九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡及其机制研究

目的研究九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法用四甲基偶氨唑蓝（MTT）法检测不同剂量九节龙皂苷于不同时间（6、12、24、72h）对人胶质瘤SHG-d4细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Western—blot检测caspase-3和Bcl-2在SHG-44细胞中的表达情况。结果流式细胞仪检测显示,随着九节龙皂苷浓度的增大和时间延长,SHG-44细胞的凋亡率明显上升,Western—blot结果提示九节龙皂苷下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白caspase-3,九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长与增殖。结论九节龙皂苷引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用,通过调控caspase-3和Bcl-2诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡。     

RNA干扰XBP1基因表达对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 设计并合成干扰XBP1表达的小干扰RNA(siXBP1),转染人脑胶质瘤U251细胞,MTT 法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果 siXBP1可有效抑制U251细胞增殖,促进细胞凋亡,Western blot显示,siXBP1上调了U251细胞中促凋亡信号分子Bax及Caspase-3的表达,抑制了U251细胞中抗凋亡信号分子Bcl-2的表达。结论 下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达有望为脑胶质瘤的治疗提供理想的分子靶点。     

太白银莲花皂甙-1抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质瘤U251细胞生长的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测太白银莲花皂甙-1对U251细胞增殖的影响;应用倒置显微镜和Hochest33342荧光染色、透射电子显微镜观察细胞形态的变化;通过逆转录酶多聚酶链反应(RTPCR)检测与凋亡相关基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA水平的表达变化,Western blot分析Bcl-2和Bax在胶质瘤U251细胞中蛋白的表达情况。结果 U251细胞经太白银莲花皂甙-1诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在太白银莲花皂甙-1作用下明显呈低表达而Bax mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示太白银莲花皂甙-1作用后,下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达并激活了促凋亡蛋白Bax的表达。结论太白银莲花皂甙-1明显抑制U251细胞的生长活性,且能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。     

抑制miR-301a对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨抑制miR-301a对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养人脑胶质瘤U87细胞,将细胞分为空白对照组、阴性转染组(阴性序列转染U87细胞)、miR-301a抑制剂转染组(miR-301a抑制剂转染U87细胞)。采用MTT法检测各组细胞的增殖;平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RTPCR法检测细胞中miR-301a、PTEN mRNA表达;Western blot检测细胞PTEN、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9蛋白表达。结果与空白对照组、阴性转染组比较,miR-301a抑制剂转染组转染后不同时间点的细胞抑制率均升高,呈时间依赖性(均P0.05)。miR-301a抑制剂转染组的菌落数量明显降低,迁移距离短,细胞迁移、侵袭数量明显降低,细胞凋亡率升高(均P0.05);miR-301a mRNA表达水平降低,PTEN mRNA表达水平升高;PTEN、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(均P0.05)。结论抑制miR-301a的表达,可抑制胶质瘤U87细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进胶质瘤U87细胞凋亡。     

WISP-2siRNA对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨siRNA沉默WISP-2基因表达对人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡的影响.方法 脂质体介导siRNA转染人脑胶质瘤细胞U251后,检测U251细胞的增殖、凋亡的变化,并用Western blot法检测WISP-2、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 WISP-2 siRNA能有效抑制U251细胞株的生长,诱导凋亡,siRNA干扰组WISP-2蛋白表达水平为(18.67±1.40)％,明显低于空白对照组(70.18±1.82)％和阴性对照组(69.41±1.77)％,且差异有统计学意义(P＜0.01);siRNA干扰组Bcl-2、Bax蛋白表达水平为(29.67±1.47)％、(31.62±1.32)％,明显低于空白对照组和阴性对照组,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 WISP-2 siRNA抑制WISP-2 mRNA和蛋白表达后,能有效抑制胶质瘤细胞的增殖,增加U251细胞凋亡,可能通过下调Bcl-2/Bax蛋白表达的比值来诱导细胞凋亡.     

TRAIL与硝普钠联合诱导胶质瘤细胞株U251凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)与硝普钠(SNP)联合诱导U251细胞凋亡的协同作用.方法 将TRAIL和SNP单药或联合作用于U251胶质瘤细胞系.MTT比色法、流式细胞术检测细胞生长抑制率、凋亡率;Western blot法检测DR5、Caspase-3、Bcl-2、Survivin 蛋白表达.结果 TRAIL和SNP单药组对U251细胞活性均有抑制作用;联合作用组细胞凋亡率明显高于单药组和对照组(P＜0.01),并存在协同作用;联合作用组较对照组DR5、Caspase-3蛋白表达明显上调,Survivin、Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 TRAIL和SNP可显著抑制U251细胞增殖,具有协同细胞凋亡诱导作用.其机制与上调DR5、Caspase-3,下调Bcl-2、Survivin 蛋白表达有关.     

白藜芦醇抑制U251人胶质瘤细胞增殖及其相关机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇（Res）对U251胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法 将不同浓度Res作用于U251胶质瘤细胞系，相差显微镜下观察其形态的变化，MTT法检测其对细胞生长增殖的抑制作用，流式细胞术（FCM）检测其对细胞周期的影响，用蛋白印迹（Western blot）检测Res处理前后U251细胞表皮生长因子受体（EGFR）、p53、p21、CDK4、CyclinD1、Bcl-2及caspase-3的表达，免疫组化分析MMP9、NFKB、P-AKT及AKT2的表达。结果 U251细胞经Res处理后，细胞形态发生一定变化，U251胶质瘤细胞的增殖被抑制，呈浓度和时间依赖性，细胞周期被阻滞在S期，Western blot检测显示EGFR、CyclinD1、CDK4、Bcl-2的表达降低，p21、p53、caspase-3蛋白表达升高，免疫组化检测显示MMP9，NFKB、P-AKT及AKT2的表达降低。结论 Res有可能通过调节EGFR及p53信号通路而抑制U251胶质瘤细胞的增殖和侵袭，诱导肿瘤细胞凋亡。     

HOXA4基因抑制对胶质瘤细胞U251的影响

目的探讨HOXA4在人胶质瘤中的表达水平以及对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过生物信息学分析HOXA4在人胶质瘤中表达情况。选取胶质瘤细胞U251转染HOXA4 siR NA作为si-HOXA4组,抑制HOXA4基因的表达,同时转染阴性对照慢病毒载体作为si-NC组。q RT-PCR和Western blot检测转染后HOXA4基因和蛋白的表达水平。MTT实验、细胞克隆实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测抑制HOXA4基因表达对细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响。Western blot分析HOXA4下游凋亡蛋白P53、Bcl-2、Cytochrome C、Caspase-3的表达。结果与正常脑组织比较,人胶质瘤中HOXA4表达水平明显升高(P0.001)。与si-NC组比较,si-HOXA4组U251细胞的OD值从转染后第4天明显下降(P0.01),第7天下降更为显著(P0.001)。si-HOXA4组U251细胞较si-NC组侵袭细胞数明显减少(P0.01),G0/G1期比例显著升高(P0.05),凋亡率明显升高(P0.05),凋亡蛋白P53、Cytochrome C、Caspase-3表达明显升高,Bcl-2明显下降(P0.05)。结论HOXA4基因在人胶质瘤中高表达,可能通过影响细胞增殖、侵袭、凋亡等生物功能对胶质瘤的发生发展起重要作用。     

华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及凋亡的影响

目的初步探讨华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖、细胞周期分布及凋亡的影响机制。方法利用MTT法、流式细胞仪检测华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及细胞周期变化的影响。AO／EB染色、透射电镜观察人脑胶质瘤细胞SHG44凋亡细胞形态学的变化。Westernblot检测Bcl-2与Caspase8蛋白的表达。结果华蟾素（1μg／ml、10μg／ml）对细胞株增殖具有显著抑制作用（P〈0．05）,并呈时间和浓度依赖性。沆式细胞仪检测可见凋亡峰,Go／G。期细胞明显增多（P〈0．05）;华蟾素作用后可使Bcl-2蛋白表达降低．Caspase8蛋白表达升高。结论华蟾素可调控人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase8差异性表达,且具有抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用。     

重组腺病毒p27kip1诱导脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究

目的研究重组腺病毒介导的p27kip1体外对U251人胶质瘤细胞凋亡的影响。方法构建p27kip1重组腺病毒载体转染U251人胶质瘤细胞为实验组,并设正常对照组、空载体组,采用Western blot法检测相关蛋白的表达;采用Real time PCR法检测相关基因的表达;采用流式细胞仪检测细胞增殖情况。结果 Western blot和Real time PCR结果均显示,实验组细胞经转染72h后,可见Bcl-2表达降低,同时Bax、Caspase3和Fas-L表达增强;流式细胞仪检测转染p27kip1腺病毒后能够抑制胶质瘤细胞的增殖。结论 p27kip1在体外能够抑制U251人胶质瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

Apoptosis in glioma-bearing rats after neural stem cell transplantation

Abnormal activation of the Ras/Raf/Mek/Erk signaling cascade plays an important role in glioma. Inhibition of this aberrant activity could effectively hinder glioma cell proliferation and promote cell apoptosis. To investigate the mechanism of gJioblastoma treatment by neural stem ceiJ trans- plantation with respect to the Ras/Raf/Mek/Erk pathway, C6 glioma cells were prepared in sus- pension and then infused into the rat brain to establish a glioblastoma model. Neural stem cells isolated from fetal rats were then injected into the brain of this glioblastoma model. Results showed that Raf-1, Erk and Bcl-2 protein expression significantly increased, while Caspase-3 protein expression decreased. After transplantation of neural stem cells, Raf-1, Erk and Bcl-2 protein expression significantly decreased, while Caspase-3 protein expression significantly in-creased. Our findings indicate that transplantation of neural stem cells may promote apoptosis of glioma cells by inhibiting Ras/Raf/Mek/Erk signaling, and thus may represent a novel treatment approach for glioblastoma.     

三氧化二砷缓释剂瘤内治疗裸鼠胶质瘤的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用及其作用机制。方法建立胶质瘤裸鼠移植模型,随机分为3组:空白对照组,缓释剂-聚乳酸-羟基乙酸聚合物(50:50)组(PLGA组)、三氧化二砷-聚乳酸-羟基乙酸聚合物(50:50)缓释剂组(As2O3-PLGA组)。As2O3-PLGA组在瘤内置入As2O3-PLGA一片,其他每组均作相同的瘤内置入处理,利用其缓释As2O3的作用观察肿瘤的抑制情况。并用TUNEL法检测移植瘤的细胞凋亡率,用免疫组化染色及Western-blot检测Caspase-3与Bcl-2的蛋白表达。结果PLGA组对肿瘤无明显抑制作用,与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);As2O3-PLGA组能明显抑制裸鼠皮下肿瘤生长(P<0.01),抑瘤率为60.8%。As2O3-PLGA组的肿瘤细胞凋亡率(30.80%)明显高于空白对照组(3.92%)及PLGA组(4.08%)。移植瘤组织中Bcl-2蛋白含量明显减少,Caspase-3蛋白含量明显增加。结论As2O3对体内胶质瘤的生长具有明显的抑制作用,并能诱导肿瘤细胞部分凋亡,其作用的分子机制可能是下调Bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3蛋白表达。     

声动力化学疗法促大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及抗血管作用的实验研究

目的探讨声动力化学疗法(SDT)对大鼠脑胶质瘤细胞凋亡及微血管蛋白表达的关系。方法以大鼠颅内C6胶质瘤为实验模型,观察4组(SDT、US、HMME、对照)处理后脑胶质瘤原位细胞凋亡、Cyt-C蛋白、Caspase-3蛋白表达水平。结果原位凋亡检查见HMME组和对照组凋亡细胞极少,各时间点凋亡率无明显差别。处理后24h,US组凋亡率高于HMME组和对照组;处理后3d、7d,凋亡率与HMME组和对照组无明显差别。SDT组处理后24h,凋亡率明显高于其它3组。处理后3d、7d,凋亡率与其它3组无明显差别。HMME组和对照组各时间点MVD密度、VEGF蛋白表达无明显差别。US组处理后24h,MVD密度、VEGF蛋白表达与HMME组和对照组比较,略下降;处理后3d、7d,2项表达结果与HMME组和对照组无明显差别。SDT组处理后24h MVD密度、VEGF蛋白表达较其它3组明显下降;处理后3d,二者有所升高,但仍较其它3组低;处理后7d,VEGF表达结果与其它3组无明显差别。结论 SDT处理后早期可通过血管靶向作用促进体内胶质瘤细胞凋亡。     

吴茱萸碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡影响的研究

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,并将其分为空白对照组及25、50、100μg/mL吴茱萸碱4组。应用MTT法检测吴茱萸碱对U251细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258荧光染色法检测吴茱萸碱诱导胶质瘤U251细胞凋亡;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组早期凋亡率;Western blot法分析凋亡相关蛋白的变化。结果与空白对照组同期比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱组生长抑制率在24、48、72 h均增加,差异有统计学意义。Hoechst 33258荧光染色显示吴茱萸碱作用24 h后U251细胞出现典型的细胞凋亡特征,各处理组均可见凋亡小体。与空白对照组自发早期凋亡率3.12%比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱组早期凋亡率分别为8.65%、19.47%及28.97%,差异均有统计学意义。Western blot实验显示,与空白对照组同期比较,25、50、100μg/mL吴茱萸碱上调了FAS、FADD、Caspase-8及Caspase-3蛋白表达,Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达明显上升,差异均有统计学意义。上述指标均呈时间和剂量依赖性。结论吴茱萸碱对U251细胞具有明显的抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Fas途径和下调Bcl-2/Bax有关。     

TrkA induces differentiation but not apoptosis in C6-2B glioma cells

Nerve growth factor (NGF) binds to the TrkA tyrosine kinase and the p75 neurotrophin receptors. Depending upon which receptor is activated, NGF can induce differentiation or apoptosis. C6-2B glioma cells express the p75 receptor, but NGF decreases their growth only when TrkA is introduced (C6trk). It is unclear, however, whether TrkA reduces C6-2B cell growth by apoptosis or differentiation. To examine which mechanisms account for the anti-proliferative effect of NGF in these cells, we first analyzed whether NGF causes apoptosis by flow cytometry, two-site immunoassay and in situ TUNEL. None of these methods indicated that C6trk undergo apoptosis. Additional apoptotic markers, such as Bcl-2, Bax, Bad, p53, caspase 3, and NF-kappaB were also used. C6trk cells exhibited lower levels of Bcl-2 compared with the parental C6 mock cells, but no changes in the levels of other apoptotic proteins. Moreover, NGF increased AP-1 binding activity in C6trk cells, suggesting that NGF may induce differentiation. We then examined whether TrkA changes the glioma phenotype. In C6trk cells, but not in C6mock cells, NGF enhanced the levels of neuron-specific enolase as well as the levels of A2B5 and 2', 3'-cyclic nucleotide 3'-phosphodiesterase, markers for oligodendrocytes, without affecting the expression of other neuronal markers. Our data suggest that the antiproliferative properties of TrkA may rely on its ability to induce differentiation of C6 cells from undifferentiated glioma to oligodendrocytes.     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

大鼠脑创伤后海马CA3区细胞凋亡及相关基因表达研究

目的研究弥漫性脑损伤后不同时间,大鼠海马CA3区细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况,探讨脑创伤后神经细胞凋亡的分子生物学机制.方法应用流式细胞仪和免疫组化法,分别检测脑创伤后不同时间海马CA3区细胞凋亡率及Bcl-2,Bax和Caspase-3基因在蛋白质水平的表达情况.结果脑创伤后海马CA3区存在不同程度细胞凋亡,Bcl-2在脑损伤后表达下降,而Bax和Caspase-3在脑创伤后表达升高;Caspase-3表达的峰值时间(72 h)出现在Bax之后(48 h).结论弥漫性脑损伤后,大鼠海马CA3区存在细胞凋亡及Bcl-2,Bax和Caspase-3的表达变化.Bcl-2/Bax表达比值下降早于Caspase-3的上升,Bcl-2/Bax表达比值改变可能与Caspase-3活化有关,进而启动并加重脑损伤后神经细胞凋亡.     

华蟾素诱导人胶质瘤U87细胞凋亡的作用机制研究

目的 探讨华蟾素(Cinobufacini)对人胶质瘤U87细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U87细胞分为对照组、华蟾素组(依华蟾素水平不同分为3个亚组),MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤U87细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平。结果 华蟾素对胶质瘤U87细胞增殖有抑制作用; 流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测显示,随着华蟾素作用浓度的递增,胶质瘤U87细胞凋亡率呈剂量依赖性递增; 华蟾素作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平升高。结论 华蟾素通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平来抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进其凋亡。     

microRNA-183通过下调Bcl-2诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的研究microRNA-183对神经母细胞瘤细胞的调控作用,为神经母细胞瘤的治疗提供新策略。方法购买microRNA-183和对照microRNA,转染至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,再使用MTT实验,Caspase-3活性测定试剂盒和流式检测细胞生长和凋亡的影响。合成Bcl-2siRNA,检测Bcl-2对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的影响。转染Bcl-2质粒后,再转染microRNA-183至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,分析Bcl-2的表达水平和人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞的凋亡。结果转染microRNA-183降低SK-N-SH细胞的生长(P=0.005 9),发生磷脂酰丝氨酸膜表面表达(P=0.008)和Caspase-3的激活(P=0.014),Bcl-2的表达降低(P=0.015)。干扰SK-N-SH细胞中Bcl-2增强了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.005 8),而过表达Bcl-2抑制了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.007 3)。结论转染microRNA-183抑制SK-N-SH细胞的生长和增殖。microRNA-183通过下调Bcl-2而诱导SK-N-SH细胞的凋亡,提示Bcl-2可能是神经母细胞瘤潜在的候选治疗靶点。