一测多评法测定小柴胡颗粒中7种成分

目的 建立一测多评法同时测定小柴胡颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷B₁的含量。方法 建立高效液相色谱（HPLC）法检测小柴胡颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷B₁的含量,色谱柱为Waters XBridge C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,3.5 μm）,流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱,体积流量0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温35℃,进样量10 μL,并进行专属性、线性关系、重复性、精密度、加样回收率等方法学验证;以黄芩苷为内参物,建立其与汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂和柴胡皂苷B₁的相对校正因子,并进行含量测定。采用外标法测定15批小柴胡颗粒中的7个指标性成分对一测多评法的准确性进行验证。结果 建立的HPLC法方法学验证结果符合要求;以黄芩苷为内参物,汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、甘草酸铵、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷B₁相对于黄芩苷的相对校正因子分别为0.78、0.52、0.57、1.80、0.82、1.08。一测多评法所测结果与外标法无显著性差异。结论 该方法简单、可靠、耐用性良好,可用于小柴胡颗粒的质量控制。     

甘草次酸对雄黄染毒小鼠体内活性硫水平的影响

摘 要 目的：建立HPLC法测定小鼠血浆、脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及睾丸中的活性硫水平。方法: 70只ICR小鼠随机分为对照组,低、中、高剂量雄黄组,甘草次酸对照组,甘草次酸低、高剂量干预组,每组10只,灌胃给药,每日1次,共染毒8周。采用HPLC法检测染毒后小鼠血浆、脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及睾丸组织中的活性硫含量。结果: 与对照组相比,雄黄高剂量组血浆、脑、肝脏、肾脏中活性硫水平显著降低（P<0.05）;与雄黄高剂量组相比,甘草次酸高剂量干预组血浆、脑、肝脏、肾脏的活性硫水平明显升高（P<0.05）,甘草次酸低剂量干预组血浆的活性硫水平明显升高（P<0.05）。结论:该方法简便、准确,灵敏度高。甘草次酸对雄黄所引起的血浆、脑、肝脏、肾脏中活性硫水平的降低有明显的保护作用。     

台湾林檎叶提取物不同极性部位抑菌活性高通量筛选及其谱效相关性分析

目的 实现台湾林檎叶醇提物不同极性部位抑菌活性快速、高效筛选和评价,研究不同极性部位HPLC指纹图谱与抑菌作用谱效关系,以期明确台湾林檎叶抑菌物质基础。方法 采用HPLC建立台湾林檎叶醇提物不同极性部位指纹图谱,采用金黄色葡萄球菌刃天青高通量抑菌筛选模型,对台湾林檎叶醇提物不同极性部位样品进行抑菌活性评价,计算不同浓度各极性部位的抑菌率,筛选台湾林檎叶抑菌活性部位。运用最小二乘拟合法来建立各极性部位共有峰与抑菌活性间的谱效分析,寻找对抗金黄色葡萄球菌作用贡献较大的成分;采用UPLC-Q-TOF/MS²技术对高贡献度的共有峰进行识别分析。结果 在台湾林檎叶醇提物不同极性部位指纹图谱中共确定15个共有峰,不同极性部位抑菌活性为乙酸乙酯部位>正丁醇部位/二氯甲烷部位>石油醚部位>萃余液。共有峰8、峰9、峰10、峰15等显示有较高的抑菌活性贡献度,分别鉴定为槲皮素-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、根皮苷和白杨素。结论 台湾林檎叶抑菌活性部位为乙酸乙酯部位,谱效分析提示槲皮素-7-O-葡萄糖苷、异槲皮苷、根皮苷和白杨素4个成分为抑菌活性成分,是否存在其他微量抑菌活性成分还有待进一步研究。     

基于UHPLC-Q-TOF-MS和生物信息分析探讨鳖血柴胡炮制理论的科学内涵

目的 基于UHPLC-Q-TOF-MS分析鳖血柴胡炮制前后药效物质的变化,结合生物信息分析阐释鳖血柴胡炮制理论的科学内涵。方法 采用UHPLC-Q-TOF-MS技术和多元变量模式识别分析方法对鳖血柴胡炮制前后化学成分的变化进行定性定量分析,通过PubChem、STITCH、SwissTargetPrediction、SEA、Metascape和SymMap数据库对鳖血柴胡炮制前后的"差异成分-靶点-功效-中医证候"进行相关分析。结果 鳖血柴胡炮制后松脂素、山奈酚素、鸟嘌呤核苷、淫羊藿苷F2、柴胡皂苷BK1、柴胡皂苷D、异土木香内酯等37种成分发生了明显改变,生物信息分析显示差异成分相关靶点主要富集定位在肝脏、骨髓、小肠、脾脏等组织,靶点功效主要与G蛋白偶联受体信号传导通路、蛋白质磷酸化、神经活性配体-受体相互作用、激素反应等生物学过程相关,与肝气郁滞、风热、火热、肝肾亏虚、阴虚阳亢、肝风等中医"肝阴虚"类证候呈现相关性,显示其主入肝经,侧重于疏肝解郁、疏散肝经风热、清肝泻火、滋补肝肾、滋阴潜阳、平肝息风等功效。结论 鳖血柴胡炮制前后药效物质及药性发生了一定的变化,其变化与"肝阴虚"相关证候有明显的关联性,提示基于"柴胡劫肝阴"理论的鳖血柴胡炮制理论具有一定的科学性。     

网络药理学联合灰色关联分析黄芩抗呼吸道合胞病毒小鼠肺炎的药效物质基础研究

目的 探讨黄芩抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)的药效物质基础。方法 运用网络药理学分析黄芩抗RSV的作用靶点；UPLC-QTOF-MS/MS定量表征黄芩的共有成分，建立RSV肺炎小鼠模型，检测小鼠体质量、肺指数、肺部病理切片以及IL-6的含量，采用灰色关联度方法对50批次黄芩样品谱-效数据进行关联分析，挖掘黄芩抗RSV肺炎小鼠的有效成分。结果 蛋白互作网络结果确定黄芩抗RSV核心靶点为AKT1、IL-6、TNF、MAPK3、SRC、HSP90AA1、PTGS2；整体动物实验证明，黄芩可不同程度地下调肺指数及炎性因子IL-6含量；灰色关联度分析显示黄芩中抗RSV的化学成分主要为黄酮苷类成分。结论 采用网络药理学方法确定药效靶点，灰色关联度分析成分-靶标数据，挖掘药效物质基础的方法可行，黄芩苷、汉黄芩苷、白杨素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷、白杨素-6-C-阿拉伯糖-8-C-阿拉伯糖苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷等黄酮苷类成分可作为黄芩的Q-Markers用于质量评价。     

一测多评法测定黄芪 柴胡药对中8种成分的含量

摘 要 目的：建立一测多评法测定黄芪 柴胡药对中8种成分含量。 方法: 采用HPLC法,以黄芪皂苷Ⅰ为内标物,分别计算其与毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、柴胡皂苷c、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的相对校正因子（RCF）,通过RCF计算黄芪 柴胡药对中上述7种成分的含量（计算值）,同时采用外标法测定上述8种成分的含量（实测值）,比较计算值与实测值的差异。色谱柱为Waters sunfire C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）柱,流动相为乙腈 0.3%甲酸溶液梯度洗脱液,流速为0.8 ml·min-1,检测器为蒸发光散射检测器,柱温为30℃,进样量为10 μl。 结果: 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷 Ⅲ、黄芪皂苷Ⅰ、柴胡皂苷c、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为13.680～191.500 μg·ml-1、2.478～34.690 μg·ml-1、2.042～28.590 μg·ml-1、7.278～101.900 μg·ml-1、16.880～236.300 μg·ml-1、2.506～35.080 μg·ml-1、10.260～143.700 μg·ml-1、19.760～276.700 μg·ml-1（r分别为0.999 7,0.999 5,0.999 3,0.999 6,0.999 7,0.999 4,0.999 5,0.999 6）;平均加样回收率分别为98.2%,98.8%,98.9%,99.1%,98.7%,99.0%,98.5%,98.2%（RSD均<1.6%）。毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、柴胡皂苷c、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的RCF分别为1.037,0.759,1.247,0.995,1.085,0.587,0.635,其计算值和实测值之间差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论: 该方法简单、有效、结果准确、节约成本,可用于黄芪 柴胡药对中上述8种活性成分的同时测定。     

马尾松叶低极性部位的GC-MS分析及协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性研究

目的 研究马尾松叶低极性部位的主要化学成分,以及其与氟康唑联用对氟康唑耐药白念珠菌的抗真菌活性。方法 马尾松叶经80%乙醇热提取后,用石油醚萃取得到低极性部位,运用GC-MS法检测其化学成分,所测结果与标准谱库进行比对分析,用峰面积归一法计算各个成分的相对含量。采用棋盘式微量稀释法测试低极性部位协同氟康唑对耐药白念珠菌的最小抑菌浓度（MIC₈₀）。结果 从低极性部位中检测出30种成分,鉴定了17个化学成分;马尾松叶80%乙醇提取物、低极性部位及石油醚提取物协同氟康唑对耐药白念珠菌的最小抑菌浓度（MIC₈₀）分别为7.81 μg/ml、31.25 μg/ml、>250 μg/ml。结论 马尾松叶80%乙醇提取物及低极性部位具有协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性;马尾松叶低极性部位协同氟康唑抗耐药白念珠菌活性的有效成分可能是其中的二萜类化合物（53.99%）。     

HPLC波长切换法同时测定小儿热速清颗粒中9种成分的含量

摘 要 目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定小儿热速清颗粒中9种活性成分的含量。 方法: 采用HPLC法,同时测定小儿热速清颗粒中绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、连翘苷、大黄素、大黄酚的含量,采用ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈(A) 0.05%磷酸溶液 (B),梯度洗脱,检测波长为210 nm（柴胡皂苷a、柴胡皂苷d）、260 nm（黄芩苷、连翘苷、葛根素、大黄素、大黄酚）、330nm（绿原酸、连翘酯苷A）,流速0.8 ml·min-1,柱温30 ℃,进样量10 μl。 结果: 绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、连翘苷、大黄素、大黄酚检测质量浓度的线性范围分别为3.00～35.98,61.08～733.0,4.48～53.71,133.7～1 604,4.356～52.27,5.236～62.83,2.736～32.84,6.724～80.69,13.46～161.5 μg·ml-1（r为0.999 1～0.999 8）,平均加样回收率分别为98.5%,98.9%,98.4%,99.1%,98.7%,98.3%,98.2%,98.2%,98.1%（RSD<2.0%,n=6）。结论: 该方法简单、有效、结果准确,可用于小儿热速清颗粒中上述9种活性成分含量的同时测定。     

毛大丁草抗卵清蛋白诱导的小鼠支气管哮喘作用的活性部位筛选

目的 通过卵清蛋白(ovalbumin，OVA)诱导的支气管哮喘小鼠模型，筛选毛大丁草抗哮喘的活性部位。方法 采用D101大孔吸附树脂法对毛大丁草50%乙醇提取物进行分段富集，依次洗脱得到水、60%乙醇、95%乙醇3个洗脱部位。小鼠通过腹腔注射OVA致敏、雾化吸入OVA激发来复制哮喘动物模型，在激发阶段连续6 d进行灌胃给药治疗。采用行为学评分考察不同部位对哮喘行为学的影响，利用酶联免疫吸附法测定血清、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中IL-5的浓度和血清免疫球蛋白IgE的浓度，采用HE染色对肺组织进行组织病理学评价。结果 模型组小鼠哮喘症状评分升高，血清中IgE和IL-5的水平显著升高，BALF中IL-5的水平显著升高；与模型组比较，60%乙醇段高剂量组小鼠哮喘症状明显改善，血清中IL-5的水平显著降低，BALF中IL-5的水平也显著降低。结合病理学切片观察，60%乙醇段治疗的小鼠较之模型组小鼠肺泡间隔增厚程度降低，血管周围和支气管周围炎症细胞浸润显著减少。结论 毛大丁草50%乙醇提取物的60%乙醇洗脱部位为其抗哮喘的活性部位，其化学成分主要是酚酸类、黄酮类和香豆素类。     

不同精制工艺对柴胡皂苷类物质含量及急性毒性影响研究

目的通过对树脂类型、洗脱溶剂种类和浓度的比较研究,探讨不同精制工艺对柴胡皂苷类物质基础含量高低及急性毒性大小的影响,以确定柴胡的毒性物质基础。方法采用HPLC法、经典急性毒性实验法,进行不同精制工艺的柴胡皂苷a的含量测定及急性毒性比较研究。结果以柴胡皂苷a含量为指标,确定D101大孔树脂比AB-8更优于皂苷类物质的分离纯化,洗脱溶剂为70%乙醇可以达到更为理想的洗脱效果;对小鼠急性毒性的影响大小为:70%乙醇洗脱液>50%乙醇洗脱液>30%乙醇洗脱液>80%乙醇洗脱液>水洗脱液>95%乙醇洗脱液。结论不同精制工艺对柴胡皂苷a含量和毒性大小存在显著差异,且柴胡毒性大小与皂苷类物质含量高低有一定的相关性,故确定采用D101大孔树脂吸附,洗脱液为70%乙醇为富集柴胡皂苷的最佳精制工艺。     

基原对柴胡急性毒性和皂苷类物质含量影响的实验研究

目的对不同基原柴胡的皂苷类物质含量和急性毒性大小进行比较研究,探讨基原对柴胡皂苷类化学成分含量与急性毒性的影响。方法运用UV法、HPLC法、经典急毒实验法,进行南、北柴胡药材中柴胡总皂苷和皂苷a含量测定及急性毒性比较研究。结果北柴胡药材中总皂苷含量4．61％,柴胡皂苷a的含量0．60％,南柴胡药材中总皂苷含量3．53％,柴胡皂苷a的含量0．46％。1日内给小鼠灌胃南、北柴胡药材分别为25．2g／kg、26．4g／kg（按含生药量计算）,分别相当于临床70kg的成人每公斤体重日用量的196倍和205倍以上,观察14天,小鼠一般状况良好,无一死亡。结论北柴胡药材毒性大于南柴胡药材,其毒性的大小与柴胡皂苷类物质含量有一定相关性。     

正常及脑缺血-再灌注大鼠静脉注射清开灵后黄芩苷在脑、肝、肺中的分布

目的研究清开灵注射液(QKL)中黄芩苷(BC)在生理及病理大鼠效应器官(脑、肝、肺)分布的不同。方法取正常和脑缺血-再灌注大鼠,尾静脉注射QKL 800 mg.kg-1后,于不同时间点处死,取脑、肝、肺组织,HPLC-MS测定BC含量。结果静脉给药后,正常大鼠肺中BC含量明显高于肝、脑,脑部浓度最低;脑缺血-再灌注大鼠脑中BC浓度较正常大鼠明显升高,肝中分布也有显著增加,但肺中BC浓度较正常组明显降低。结论QKL中BC在正常及病理大鼠的效应器官均有分布,但两种状态下分布具有明显区别,脑缺血-再灌注状态有利于BC快速透过血-脑屏障。     

通淋片薄层鉴别与定量测定研究

目的制订通淋片的质量控制方法。方法采用薄层色谱法鉴别方中柴胡、苦参碱、大黄、乌药,采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量。结果薄层鉴别方法简单;含量测定方法重现性好,黄芩苷进样量在89.12～1 336.80 ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。黄芩苷的平均加样回收率为97.23%,RSD为1.78%(n=9)。结论所采用方法简便、准确、重现性好,可用于通淋片的质量控制。     

南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性试验比较研究

目的探讨南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性的影响。方法分别制备南、北柴胡水提组分和醇提组分,按照经典小鼠急性毒性试验方法,进行南、北柴胡不同组分的小鼠急性毒性试验比较研究,试验数据用公斤体重法计算最大耐受量（MTD）和最大给药量（MLD）,连续观察14天。结果南、北柴胡不同组分对小鼠急性毒性强度为：北柴胡醇提组分〉南柴胡醇提组分〉北柴胡水提组分〉南柴胡水提组分。南、北柴胡水提组分没有出现死亡,测得MLD值按含生药量计算分别为181.6g·kg-·1d-1和201.6g·kg-·1d-1,分别相当于临床70kg人每公斤体重日用量的1412.4倍和1568.0倍;南、北柴胡醇提组分无法做出LD50,测得MTD值按含生药量计算分别为46.4g·kg-1·d-1和75.2g·kg-1·d-1,分别相当于临床70kg人每公斤体重日用量的360.9倍和584.9倍。结论北柴胡药材毒性大于南柴胡,且南、北柴胡的醇提组分均大于其水提组分。柴胡皂苷类物质含量高低与其毒性大小有一定相关性,推测柴胡皂苷可能是其主要毒性物质基础。     

基于谱效关系的核桃楸皮治疗肝癌药效物质基础研究

目的 基于核桃楸皮不同极性部位HPLC指纹图谱与抗肝癌作用的谱效关系，筛选出核桃楸皮治疗肝癌的药效物质，揭示其治疗肝癌的药效物质基础。方法 采用HPLC法建立核桃楸皮不同极性部位的指纹图谱；采用CCK-8法开展核桃楸皮不同极性部位治疗肝癌的体外药效学研究；采用灰色关联度分析法及偏最小二乘回归分析法，将指纹图谱共有峰峰面积与药效学数据相关联，建立核桃楸皮不同极性部位治疗肝癌体外谱效关系，筛选出其治疗肝癌的药效物质，并进行体外药效验证。结果 不同极性部位指纹图谱中共24个共有峰，其中有8个峰与药效呈正相关且VIP值大于1，确认这8种成分为核桃楸皮治疗肝癌的药效物质。经对照品比对，指认出4号峰为丁香酸、9号峰为鞣花酸、10号峰为槲皮苷、16号峰为山柰酚。结论 本研究通过建立谱效关系筛选出了核桃楸皮治疗肝癌的药效物质，揭示了核桃楸皮治疗肝癌的药效物质基础。     

甘草及其活性成分的表面活性比较研究

目的 研究甘草及其活性成分的表面活性,为更合理地研究甘草中成分的增溶能力提供参考.方法 在不同温度下,采用Wilhelmy吊片法测定溶液的表面张力和溶液的临界胶束浓度(CMC).结果 分析了溶液的表面活性效能、效率和表面过剩浓度,甘草水煎液表面活性较好.结论 甘草中除皂苷组分具有表面活性外,其他组分对表面活性有贡献.     

南柴胡不同炮制品皂苷类物质含量及急性毒性实验比较研究

目的对南柴胡不同炮制品中皂苷类物质的含量和急性毒性大小进行比较研究,探讨炮制对南柴胡皂苷类物质含量与毒性的影响。方法运用HPLC法、经典急性毒性实验法,进行南柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a的含量测定及急性毒性比较研究。结果南柴胡生品、清炒品、醋炙品、酒炙品和蜜炙品不同炮制品中柴胡皂苷a的百分含量依次为0.46%、0.16%、0.22%、0.22%、0.32%。南柴胡生品,清炒品,醋炙品,酒炙品和蜜炙品没有出现死亡,测得最大给药量（MLD）值按含生药量计算分别为25.2、28.8、26.4、26.0、32.4g·kg-1,分别相当于临床70kg人每公斤体重日用量的196、224、205、233、252倍,连续观察14天,小鼠一般状况良好,无一死亡。结论南柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a含量和毒性各不相同,且各样品均未出现死亡,其最大给药量显示南柴胡的各炮制品基本安全低毒,提示炮制对南柴胡药材柴胡皂苷类物质含量和安全剂量范围大小有一定影响。     

正交试验优选柴胡微波炮制工艺

目的:优化醋制柴胡的微波炮制新工艺。方法:采用正交试验,以柴胡皂苷b2和总皂苷含量为评价指标,以醋用量、微波热力、加热时间、药材铺叠厚度为考察因素,确定最佳微波炮制工艺。结果:最佳的炮制工艺为醋用量20kg,微波热力60%,加热时间6min,铺叠厚度1cm。结论:该方法简单、可行,易于控制,可作为醋制柴胡的新方法。     

基于数据挖掘的中药专利复方治疗慢性胆囊炎的用药规律分析

目的 探讨中药专利复方治疗慢性胆囊炎的用药规律。方法 使用中国专利数据库检索治疗慢性胆囊炎的中药处方，建立Excel数据表对处方进行筛选处理，应用古今医案云平台软件对数据进行分析。结果 筛选治疗慢性胆囊炎的复方170个，用药以寒性、苦味为主，归经以肝经为主。使用频次前10位的中药分别为柴胡、甘草、郁金、金钱草、茵陈、白芍、大黄、川楝子、黄芩、延胡索；关联规则显示药物以白芍-柴胡、白芍-甘草、黄芩-柴胡、大黄-金钱草、川楝子-柴胡、川楝子-郁金、川楝子-金钱草配伍较多；聚类分析得到7类药物组合；复杂网络分析得到30味核心中药和3组核心药物网络配伍。结论 治疗慢性胆囊炎的中药专利复方药物性味以苦寒为主，多归肝经，用药以疏肝利胆、清热利湿、理气活血、泻下通腑类药物为主，配伍以疏肝柔肝、缓急止痛、和解表里、清热利湿、疏肝利胆为主，治疗上常用四逆散、金铃子散、大柴胡汤、茵陈蒿汤等方进行加减。