HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价红芪质量

目的 以完善红芪Hedysari Radix质量评价方法与内容为目的，建立红芪HPLC指纹图谱并测定4种有效成分的含量，并在建立多成分含量测定方法基础上，为其质量标志物的可测性提供依据。方法 运用HPLC法建立36批红芪的指纹图谱，通过对照品比对，对共有峰进行指认，确定并建立4种有效成分含量的测定方法，在指纹图谱相似度评价基础之上，运用聚类分析、主成分分析、判别分析对36批次红芪差异性成分进行分析。结果 36批红芪指纹图谱共有16个峰，指认了4个峰，分别是毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素；30批红芪相似度大于0.900,6批红芪的相似度在0.802～0.900；聚类分析将36批红芪分为4类；主成分因子分析提取了4个主成分，5批红芪主成分综合得分较低，与其他批次有较大差异，主成分分析依据生长类型将红芪分为2类、依据商品等级分为4类，差异性成分分别为峰7、芒柄花苷、峰10、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素；判别分析结果与主成分分析一致；毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷以及4种有效成分的总量与主成分综合得分呈显著负相关，指认的4种有效成分在可测性方面具备成为红芪质量标志物的科学性。结论 建立的HPL...     

黄芪-丹参煎液HPLC指纹图谱及多指标定量测定研究

目的建立黄芪丹参煎液的HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析方法,为黄芪丹参煎液质量控制提供科学依据。方法采用HPLC-UV法,ODS Hypersil DIM色谱柱(250 mm×4.6 mm,3μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 mL/min,进样量20μL,检测波长254 nm,建立HPLC指纹图谱;采用LC-MS法,建立黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸11个成分含量测定方法,并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对测定结果进行识别。结果 10批黄芪丹参煎液的指纹图谱中有12个共有峰,通过与化学对照品比对,指认出7个色谱峰,分别为1号峰咖啡酸、3号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6号峰迷迭香酸、8号峰紫草酸、9号峰毛蕊异黄酮、10号峰丹酚酸B、11号峰芒柄花苷,10批样品的相似度≥0.995。黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸线性关系良好,r2值均大于0.995;回收率为89.3%～110.9%。通过PCA可将10批黄芪丹参煎液分成2类,并可看出不同产地、不同批次药材之间的质量存在差异,进一步采用OPLS-DA筛选出导致质量差异的两个物质丹酚酸B和芒柄花苷。结论根据黄芪丹参煎液指纹图谱的建立,结合质谱进行定量,能够为其质量控制提供更可靠的参考。     

黄芪饮片-标准汤剂-配方颗粒HPLC指纹图谱相关性研究

目的建立黄芪饮片、标准汤剂、配方颗粒的HPLC特征图谱,对其相关性进行评价。方法采用HPLC法测定黄芪饮片、标准汤剂、配方颗粒中7-羟基-4′-甲氧基异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷含量,以HPLC特征图谱为对照,建立三者指纹图谱共有模式,并进行相关性评价。结果 20批黄芪饮片中7-羟基-4′-甲氧基异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷平均质量分数分别为0.097、0.482、0.142、0.237 mg/g;标准汤剂中这4种指标成分的平均质量分数分别为0.116、0.912、0.214、0.434 mg/g;配方颗粒中这4种指标成分的平均质量分数分别为0.088、0.623、0.160、0.289mg/g,20批黄芪饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱均呈现6个共有特征峰,黄芪配方颗粒与标准汤剂对照指纹图谱相似度为0.980,说明两者的成分差异很小。结论建立黄芪饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱,全面反映黄芪饮片-标准汤剂-配方颗粒的多组分情况,为黄芪配方颗粒的鉴定及质量控制提供参考价值。     

黄芪的现代研究进展及其质量标志物的预测分析北大核心CSCD

黄芪是一味补气良药,具有抗衰老、抗肿瘤、免疫调节、降糖调脂、抗纤维化、抗辐射等药理作用。该文通过对黄芪的化学成分及药理作用研究概况进行综述,根据中药质量标志物(Q-marker)的理论,基于传统功效、化学成分有效性、可测性、植物亲缘学及药动学等进行质量标志物预测分析,推测其总多糖,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、槲皮素和芒柄花素等黄酮类及黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷等皂苷类可作为黄芪的质量标志物。为规范黄芪质量研究和标准建立奠定基础,同时也有利于黄芪及其相关产品生产过程地控制和质量监管。     

HPLC测定黄芪蜜炙前后毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量

目的:比较黄芪蜜炙前后毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量变化。方法:采用Waters SunfireTM C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm);以甲醇-水为流动相梯度洗脱,柱温:35℃,检测波长:254nm,流速:1.0mL/min。结果:生黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量分别为0.2479mg/g和0.1252mg/g,炙黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量分别为0.2256mg/g和0.1082mg/g。结论:蜜炙法可使黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量降低。     

甘肃产1～2年生红芪和黄芪皂苷、多糖、黄酮类成分含量差异研究

目的对甘肃产1～2年生红芪（多序岩黄芪Hedysarum polybotrys）和黄芪（蒙古黄芪Astragalus membranaceus var. mongholicus或膜荚黄芪A. membranaceus）总皂苷、总多糖、黄酮类成分含量进行统计分析,综合多指标探讨红芪和黄芪的差异。方法运用R3.3.2软件,选取总皂苷、总黄酮、总多糖、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、4种异黄酮含量总和8个含量指标,产地、品种、采收时间、纬度、经度、海拔高度6个影响质量的因素做变量,采用相关分析、聚类分析、主成分分析方法,对甘肃产1～2年生红芪和黄芪质量差异进行综合评价。结果聚类结果表明红芪、黄芪聚成2大类,2种药材品质相差较大;主成分分析结果表明,黄芪质量优于红芪,总体上2年生红芪、黄芪药材质量优于1年生药材,宕昌产黄芪质量较优,武都产红芪质量较优。结论甘肃产红芪和黄芪药材质量有明显差异,从质量角度分析,二者不适合替代使用。     

一测多评法测定黄芪中异黄酮及苷类成分

目的采用一测多评(QAMS)法同时测定黄芪中6个异黄酮及苷类成分的含量,并验证方法在黄芪质量评价中应用的可行性与适用性。方法采用HPLC-UV法建立丙二酰毛蕊异黄酮苷(CYM)、芒柄花苷(FMG)、丙二酰芒柄花苷(FMM)、毛蕊异黄酮(CY)及芒柄花素(FM)与内参物毛蕊异黄酮7-O-β-D糖苷(CYG)的相对校正因子(fs/i),并在不同色谱仪和色谱柱上考察各成分相对校正因子的稳定性和耐用性,比较QAMS法和外标法测定结果的差异。结果在优化色谱条件下,确立的fs/i分别为fCYM/CYG=0.96、fFMG/CYG=0.84、fCY/CYG=0.68、fFMM/CYG=0.86、fFM/CYG=0.53,fs/i在3种HPLC色谱仪/3个品牌C18柱、不同体积流量(0.9、1.0、1.1m L/min)和不同柱温(25、30、35℃)下的RSD分别为0.88%～1.63%、0.23%～0.73%、0.15%～0.46%,表明相对校正因子的耐用性良好。分别采用外标法(ESM)和QAMS法对16批黄芪药材和3批饮片中6个异黄酮及苷类成分进行含量测定,2种方法所得结果的相对误差均5.0%,无显著性差异,表明建立的QAMS法的准确度良好。结论建立同时测定黄芪中6个异黄酮及苷类化学成分的QAMS方法准确可靠,能为更加全面地评价黄芪药材及饮片的质量提供参考。     

山西浑源仿野生栽培蒙古黄芪的质量研究

目的通过对山西浑源县仿野生栽培和野生蒙古黄芪中皂苷类和黄酮类成分的比较,评价仿野生栽培蒙古黄芪的质量。方法采集12批野生和19批仿野生栽培蒙古黄芪样品,采用HPLC-DAD法测定毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分,UPLC-ELSD法测定黄芪皂苷I、II、III、IV 4种皂苷成分。结果 5～6年生的仿野生栽培的蒙古黄芪中的高质量分数成分毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、黄芪皂苷I、II、III的量高于野生黄芪,相应的黄酮总量、皂苷总量高于野生黄芪,而2种低质量分数成分芒柄花素、黄芪皂苷IV的量低于野生黄芪;通过比较仿野生栽培1～6年生黄芪中8种成分的量发现,黄酮类成分随生长年限的增长不断升高,而皂苷类成分则逐渐降低。结论仿野生栽培的方法可有效地解决优质野生浑源蒙古黄芪资源不足的问题。     

红芪精准煮散饮片HPLC指纹图谱建立及3种指标成分测定

目的 建立红芪精准煮散饮片高效液相色谱指纹图谱和3种指标成分的含量测定方法。方法 采用HPLC法测定红芪饮片与红芪精准煮散饮片中芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量,色谱柱为Robusta C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为254 nm;体积流量1.0 mL/min;进样量20μL;柱温30℃。结果 建立了红芪精准煮散饮片的特征指纹图谱,并指认出了20个共有峰中的3个主要峰芒柄花苷(峰11)、毛蕊异黄酮(峰13)和芒柄花素(峰16),3种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率98.08%～99.33%,RSD在1.46%～2.37%。通过加权得分,比较红芪精准煮散饮片与传统饮片中3种成分,得到红芪精准煮散饮片1.00g约相当于传统饮片1.37 g。结论 建立的指纹图谱及含量测定方法可为红芪精准煮散饮片的质量控制与评价提供依据。     

HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮

目的建立HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮的含有量。方法天山岩黄芪70%乙醇提取液的分析采用YMC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.2%甲酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长254 nm;柱温35℃。结果毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在1~50、2~70、0.8~50、2~70μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率95.1%~104.1%,RSD 0.5%~2.8%。结论该方法稳定可靠,可用于天山岩黄芪的质量控制。     

Quality Evaluation of Astragali Radix Products by Quantitative Analysis of Multi-components by Single Marker

Objective To develop a quantitative analysis of multi-components by single-marker(QAMS)method for the simultaneous determination of eight components in Astragali Radix products,and to examine the feasibility of using the method among the different dosage forms and between two different types of compounds.Methods Eight main effective components,campanulin,genistin,ononin,calycosin,genistein,formononetin,methylnissolin,and astragaloside IV were selected as analytes for the quality control of Astragali Radix products.Calycosin was selected as the internal reference substance,the content of which was determined by external standard method;the relative correction factors(RCFs)of campanulin,genistin,ononin,genistein,formononetin,methylnissolin,and astragaloside IV were calculated.In total,twelve Astragali Radix specimen in decoction pieces,as well as in two different dosage forms,such as granule and oral liquid products,were used for the quality control by both methods of external standard and QAMS.The validity of the QAMS method was evaluated by comparison on the quantitative results of the two methods.Results These RCFs were obtained with good reproducibility(RSD<6.5%)by using ultra high performance liquid chromatography coupled with diode array detector under various chromatographic conditions.Meanwhile,no obvious differences(RSD<3.98%)were found in the quantitative results of the seven components in twelve samples of Astragali Radix products determined by the two methods.Conclusion QAMS is a reliable and feasible method in determining the components in products of Astragali Radix.     

不同生长年限及粗度径级对黄芪饮片药效成分含量的影响

目的 测定不同年限蒙古黄芪Astragalus membranaceus产出不同粗度径级黄芪饮片的比例，比较各粗度径级黄芪饮片药效成分含量的差异，为黄芪饮片质量等级的科学划分提供理论依据。方法 以4～6年生仿野生蒙古黄芪为材料，按照直径在0.5～0.8 cm（不包含0.8 cm）、0.8～1.0 cm和大于1.0 cm对样品进行划分，测定不同年限黄芪各粗度径级饮片的产出比率及药效成分含量。结果 生长年限对不同粗度径级黄芪饮片的质量占比具有极显著影响（P<0.01）。0.5～0.8 cm粗度径级的黄芪饮片在4年生黄芪中质量占比最高，而粗度大于1.0 cm的黄芪饮片在6年生黄芪中质量占比最高。生长年限、粗度径级及二者的交互作用对黄芪中黄酮类和皂苷类成分含量均有极显著影响（P<0.01）。黄酮类成分含量受年限因素的影响大于粗度径级，在6年生黄芪的0.8～1.0 cm粗度部位中达到最高；而黄芪甲苷含量受粗度径级的影响大于年限因素，在0.5～0.8 cm粗度径级的5年生黄芪中达到最高。结论 生长年限、粗度径级均会影响黄芪药效成分含量，黄芪饮片在划分质量等级时，在传统考虑粗度直径的同时，要特别注意生长年限的影响。     

硫磺熏蒸对黄芪中黄酮类和皂苷类成分的影响

目的测定硫磺熏前后黄芪中黄酮类和皂苷类成分的变化,确定硫磺熏对黄芪药材质量的影响,为评价熏硫加工对黄芪质量的影响提供依据。方法对收集的黄芪进行熏硫加工,采用HPLC-DAD法测定了毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分,UPLC-ELSD法测定了黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷4种皂苷成分。结果硫磺熏过的黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷含量降低,毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷I、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷的含量变化不明显。结论黄芪熏硫加工后,黄酮苷成分有所降低,其余成分变化不明显。     

基于化学计量学分析方法黄芪药材质量评价体系的建立

目的采用化学计量学分析方法,建立黄芪Astragalus membranaceus药材质量评价体系。方法收集20批不同产地不同品种黄芪药材,建立皂苷、黄酮类成分特征图谱。运用主成分分析、聚类分析方法深入研究不同黄芪药材中化学成分量的变化趋势及规律。结果 17个特征成分中,黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷ⅣV、芒柄花素和2个未知皂苷成分的差异显著,可作为区分不同产地或不同品种黄芪的关键性指标成分。结论通过化学计量学分析方法,建立的黄芪药材中皂苷、黄酮类成分评价体系专属性强、准确性高,可有效控制和评价黄芪药材质量。     

Quality Evaluation of Astragali Radix based on DPPH Radical Scavenging Activity and Chemical Analysis

Objective To assess the quality of Astragali Radix from different areas based on the biological evaluation and chemical analysis. Methods The bioassay method of 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH) radical scavenging activity for Astragali Radix was established. The parameters of DPPH assay including sample extraction time, reaction time, repeatability, and stability were detected. Furthermore, a method of HPLC-MS was developed to simultaneously determine calycosin-7-O-glucoside, ononin, formononetin, and astragaloside IV in Astragali Radix samples. And the total flavonoids and total saponins were detected by spectrophotometry. The relationship between DPPH evaluation and chemical analysis was studied by Pearson correlation analysis. Results Twelvebatches of Astragali Radix from different origins showed a wide range of DPPH radical scavenging activities(IC50 = 1.395-9.894 μg/mL). Based on DPPH assay, Sample 10 derived from Inner Mongolia Autonomous Region(IC50 = 1.395 μg/mL) showed the best quality of all samples. Chemical analysis showed that different compounds selected as indices would cause different results for quality evaluation. Pearson correlation analysis revealed that the contents of total flavonoids(P = 0.032), calycosin-7-glucoside(P =0.035), and astragaloside IV(P = 0.010) were positively correlated with DPPH radical scavenging activity. Conclusion Except for chemical analysis, DPPH radical scavenging activity can be used as a good alternative to assess and control the quality of Astragali Radix.     

黄芪药材不同干燥方式对其饮片的提取动力学影响

目的 考察在自然干燥、热风干燥、减压真空干燥方式下的黄芪药材经炮制成饮片后，药效成分的提取动力学。方法 以传统水煎煮法对黄芪饮片进行提取，建立提取动力学模型，比较黄芪药材经自然干燥、热风干燥、减压真空干燥3种初加工方式对饮片中4个评价指标（浸出物、黄芪多糖、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷）提取效率差异。结果 3种干燥方式导致黄芪药材切面品相不一，提取动力学均与一级动力学模型拟合效果最佳，其中减压干燥动力学拟合方程斜率最大，提取效率最高。结论 减压干燥方式4个评价指标的药材-饮片转移率高，干燥、提取速率快，可作为传统干燥方式的替代干燥方式。不同干燥方式不仅对药材品相有影响，同时对药材制成饮片及后续饮片制成制剂过程中评价指标的提取效率也有影响，说明干燥等药材初加工是药材-饮片-制剂品质传递过程中的重要环节，应引起足够的关注。     

二次通用旋转组合法优化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的酶解提取工艺

目的采用二次通用旋转组合设计优化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的酶解提取工艺。方法在确定酶比例的基础上,选定复合酶用量、酶解时间、加水量和提取时间为考察因素,以毛蕊异黄酮苷、芒柄花素提取量为指标,采用二次通用旋转组合设计优化黄芪酶解提取工艺。结果优化所得黄芪酶解提取的最佳工艺条件:复合酶用量340 mg,酶解时间110min,加水量19倍,提取时间150 min,在此条件下,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素提取量分别为0.25 mg/g、67.95μg/g。结论优化所得黄芪酶解提取工艺稳定可行。     

黄芪趁鲜切制饮片与传统饮片化学成分及体外抗氧化活性比较研究

目的 采用HPLC、UV等方法测定并比较黄芪趁鲜切制饮片与黄芪传统饮片的指标性成分及体外抗氧化活性,为不同加工方式的黄芪饮片质量控制提供科学依据。方法 采用HPLC、UV等方法对黄芪趁鲜切制饮片与黄芪传统饮片的7种指标性成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、总黄酮、总多糖、水溶性浸出物)进行含量测定,采用熵权法结合逼近理想解排序法(technique for order preference by similarity to ideal solution,TOPSIS)评价不同产地加工方式对黄芪药材质量的影响,并结合主成分分析(principal component analysis,PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)等化学计量学方法对黄芪趁鲜切制饮片与黄芪传统饮片进行区分和比较,同时以DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基清除能力为评价指标对黄芪趁鲜切制饮片与黄芪传统饮片的体外抗氧化活性进行比较。结果 通过熵权综合评分法比较2种不同加工方式对黄芪饮片质量的影响,结果发现黄芪趁鲜切制饮片综合评分均高于黄芪传统饮片;同时,黄芪趁鲜切制饮片组与黄芪传统饮片组在体外抗氧化活性方面,DPPH自由基清除能力的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)分别为5.560、8.168mg/mL,羟基自由基清除能力的IC₅₀分别为10.994、15.045mg/mL,ABTS自由基清除能力的IC₅₀分别为8.126、14.546mg/mL,表明黄芪趁鲜切制饮片体外抗氧化活性强于黄芪传统饮片。结论 通过熵权TOPSIS综合评分法结合化学计量学分析方法及体外抗氧化活性对黄芪趁鲜切制饮片与黄芪传统饮片进行分析,为不同加工方式的黄芪饮片质量控制提供参考。     

白芷饮片全国评价性抽验结果分析与多指标成分一测多评法研究

目的采用指纹图谱与一测多评相结合的方法测定白芷药材及其饮片中的6种指标性成分,分析全国评价性抽验所抽验白芷质量,不断完善和修订标准方法,保障公众用药安全有效。方法依据法定标准进行检验,建立白芷饮片的HPLC指纹图谱,水合氧化前胡素、白当归素、氧化前胡素、佛手柑内酯、欧前胡素和异欧前胡素6个指标成分一测多评定量测定方法,进行方法学考察,对20批(S1～S20)白芷饮片进行多指标成分含量测定,最终判定白芷饮片的质量。结果共收到239批白芷饮片,涉及189家生产企业。其中225批次合格,14批次不合格,总体合格率为94.1%。以一测多评方法建立以欧前胡素为参照同步测定白芷饮片中6种香豆素类成分含量的方法,可以解决对照品难得、检验周期长等问题,更好地反映药材质量。结论所建立的方法可用于白芷饮片中水合氧化前胡素、白当归素、氧化前胡素、佛手柑内酯、欧前胡素和异欧前胡素6个化学成分的定性定量分析。通过本次抽验,发现白芷饮片仍然存在一些质量问题,应进一步加强监管。