硫化氢上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法氧化低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞诱导泡沫化,H2S供体硫氢化钠处理细胞,测定胆固醇流出率,高效液相色谱测定细胞内游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)和总胆固醇(TC)浓度。实时定量PCR和蛋白印迹法检测泡沫细胞中ABCA1mRNA和蛋白表达。结果与泡沫细胞组相比,外源性H2S以时间和浓度依赖的方式增加泡沫细胞胆固醇流出(P<0.05),降低细胞中TC、FC和CE及CE/TC水平(P<0.05),上调细胞中ABCA1表达。结论外源性H2S上调泡沫细胞中ABCA1表达,促进胆固醇流出。     

炎性细胞模型中姜黄素对胆固醇逆转运蛋白ABCA1和ABCG1基因的影响

目的 探讨炎性反应模型中,姜黄素对胆固醇逆转运蛋白基因表达的影响。 方法 将RAW264.7细胞分为6组:空白对照组,姜黄素10 μmol/L组,姜黄素20 μmol/L组,脂多糖(LPS)组,姜黄素10 μmol/L+LPS组和姜黄素20 μmol/L+LPS组。应用荧光定量PCR检测各组中RAW264.7细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、腺苷三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达情况。 结果 LPS刺激可显著上调RAW264.7细胞ABCA1和TNF-α基因的表达(P<0.05),下调ABCG1基因的表达(P<0.05);姜黄素处理后可进一步上调ABCA1基因的表达(P<0.05),但是对ABCG1和TNF-α基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 在炎性反应条件下,姜黄素可进一步上调胆固醇逆转运关键基因ABCA1的表达,这可能是其抗动脉硬化的分子机制之一。     

普伐他汀与罗格列酮联合作用对巨噬细胞ABCA1表达的影响

目的 观察普伐他汀与罗格列酮联合应用对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响.方法 THP-1细胞经160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育24 h,诱导分化成巨噬细胞,分别与10.0 μmol/L普伐他汀及10.0 μmol/L罗格列酮单独或联合作用24 h,提取各组细胞总RNA和蛋白质,分别采用RT-PCR和 Western Blot检测ABCA1的 mRNA和蛋白的表达.结果 普伐他汀增强PPARγ mRNA表达,但抑制LXRα mRNA表达(P<0.05),对ABCA1的表达不产生明显效应(P>0.05); 罗格列酮单独或与普伐他汀联合作用均可引起ABCA1表达明显增加,同时PPARγ及LXRα mRNA 表达亦上调(P<0.05).结论 普伐他汀与罗格列酮联合应用能增强巨噬细胞ABCA1的表达.     

小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的 观察不同浓度小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 佛波酯（PMA）刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞后经乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)诱导泡沫化,建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。根据小檗碱干预与否及干预浓度将泡沫细胞分为空白对照组和小檗碱（5~20 μmol/L）干预组。细胞经分组处理24 h后,流式细胞仪检测AcLDL聚集量;酶法检测胆固醇和乙酰甘油含量;闪烁计数法检测各组胆固醇流出率,同时分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662预处理对胆固醇流出率的影响（以吡格列酮作为阳性对照）;RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1) mRNA表达。结果 与空白对照组比较,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞内AcLDL聚集量及胆固醇和乙酰甘油含量均显著减少（P＜0.01）,而胆固醇流出率上升（P＜0.01）,并呈现一定的量效关系。GW9662预处理后,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞的胆固醇流出率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞LXRα和ABCA1 mRNA表达均高于空白对照组。结论 小檗碱可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出量,其作用机制可能与激活PPARγ途径,增加LXRα和ABCA1 mRNA表达有关。     

载脂蛋白A-I模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的:观察载脂蛋白A-I(apoA-I)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制.方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107 Bq/孔 3H -胆固醇和含50 μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育 24 h后,给予不同浓度的D-4F(0～100 μg/mL)干预24 ...     

小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的 观察不同浓度小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 佛波酯(PMA)刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞后经乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)诱导泡沫化,建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型.根据小檗碱干预与否及干预浓度将泡沫细胞分为空白对照组和小檗碱(5～20 μmol/L)干预组.细胞经分组处理24 h后,流式细胞仪检测AcLDL聚集量;酶法检测胆固醇和乙酰甘油含量;闪烁计数法检测各组胆固醇流出率,同时分析过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662预处理对胆固醇流出率的影响(以吡格列酮作为阳性对照);RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1) mRNA表达.结果 与空白对照组比较,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞内AcLDL聚集量及胆固醇和乙酰甘油含量均显著减少(P＜0.01),而胆固醇流出率上升(P＜0.01),并呈现一定的量效关系.GW9662预处理后,不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞的胆固醇流出率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).不同浓度小檗碱干预组泡沫细胞LXRα和ABCA1 mRNA表达均高于空白对照组.结论 小檗碱可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出量,其作用机制可能与激活PPARγ途径,增加LXRα和ABCA1 mRNA表达有关.     

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的：观察载脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法：巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×10^7Bq/孔3H-胆固醇和含50μg/mL氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）共同孵育24h后,给予不同浓度的D-4F（0～100μg/mL）干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的mRNA及蛋白表达。结果：D-4F呈浓度依赖及时间依赖性促进巨噬细胞内胆固醇流出,增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1mRNA和蛋白表达。8-Br-cAMP显著增加D-4F介导的胆固醇流出和ABCA1表达,而蛋白激酶A（PKA）抑制剂虽然对基础胆固醇流出及ABCA1表达几乎无作用,却可以抑制8-Br-cAMP对胆固醇流出和ABCA1表达的促进作用。结论：D-4F促进巨噬细胞胆固醇流出,cAMP释放及ABCA1表达,可能与激活cAMP-PKA-ABCA1通路有关。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞ABCA1表达的影响

目的 研究辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与0μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的辛伐他汀温育24h。采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞技术分别检测人脐静脉内皮细胞的ABCA1的mRNA及蛋白表达水平。 结果 随着给药浓度的增加,人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达逐步升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 辛伐他汀的调脂途径可能与其上调人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达有关。     

高密度脂蛋白对内皮细胞胆固醇流出的影响

目的 研究高密度脂蛋白(HDL)和氧化高密度脂蛋白(OX-HDL)对人脐静脉内皮细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆同醇流出的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并分别与100μg/ml HDL或100μg/ml ox-HDL温育24 h.设PBS为对照组.采用RT-PCR、液体闪烁计数法分别检测人脐静脉内皮细胞ABCA1的mRNA水平及细胞内胆固醇流出功能.结果 HDL组及ox-HDL组的ABCA1 mRNA表达水平分别较埘照组增高58%和23%.差异有统计学意义(P<0.05);ox-HDL组较HDL组的胆同醇流出率显著降低(P<0.01).结论 HDL可显著上凋人脐静脉内皮细胞的ABCA1表达并介导内皮细胞胆固醇流出;HDL经氧化修饰后对ABCA1表达的上调作用减弱.引起内皮细胞胆同醇外排障碍,是HDL氧化修饰后促进动脉粥样硬化发展的可能机制之一.

Abstract：

Objective To study the effects of high-density lipoprotein (HDL) and oxidized high-density lipoprotein (ox-HDL) on the expression of ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) and cholesterol efflux in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods In vitro cultured HUVECs were incubated in the presence of 100 μg/ml HDL or 100 μg/ml ox-HDL for 24 h, using PBS as the negative control. ABCA1 mRNA level and cholesterol efflux rate were determined using RT-PCR and a liquid scintillator, respectively. Results HDL and ox-HDL significantly elevated the level of ABCA1 mRNA by 58% and 23% relative to the control level, respectively (P<0.05). The cholesterol efflux rate in ox-HDL group was significantly lower than that in HDL group (P<0.01). Conclusion HDL increases ABCA1 expression and cholesterol efflux in HUVECs. Oxidative modification of HDL decrease cholesterol efflux by inhibiting the expression of ABCA1, suggesting a possible mechanism of ox-HDL in the pathogenesis of atherosclerosis.     

阿托伐他汀对巨噬细胞ABCA1表达的影响

目的观察阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响。方法THP-1细胞经160 nmol/L佛波酯（PMA）孵育24 h,诱导分化成巨噬细胞,分别与不同浓度的阿托伐他汀（0、1、10、100μmol/L）作用不同时间（0 h、6 h、12 h、24 h）。提取各组细胞总RNA和蛋白质,分别采用RT-PCR和W esternB lot检测ABCA1的mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,不同浓度的阿托伐他汀与巨噬细胞孵育不同时间组的细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达无统计学差异（P〉0.05）。结论阿托伐他汀对巨噬细胞ABCA1的表达无影响。     

急性肺损伤大鼠肝X受体表达的变化

目的 观察急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织内肝X受体(LXRs)的表达情况,探讨其在ALI炎症调控过程中的可能作用. 方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组:对照组、LPS处理后1h组、2h组、4h组和8h组.用LPS静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS处理1h、2h、4h、8h后处死大鼠,用RT-PCR与Western印迹检测LXRs表达水平,同时测定动脉血气和肺组织湿/干比值(W/D weight ratio). 结果 与对照组小鼠相比,LPS处理组大鼠肺组织W/D较对照组均显著升高;动脉血氧饱和度均显著降低;LXRα/β mRNA的表达在LPS处理2h时开始下降,在2h、4h和8h时差异有显著性;而LXRα/β蛋白的表达在LPS处理4h时开始下降,在4h和8h时差异有显著性. 结论 脂多糖(LPS)所致的ALI大鼠肺组织内LXRs表达显著减少,表明LXRs可能参与了ALI炎症反应的调控.     

血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

目的 以人的血管内皮细胞ECV304为靶点,研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法 复苏培养血管内皮细胞,无血清培养基培养静止12 h后,分别加入Ox-LDL (30 ng/ml)、8-Br-cAMP (0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,设未加刺激同时孵育24 h的细胞为阴性对照组,以RT-PCR和Western蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量。结果 血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高,ICAM-1的高峰时间在12 h,其余高峰时间在6 h;在8-Br-cAMP的刺激下,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高,高峰时间均在6 h。结论 公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加,参与AS的形成,同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加,具有AS保护作用。cAMP不仅可增加ABCA1的表达,而且可增加ICAM-1、MCP-1表达。     

血浆高密度脂蛋白的组成成分在LPS诱导的急性相反应中的改变

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)组成成分在内毒素 (LPS)诱导的急性相反应 (APR)中的改变。方法　家兔静脉注射 1.0mg/kgLPS诱导APR ,反应不同时相血浆超离心制备的HDL通过分子筛色谱分析其分子大小的改变 ,通过SDS PAGE并分析图像以及ELISA等实验手段分析其蛋白成分的变化 ;测定PEG 6 0 0 0化学沉淀分离的反应不同时相HDL胆固醇和三酰甘油含量反映HDL在APR中脂质成分的变化。结果　HDL在LPS诱导的APR中组成成分的改变包括 :①形成颗粒半径比较小的HDL ;②大约 10 %的HDL载脂蛋白A Ⅰ (apoAⅠ )—被一种相对分子质量约为 130 0 0的蛋白置换出来 ,HDL中载脂蛋白 (Apo HDL)的含量随着APR的发展降低 (P <0 .0 5 ) ;③HDL胆固醇含量显著降低 ,同时三酰甘油含量显著升高 (P <0 .0 1)。结论　HDL在HPS诱导的APR中蛋白及脂质成分均发生急剧的改变 ,这种改变尤其是蛋白成分的改变对于HDL在APR中所起的作用可能有重要意义     

电针丰隆穴对高脂血症患者血脂水平及对巨噬细胞ABCA1表达的影响

目的 探究电针丰隆穴对高脂血症患者的降脂疗效及对巨噬细胞与人血清共培养ATP结合盒转运子A1（ATP binding cassette transporter A1,ABCA1）表达的影响。方法 将120例辨证为痰浊阻遏证高脂血症患者,随机分为电针组、药物组与对照组,每组40例。电针组予以电针针刺丰隆穴治疗;药物组予以口服血脂康治疗;对照组不予以特殊处理。观察治疗前后及治疗后3个月、6个月3组患者总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triacylglycerol,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平的变化;分别采用RT-PCR法和免疫印迹法检测3组患者巨噬细胞ABCA1 mRNA及其蛋白的表达水平。结果 药物组和电针组总有效率均高于对照组（P＜0.05）。药物组和电针组治疗后TG、TC、LDL-C水平均较治疗前显著下降（P＜0.05）,两组治疗前后TG、TC、LDL-C水平降低程度显著大于对照组（P＜0.05）,两组TG、TC、LDL-C水平差值比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。电针组治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平与治疗后比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）,药物组治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平均较治疗后显著上升（P＜0.05）;两组治疗后、治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平仍显著低于对照组（P＜0.05）。药物组、电针组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）;两组间ABCA1 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 电针丰隆穴可降低高脂血症患者TC、TG、LDL-C水平,且疗效较药物组稳定,可促进巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白的表达,促进胆固醇逆转运,降低巨噬细胞胆固醇负荷,减轻炎症反应,从而防治动脉粥样硬化性心脑血管疾病。     

口服FDP对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究二磷酸果糖钠（FDP）对D-氨基半乳糖引起的小鼠急性肝损伤的保护作用，并分析其对小鼠肝生化指标的影响。方法 对小鼠连续灌胃FDP3天后，采用腹腔注射D-氨基半乳糖造成小鼠急性肝损害，研究各组小鼠间肝损害的差异，衡量FDP的肝保护作用。同时检测FDP对小鼠生化指标（ALT、T-BIL、Asr）的影响。结果 FDP对肝损伤模型小鼠有一定的保护作用，并可降低血液中ALT、AST和T-BIL的水平。结论 FDP能防止化学物质造成的肝损伤，保护肝功能。     

急性肝功能衰竭大鼠肝组织iNOS的表达及其意义

目的检测急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达,探讨其在ALF中的意义。方法 SD大鼠随机分为3组：对照组给予生理盐水（NS）1ml腹腔注射;实验组予D-氨基半乳糖联合内毒素腹腔注射,复制ALF大鼠模型,分别在6、12h处死大鼠即为ALF6h组（D-6组）和ALF12h组（D-12组）,门静脉采血检测肝功能;留取肝组织标本,免疫组织化学方法检测iNOS,阳性产物灰度值应用图像分析软件半定量分析。结果对照组肝组织iNOS无表达;实验组6、12h肝脏病理呈进展性,肝组织iNOS沿中央静脉及残存小血管高表达,其平均灰度值在D-6组为81.02±5.86,D-12组为130.71±7.16,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ALF大鼠肝组织iNOS高表达;缺氧、微循环障碍可能是诱导iNOS表达的重要因素。     

靶向肝X受体对PD-1单抗治疗原发性肝癌的增敏作用

目的：探索原发性肝癌中肝脏X受体（LXR）与程序性死亡配体1(PD-L1)表达的相关性;明确LXR激动剂（T09）对于PD-1单抗治疗的影响。方法：采用生物信息分析方法分析肝癌中LXR及其下游关键基因ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和PD-L1表达的相关性。采用免疫组化染色在肝癌组织样本中验证LXR和PD-L1蛋白水平表达的相关性。采用慢病毒介导的RNA干扰技术分析肝癌细胞中LXR沉默对PD-L1蛋白水平表达的影响。建立免疫健全小鼠C57BL/6小鼠Hepa1-6肝癌原位瘤移植模型,分别给予T09和（或）PD-1单抗治疗,测量干预3周后的各组皮下瘤体积。结果：生物信息结果显示,LXR(r=0.20,P=0.021)及其下游关键基因ABCA1(r=0.12,P<0.001)表达和PD-L1表达呈正相关。免疫组化结果显示,高表达LXR的患者往往合并PD-L1高表达,两者表达具有相关性,差异有统计学意义（P<0.05）。通过慢病毒介导的RNA干扰技术敲低了肝癌细胞系中LXR的表达后,PD-L1的表达水平亦显著下调。动物实验显示与对照组、T09组、PD-1单抗组相比,T09...     

黄甲软肝颗粒对小鼠急性肝损伤和肝纤维化的保护作用研究

目的：研究黄甲软肝颗粒对D- 氨基半乳糖（D-galactosamine,D-Gal N）诱导小鼠急性肝损伤和刀豆素 蛋白A（concanavalin A,Con A）诱导的小鼠肝纤维化的保护作用。方法：急性肝损伤保护作用实验：84 只ICR 小鼠随机分为阴性对照组、模型组、阳性药组,黄甲软肝颗粒高、中、低剂量组。灌胃给药,每天1 次,连续14 d, 阴性对照组及模型组灌胃同体积去离子水。给药后d 13,除阴性对照组外,其余动物腹腔注射D-Gal N,建立急 性肝损伤模型。于末次给药后60 min,取血并剖检。肝纤维化保护作用实验：96 只BALB/c 小鼠随机分成阴性 对照组、模型组、阳性药组、黄甲软肝颗粒高、中、低剂量组。除阴性对照组以外的动物按照尾静脉注射Con A,阴 性对照组动物注射同体积的无菌PBS,每周注射1 次,共注射7 次。于第4 次注射当天,各组开始灌胃给药,每天 1 次,连续4 w,阴性对照组及模型组灌胃同体积的去离子水,于末次给药后24 小时,取血并剖检。两次实验均 测定血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）,摘取肝脏、脾脏称重计算脏器指数、观察肝脏组织病理改变。结果：急性肝损伤保护作用实验中各给药组 血清ALT、AST 较模型组显著降低、各给药组脾脏指数明显减小、肝损伤程度明显减轻;肝纤维化保护作用实验 中黄甲软肝颗粒高、中剂量组血清ALT、AST 较模型组显著降低,中剂量组肝指数明显减小。结论：黄甲软肝颗 粒对小鼠急性肝损伤和肝纤维化均具有一定的保护作用。