HPLC-ELSD法同时测定知母药材中5种成分的含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射检测方法(HPLC-ELSD)建立同时测定知母药材中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、宝藿苷Ⅰ及知母皂苷AⅢ的含量测定方法。方法采用Agilent poroshell 120 EC-C₁₈柱,流动相采用乙腈-0.2%醋酸水系统,梯度洗脱;柱温为30℃,流速为0.7 ml/min;蒸发光散射检测器以氮气为雾化气,雾化气温度为40℃,漂移管温度为90℃,氮气体积流量为2.0 L/min;进样量为20μl。结果 5种成分均能达到基线分离,新芒果苷24.1～386μg/ml(r=0.999 3)、芒果苷23.2～371μg/ml(r=0.998 6)、知母皂苷BⅡ54.2～867.2μg/ml(r=0.995 6)、宝藿苷Ⅰ5.3～84.8μg/ml(r=0.996 8)、知母皂苷AⅢ10～160μg/ml(r=0.998 9)的浓度范围内呈现良好的线性关系。5种成分的平均加样回收率在101.8%～105.0%之间,重复性RSD小于2.4%,知母药材中上述5种成分含量分别为1.62%、0.82%、7.36%、0.07%、0.34%。结论该方法...     

HPLC-ELSD内标法测定知母药材中菝葜皂苷元含量

目的:建立 HPLC—ELSD 内标法,测定知母药材中菝葜皂苷元含量。方法:采用胆同醇为内标,Kromasil C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇为流动相,流速1 mL·min~(-1)。柱温为30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,蒸发温度为70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×10~5Pa。结果:菝葜皂苷元进样浓度存0.02～0.50 mg·mL~(-1)内,进样量的常用对数与对照品峰和内标峰面积比值的常用对数成良好线性关系(r=0.9995);平均回收率(n=5)为96.3%,RSD 为2.1%。结论:建立的内标方法准确、快速,是控制知母药材质量较理想的方法。对我国北方主要知母产地药材中菝葜皂苷元含量测定和比较表明不同产地野生知母质量差异较大。     

知母中知母皂苷BⅡ的TLC鉴别及HPLC法含量测定

目的:建立知母药材中知母皂苷BⅡ的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。方法:TLC 法,展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,显色剂:10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。HPLC 法,色谱柱:HiQ-sil C_(18)(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水(53:47),流速:0.8 mL·min~(-1),检测:蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度:100℃,气体流速:2.6L·min~(-1)。结果:3批药材中知母皂苷 BⅡ成分的 TLC 分离效果均较好,HPLC 法测得知母皂苷 BⅡ的平均回收率为97.7%,RSD 为1.8%。结论:该方法准确可靠,可用于知母药材质量控制。     

HPLC法测定知母中知母皂苷BⅢ的含量

目的:建立 HPLC 法测定知母药材中知母皂苷 BⅢ含量。方法:采用 Agilent C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(26:74),检测波长为210 nm,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为33℃。结果:知母皂苷 BⅢ在18.4～172.5μg·mL~(-1)内呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.4%(n=6)。结论:本法可用于知母皂苷 BⅢ的定量分析。     

知母商品药材中的皂苷类成分含量测定

目的：考察市场流通商品知母药材的品质。方法：采用高效液相-蒸发光散射法测定不同流通地区的商品知母药材中皂苷类成分的含量、结果：知母皂苷E1、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B、知母皂苷AⅢ的平均回收率分别为100．31％（RSD为1．93％）、99．22％（RSD为1．72％）、101．80％（RSD为2．04％）、101．54％（RSD为1．76％），4种皂苷类成分的含量之和为4．4502％～6．2854％。结论：知母商品药材中皂苷类成分含量存在一定的差异，其品质差异的影响因素有待进一步考察。     

HPLC-CAD同时测定知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量

目的:建立HPLC-CAD方法同时测定知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量.方法:采用Acclaim-C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm,3 μm),以乙腈(A )-0.2％醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,15％A → 21％A;10～12 min,21％A → 23％A,12～30 min...     

用HPLC-ELSD法同时测定不同产地知母饮片中芒果苷、新芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量

目的:建立测定知母药材中芒果苷、新芒果苷和知母皂苷BⅡ含量的HPLC-ELSD方法。方法:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A相)-水(用冰醋酸调节至pH3.3)(B相);梯度洗脱:0~15 min,5%~22%A相;15~24 min,22%~23%A相;24~45 min,23%~50%A相。检测波长:254 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;进样量20μl。ELSD条件为:漂移管温度40℃,载气(空气)压力350 kPa,增益值7,气体流量9 L/min。结果:芒果苷、新芒果苷和知母皂苷BⅡ分别在81.1~486.6μg/ml(r=0.999 8)、81.6~489.6μg/ml(r=0.999 9)和192.2~1 153.0μg/ml(r=0.999 7)范围内线性关系良好;平均回收率分别为98.75%、101.83%和99.14%;RSD分别为2.03%、2.87%和1.77%。结论:该方法简便、准确,重复性好,适用于知母药材饮片的质量控制。     

HPLC-ELSD法同时测定心灵丸中六种皂苷类成分的含量

摘 要 目的：建立高效液相色谱联合蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）同时测定心灵丸中三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1 、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的含量。方法: 采用HPLC ELSD法,Agilent Eclipse XBD C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈(A) 水(B),梯度洗脱,流速：1.0ml·min 1,柱温：20℃,漂移管温度：60℃,载气压强：4.00 bar。结果: 三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1 、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的质量浓度分别在0.30~6.00μg(r=0.999 5) 、1.14~22.80 μg ( r=0.999 6)、0.17~3.40 μg (r=0.999 7)、0.81~16.20 μg (r=0.999 7)、0.08~1.60 μg (r=0.9998)、0.07~1.40 μg (r=0.999 8) 内与峰面积呈良好的线性关系。三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的平均加样回收率分别为98.23%、97.98%、99.14%、99.15%、98.72%、98.37%,RSD分别为1.56%、1.31%、1.16%、1.07%、0.73%、0.92%（n=6）。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于心灵丸中皂苷类多成分的质量控制研究。     

HPLC-ELSD测定酸枣仁汤不同配伍情况下酸枣仁皂苷A和B的含量

目的:建立HPLC-ELSD测定酸枣仁汤不同配伍情况下各组方中酸枣仁皂苷A和B含量的方法。方法:采用GraceBrava C18-BDS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,柱温25℃;ELSD参数:漂移管温度100℃,载气流速2.9 L.min-1。结果:酸枣仁皂苷A和B浓度分别在49.50～900.0"g.mL-1和20.40～407.2"g.mL-1范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为101.9%(RSD=2.3%)和100.7%(RSD=3.0%)。结论:酸枣仁与其他药味配伍后,酸枣仁汤中酸枣仁皂苷A和B的含量发生一定变化,其他药味的存在不同程度地影响其溶出。     

基于水通道蛋白的知母利水功效研究

目的 通过建立水负荷模型,观察不同剂量知母水提物对大鼠尿量及水通道蛋白（AQP）相关指标的影响,探究其利水功效。方法 将实验动物分为对照组、模型组和知母水提物高、中、低剂量（4.56、3.04、1.52 mg/kg）组,置于代谢笼中,每天9：00时ig给药,对照组和模型组给予等体积蒸馏水,连续3 d,记录每日饮水量、日间8 h尿量、夜间12 h尿量。第4天除对照组外其余各组大鼠ip生理盐水5 mL,同时ig生理盐水5 mL,连续收集6 h尿量,分别记录0~2、2~4、4~6 h尿量。水负荷实验结束后,取各组大鼠的气管、肝脏、肾脏、大肠、小肠、胰腺、心脏、肺脏、唾腺。酶联免疫法检测气管中AQP3、AQP4,肝脏中AQP9,肾脏中AQP2,小肠中AQP4,大肠中AQP2,胰腺中AQP3,心脏中AQP1,肺脏中AQP3、AQP4,唾腺中AQP5蛋白表达。结果 高剂量知母水提物的利水作用起效较慢,与对照组比较,正常大鼠第2、3天夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,高剂量组水负荷大鼠2~4、4~6 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,气管AQP4、肝脏AQP9、肾脏AQP2、胰腺AQP3、心脏AQP1蛋白表达均显著下降（P<0.05、0.01）;中剂量利水作用起效较快,与对照组比较,正常大鼠第1天日间8 h尿量、夜间12 h尿量显著增加（P<0.05、0.01）;与模型组比较,中剂量组水负荷大鼠0~2、2~4 h尿量及总尿量均显著增加（P<0.05）,小肠AQP4,肺脏、气管AQP3,心脏AQP1蛋白含量显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,知母水提物低剂量组的水负荷大鼠肺、小肠AQP4,大肠、气管AQP3和肝脏AQP9的蛋白表达显著降低（P<0.05、0.01）。结论 知母水提物通过抑制AQP的表达,抑制机体对水的重吸收,起到利水作用。     

知母皂甙E1和E2

应用硅胶柱色谱、高效液相色谱等分离手段,从中药知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)分离得到2种新的呋甾皂甙,经光谱(IR,ESI MS,¹HNMR,¹³HNMR)分析和化学反应,鉴定其结构分别是:(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-β-呋甾-3β,15α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙(1),(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-3β,15α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙(2)。(1)是新化合物,命名为知母皂甙E1;(2)是(1)的甲醚化人工产物,命名为知母皂甙E2。对知母皂甙-I(A)的结构分析作了简单说明。     

知母总多糖的含量测定

目的 :测定知母根茎、根、叶中的总多糖含量。方法 :苯酚—硫酸比色法。结论 :知母根茎中总多糖含量较高 ,同一生长期、不同产地知母根茎中含量存在较大差异。     

HPLC-ELSD法测定白果中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C

目的建立HPLC-ELSD法同时测定白果药材中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C 3个萜杏内酯成分。方法采用Agilent 5TC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇–四氢呋喃–水(25∶10∶65)为流动相,体积流量1 m L/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器检测,对照品进样量为10、20μL,供试品溶液进样量为5~20μL。结果银杏内酯A在0.37~5.92μg、银杏内酯B在2.8~44.8μg、银杏内酯C在0.65~10.4μg时线性关系良好。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C平均回收率分别为92.40%、95.03%、91.29%,RSD值分别为2.75%、2.06%、2.88%。结论本法操作简单,重复性好,为白果药材的质量控制提供了依据。     

知母盐炙前后体外降血糖作用的研究

目的利用Caco-2细胞模型比较知母盐炙前后的降血糖作用,并考察其作用机制,为盐知母炮制原理的阐明提供依据。方法建立Caco-2单层细胞模型,采用CCK-8细胞活力试剂盒检测5 000、2 500、500、250、50、25、5、2.5、0.5、0.25μg/m L生、盐知母水煎液细胞毒性,来确定药物最大毒性剂量。以蔗糖酶和麦芽糖酶底物,葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖质量浓度,计算抑制率,比较其对Caco-2单层细胞上蔗糖酶和麦芽糖酶活力的影响。葡萄糖吸收实验测定剩余葡萄糖的质量浓度,比较生、盐知母对Caco-2细胞吸收和转运葡萄糖的影响。结果当生、盐知母质量浓度≤250μg/m L时,Caco-2细胞可进行细胞实验。实验选取了50、250μg/m L两个质量浓度。生、盐知母水煎液50、250μg/m L对蔗糖酶、麦芽糖酶活性均有抑制作用,且盐知母水煎液对蔗糖酶、麦芽糖酶的抑制作用均优于生知母。生、盐知母水煎液均有降低细胞对葡萄糖吸收的趋势,且呈现剂量相关性,但效果不显著。盐知母水煎液对葡萄糖吸收的抑制作用略好于生知母(P0.05)。结论盐知母对Caco-2细胞的降糖作用优于生知母,其降糖机制可能主要体现在α-葡萄糖苷酶上,而对葡萄糖吸收作用影响较小。     

HPLC-ELSD法测定川牛膝中两种三萜皂苷的含量

目的：建立川牛膝中2种主要三萜皂苷——川牛膝皂苷A、B的含量测定方法。方法：采用HPLC-ELSD法,Shim-pack VP-ODS C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸水（37∶63）;体积流量为1.0 mL·min^-1;ELSD漂移管温度为105 ℃;载气流速2.8 L·min^-1。结果：3-O-{β-D-吡喃葡萄糖-（1→2）-[α-L-吡喃鼠李糖-（1→3）]-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基}齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（川牛膝皂苷A）和3-O-[α-L-吡喃鼠李糖-（1→3）-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（川牛膝皂苷B）的含量分别为0.47%~1.37%和0.46%~1.32%;线性范围分别为1.0~20.0 μg与0.8~16.0 μg;平均回收率分别为99.72%和97.72%。结论：HPLC-ELSD含量测定方法准确、简便、专属性好,适用于川牛膝的质量评价。     

HPLC-ELSD法测定杏香兔耳风中3个倍半萜内酯的含量

目的:建立HPLC-ELSD法同时测定药材杏香兔耳风中3个倍半萜内酯含量的方法.方法:采用Shim-pack CLC-ODS C18色谱柱 (150 mm×6.0 mm, 5 μm ) 以甲醇-2 %醋酸为流动相,梯度洗脱,蒸发光散射检测器 (ELSD) 检测.结果:被测定峰能够与其他组分达到基线分离,成分为8α-hydroxy-11αH-11,13-dihydro-zaluzanin C-3-O-β-D-glucopyranoside (1)、8α-hydroxy-11αH-11,13-dihydro-zaluzanin C (2) 和 zaluzanin C-3-O-β-D-glucopyranoside (3) 的线性范围分别为0.78～7.80 μg、0.46～4.64 μg和0.44～4.36 μg,平均回收率分别为103.5%、104.7%和98.9%, RSD分别为0.28%、0.13%和0.13%.结论: 该方法简便、准确,分离效果好,可用于对药材杏香兔耳风进行质量评价.     

HPLC-ELSD法检查抗感颗粒中山银花皂苷类成分

目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定方法,对抗感颗粒进行山银花检查。方法 以山银花中两种专属三萜皂苷—灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙作为指标成分,采用Thermo Hypersil Gold C₁₈色谱柱（4.6 mm*250 mm,5 μm）,以水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温32 ℃,体积流量1.0 mL·min^-1,蒸发光散射检测器检测（漂移管温度90 ℃,雾化器温度60 ℃,N₂载气流速1.6 L·min^-1）。结果 在收集的53批样品中,49批样品检出了至少1种山银花专属三萜皂苷,存在以山银花投料的情况。结论 建立的方法准确、可靠、专属性强,可用于检查抗感颗粒中山银花的使用情况。     

HPLC-ELSD 法测定不同产地茯苓中茯苓酸的含量

目的:建立茯苓中茯苓酸的含量测定方法,比较12个不同产地茯苓中有效成分茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据。方法:采用反相高效液相色谱蒸发光散射法（HPLC-ELSD）,Kromasil 100-5C₁₈色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,柱温30℃,流动相为乙腈-0.2%甲酸（78:22）,流速1.0ml·min^-1,蒸发光检测器漂移管温度:40℃,压力:3.5bar。结果:茯苓酸在0.488～2.440μg范围内线性关系良好（r=0.999 8）,回收率试验平均为100.05%,RSD=0.47%;12个不同产地茯苓中茯苓酸的含量差异较大。结论:该方法简便、稳定、专属、可靠性强,可用于比较不同产地茯苓有效成分茯苓酸的含量,能有效评价各地茯苓药材的质量。     

具有酪氨酸酶抑制活性的丹参有效成分筛选研究

目的 筛选丹参中对酪氨酸酶活性具有抑制作用的有效成分。方法 基于受试物抑制酪氨酸酶催化底物L-多巴的反应原理,将丹参经80%乙醇提取后依次经石油醚、氯仿、醋酸乙酯、饱和正丁醇和水5种不同极性溶剂萃取,分别检测各提取部位对酪氨酸酶活性的抑制作用;并通过UPLC-MS/MS技术鉴定活性最强提取部位化学成分,结合分子对接技术预测各成分潜在活性,并通过酶学检测验证。结果 丹参氯仿萃取层具有较强的酪氨酸酶抑制活性。其生物活性与丹参素、原儿茶醛等6种成分有关,酶学检测验证结果与筛选结果一致。结论 丹参中丹参素和原儿茶醛等成分对酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用。