男性泌尿生殖道支原体感染标本采集研究

目的:探讨男性泌尿生殖道不同标本(尿道分泌物、前列腺液、精液)支原体检测结果的差异。方法:对初诊疑泌尿生殖道感染者412例,复查患者308例。分别取尿道分泌物、前列腺液、精液为标本进行支原体检测。结果:初诊412例中,尿道分泌物标本支原体阳性194例,占47.0%;前列腺液标本支原体阳性202例,占49.0%;精液标本支原体阳性214例,占51.9%;214例精液支原体阳性标本覆盖前列腺液标本阳性202例,覆盖尿道分泌物标本阳性194例。精液支原体阳性漏诊率为0,前列腺液漏诊率为5.6%,尿道分泌物漏诊率为9.3%。三个标本组两两间比较支原体阳性率及漏诊率无显著性差异。复查患者308例,尿道分泌物标本支原体阳性30例,占9.7%;前列腺液标本支原体阳性61例,占19.8%;精液标本支原体阳性77例,占25.0%。77例精液标本支原体阳性覆盖前列腺标本支原体阳性59例。漏诊2例;覆盖尿道分泌物标本支原体阳性30例;总阳性79例,精液标本支原体漏诊率2.5%(2/79),前列腺液标本支原体漏诊率22.8%(18/79),尿道分泌物标本支原体漏诊率62.0%(49/79)。前列腺液标本支原体阳性率与尿道分泌物标本支原体阳性率比较有显著性差异;精液标本支原体阳性率与前列腺液标本支原体阳性率比较无显著性差异;精液标本支原体阳性率与尿道分泌物标本支原体阳性率比较有显著性差异。标本组间两两比较漏诊率均有显著性差异。结论:精液标本覆盖面广,支原体培养标本应首选精液。     

荧光定量PCR方法检测男性三种标本的分析

目的:分析荧光定量PCR方法检测1256例前列腺液、尿道分泌物、精液标本解脲支原体(UU)和(或)沙眼衣原体(CT),了解三种标本感染UU、CT的情况。方法:对2007年1256例怀疑感染UU或CT的患者和不孕不育症患者标本检测。结果:149例前列腺标本中UU阳性率为42.3%(63/149)、136例前列腺标本CT阳性率为19.9%(27/136);361例尿道分泌物UU阳性率为21.1%(76/361)、346例尿道分泌物CT阳性率为10.4%(36/346);141例精液UU阳性率为11.3%(16/141)、123例精液CT阳性率为7.3%(9/123)。结论:三种标本的UU、CT阳性率相差显著,P<0.005。前列腺标本检测的阳性率明显高于尿道分泌物标本,精液检测的阳性率最低。不同类型的标本检测的UU、CT的结果有很大的差异,送检的标本最好是前列腺液。     

PCR-ELISA法及荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV-DNA的探讨

目的探讨PCR-ELISA法及荧光定量PCR法（FQ-PCR）检测HBV感染者精液中HBV-DNA检出情况及其临床意义。方法选取男性HBV感染者60例,采集患者精液、静脉血,用PCR-ELISA法来检测患者精液及血清中HBV-DNA。同时采用荧光定量PCR检测患者精液中HBV-DNA。结果PCR-ELISA法：60例精液标本HBVDNA阳性12例,阳性率18.33%,拷贝数为1.267×10^3-6.532×10^5/ml,平均拷贝数为4.781×10^4/ml;60例血清标本阳性53例,阳性率为88.33%,拷贝数1.462×10^3-5.153×10^7/ml,平均拷贝数为2.451×10^6/ml。荧光定量PCR法：60例精液标本HBVDNA阳性13例,阳性率21.67%,拷贝数为1.357×10^3-7.113×10^5/ml,平均拷贝数为4.983×10^4/ml;两种检验方法检测精液HBV-DNA的阳性检出率比较无显著性意义（P〉0.05）。结论PCR-ELISA法与荧光定量PCR定量检测精液中HBVDNA同样具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解乙型肝炎患者精液中肝炎病毒的感染状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

男性不育患者与正常人的沙眼衣原体感染的比较

目的对男性不育患者和正常生育男性的精液、尿道拭子和尿液3种不同的标本,同时进行沙眼衣原体（CT）的检测,以探讨CT感染与男性不育的关系以及不同标本的CT阳性率。方法 150例男性不育患者,100名正常生育男性的精液、尿道拭子和尿液标本离心,用常规碱裂解法提取CT-DNA。各反应管放入PE5700自动荧光检测仪,按下列条件扩增：93度2min预变性,然后按93度45s,55度2min扩增,共做40个循环。结果男性不育患者的精液、尿道拭子和尿液标本的CT阳性率明显高于正常生育男性。精液和尿道拭子这2种标本的CT阳性率明显高于尿液标本的CT阳性率。结论 3种不同标本的CT阳性率最高的是精液,其次是尿道拭子,不宜用尿液标本代替精液和尿道拭子进行CT检测。CT感染已成为不孕不育的主要病因之一,对于不育症患者进行CT的监测对防治不育症有重要意义。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。     

实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中沙眼衣原体的分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术（SAT）检测尿液中沙眼衣原体（CT）的特异性和敏感性。方法对175例疑似患者生殖道拭子行CT—SAT、PCR检测和沙眼衣原体培养,同时对对应的175份尿液标本行CT—SAT检测。结果SAT对同一患者的拭子标本和尿液标本的检测结果符合率100％。1例淋球菌培养阴性而SAT阳性,2例PCR阳性而SAT阴性。结论SAT技术检测拭子及尿液中的沙眼衣原体具有很高的灵敏度和特异性,为CT的实验室诊断提供新的检测方法。     

性病高危人群中女性阴道口部位沙眼衣原体感染的检测

目的 :研究能否用阴道口部位标本代替宫颈标本检测沙眼衣原体 (CT)。方法 :分别用 PCR法和立明法 (Clearview)对 2 31例性病高危人群的宫颈拭子、阴道口拭子及尿液标本进行检测。结果 :以6种检测方法中任何 2种结果同时阳性为金标准 ,宫颈拭子、阴道口拭子及尿液 3种标本 PCR法的敏感性和特异性分别是 86 .8%和 99.4 8% ,84 .2 %和 10 0 % ,6 3.2 %和 99.4 8% ;立明法的敏感性和特异性分别是 81.6 %和 10 0 % ,4 7.4 %和 10 0 % ,10 .5 %和 10 0 %。结论 :对女性 CT检测可以用阴道口拭子代替其它部位标本进行 PCR检测     

两种检测男性生殖道沙眼衣原体和解脲支原体方法的对比

目的: 对比应用实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing,SAT)-RNA(SAT-RNA 法)与应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-DNA(PCR-DNA法)检测男性生殖道沙眼衣原体、解脲支原体的效果,以探讨SAT-RNA法的应用价值。方法: 收集2016年4月至2017年4月于中国医科大学附属盛京医院生殖医学中心就诊的因女方因素拟行体外受精-胚胎移植助孕的163例男性,采用SAT-RNA法检测尿液标本中的沙眼衣原体、解脲支原体,并对其中109例符合当天采集精液标本条件者进行相应病原体的检测。同时采用PCR-DNA法检测163例男性尿道拭子标本中的相应病原体。结果: 163例男性生殖道解脲支原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性77例(阳性率47.24%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性78例(阳性率47.85%),两者差异无统计学意义(χ² =0,P>0.05),两种方法的检测结果符合率为93.25%,阳性符合率93.51%,阴性符合率93.02%,检验结果一致性极好(Kappa值0.865)。163例男性生殖道沙眼衣原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性5例(阳性率3.07%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性7例(阳性率4.29%),两者差异无统计学意义(χ²=0.25,P>0.05),两种方法检测结果符合率为97.55%,阳性符合率80.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.654)。对其中109例男性采用SAT-RNA法同时检测尿液和精液标本中的解脲支原体和沙眼衣原体:(1)解脲支原体:尿液标本阳性55例(阳性率50.46%),精液标本阳性49例(阳性率44.95%),两标本差异无统计学意义(χ²=2.08,P>0.05),检测结果符合率为88.99%,阳性符合率93.88%,阴性符合率85.00%,检验结果一致性较好(Kappa值0.780);(2)沙眼衣原体:尿液标本阳性6例(阳性率5.50%),精液标本阳性4例(阳性率3.67%),两标本差异无统计学意义(χ²=0.5,P>0.05),检测结果符合率为98.17%,阳性符合率100.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.791)。结论: SAT-RNA法与PCR-DNA法检测生殖道沙眼衣原体、解脲支原体有良好的一致性;相比PCR-DNA法,SAT-RNA法可用于尿液或精液标本的检测,具有无创、方便等优势,更适宜临床应用。     

定量PCR检测血清HBV-DNA与血清HBV标志物关系的研究

目的 :探讨定量PCR检测血清HBV -DNA与血清HBV标志物之间的关系及其临床意义。方法 :35 2例血清标本运用荧光定量PCR检测血清HBV -DNA及放射免疫法 (ELISA)检测血清HBV标志物。结果 :经荧光定量PCR检测 94例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA全部阳性 ,DNA测值范围 4 .8× 10 5～ 2 .8× 10 8copy/ml;81例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA4 3例阳性(阳性率为 5 3% ) ,DNA测值范围 1.0× 10 4～ 1.4× 10 7copy/ml;39例HBsAg、HBcAb阳性的标本 ,其血清HBV-DNA2 4例阳性 (阳性率为 6 1% ) ,DNA测值范围 3.5× 10 3 ～ 1.6× 10 7copy/ml;10 0例HBVM全阴性的标本 ,血清HBV -DNA全部阴性。结论 :荧光定量PCR检测血清HBV -DNA准确灵敏 ,可反映乙肝患者病程变化 ,对于乙肝临床诊断、治疗方案的选择、疗效观察及预后判断有极其重要的作用。     

诊断为慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中细菌基因的检测

【目的】探讨细菌感染在诊断为慢性非细菌性前列腺炎患者中的作用。【方法】应用PCR方法检测38例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中细菌16SrRNA基因,用尿道拭子和直肠拭子以及穿刺枪头拭子作对照。然后用RT-PCR方法检测细菌16SrRNA基因阳性的对应前列腺组织的大肠杆菌tufAmRNA基因。【结果】细菌16SRNA基因的检出率在前列腺液中和前列腺组织中分别为78.9%和81.5%(P>0.05)。细菌基因信号在前列腺液标本中和尿道拭子中各有30例(78.9%)和4例(10.5%)呈阳性(P<0.01);在前列腺组织中和直肠拭子中各有31例(81.5%)和6例(15.8%)呈阳性(P<0.01),无1例穿刺枪头拭子阳性。在31例细菌16SrRNA基因阳性的患者前列腺组织中,有6例(19.4%)检出大肠杆菌tufAmRNA基因。【结论】诊断为慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中不仅有细菌的存在,而且部分被证实是活力细菌。细菌在此类患者的病因中可能起一定的作用。     

荧光定量PCR法在结核杆菌检测中的价值

目的探讨荧光定量PCR法检测技术在结核病诊断中的价值。方法采用荧光定量PCR法和抗酸染色法同时检测231例结核患者体液标本(121例痰标本、67例胸腹水及43例尿液标本),对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR法的检测灵敏度为102Copy/ml,是抗酸染色法方法检测灵敏度100倍,且对除结核杆菌外的其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。本研究痰标本、胸腹水标本及尿液标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异均有显著性(﹤0.01)。结论荧光定量PCR方法检测结核杆菌具有特异性强、灵敏度高、简便、快速的特点,明显优于抗酸染色法,可作为结核病诊断的常规方法。     

实时荧光定量PCR检测肾移植患者术后BK病毒感染

目的:建立肾移植术后患者尿液和外周血BK病毒(BKV)感染负荷的实时荧光定量PCR检测方法,并初步探讨其临床应用价值.方法:构建含有BKV VP1蛋白保守区核苷酸序列片段的质粒作为外参照品,采用TaqMan荧光探针检测技术,建立定量检测BKV DNA方法;并对112例肾移植术后患者,40例正常体检者的尿液和外周血标本BKV含量进行检测.结果:本研究建立的BKV实时荧光定量PCR检测方法灵敏度、特异度及重复性较好,定量PCR方法最低检测下限为8×102copy/ml,测量批内差异为0.54%～3.78%,批间差异为0.62%～4.58%.112例肾移植术后患者尿液和外周血BKV DNA的检测阳性率分别为27.7%和11.6%,BKV DNA阳性者尿液和外周血BKV中位数水平分别为8.2×104copy/ml和2.4×103copy/ml.40例正常人BKV尿液和外周血阳性率为2.5%和0%;与正常体检者相比,肾移植术后患者尿液及外周血BKVDNA阳性率及水平明显升高(P＜0.01).尿液BKV阳性率较外周血明显升高(P=0.02),但尿液和外周血中BKV含量无明显相关性.结论:实时荧光定量PCR检测肾移植患者术后BKV感染方法简便、可靠、准确,为进一步研究BKV感染与肾移植术后移植物丢失的关系奠定了基础.     

实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体

目的 应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体(UU),并评价其敏感性和特异性.方法 对140例疑似泌尿生殖道感染患者的拭子和尿液样本,分别采用培养法、SAT进行解脲脲原体检测,检测结果有差异的标本用实时荧光定量PCR法对拭子进行复测,根据实验结果评估SAT检测尿液UU的敏感性和特异性.结果 140例疑似患者试子培养和尿液SAT检测阳性率均为60％,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05),其中16例培养结果与SAT检测结果不一致,8例培养法阳性、SAT阴性的拭子PCR结果复测阳性;8例培养法阴性、SAT阳性的拭子标本PCR结果4例阴性、4例阳性,结合培养法结果和PCR结果作为“扩大金标准”,得出SAT对尿液检测的敏感性为95.5％、特异性为100％.结论 SAT检测泌尿生殖道患者尿液UU具有取样方便,检测快速、准确等优点,适用于临床实验室泌尿生殖道UU的检测.     

应用荧光定量PCR检测前列腺炎沙眼衣原体的探讨

目的:探讨分析应用荧光定量PCR检测前列腺炎的沙眼衣原体(CT)的感染情况和荧光定量PCR检测在前列腺炎中的诊断价值。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测法,对256例前列腺炎患者前列腺液的CT进行检测。结果:256例前列腺炎患者检出CT63例,阳性率为24.5%。结论:前列腺炎患者与CT感染有着密切的关系,对指导临床在病原学的诊断与治疗具有其重要的应用价值。     

男性不育患者不同部位沙眼衣原体感染的检测与比较

目的　探讨沙眼衣原体 (Ct)感染与男性不育的关系及不同标本Ct阳性率。方法　采用直接免疫荧光法检测了 386例男性不育患者与 2 10例正常生育男性的精液、尿道拭子和尿液Ct。结果　男性不育组中精液、尿道拭子和尿液Ct阳性率显著高于对照组 ,三种不同标本的阳性率也存在差异。结论　Ct感染是男性不育的原因之一。男性不育患者检测Ct感染时应首选精液 ,亦可选择尿道拭子 ,不宜用尿液     

男性不育患不同部位沙眼衣原体感染的检测与比较

目的 探讨沙眼衣原体（Ct)感染与男性不育的关系及不同标本Ct阳性率，方法 采用直接免疫荧光法检测了386例男性不育患者与210例正常生育男性的精液，尿道拭子和尿液Ct。结果 男性不育组中精液，尿道拭子和尿液Ct阳性率显著高于对照组，三种不同标本的阳性率也存在差异。结论 Ct感染是男性不育的原因之一。男性不育患者检测Ct感染时应首选精液，亦可选择尿道拭子，不宜用尿液。     

实时荧光PCR技术在手足口病原学检查中的应用

目的：采用实时荧光PCR法检测手足口病患儿病原体。方法：收集40例本市确诊手足口病患儿的肛拭子样本,进行肠道病毒筛选和柯萨奇病毒16型与肠道病毒71型鉴别与分析。结果：实时荧光PCR法检测40例患儿肛拭子标本使用通用型试剂盒检出22例阳性,其中9例为CVA-16感染,12例为EV71感染,发病3 d内采集标本检出阳性患儿占75%。结论：CVA-16和EV71肠道病毒是手足口病的主要病原体,手足口病病毒检出率与标本的采集时间相关性,实时荧光PCR技术对手足口病的病原诊断具有重要价值。     

实时荧光PCR在乙肝病毒DNA检测中的临床意义

目的用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者HBV DNA结果进行分析,以探讨其临床诊疗意义。方法对630例血清标本用时间分辨荧光免疫技术定量测定乙肝炎病毒血清学指标,用荧光定量PCR法检测血标本中的HBVDNA,并依据乙肝两对半结果进行归类分组。结果 630份标本中,大三阳206例标本中有173份HBV-DNA为阳性,阳性率为84.0%,其PCR定量拷贝数为(2.13±0.72)×107/ml;小三阳211例中有64份HBV-DNA阳性,阳性率达到30.3%,PCR定量拷贝数为(1.61±0.85)×106/ml;69份HBs Ab(+)、HBe Ab(+)、HBc Ab(+)标本有33份HBV-DNA阳性,阳性率47.8%;27份HBs Ag(+)、HBc Ab(+)标本中有8份HBV-DNA为阳性,阳性率为29.6%;22份HBe Ab(+)、HBc Ab(+)标本有3份PCR HBV-DNA阳性,阳性率13.6%;20份HBs Ag(+)、HBs Ab(+)、HBe Ag(+)、HBc Ab(+)标本中有17份HBV-DNA为阳性,阳性率为85.0%;17份HBs Ab(+)、HBe Ab(+)阳性标本有3份PCR HBV-DNA阳性,阳性率为17.6%;13份HBs Ab(+)、HBc Ab(+)标本有1份HBV-DNA阳性,阳性率7.7%;12份HBc Ab(+)标本有5份PCR HBV-DNA阳性,阳性率为41.7%;2份HBs Ab(+)的标本HBV-DNA均为阴性,PCR定量拷贝数为1.00E×103;1份HBs Ag(+)标本HBV-DNA均为阳性,阳性率为100%;其余30例全阴性结果和各少见模式基本未见有HBV-DNA的检出。结论 PCR定量测定HBV-DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。     

2123例男性泌尿生殖道标本的病原学分析

目的 了解男性泌尿生殖道感染的病原学分布,为男性泌尿生殖道感染的预防和治疗提供可靠依据.方法 对2123例男性泌尿生殖道标本的微生物学检验进行回顾性分析.结果 2123例男性泌尿生殖道标本中共检出病原菌1082株,检出率为50.96%,其中解脲支原体检出率最高,为24.30%;所有送检标本中,尿道拭子标本的病原菌检出率最高,为60.09%,混合感染率为12.74%;精液标本中无乳链球菌检出率明显高于前列腺液(P<0.05).结论 解脲支原体是男性泌尿生殖道感染的主要病原菌;男性泌尿道标本的病原学检查以尿道拭子为宜;男性不孕是否与无乳链球菌的感染有关还有待进一步研究.     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值.方法 收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率.结果 169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌 DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%.结论 涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌 DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目.