人硫氧还蛋白及其变异体对TF-1和NFS60细胞的凋亡抑制和促增殖效应

目的:比较rhTRX与rhTRXδ3对细胞因子依赖株TF-1细胞、NFS60细胞撤除细胞因子所诱导凋亡的抑制及促细胞增殖作用.方法:在大肠杆菌中克隆并表达重组hTRX和hTRXδ3,纯化rhTRX与rhTRXδ3蛋白,FACS检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖.结果:在依赖IL-3、GM-CSF生长的TF-1细胞(人红白血病细胞)和依赖G-CSF生长的NFS60细胞(小鼠白血病细胞)撤除细胞因子后,加入rhTRXδ3比加入rhTRX能更有效地抑制这两种细胞的凋亡并有促增殖的作用.结论:重组hTRX和hTRXδ3有着不同的生物活性,rhTRXδ3有着更强的抑制这两种细胞的凋亡和促增殖的作用.     

硫氧还蛋白在凋亡途径中的作用机制

硫氧还蛋白(Trx)是体内广泛存在的氧化还原蛋白,其家族中两种重要的硫氧还蛋白:硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)和硫氧还蛋白2(thioredoxin2,Trx2)都含有保守的-Cys-Gly-Pro-Cys-还原序列。由于Trx具有调节细胞生长增殖和抗凋亡的作用,因此Trx在凋亡途径中的作用机制就成为了对抗肿瘤的研究热点。     

硫氧还蛋白对缺氧／复氧海马神经元生长与凋亡的影响

目的 :探讨硫氧还蛋白 (Thioredoxin ,Trx)在大鼠海马神经元缺氧 /复氧损伤中对神经元生长与凋亡的作用。方法 :①海马神经元培养和缺氧实验。取当天出生的SD大鼠 ,在无菌条件下断头取脑 ,分离双侧海马 ,参照文献进行鼠海马神经元的培养 ;取培养 10d的海马神经元 ,参照文献进行缺氧实验 ,在缺氧条件下继续培养 3h ,部分细胞在缺氧 3h后迅速更换新鲜培养液 ,在正常供氧环境下分别继续培养 12h、2 4h或 48h ,同时设置未缺氧的正常海马神经细胞作为对照。②Trx干预。取培养 10天的海马神经元 ,加入 2 0 μg/ml的Trx ,作用 1h后如上操作开始诱导缺氧 /复氧 ,如上设定时点终止培养。③细胞活力测定和caspase -3活性测定。采用MTT法测定细胞活力 ,caspase-3活性按照说明书进行操作。实验数据以 x±s表示 ,用ANOVA进行分析处理。 结果 :与正常对照组相比 ,缺氧 /复氧组2 4/4 8h时点细胞存活率显著降低 (P <0 .0 0 1) ,Trx处理组的细胞活力也进行性下降 ,但与缺氧 /复氧组相比 ,2 4/4 8h时点细胞存活率明显提高 (P <0 .0 5 ) ;但与正常对照组相比 ,Trx处理组的细胞活力仍降低 (P <0 .0 5 ) ;在缺氧 /复氧组在复氧 12～ 48h ,caspase -3样蛋白酶活性明显增高 ,以复氧 2 4h为最高 (P <0 .0 0 1) ,在Trx处理组 ,神     

人硫氧还蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及ASK1的影响

目的 探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系及人硫氧还蛋白的作用机制。方法 随机将Wistar大鼠84只分为对照组、肺缺血再灌注组、人硫氧还蛋白干预组。观察各组肺组织湿、干重比值（W/D）、肺泡损伤指数（IQA）、肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法观测细胞凋亡指数(AI）, 采用免疫组化技术检测细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白的变化。结果 与对照组比较,缺血再灌注组SOD活性降低,MDA含量、W/D比值、IQA、AI及ASK1表达均上调(P均<0.01)。与缺血再灌注组比较, 人硫氧还蛋白干预组SOD活性显著升高,MDA、W/D比值、IQA、AI及ASK1表达明显下降(P均<0.01)。AI与SOD、ASK1蛋白与SOD呈显著负相关(r为-0.820,-0.749,P均<0.01), 与W/D、IQA、MDA、ASK1蛋白呈明显正相关(r分别为0.721,0.835,0.844,0.675, P均<0.01),与MDA含量呈明显正相关（r为0.721,P<0.01）。结论 肺组织细胞凋亡参与肺缺血再灌注损伤的发生,人硫氧还蛋白可能通过降低氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应,下调ASK1的表达抑制细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

硫氧还蛋白及硫氧还蛋白相互作用蛋白在结肠息肉癌变中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）与硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）在结肠息肉、结肠腺瘤及结肠癌中的表达,分析Trx、TXNIP在结肠息肉癌变中的作用。 方法 收集河北北方学院附属第一医院2019年1月～2019年10月就诊的结肠息肉（结肠息肉组）20例、结肠腺瘤（结肠腺瘤组）40例、结肠癌（结肠癌组）20例以及正常结肠(正常结肠组)20例,通过ELISA法检测血清Trx、TXNIP的含量,采用胰岛素还原法检测血清Trx活性,苏木精-伊红染色（HE）法观察各组织的形态学,应用免疫组织化学法检测组织中Trx、TXNIP的表达,实时荧光定量PCR检测组织中Trx mRNA与TXNIP mRNA的表达水平。 结果 与正常结肠组比较,结肠腺瘤组与结肠癌组患者血清中Trx含量和活性明显升高,结肠息肉组、结肠腺瘤组患者与结肠癌组患者血清中TXNIP含量较正常结肠组明显下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）;在结肠腺瘤组和结肠癌组组织中Trx阳性表达率明显高于正常结肠组,而TXNIP阳性表达率明显低于正常结肠组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与正常结肠组比较,结肠息肉组、结肠腺瘤组及结肠癌组组织中Trx mRNA的表达水平均明显上调,TXNIP mRNA的表达水平均明显下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 Trx在结肠息肉癌变中高表达,而TXNIP表达降低,表明两者都参与结肠癌前病变与癌组织的发生及发展,两者均在结肠息肉癌变过程中起着重要的作用。     

硫氧还蛋白结合蛋白与肺部疾病的研究进展

硫氧还原蛋白相互作蛋白(TXNIP)是硫氧还蛋白(Trx)的内源性抑制剂,它通过与Trx活性部位结合而抑制其活性,破坏细胞内氧化还原平衡,促进氧化应激,最终可诱导炎症或细胞凋亡。TXNIP作为机体内主要的氧化应激相关因子,有可能成为干预治疗的靶点,在肺部疾病中发挥了一定作用,本文对TXNIP在肺部疾病中的表达与哮喘、慢性阻塞性肺疾病、急性肺损伤、肺癌的关系进行简述。     

硫氧还蛋白与凋亡的关系

硫氧还蛋白(tlaioredoxin,Trx)系统是一个控制细胞还原/氧化状态和细胞增殖/生存的广泛表达的氧化还原系统,它包括:硫氧还蛋白(Trx),硫氧还蛋白还原酶(TrxR),还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和硫氧还蛋白过氧化物酶(TrxP).     

硫氧还蛋白2在老年白内障患者晶状体前囊膜中的表达及其与细胞凋亡、氧化应激的关系

目的 探讨硫氧还蛋白2（thioredoin-2,Trx-2）在老年白内障患者晶状体前囊膜中的表达及其与细胞凋亡、氧化应激的关系。 方法 选择年龄相关性白内障并行超声乳化术吸出白内障的老年患者40例40眼作为研究组,因外伤行透明晶状体取出术（非白内障）的老年患者20例20眼作为对照组。采用免疫组织化学法测定晶状体前囊膜组织中Trx-2的阳性表达情况。比较2组标本组织和研究组不同Trx-2（+）、Trx-2（-）标本组织中凋亡相关分子（P53、Bcl-2、ASK1）蛋白表达量、氧化应激指标［超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性及谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）］水平。 结果 研究组标本中Trx-2表达阳性率显著低于对照组标本（P＜0.05）。研究组晶状体前囊膜标本中P53、ASK1的蛋白表达量高于对照组,Bcl-2的蛋白表达量低于对照组;标本上清液中SOD、CAT、GSH的水平低于对照组,MDA的水平高于对照组（P＜0.01）。研究组中,Trx-2（+）的晶状体前囊膜标本中P53、ASK1的蛋白表达量低于Trx-2（-）者,Bcl-2的蛋白表达量高于Trx-2（-）者;标本上清液中SOD、CAT、GSH的水平高于Trx-2（-）者,MDA的水平低于Trx-2（-）者（P＜0.05或P＜0.01）。 结论 老年白内障患者晶状体前囊膜中Trx-2表达减弱,其抗凋亡及抗氧化应激作用减弱,可能是导致疾病发生发展的重要分子机制之一。     

硫氧还蛋白与阿尔茨海默病的研究进展

硫氧还蛋白（Thioredoxin,Trx）是一种高度保守且广泛表达的小分子蛋白,具有维持体内细胞内外氧还原平衡、清除自由基、抑制细胞凋亡以及调节转录因子活性等功能,在细胞信号转导中也发挥重要的作用。阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）发病机理与体内自由基清除能力下降、神经元的丢失与凋亡有紧密的联系,近年来有关Trx与AD的发病机理的研究日渐增多。本文拟对Trx与AD的关系进行综述,理清Trx在AD中的作用,旨在为AD的治疗挖掘新途径。     

一种人硫氧还蛋白基因修饰肝细胞的制备

[目的]制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞.[方法]逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrx cDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞.白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测.[结果]克隆出hTrx开放阅读框cDNA并制备出重组逆转录病毒,感染真核细胞后可分泌融合表达的hTrx并具有生物学活性.制备出hTrx基因修饰大鼠肝细胞,免疫组化SABC法显示肝细胞功能正常,MTT比色法检测具有较强的抗氧化应激能力(P＜0.05),并可有效增殖.[结论]成功制备出一种具有较强抗氧化应激的hTrx基因修饰肝细胞.     

硫氧还蛋白2的研究进展

硫氧还蛋白2(Trx2)是特异位于线粒体的小分子蛋白,它在抗氧化应激、阻止线粒体介导的细胞死亡、调节某些基因的表达等方面起着关键作用。最新研究表明,Trx2还可促进血管再生、减少高血压病理生理改变,抑制神经退行性变、保护脑细胞,且高表达Trx2的细胞对致癌剂有更强的抵抗力。因此,Trx2与心血管、神经系统、肿瘤等疾病的发病机制密切相关。现综述Trx2的结构、生物学功能和有关机制,以及该蛋白在相关疾病中的基础研究。     

硫氧还蛋白1与炎性相关性疾病

硫氧还蛋白1是体内抗氧化系统最重要的成员之一,对氧化应激起着关键性作用。它通过直接抗氧化作用和由带有关键信号分子的蛋白质之间的相互作用而间接施加影响。该文综述了硫氧还蛋白1的结构、生物学功能和有关炎性机制,以及该蛋白在免疫、神经、呼吸、心血管、消化系统等炎性相关性疾病的基础研究。     

大肠杆菌硫氧还蛋白基因的克隆及序列测定

目的：获取大肠杆菌硫氧还氧白基因，并进行序列测定，为今后研究其机理及应用创造条件。方法：用ＰＣＲ法从大肠杆菌ＤＮＡ中扩增ｔｒｘＡ基因编码区，重组人ｐＵＣ１９质粒载体，用双脱氧法测定目的基因序列。结果：从大肠杆菌中成功的扩增到ｔｒｘＡ基因，测出的序列与已知基因序列一致。结论：构建了ｔｒｘＡ基因的重组克隆，为以后的深入研究奠定了基础。     

硫氧还蛋白和子宫内膜异位症

子宫内膜异位症的病因和发病机制一直未能得到很好的解释,即便是被广为接受的经血逆流学说也无法圆满地解释。随着对硫氧还蛋白研究的深入,发现了其具有许多生物活性如抗氧化应激、抑制凋亡、细胞间黏附、组织侵袭、血管形成等,其作用机制的研究中与现有子宫内膜异位症的研究,特别是在与我国学者提出的"在位内膜决定论"的研究即"3A"模式存在着一定的交集。     

硫氧还蛋白对缺氧/复氧大鼠海马神经元caspase-3活性的影响

目的：探讨硫氧还蛋白（Trx)和caspase-3在鼠海马神经元缺氧／复氧损伤中的作用。方法：原代培养10d的新生鼠海马神经元缺氧3h复氧12h,24h和48h，分为正常对照组、缺氧／复氧组和Trx组，用MTT比色法测定各时点的神经元存活率；底物裂解法检测caspase-3活性。结果：缺氧／复氧组海马神经元复氧12－48h，海马神经元caspase-3样蛋白酶活性明显增高，以复氧24h为最高，而存活率进行性下降；Trx组caspase-3样蛋白酶活性曲线与缺氧／复氧组相似，但明显下降，细胞存活率较缺氧／复氧组明显提高。结论：海马神经元缺氧／复氧后，caspase-3样蛋白酶被激活，参与神经元损伤过程；Trx对神经元有保护作用。     

硒蛋白硫氧还蛋白还原酶3对肿瘤患者生存预后的影响

目的 探讨硒蛋白硫氧还蛋白还原酶3(TXNRD3)在人类33种恶性肿瘤中的表达情况,并分析其对33种肿瘤生存预后的影响。方法 利用基因型-组织表达研究项目数据库、癌症细胞系百科全书数据库和癌症基因组图谱数据库,从硒蛋白基因TXNRD3出发,探讨其在人类33种恶性肿瘤中的表达情况,并分析其对33种肿瘤生存预后的影响,探讨TXNRD3与肿瘤微环境中的免疫细胞及免疫浸润的相关性,以及与免疫新抗原、免疫检查点、肿瘤突变负荷和微卫星不稳定性等的相关性,根据TXNRD3基因表达水平将人类肿瘤样本分为高、低表达组,并且对其进行生物功能和信号通路的富集分析。结果 多个数据库的差异分析结果显示TXNRD3在15种肿瘤中高表达。生存分析显示TXNRD3与胰腺癌患者预后不良显著相关。此外,TXNRD3的表达水平与肿瘤免疫浸润相关,也与免疫新抗原、免疫检查点基因、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性相关。TXNRD3影响DNA错配修复基因的表达。通过基因集富集分析显示TXNRD3参与调节许多涉及肿瘤代谢和肿瘤免疫的信号通路。结论 TXNRD3在肿瘤中广泛表达,TXNRD3对多种肿瘤的生存预后和治疗具有临床价值,揭示了TXNRD3在肿瘤靶向治疗中的潜力,表明TXNRD3在多种肿瘤中是一种很有前景的肿瘤预测生物标志物。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白在大鼠急性肾损伤中的作用

目的 探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）在大鼠急性肾损伤中的作用。方法 16 只雄性Sprague Dawley 大鼠随机分为假手术组（S）,缺血再灌注组（IR）,每组8 只。采用夹闭双侧肾蒂25 min,再灌注48 h 复制大鼠急性肾损伤模型。取大鼠肾脏HE 染色观察病理学结果,血标本测定血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记法检测细胞凋亡指数,Western blot 检测TXNIP 和炎性体3 蛋白（NLRP3）的表达,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1β（IL-1β）。结果 与S 组比较,IR 组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死;与S 组比较,IR 组BUN,Scr,MDA,TXNIP,NLRP3 及IL-1β 表达增高（P <0.05）,凋亡指数增高（P <0.05）,SOD 活性降低（P <0.05）。结论 TXNIP 可能通过激活NLRP3/IL-1β 炎症通路参与大鼠急性肾损伤。     

人硫氧还蛋白基因克隆及其重组逆转录病毒载体的构建和鉴定

目的 克隆人硫氧还蛋白（hTRX）基因,并构建含有该目的 基因的重组逆转录病毒载体。方法 利用RT-PCR法,以PHA活化的人外周血单个核细胞总RNA为模板,扩增hTRX编码蛋白的cDNA基因,并亚克隆至逆转录病毒载体pSIV-1中进行PCR、双酶切和测序鉴定。结果 将所得的序列与GenBank（BC003377）报道的序列比较,其酶活性中心（Trp-Cys-Gly-Pro-Cys）与已知序列一致,第132、136、170、264位碱基与已知序列不同,其中第136、170位相应密码子编码的氨基酸发生了变化（Phe→Leu,Ile→Thr）,成功获得了pSIV-1-hTRX重组逆转录病毒载体。结论 hTRX基因的克隆及其重组逆转录病毒载体pSIV-1-hTRX的构建,为进一步探讨hTRX的生物学活性和应用奠定了基础。     

人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体，获得TR蛋白。方法：采用反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术，从人胚脑组织中扩增出TRcDNA片段，克隆至pGEM—T载体并转化大肠杆菌DH5α，获得重组质粒pGEM—TR；经序列分析证实后，提取pGEM—TR重组体，由双酶切得到目的片段，并插入pET9c原核表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得重组质粒pET—rhTR。异丙基硫代—β—D—半乳糖苷(IPTG)诱导pET—rhTR在BL21中表达，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果：克隆的TRcDNA与人胎盘组织TRcDNA同源性为99％；pET—rhTR在大肠杆菌中高效表达，目的蛋白占菌体总蛋白量的36％，其分子质量为55ku。TRcDNA序列被GenBank收录，登录号为AF208018。结论：成功克隆了人脑组织来源的TR基因，该基因在大肠杆菌中得到高表达，为进一步研究其功能奠定基础。     

维拉帕米通过下调硫氧还蛋白互作蛋白的表达抑制丙型肝炎病毒感染

目的 探讨抗高血压药维拉帕米是否可通过下调宿主硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)的表达而抑制丙型肝炎病毒(HCV)的感染.方法 用不同浓度梯度的维拉帕米处理人肝癌细胞系Huh7.5.1,用qPCR和蛋白质印迹法检测TXNIP的表达.用维拉帕米处理Huh7.5.1细胞,同时加入细胞培养产生的HCV (HCVcc),48 h后检测HCVcc感染情况.用TXNIP siRNA转染Huh7.5.1细胞,检测下调TXNIP表达后,维拉帕米对HCVcc感染的影响;用TXNIP启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因表达质粒(pTXNIP-EGFP)转染Huh7.5.1细胞,分析维拉帕米对TXNIP启动子转录活性的影响.结果 与对照孔相比,维拉帕米(100、200、400 μmol/L)可下调Huh7.5.1细胞中TXNIP的表达,并呈现浓度依赖性(P＜0.05);并可抑制HCVcc对Huh7.5.1细胞的感染,且浓度越高抑制作用越明显(P＜0.05).进一步研究结果显示,与对照组相比,维拉帕米能够抑制pTXNIP-EGFP转染细胞中EGFP的表达水平(P＜0.05).结论 维拉帕米可下调TXNIP的表达从而抑制HCV感染,这可能是通过抑制TXNIP启动子的转录活性来实现的.