[α-~(35)S]dATP标记DNA探针在临床样品检验中的应用

用国产[α-~(35)S]dATP,经体外缺口翻译(nick translation)方法,制备 pBR322 DNA 探针,用于检测临床样品中 pBR322 DNA 的同源性物质。结果提示,~(35)SdATP 标记 DNA 探针,具有特异性强,敏感性高,方法简便,而且对人体辐射危害小,价格便宜等特点,可用于临床检验、诊断及基因分析。     

非同位素标记DNA探针的制备(简讯)

核酸分子杂交法广泛用于分子生物学研究,对遗传性疾病的探索、优生检查、法医侦破罪犯等都起到重要作用。在分子杂交中,DNA探针的制备是方法成功的关键。目前常用的是~(32)P或~(35)S标记的探针,但在国内高比活性的底物[α-~(32)P]-dATP或[α-~(35)S]-dATP都难得到,阻碍了分子杂交法的应用。 1981年Langer用dATP-生物素做底物,标记DNA,再与过氧化酶联的抗生物素结合,经酶反应显色检测。1983年Leary用碱性磷酸酶代替过氧化物酶,使检测的灵敏度提高了20～50倍,达到同     

中国人β地中海贫血基因的序列测定

对已克隆化分离的一个β地贫基因,应用6种人工合成的寡核苷酸为内引物。以[α-~(35)S]dATP进行标记,用Sanger双脱氧末端终止法进行序列测定。结果表明,此例β珠蛋白基因的密码子41/42中缺失了4个核苷酸(TCTT)。     

宫颈癌组织中HSV-2核酸片段的检测

本文以[α-~(32)ρ]dATP 标记HSV-2 DNA,分别用Southern 转印及打点杂交技术,同时检测了39例宫颈癌及4例正常活检标本。在39例宫颈癌中未发现HSV-2 DNA,其中12例宫颈癌组织RNA 与HSV-2 DNA 杂交呈阳性结果。初步结果说明HSV-2与宫颈癌的发生可能有关。     

用不同标记的乙型肝炎病毒DNA探针对肝组织内病毒基因进行原位核酸分子杂交

本文报道采用国产[α-(55)~S]dATP及进口[3~H]dNTP与生物素标记HBV DNA全基因探针进行原位核酸分子杂交,均可获得阳性结果。其中[3~H]dNTP标记探针的敏感性与特异性最佳。对6例慢性乙型肝炎患者肝组织切片进行原位核酸分子杂交,结果与肝组织提取物经Southern吸印转移HBV DNA杂交的阳性率完全一致。原位核酸杂交显影后的银颗粒呈灶性分布于肝细胞内,提示病毒在肝内扩散为细胞——细胞间传播方式进行。对1例有复制型HBV DNA的肝癌组织进行原位核酸分子杂交,发现HBV DNA主要分布在光镜下癌细胞旁肝细胞胞浆中,而癌细胞中未测得HBV DNA,其意义有待更多病例数检测后才能阐明。     

钠离子和萝芙木碱对预结合的影响

目的：研究钠离子和萝芙木碱对α2受体预结合(激活G蛋白)影响。方法：细胞培养、膜分离、GTPγ／[^33S]结合试验。结果：Na^ 浓度对基础、EPI刺激、RAU抑制的GTPγ／[^35S]结合有明显影响。结论：在缺乏Na^ 和GTP时结合实验中α2受体有较高的亲和力；拮抗剂RAU对Na^ 和GTP的存在较敏感，在本上与激动剂的作用相反。     

大骨节病区粮水对恒河猴致软骨硫代谢的损害作用

用大骨节病区粮水喂养18个月的恒河猴,出现明显的软骨对硫的利用代谢障碍。表现为软骨中硫酸软骨素对产[~(35)S]的摄取能力下降,尿液氨基多糖中[~(35)S]掺入的比放射性降低,其中以病水组动物表现尤为明显。同时,病理形态学检查猴关节软骨和髓板软骨都出现大骨节病样的软骨细胞坏死。上述猴的硫代谢紊乱性质与以前报告的大白鼠硫代谢变化规律完全相同。     

~(65)Zn~(35)S双标记测量及其淬灭校正方法

本实验采用液闪-液闪法作~(65)Zn~(35)S双标记测量,以H~#作淬灭指标,可一次性给出双际记样品经过淬火校正的实际计数率。实验结果表明:在中度淬灭(H~#<160)、~(35)S/~(65)Zn=0.05～20范围内、~(65)Zn~(35)S校正误差基本在10％以内,这一结果基本可满足放射性测量的误差要求。     

姜黄挥发油抗癌活性成分研究

姜黄挥发油为姜黄Curcum a longa L.的有效部位,经生物学实验表明,对肿瘤有明显的抑制作用和增强免疫功能[1]。为了揭示该制剂抗癌活性作用的物质基础,本研究采用多种色谱和波谱方法对姜黄组分进行分离和结构鉴定。分离得到3个化合物,约占姜黄挥发油总量的80%,分别鉴定为芳姜黄酮(ar-turm erone)、α-姜黄酮[-αturm erone,(1′R,6S)-2-m ethy l-6-(4-m ethy lenecyclohexa-2,4-d ieny l)hept-2-en-4-one]和β-姜黄酮[-tβurm erone,(1′R,6S)-2-m ethy l-6-(4-m ethy lenecyclohexa-2-eny l)hept-2-en-4-one]。其中β-姜黄酮国内未见报…     

西洋参茎叶皂苷水解产物中稀有抗肿瘤成分的化学研究

目的研究西洋参Panax quinquefolium茎叶皂苷酸水解产物的化学成分。方法利用硅胶柱色谱等各种色谱技术对西洋参茎叶皂苷酸水解产物进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果从西洋参茎叶皂苷酸水解产物中分离得到8个化合物,分别鉴定为20(S)-人参二醇[20(S)-panaxadiol,Ⅰ]、20(S)-原人参二醇[20(S)-protopanaxadiol,Ⅱ]、20(R)-原人参二醇[20(R)-protopanaxadiol,Ⅲ]、20(S)-人参三醇[20(S)-panaxatriol,Ⅳ]、24(R)-拟人参皂苷元[24(R)-ocotillol,Ⅴ]、20(R)-原人参三醇[20(R)-protopanaxatriol,Ⅵ]、20(R)-达玛烷-3β,12β,20,25-四醇[20(R)-dammarane-3β,12β,20,25-tetrol,Ⅶ]、20(R)-达玛烷-3β,6α,12β,20,25-五醇[20(R)-dammarane-3β,6α,12β,20,25-pentol,Ⅷ]。结论化合物Ⅰ～Ⅷ为首次从西洋参茎叶皂苷酸水解产物中分得的人参皂苷元衍生物。其中Ⅳ、Ⅶ、Ⅷ为从西洋参根、茎、叶、果、花蕾中首次发现。化合物Ⅶ为本课题组从人参果皂苷中首次发现和报道的具有显著抗肿瘤活性的原人参二醇型皂苷元衍生物。     

Gene analysis of free fetal DNA in maternal plasma

In recent years,many researches have beenstudying in the gene analysis of fetal cells frommaternal blood,but few reports were available aboutthe freefetal DNA from maternalblood. Justlikefetalcells in maternal blood,the fetal DNA isin very smallquantity that entails highly sensitive and specificmethods in order to perform gene analysis of fetalDNA. In this study,PEP and probe microplatehybridization were employed to detecttracefetal DNAin maternal blood,and the sensitivity was comparedby…     

聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）和DNA探针杂交法检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)的临床诊断价值。方法：应用这两种方法对未使用过抗衣原体药物的80例宫颈炎患者同时进行Ct检测。结果：PCR法检出Ct基因的阳性率（23．8％）高于探针杂交法（15．0％），两者比较有显著性差异。结论：PCR法检测Ct较DNA探针杂交法敏感，如将两法结合应用结果将更可信。     

人乳头瘤病毒第16型DNA在宫颈癌中的检测

我们利用尼龙膜和~(35)S标记的HPV-16探针(比活性为2-3×10~7cpm/μg),采取简单易行的斑点杂交技术,建立了消除HPV各型间交叉反应的最适杂交、漂洗和放射自显影条件,并在该条件下在30例取自天津的人宫颈鳞状上皮癌组织DNA中,检出17例(56.7％)为HPV-16DNA阳性。     

生物素标记探针检测外周血白细胞端粒长度的应用研究

目的建立生物素标记测定端粒DNA长度的方法,探讨其法医学应用价值．方法基因组DNA经RsaⅠ和HinfⅠ限制性内切酶消化,0.8％琼脂糖凝胶电泳,Southern印迹转移,以5′末端生物素标记寡核苷酸（TFAGGG）3为探针进行杂交,化学发光检测DNA谱带,与DNA标准分子量比较计算端粒长度．结果通过严格控制印迹转移条件、探针的工作浓度、杂交温度等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带．结论生物素标记探针检测端粒DNA长度方法稳定、可靠,无放射污染,杂交信号明显．     

原位杂交技术在培养细胞冰冻切片和石蜡片切中的应用

本实验详细地探讨了原位杂交技术的有关问题:生物素标记DNA探针的制备,各类来源标本的制备,杂交前、中、后细胞组织切片的处理等;并把缺口翻译法合成的生物素化EB病毒DNA探针应用于检测培养细胞,冰冻和石蜡切片中EB病毒Bam HI-W重复片断DNA序列。实验结果表明:自制的EB病毒DNA探针完全可靠;所采用的一套原位杂交技术适用于检测上述三类不同的标本,其检测的结果是满意的。     

斑点杂交试验检测血清中HBV—DNA的临床应用及其意义

本文用地高辛探针和生物素探针做斑点杂交平行检测了160例乙型肝炎患者,其符合率为96.25％;HBeAg阳性者HBV-DNA检出率为88.41％;而HBeAg及抗HBe均阴性者的阴性率为95.95％。用地高辛探针对21例正常人,28例非乙肝患者中均未检出HBV DNA。实验表明,地高辛探针做斑点杂交具有较好的敏感性特导性和实用性。     

Detection of Human Papillomavirus Type 16 DNA in Cervical Carcinomas

Accurate typing of the different human papillomavirus types is csscntial in view of the differ-ent pathological potential of the common virus types of human papillomavirus (HPV) present in thecervix. We have developed hybridization, washing and autoradiography conditions that minimize thecross-hybridization among different specific types of HPV so as to allow clear - cut type assignmentthrough practical dot blot hybridization technique using nylon membrane and ~(35)S - labeled HPV - 16DNA probe. Under these conditions seventeen of thirty (56.7%) of squamous cell carcinomas of thecervix uteri obtained from Tianjin women were detected in the presence of HPV - 16 DNA.     

HBV基因型与肝癌的预测性相关研究 Ⅰ.地高辛甙元标记HBV-DNA探针的制备

用地高辛甙元随机引物法标记HBV DNA探针,通过核酸分子杂交技术测试该探针。结果证实,该探针检测HBV DNA的特异性和敏感性均达到了实验要求,为进一步开展临床HBV核酸分子杂交检测技术提供了可靠的实验材科。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

运用荧光分光光度仪观测结核杆菌耐链霉素耐药rpsL 43密码子发夹探针液相杂交信号

目的 设计针对结核杆菌耐链霉素(SM)rpsL 43密码子的发夹型DNA探针,尝试运用荧光分光光度仪直接观测液相中发夹探针与rpsL 43密码子扩增产物杂交后荧光信号,从而检出该位点突变.方法 运用软件Beacon designer 设计针对rpsL 43密码子的发夹探针,应用荧光分光光度仪检测rpsL 43密码子扩增片段与探针杂交后荧光信号,并比较扩增产物测序结果.结果 通过荧光分光光度仪观测到结核杆菌标准株及SM耐药rpsL 43密码子扩增产物杂交荧光信号存在显著差异;20株SM耐药组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,SM耐药组rpsL 43密码子突变检出率为70%,测序法突变检出率为65%,发夹探针杂交法假阳性株1例(504S).结论 应用荧光分光光度仪直接观测发夹探针液相杂交荧光信号具有简单、灵敏等优特点;rpsL 43密码子点突变是重庆地区SM耐药的主要因素之一.