达的影响。结果:RAW264.7细胞经oxLDL刺激后Lp-PLA2表达明显升高,且呈时间和剂量依赖性。Lp-PLA2shRNA转染小鼠单核巨噬细胞后,炎症基因及mRNA表达明显下降。结论:Lp-PLA2shRNA转染可明显逆转oxLDL刺激引起的RAW264.7细胞炎症基因高表达。     

内脏脂肪素及脂蛋白相关磷脂酶A_2在动脉粥样硬化发病中的意义

内脏脂肪素是脂肪组织分泌的重要产物,实验表明内脏脂肪素可作为一个炎性介质在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。脂蛋白相关磷脂酶A2是由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成、分泌的,大量的基础研究和临床表明,脂蛋白相关磷脂酶A2及其水解产物参与动脉粥样硬化的形成和发展,具有致动脉粥样硬化作用。对内脏脂肪素和脂蛋白相关磷脂酶A2的研究将为探讨动脉粥样硬化性疾病的发病机制及治疗方案提供新的思路。     

蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响

目的 观察蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用环节。方法 以MTT法测定蜂毒素体外对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，运用流式细胞术分析增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并观察iv蜂毒素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果蜂毒素对H22细胞的抑制作用随药物浓度增加而增强；蜂毒素作用于H22细胞后，细胞PCNA平均荧光强度低于对照组；iv蜂毒素对小鼠皮下H22肝癌细胞具有明显的抑制作用，抑瘤作用随浓度增加而增强。结论蜂毒素在体内外对小鼠肝癌H22细胞增殖均有明显的抑制作用，下调细胞PCNA表达可能是其作用环节之一。     

腺病毒介导蜂毒素基因转染对HepG2细胞生长及AFP表达的影响

目的:将蜂毒素基因置于甲胎蛋白(AFP)转录调控元件(rAFP)驱动之下,构件重组腺病毒载体,观察蜂毒素基因转染对肝癌细胞生长及AFP表达的影响.方法::将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中,将腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,用脂质体介导转染293细胞进行腺病毒的包装.携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,RT-PCR实验观察蜂毒素基因是否发生转录;MTT法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响;ELISA双抗体夹心法定量检测AFP.结果:RT-PCR实验表明蜂毒素基因转染肝癌细胞后可以被转录;蜂毒素基因在rAFP的控制下,可以特异性的抑制AFP阳性肝癌细胞的增殖,并降低其AFP的生成量.结论:蜂毒素基因转染对肝癌细胞的生长及AFP的表达具有抑制作用,可降低其恶性度.     

七氟醚对单肺通气致肺损伤兔肺组织胞质型磷脂酶A2和clara细胞分泌蛋白表达的影响（英文）

目的探讨七氟醚对单肺通气(OLV)兔肺组织胞质型磷脂酶A2(C-PLA2)及clara细胞分泌蛋白(CCSP)表达的影响。方法36只健康日本大耳白兔随机分为假手术组(S组)、OLV组(O组)和OLV+七氟醚组(OS组)。OS组据所给七氟醚浓度(体积分数)不同分为1%、2%、3%和4%亚组。Western blotting和定量PCR分别用于检测肺组织中CCSP和C-PLA2蛋白及mRNA的表达水平。ELISA检测肺组织花生四烯酸(AA)含量。通过观察肺湿/干(W/D)和肺组织的形态学改变评价肺损伤的严重程度。结果 OLV后兔肺组织CCSP蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而C-PLA2蛋白和mRNA表达水平、肺组织AA含量和肺损伤程度均明显增加(P<0.05);OLV+七氟醚组中肺组织CCSP蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),而C-PLA2蛋白和mRNA表达水平和肺组织AA含量降低(P<0.05),肺损伤减轻(P<0.05);OLV+不同浓度七氟醚组中肺组织CCSP蛋白和mRNA表达水平无显著性差异,但肺组织C-PLA2蛋白和mRNA表达水平、肺组织AA含量和肺损伤程度随浓度的增加而逐渐降低(P<0.05)。结论 OLV可使兔肺组织中CCSP蛋白和mRNA表达水平降低,肺组织C-PLA2蛋白和mRNA表达水平和AA含量增加,引起急性肺损伤。七氟醚可通过逆转OLV的上述效应而发挥抗急性肺损伤作用。     

磷脂酶A_2对培养的小牛肺动脉内皮细胞的损伤及氯喹的保护作用

本研究观察了磷脂酶A_2(PLA_2)对培养的小牛肺动脉内皮细胞的损伤作用和氯喹的保护作用。结果发现:PLA_2可使膜通透性升高,硝酸镧颗粒在胞浆内沉着的数量和范围随PLA_2浓度增加和作用时间延长而增加,乳酸脱氢酶释放率、培养液血管紧张素转化酶活性、培养液和细胞内二醛含量显著高于正常对照组、PLA_2 +氯喹组和氯喹组。氯喹对PLA_2造成的细胞损伤有保护作用。     

Regulatory effects of phospholipase A_2 inhibitors on platelet activating factor in endotoxic shock in rabbits

ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ_２ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｎｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｉｎｅｎｄｏｔｏｘｉｃｓｈｏｃｋｉｎｒａｂｂｉｔｓＤｕＷｅｎｈｕａ（杜文华）；ＬｉＺｈｕ（李著）；ＬｕＳｏ?..     

磷脂酶A_2抑制剂对家兔内毒素休克血中血小板活化因子活性的调节作用观察

通过家兔内毒素休克模型重点观察了磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）抑制剂磷酸氯喹和地塞米松对血中ＰＬＡ２及其相关脂介质的影响。实验分成４组：（１）假手术组（ＳＯ）；（２）内毒素休克组（ＥＳ）；（３）磷酸氯喹预处理组（ＣＱ）；（４）地塞米松预处理组（ＤＸＭ）．分别于给药前、内毒素或生理盐水注射后５、３０ｍｉｎ，１、３、５、８ｈ取血测ＰＬＡ２血小板活化因子（ＰＡＦ）、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ，同时连续监测平均动脉压（ＭＡＰ）、心率和呼吸，观察动物８ｈ存活率、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ浓度均明显升高，ＰＬＡ２抑制剂能显著抑制ＰＬＡ２及ＰＡＦ活性，其中磷酸氯喹对ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的抑制最为显著。此外，ＰＬＡ２抑制剂可使家兔８ｈ存活率由４８％提高到７５％（ＣＱ组）和７０％（ＤＸＭ组）。提示，用ＰＬＡ２的抑制剂磷酸氯喹和地塞米松均能显著抑制内毒素休克时ＰＬＡ_２的活性及相关脂介质如ＰＡＦ、ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ的升高，提高动物存活率，有效地改善休克动物的预后。     

内毒素对大鼠肝脏中胞液型磷脂酶A2表达的影响

探讨内毒素血症时胞液型磷脂酶Ａ２对大鼠肝脏损伤的影响。方法：选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只,分为对照组和内毒素组,分别检测血清常规肝功能生化指标和前列腺素Ｅ２的含量,同时观察肝脏组织冰冻切片ｃＰＬＡ２的免疫组化变化。结果内毒素血症大鼠血清碱性磷酸酶和谷氨酰氨基肽酶活性及前列腺素Ｅ２含量有升高,肝脏ｃＰＬＡ２表达显著增强。结论ｃＰＬＡ２可能参与内毒素致肝脏损伤,并介导炎症介质ＰＧＥ２的产生。     

过氧化氢对胰岛微血管内皮细胞钙非依赖型磷脂酶A2表达的影响

目的：研究过氧化氛（H2O2）对胰岛内皮细胞钙非依赖型磷脂酶A2（iPLA2）mRNA表达的影响。方法：用0,30,100和300μmol／L H2O2诱导IMECs8h后进行RT-PCR检测;用300μmol／L H2O2分别诱导0,4,8和12h后应用RT-PCR技术进行iPLA2基因表达的检测。采用Annexin V-FITC／PI双染色检测细胞的凋亡率;采用DIOC6（3）染色检测细胞线粒体膜电位.结果：①300μmol／L H2O2作用12h的电泳条带亮度与其他组（0,30,100μmol／L）相比明显减弱,300μmol／L H2O2作用8h及12h的电泳条带亮度与0,4h相比明显减弱。②各浓度H2O2处理组（0,30,100和300μmol／L）IMECs凋亡率差异具有统计学意义[分别为（2.0±0.5）％,（19.1±5.8）％,（28.4±4.9）％,（40.1±5.1）％,P〈0.01];300μmol／L H2O2处理0,4,8,12h后,各时间点IMECs凋亡率差异具有统计学意义（P〈0.01）;③各浓度及各时间点H2O2处理组IMECs细胞内DIOC6（3）的荧光强度差异具有统计学意义（P〈0.01）.结论：H2O2对IMECs iPLA2的表达具有抑制作用,其抑制作用呈量效及时效关系。