慢性粒细胞白血病细胞eIF4E mRNA表达及影响因素

目的:初步探索真核细胞翻译起始因子4E(eW4E)在慢性粒细胞白血病(CML)不同病程,包括慢性期(CP)、加速期(AP)、急变期(BC)、急变治疗后(BC-R)骨髓细胞中mR-NA表达及其在K562细胞中的表达影响因素.方法:RT-PCR检测25例骨髓样本[CML急变期(CML-BC)10例,慢性期(CML-CP)8例,加速期(CML-AP)1例,急变期治疗后(CML-BC.a)3例,贫血对照3例]elF4E mRNA表达,及其中9例CML elF4E和RNA结合蛋白K(hnRNP K)mRNA表达,并分析两种基因表达相关性.用酪氨酸激酶抑制剂STI571处理K562细胞,并用ImRNP K短发夹RNA(shRNA)逆转录病毒载体感染K562细胞,经G418稳定筛选,分别检测elF4E mR-NA表达变化.结果:与贫血对照组相比,CML-BC和CML-BC.R eW4E rnPNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),而与CML-CP无统计学意义,ImRNP K与elF4E mRNA表达呈线性相关(r=0.79,P＜0.01).STI571能轻微下调K562细胞elF4E mRNA表达.hnRNP K干扰组hnRNP K和eIF4E mRNA表达比空载对照组分别下降55.22%,55.27%.结论:CML急变期eW4E mRNA表达显著增高,BCR/ABL融合蛋白可能参与调节eW4E mRNA表达但效应有限,hnRNP K分子在eIF4E mBNA表达调控中可能发挥一定作用.     

Cyr61基因与慢性粒细胞白血病的相关性研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中富半胱氨酸61基因（Cyr61）的表达水平及其临床意义。方法应用半定量RT PCR和免疫组化技术分别检测38例CML患者和10例正常对照者（正常对照组）骨髓单个核细胞中Cyr61mRNA和蛋白水平的表达情况,CML患者中慢性期20例（慢性期组）,加速期11例（加速期组）,急变期7例（急变期组）。结果38例CML患者中,慢性期组、加速期组、急变期组Cyr61mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05)。Cyr61基因在加速期及急变期的表达高于慢性期(P<0．05),Cyr61基因在加速期和急变期的表达虽升高,但两者差异无统计学意义(P>0．05)。Cyr61蛋白在CML中的表达明显高于正常对照组,CML加速期和急变期中Cyr61蛋白的表达高于慢性期（P均<0．05）。结论Cyr61基因参与了CML的发生、发展过程,且与CML的急变有关,可作为预示CML急变的实验依据。     

SHP1表达与慢性粒细胞白血病进展的初步研究

目的：探讨SHP1表达与CML急变的关系；构建SHP1真核表达载体．方法：应用RT—PCR比较慢性期和急变期CML患者原代细胞中SHP1的mRNA转录本水平；SHP1真核表达载体pcDNA3．0-SHP1的测序，检测其mRNA和蛋白表达．结果：急变期患者SHP1转录本水平明显下降，与正常对照间存在统计学差异；pcDNA3．0-SHP1转染K562细胞，可表达SHP1mRNA和蛋白．结论：SHP1的表达下调可能与CML由慢性期朝加速／急变期演化过程有关；成功构建了SHP1真核表达载体peDNA3．0-SHP1．     

血管内皮生长因子与慢性粒细胞白血病的相关性

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)中血管内皮生长因子(VEGF)等血管新生调节因子表达的状态及其在CML病程进展中的作用。方法 (1)CML患者骨髓和K562细胞VEGF及其受体的表达。采用RT-PCR方法检测CML骨髓细胞和K562细胞的VEGF、VEGFR-1(Fit-1)和VEGFR-2(KDR)mRNA的表达；免疫组织化学法检测K562细胞VEGF的蛋白表达；ELISA法检测K562、HL-60和人脐静脉     

膀胱癌P53基因突变与蛋白高表达的相关性研究

目的　探讨膀胱癌 p53基因突变及突变蛋白高表达情况和它们之间的相关性。 方法　采用PCR -SSCP方法检测 p53基因 5～ 8外显子突变 ,免疫组化研究 p53蛋白的表达情况。 结果　 75例膀胱移行细胞癌病例中 p53蛋白的阳性表达率为 4 4 .0 % ,PCR -SSCP检测 p53基因的点突变率为 4 5.3% ,且两者显著相关 (P <0 .0 1)。 11例出现在外显子 5～ 6,8例出现在外显子 7,15例出现在外显子 8。在有 p53基因突变的 34例膀胱移行细胞癌中 ,发现有 31例 p53蛋白阳性过表达。 结论　膀胱癌的发生与 p53基因突变和高表达关系密切。     

基于慢性粒细胞白血病（CML）中血管内皮生长因子（VEGF）的高表达探讨大黄蛰虫丸对CML K562细胞VEGF表达的影响

【目的】通过观察大黄蛰虫丸对慢性粒细胞白血病(CML) K562细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探索应用抗血管新生药物治疗CML的新途径。【方法】采用酶联免疫吸附（ELISA）法,检测CML慢性期（38例）、急变期（11例）患者及正常人（9例）血清中VEGF的含量;并用SD大鼠制备大黄蛰虫丸含药血清,用ELISA法检测K562细胞的VEGF含量。【结果】与正常对照组比较, CML慢性期、急变期患者血清VEGF含量显著升高(P<0.05或P<0.01);与正常对照组比较,大黄蛰虫丸含药血清预处理K562细胞的VEGF蛋白分泌量显著下降（P<0.01）,而且VEGF表达随着作用药物浓度的增大而递减。【结论】 VEGF在CML慢性期、急变期的含量增高,可能与CML的发病、进展及预后有关;大黄蛰虫丸可抑制慢性粒细胞白血病K562细胞VEGF的表达,使蛋白表达量下降,且呈浓度依赖性。     

SPARC和Tiam1基因在HL-60与K562髓系白血病细胞株中的表达及其意义

目的：探讨SPARC和Tiam1基因在人早幼粒细胞白血病细胞株（HL-60）与人慢性粒细胞白血病细胞株（K562）中的表达的水平及其意义.方法：常规细胞培养,取在对数生长期的HL-60、K562细胞进行mRNA抽提;以HUVEC细胞的mRNA作为对照组,逆转录后采用实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）法检测SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中mRNA的表达水平.结果：①SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中均为低表达;②SPARC和Tiam1在HL-60、K562细胞中的表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;③SPARC与Tiam1在HL-60细胞中的表达呈负相关（r=-0.886,P＜0.01）;SPARC与Ti-am1在K562细胞中的表达无相关关系（r=-0.086,P=0.872）.结论：在髓系白血病中,评价SPARC与Tiam1的表达水平可能具有一定的预后价值;在急性早幼粒细胞白血病中,SPARC和Tiam1可能通过共同的信号通路调控下游基因.     

野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制

目的:研究重组腺病毒介导的野生型?53基因(AdSmp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(AdSGFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.Western Blot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72 h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而AdSmtp53感染组和AdSGFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白町能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖.     

5,7-二甲氧基黄酮对K562细胞凋亡和livin基因表达的影响

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(DMF)诱导慢性髓性白血病(CML)急变期细胞系K562细胞凋亡和调控livin基因表达作用。方法:体外培养K562细胞系细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。RT-PCR检测livin基因mRNA表达。Western blot分析livin蛋白表达。结果:DMF(5、10、20μM)增高K562细胞凋亡率,呈浓度依赖性(P<0.05)。DMF有效降低K562细胞livin mRNA和蛋白表达水平。结论:DMF诱导K562细胞凋亡作用与其下调livin基因表达相关。     

辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响.辛伐他汀处理K562细胞48 h,流式细胞仪检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)浓度,免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达.RT-PCR测定c-junmRNA表达.结果:Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48-72h能诱导其凋亡.辛伐他汀作用K562细胞后,与对照组比较,处理组细胞内ROS明显升高.辛伐他汀处理K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调,c-jun mRNA 表达上调.结论:辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态,细胞氧化应激,下调突变P53蛋白表达,上调c-jun 表达诱导K562细胞凋亡.     

原位逆转录PCR检测干细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的：探索应用原位逆转录PCR（RT－PCR）检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法：在普通的PE480型PCR仪进行原位RT－PCR，检测干细胞因子mRNA在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果：直接法和间接法原位RT－PCR法可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达，而常规的原位杂交则为阴性。结论：（1）干细胞因子在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达，但是表达量较低，应用原位RT－PCR可进行检测；（2）在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR。     

原位逆转录PCR检测千细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性.方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达.结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性.结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR.     

Preliminary Research on the p53 Gene Rearrangements in the Evolution of Chronic Myelogenous Leukemia to Blast Crisis

ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｐ５３ＧｅｎｅＲｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅＥｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＣｈｒｏｎｉｃＭｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓＬｅｕｋｅｍｉａｔｏＢｌａｓｔＣｒｉｓｉｓＣＨＥＮＪｉｎｇ－ｃｈｕｎ（陈敬春）；ＬＩＵＳｈｕ...     

PTTG、c-myc基因在慢性粒细胞白血病中的表达

目的:检测垂体瘤转化基因(PTTG)在慢性粒细胞白血病(CML)患者中不同临床阶段的基因表达,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法:采用RT-PCR方法检测34例CML患者(慢性期16例,加速期11例,急变期7例)及10例对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)中PTTG和c-myc基因的表达。结果:10例对照者中未检测到PTTG和c-myc基因的表达,34例CML患者中PTTG和c-myc基因在慢性期、加速期、急性变期的表达明显高于对照者(P<0.05),PTTG在加速期和急变期的表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。c-myc基因在急变期的表达明显升高(P<0.05)。结论:PTTG和c-myc基因的过度表达可能和CML的发生发展有关。     

肝细胞癌肿瘤抑制基因P53改变及其与乙型肝炎病毒关系的研究

肝细胞癌肿瘤抑制基因Ｐ５３的改变有着显著的地理差异。应用地高辛标记探针原位杂杂，ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分别检测重庆地区高感染、黄曲霉素中等含量３８例ＨＣＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ及Ｐ５３的基因突变，并应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对其中的１２例进行限制性片段多态性分析。     

PTEN基因对慢性粒细胞白血病Survivin、Xiap、Smac调控的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病(CML)中生存素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(Xiap)、线粒体促凋亡蛋白(Smac)调控的作用.方法(1)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞周期及凋亡率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA水平变化,Western印迹检测PTEN蛋白表达水平的变化.(2)研究10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)及10名健康人(NC)骨髓单个核细胞内PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平变化.结果 以感染复数(MOI)=200转染K562细胞后,Ad-PTEN-GFP组K562细胞最大增殖抑制率为38.6％,转染3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平(0.0700±0.0059、0.0089±0.0006、0.0600±0.0039)均明显低于Ad-GPF组(0.4370±0.0790、0.0661±0.0072、0.1580±0.0078)和未转染组(0.4530±0.0810、0.0700±0.0079、0.1770±0.0085),转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP相比Survivin mRNA表达水平降低6.14倍、Xiap降低7.44倍,而Smac mRNA降低2.95倍(均P＜0.01).CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及健康对照组,而Survivin、Xiap、Smac mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及健康对照组(均P＜0.01).结论 Survivin、Xiap、Smac基因可能在PTEN介导的慢性粒细胞白血病细胞凋亡通路中参与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用.     

类高雪氏细胞在慢性粒细胞白血病中的意义

目的：探讨慢性粒细胞白血病（CML）骨髓中出现类高雪氏细胞的意义。方法：利用形态学及细胞化学染色检查94例CML患者和63例类白血病反应患者的骨髓涂片;检测49例CML患者骨髓的Ph染色体;分析94例CML患者出现急变期或加速期的情况。结果：94例CML患者的骨髓涂片中有29例找到类高雪氏细胞,而类白血病反应患者的骨髓涂片中未找到类高雪氏细胞;CML患者Ph染色体的阳性率为91．8％（45／49）;65例无类高雪氏细胞的CML有21例处于急变期或加速期（急性期17例,加速期4例）,而9例有类高雪氏细胞的CML有2例发生急变,两组间有显著差异（P＜0．01）。结论：类高雪氏细胞的出现对CML的诊断及预后有重要价值。     

BCR/ABL基因转录水平与慢性粒细胞性白血病病程关系的探讨

应用细胞原位杂交方法,对29例处于不同病期的慢性粒细胞性白血病(慢粒)患者肿瘤细胞中BCR/ABL融合基因的转录水平进行研究。结果发现,急变期组(n=5)和加速期组(n=7)患者的白血病细胞中该融合基因的转录水平明显高于慢性期患者组(n=17)(P<0.01),而急变期组和加速期组之间该mRNA的水平无显著差异。结果提示,白血病细胞中BCR/ABL融合基因的转录水平与病程进展关系密切,采用细胞原位杂交的方法检测白血病细胞中BCR/ABL融合mRNA的水平,不仅可用于慢粒及慢粒急变的辅助诊断,而且可早期预测急变的发生。