先心病肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞钙离子含量的试验研究

目的探讨平滑肌细胞游离Ca2+含量与肺动脉高压的关系,为临床选择更为有效的早期干预措施提供依据。方法采用流式细胞术分别检测先天性心脏病合并肺动脉高压的患儿18例、先天性心脏病未合并肺动脉高压的患儿19例肺动脉平滑肌细胞内钙离子含量。结果肺动脉高压组中肺动脉平滑肌细胞钙含量较非肺动脉高压组高,有显著性差异。结论通过测量肺动脉平滑肌细胞钙含量对于研究肺动脉平滑肌细胞钙转运异常与先心病肺动脉高压的发病机制之间的关系有着重要意义。     

先心病肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞钙离子含量的试验研究

目的探讨平滑肌细胞游离Ca2+含量与肺动脉高压的关系,为临床选择更为有效的早期干预措施提供依据。方法采用流式细胞术分别检测先天性心脏病合并肺动脉高压的患儿18例、先天性心脏病未合并肺动脉高压的患儿19例肺动脉平滑肌细胞内钙离子含量。结果肺动脉高压组中肺动脉平滑肌细胞钙含量较非肺动脉高压组高,有显著性差异。结论通过测量肺动脉平滑肌细胞钙含量对于研究肺动脉平滑肌细胞钙转运异常与先心病肺动脉高压的发病机制之间的关系有着重要意义。     

先天性心脏病合并肺动脉高压红细胞钙与肺动脉平滑肌细胞钙相关性的研究

目的探索红细胞内Ca2+、肺动脉平滑肌细胞内Ca2+水平与肺动脉高压的关系。方法采用流式细胞术分别检测先天性心脏病合并肺动脉高压的患儿18例、先天性心脏病未合并肺动脉高压的患儿19例红细胞内钙离子含量及肺动脉平滑肌细胞钙含量。结果红细胞钙与肺动脉平滑肌细胞钙呈正相关关系,相关系数为γ=0.818(P<0.01)。结论改善先心病病人的钙离子浓度可以有效的降低PH的发生率。     

丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞跨膜钙离子移动影响的实验研究

目的 探讨丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞跨膜钙离子移动的影响.方法 SD大鼠麻醉后迅速取出心肺,分离肺动脉平滑肌细胞.进行体外培养.应用Fluo-3/AM进行荧光标记.采用激光共聚焦显微镜观察并测定有或无丙泊酚时,氯化钾(KCI)以及去氧肾上腺素(PE)对细胞内钙离子浓度的影响.结果 KCI(60mmol/L)及PE(10 6mol/L)均能诱发体外培养的肺动脉平滑肌细胞内游离钙离子浓度的升高:加入50μmol/L丙泊酚后细胞荧光值由22.0±9.2降至16.4±8.0(P＜0.01).丙泊酚可显著抑制KCI及PE诱发的细胞内钙离子浓度的升高,荧光强度倍率分别由7.11±3.56降至3.43±0.79、1.35±0.14.结论 丙泊酚对肺动脉平滑肌细胞膜上钙离子通道存在一定的抑制作用.     

VEGF和PCNA在慢性低氧性肺动脉及高压大鼠主动脉、肺动脉平滑肌细胞中表达

目的：研究慢性低氧性肺动脉高压（PAH）发生过程中，血管内皮生长因子（VEGF）及细胞核增殖抗原（PCNA）在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达。方法：利用低压缺氧舱建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型。实验分为3组：即正常氧组、缺氧2wk组和缺氧3wk组。用免疫组化染色和图像分析，检测主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞中VEGF及PCNA的表达量。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺动脉一氧化氮合酶的实验研究

目的：研究大鼠肺动脉中一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）的含量及分布变化与慢性缺氧性肺动脉高压（ｈｙｐｏｘｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ, ＨＰＨ）发生的关系。方法：采用ｅＮＯＳ多克隆抗体,对慢性ＨＰＨ 大鼠的肺组织进行免疫组织化学分析,观察缺氧组及对照组大鼠各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量及定位;同时应用分光光度计测定缺氧组及对照组大鼠血浆中ＮＯ的间接浓度。结果：正常大鼠肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞均含有较高的ｅＮＯＳ表达,且各级肺动脉中ｅＮＯＳ含量差异无显著性;缺氧组大鼠各级肺动脉内皮细胞及平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量均较对照组显著减少;缺氧组大鼠血浆ＮＯ间接浓度较对照组明显降低。结论：大鼠肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞ｅＮＯＳ含量下降及血浆ＮＯ浓度下降参与慢性ＨＰＨ 的形成。     

大承气汤对内毒素休克家兔白细胞内游离钙浓度的影响

目的：利用内毒素休克模型研究大承气汤对内毒素休克家兔白细胞内游离钙浓度的影响。方法：采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ 负载及荧光法测定对照组、内毒素休克组和大承气汤治疗组家兔白细胞内游离钙离子浓度。结果：与对照组比较，模型组的白细胞内钙离子浓度有明显升高（Ｐ＜ ０．０１）；与模型组比较，治疗组白细胞内钙离子浓度明显降低（Ｐ＜ ０．０１）。结论：大承气汤可使休克家兔白细胞内游离钙浓度明显降低，这是由于大承气汤抗钙超负荷，减轻其对组织的损伤，从而对细胞功能的调控起到保护作用。     

严重烧伤大鼠心肌[Ca2+]i浓度变化及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系

目的：了解大鼠严重烧伤后心肌细胞胞内游离钙离子浓度[Ca^2 ]i动态变化特征及与原癌基因c-fos、c-myc表达的关系。方法：复制Wistar大鼠30％体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤模型，随机分为烧伤组，补液组，维拉帕米治疗组和对照组。烧伤后不同时相点处死动物。Fura-2/AM测定大鼠心肌细胞胞内游离钙离子浓度，原位杂交技术检测心肌c-fos、c-myc mRNA的表达。结果：心肌细胞胞内游离钙离子逍度单烧组和补液组明显升高（IP＜0．01），维拉帕米治疗组轻度升高（P＞0．05），在0．5h,72h两个时相点，三个实验组心肌细胞[Ca^2 ]i明显低于对照组（P＜0．01）。除了维拉帕米治疗组c-fos、c-myc表达与钙离子浓度无相关性（r＝0．74，P＞0．05），其它各实验组c-fos、c-myc的表达与心肌细胞钙离子浓度成正相关性。结论：烧伤导致心肌细胞钙超载，补液不能阻止[Ca^2 ]i升高，而烧伤后大鼠心肌细胞原癌c-fos、c-myc的表达与胞内游离钙离子浓主有密切关，钙离子可能参与烧伤后心肌细胞原癌基因表达的调节。     

先天性心脏病合并肺动脉高压的…

应用放射免疫分析法测定３８例先天性心脏病患者血浆内皮素浓度（肺动脉高压组１５例，非肺动脉高压组２３例）。肺动脉高压组内皮素浓度明显高于非肺动脉高压组，肺动脉血浆内皮素浓度明显高于右心室和股动脉；内皮素浓度与肺动脉压力及肺血管阻力呈明显正相关。提示血浆内皮素增高在肺高压形成中具有重要的病理生理意义。     

先天性心脏病合并肺动脉高压的内皮素改变及其意义

应用放射免疫分析法测定３８例先天性心脏病患者血浆内皮素浓度（肺动脉高压组１５例，非肺动脉高压组２３例）。肺动脉高压组内皮素浓度明显高于非肺动脉高压组，肺动脉血浆内皮素浓度明显高于右心室和股动脉；内皮素浓度与肺动脉压力及肺血管阻力呈明显正相关。提示血浆内皮素增高在肺高压形成中具有重要的病理生理意义。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇抑制(-)BayK8644诱发的兔主动脉平滑肌细胞胞内游离钙离子浓度的升高

目的探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-Zearalanol,α-ZAL)对电压依赖型钙离子激活剂(-)BayK8644所诱导的兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth musele cells,VSMCs)胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i的影响.     

不同浓度中药柴胡提取物对人肝癌细胞内Ca2+和p53表达的影响

目的：测定不同浓度中药柴胡（Bupleurun Chinese DC,BCDC）提取物对BEL-7402细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）和p53表达的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法：用Fura-2／AM作为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定不同浓度柴胡提取物作用下BEL-7402细胞内[Ca^2＋]i及其剂量-效应关系;用免疫组化法检测不同条件下BEL-7402细胞的p53表达。结果：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降（P〈0．001）,但不具有剂量-效应关系;BEL-7402细胞呈p53天然突变。结论：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂（calcium channel blocker,CCB）,提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一;BEL-7402细胞呈p53天然突变也可直接或间接影响肿瘤多药耐药性的表达。     

缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

先天性心脏病伴肺动脉高压患儿血浆神经肽Y、降钙素基因相关肽的研究

目的：研究降钙素基因相关肽（CGRP）、神经肽Y（NPY）与先心病肺高压的关系。分析两者是否具有相关性。方法：采用放射免疫法测定80例先天性心脏病（13例非肺高压,67例肺高压）血清NPY、CGRP的浓度,比较两组间不同采血部位及手术前后水平变化。结果：血浆NPY及CGRP浓度非肺高压组与轻、中、重度肺高压组均存在显著性差异;手术前后轻、中度肺高压组存在显著性差异。而重度肺高压组差异不明显;NPY与CGRP存在负相关关系。结论：NPY及CGRP在先天性心脏病肺动脉高压的发生机制中有重要的作用。NPY/CGRP比值可作为估测肺动脉压力和判断先心病预后的重要指标。     

氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠肺血管重构及血浆内皮素的影响

目的：探讨长期氧疗对慢性低氧高二氧化碳性肺动物高压大鼠肺动脉压，肺血管重构及血浆内皮素变化的影响。方法：将SD大鼠分4组：正常对照组（NC），慢性低氧4w后伴高二氧化碳2w组（HH），HH后吸空气3w组（HC）与HH后氧疗3w组（HO）。观察各组大鼠平均肺动脉压（mPAP),右心室，左心室＋空间隔重量比（RV／LV＋S），血浆内皮素－1（ET－1）浓度及肺细小动脉显微结构变化。结果：（1）mPAP,RV/V S及血浆ET－1浓度：HO组比HC组明显降低（P＜0．01）。(2)mPAP与血浆ET－1呈良好的相关性。（3）光镜下HH组肺细小动脉内弹力板扭曲，中膜平滑肌细胞增生，管腔明显狭窄，HO组肺细小动脉内弹力板扭曲明显减轻，中膜平滑肌层变薄，管壁较均匀一致。结论：长期氧疗可明显降低慢性低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠血浆ET－1的浓度及肺动脉压，减轻肺血管的重构。     

新生乳猪缺氧性肺动脉高压中平滑肌细胞增殖和凋亡

目的：研究平滑肌细胞增殖和凋亡在新生乳猪生后正常发育及缺氧性肺动脉高压肺血管重构中的作用。方法：42只新生乳猪分成正常发育组和缺氧性肺动脉高压组，其中20只新生乳猪置于低气压仓（50．8kPa)中3或11d形成不同程度的缺氧性肺动脉高压模型。采用免疫组化方法和TUNEL方法检测和观察肺小阻力动脉中层平滑肌细胞（SMC）的增殖和凋亡变化。结果：平滑肌细胞复制率在出生时即较高，出生后早期进一步升高。短期缺氧对平滑肌细胞复制率有一定程度的抑制。较长期缺氧（11d)引起肺血管重构显著变化同时，平滑肌细胞复制率显著增加；新生期无论在正常状态，缺氧或缺氧恢复阶段，在肺血管壁上均未见细胞凋亡阳性信号。结论：新生乳猪出生后肺血管重构与平滑肌细胞增殖有关。平滑肌细胞增殖在严重缺氧性肺动脉高压形成中起重要作用。细胞凋亡在出生早期肺血管重构中作用尚待研究。     

脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.     

Ghrelin对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的：研究Ghrelin对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）内游离钙离子浓度的影响,并揭示Ghrelin血管活性的调节机制。方法：组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,Western blot验证生长激素促泌素受体（GHS-R1a）在VSMCs中的表达。钙荧光染料furo-2AM标记VSMCs,高速钙离子成像分析系统检测Ghrelin对静息状态胞内钙荧光强度（FI）的影响,并观察Ghrelin对KCl和AngII增强胞内钙FI作用的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536和GHS-R1a拮抗剂（D-Lys3）-GHRP-6对Ghrelin作用的影响。结果：GHS-R1a在VSMCs内有表达。Ghrelin本身对VSMCs内钙FI无作用,也不能抑制KCl引起的VSMCs内钙FI升高,但可抑制AngII引起的VSMCs内钙FI升高,而这种抑制作用可被Sq22536和GHS-R1a逆转。结论：Ghrelin可抑制由AngII引起的大鼠主动脉VSMCs胞内钙离子的升高,机制可能和激活cAMP/PKA信号通路有关。     

高肺血流量对大鼠动脉压及肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的：建立左向右分流所致肺动脉高压的大鼠模型，探讨高肺血流量对肺血流动力学及肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用腹主动脉－下腔静脉分流术建立左向右分流的大鼠模型，观察术后6周和11周肺血流动力学，右心室肥厚和肺动脉舒张反应的改变。采用免疫组织化学和原位缺口末端标记方法对11周组大鼠肺血管平滑肌细胞进行增殖和凋亡状态的研究。结果：术后6周与11周大鼠肺动脉了收缩压，肺动脉平均压，右心室（RV）与左心室加室间隔（LV＋S）的比值较同龄对照组明显增加，而且11周分流组肺动脉收缩压较6周分流组进一步增高，在11周分流组大鼠中，乙酰胆碱（ACh)产生的肺动脉环舒张反应较对照组明显减弱，而硝普钠（SNP）产生的肺动脉环舒张百分比无明显变化，11周分流组大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖指数（PI），凋亡指数（AI），PI／AI比值明显高于11周对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞。结论：腹主动脉－下腔静脉分流术可导致肺动脉高压形成，高肺血流量引起的内皮依赖性肺血管舒张功能失调对肺动脉高压的形成有重要的影响，肺动脉平滑肌细胞的增殖的增加和凋亡的相对减少在肺动脉高压的发生中起到重要作用。该模型简单，可靠，重复性好。     

钙敏感受体在缺氧肺动脉平滑肌细胞中的表达及意义

目的观察肺动脉平滑肌细胞缺氧时钙敏感受体（calcium sensing receptor,CaSR）的表达,探讨其与缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的关系。方法Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用western blot技术分析CaSR、cyclinD1蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描显微镜观察不同干预情况下细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）的变化,应用BrdU掺入方法分析不同处理因素对细胞DNA合成的影响。结果 CaSR蛋白在肺动脉平滑肌细胞有表达。缺氧能够增加CaSR、cyclinD1的表达、BrdU掺入率及[Ca2＋]i（与对照组比较,P〈0.05）。GdCl3（CaSR激动剂）能够增强缺氧的上述作用,NPS2390（CaSR抑制剂）则能够减弱缺氧的作用。结论缺氧诱导的CaSR表达增加参与了缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖。