肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化

目的 探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法 以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系（NDUFA13fl/-;Alb-Cre）作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察,分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果 HE染色、Masson染色发现4周 龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型;2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低（P<0.05）。免疫荧光与免疫组化结果显示,NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生（P<0.05）,以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌（P<0.05）;同时,α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多（P<0.05）,基质金属蛋白酶MMP-9表达降低（P<0.05）,而其抑制剂TIMP-1表达明显增加（P<0.05）。结论 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型,可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。     

沙格列汀对糖尿病小鼠动脉粥样硬化和脂肪性肝炎的影响

目的：探讨二肽基肽酶4（dipeptidyl peptidase 4,DPP4）抑制剂沙格列汀对2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）小鼠合并动脉粥样硬化和脂肪性肝病的影响及其机制。方法：ApoE-/-小鼠高脂喂养、高脂喂养+小剂量链脲佐菌素分别构建非糖尿病、T2DM合并动脉粥样硬化和脂肪性肝病小鼠模型,分为非糖尿病治疗组（HS,n=8）、对照组（HF,n=8）,糖尿病治疗组（DS,n=8）、对照组（DM,n=8）。HS、DS组予以沙格列汀15 mg/（kg·d）灌胃治疗,对照组等量生理盐水灌胃,12周后观察主动脉斑块、肝脏脂肪沉积、炎症浸润、纤维化程度以及炎症小体NLRP3活化和炎症介质IL-1β表达变化。结果：DS组较DM组血浆血糖、游离脂肪酸、甘油三酯和ALT、AST水平明显降低（P＜0.01）,肝重比明显减小（P＜0.01）,肝脏脂肪沉积、巨噬细胞浸润及纤维化程度显著减轻（P＜0.01）,肝组织内NLRP3炎症小体及IL-1β表达明显减少（P＜0.01）,HS组较HF组上述部分指标也出现明显降低,但HS、DS组较对照组动脉粥样硬化斑块均无明显变化。结论：沙格列汀通过降低血浆血糖和FFA水平,抑制肝脏巨噬细胞聚集、减少NLRP3炎症小体活化等作用抑制糖尿病性脂肪肝的发生和发展,但对动脉粥样硬化没有治疗作用。     

鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌的抑制作用及机制

目的 研究鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝癌的抑制作用及其对炎症小体相关通路的影响，探讨其肿瘤抑制作用与炎症小体信号通路的关系。方法 65只雄性SD大鼠平均分为5组（13只/组）：对照组（Con）、DEN模型组（DEN）、鳖甲煎丸低剂量治疗组［DEN+BJJ-L，0.55 g/（kg· d）］、鳖甲煎丸中剂量治疗组［DEN+BJJ-M，1.1 g/（kg· d）］及鳖甲煎丸高剂量治疗组 （DEN+BJJ-H，2.2 g/kg· d）。在使用DEN造模4周后，分别使用鳖甲煎丸低、中、高3种剂量灌胃处理，继续造模并持续给药12周 后，收集组织通过HE和Masson染色观察肝脏组织病理形态学改变，通过ELISA检测了大鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）含量以判断肝损伤，利用ELISA检测肝脏组织中氧化应激相关指标，通过免疫印迹实验及ELISA方法对炎症小体相关通路的分子表达进行检测。结果 鳖甲煎丸可显著抑制大鼠肝脏肿瘤生长，HE和Masson染色结果显示鳖甲煎丸可降低大鼠肝组织纤维化程度，减少癌变细胞和炎性细胞浸润。ELISA显示，鳖甲煎丸可显著降低DEN处理后大鼠血清中增加的ALT、AST、ALP和TBIL含量，同时显著升高肝组织中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶含量，并降低丙二醛水平。对炎症小体通路相关分子的检测结果表明，鳖甲煎丸处理可显著降低肝脏NLRP3、ASC、caspase-1、pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和 IL-18表达水平，且呈现剂量依赖相关。结论 鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌的有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖且这种抑制作用与抗氧化能力的增强及显著下调炎症小体相关通路相关。     

苦参素对肝纤维化大鼠肝脏肌细胞增强因子2信号通路的影响

目的:探讨苦参素(OMT)抗肝纤维化的作用效果及对肝脏肌细胞增强因子2(MEF2)信号通路的影响。方法:采用皮下注射50%CCl_4的方法制备肝纤维化模型大鼠并对模型大鼠灌胃40 mg/kg OMT治疗,采用HE、Masson和免疫组织化学染色法检测大鼠肝组织损伤和纤维化程度,应用荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织MEF2信号通路相关基因MEF2A和MEF2C表达水平。结果:通过HE、Masson染色证实成功制备了肝纤维化大鼠模型;免疫组织化学表明在肝纤维化大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)高表达;荧光定量PCR结果显示在肝纤维化大鼠肝组织中MEF2A和MEF2C表达升高(P<0.05);同时,OMT可降低肝纤维化大鼠肝组织中MEF2A和MEF2C的表达水平(P<0.05)。结论:在肝纤维化模型大鼠中MEF2信号通路被激活,OMT抗肝纤维化作用可能部分是通过抑制MEF2信号通路的活化发挥作用的。     

NOX4-NLRP3信号通路在衰老小鼠肾脏纤维化中的激活研究

目的 探索NADPH氧化酶4(NOX4)和核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活在衰老相关肾损伤中的作用和机制。方法 以6、16、20和24月龄小鼠为研究对象，试剂盒检测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平；肾脏组织冰冻切片检测β-半乳糖苷酶(β-Gal)及活性氧(ROS)的水平。HE、PAS和Masson染色观察肾脏的病理变化；免疫组化检测胶原蛋白Ⅳ(COL4)和NLRP3的表达。蛋白免疫印迹检测肾脏组织NOX4-NLRP3信号通路中相关蛋白的表达。结果 与6月龄小鼠比较，16月龄小鼠BUN和SCr水平、肾脏β-Gal活性及ROS水平轻度升高，肾小球和肾小管损伤较轻，没有明显的肾脏纤维化。而在20和24月龄小鼠中上述指标则增加，肾小球和肾小管的损伤增加，出现了肾脏的纤维化。此外，介导ROS生成的NOX4及NLRP3炎症小体相关蛋白的表达在20和24月龄小鼠肾脏中上调。结论 NOX4-NLRP3信号通路可能在衰老过程中激活并促进肾脏老化和肾脏纤维化。     

慢性肝炎患者肝脏炎症程度与肝纤维化的关系

目的：探讨慢性肝炎患者肝脏炎症程度与肝纤维化的相关性。方法通过观察496例慢性肝炎患者的细针穿刺病理,结合网状纤维染色和Masson染色分析肝纤维化与炎症分级程度的相关性。结果检测的慢性肝炎患者肝组织纤维化情况随肝组织炎症活动程度加重而升高（P＜0.005）。结论慢性肝炎患者肝组织纤维化程度的改变能反映出患者肝组织炎症程度的变化。     

ICOS在调控肝纤维化Tfh极化中的作用

目的探讨ICOS在调控肝纤维化Tfh极化中的作用。方法 (1)比较敲基因小鼠与野生型小鼠肝脏病变及生存率。(2)比较ICOS敲基因小鼠与野生型小鼠TIMP-1表达水平。结果 ICOS-KO小鼠的肝脏肿大的程度减轻;生存率提高;ICOS-KO小鼠肝组织TIMP-1的表达水平低于野生型小鼠,在7、12、16周亦呈显著性差异。结论 ICOS信号参与肝纤维化的Tfh极化及肝纤维化进程。     

消退素D1通过影响小胶质细胞代谢抑制神经炎症改善阿尔茨海默病认知功能

目的：观察消退素D1（reslovin D1,RvD1）对Aβ诱导的小胶质细胞炎性激活和代谢紊乱的影响以及对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）转基因小鼠认知功能的影响。方法：培养小胶质细胞株BV2,予以脂多糖（LPS）、淀粉样蛋白（amyloid β,Aβ）和RvD1处理,使用RT?PCR方法观察Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3（Nod?like receptor pyrin domain?containing protein 3,NLRP3）炎症小体的表达,使用共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态学改变。通过给予AD转基因小鼠腹腔内连续10 d注射RvD1 5 mg/（kg·d）,分别使用免疫组织化学染色（IHC）、免疫荧光（IF）、实时荧光定量PCR（RT?PCR）方法观察AD小鼠海马区NLRP3炎症小体通路、小胶质细胞标记物（Iba1）以及线粒体代谢调控相关因子的表达变化,并通过条件恐惧测试（FCT）探究其对于AD小鼠行为学的影响。结果：RvD1抑制了小胶质细胞NLRP3炎症小体激活。RvD1处理后小胶质细胞线粒体形态结构由异常的点状碎片状变为正常的条索状。RvD1治疗后,AD小鼠海马区NLRP3以及Iba1表达水平显著降低,同时线粒体代谢紊乱得到改善,并且认知功能得到恢复。结论：RvD1可能通过改善小胶质细胞线粒体代谢紊乱,抑制神经炎症,最终提高AD小鼠的认知功能。     

橘皮素通过抑制Notch信号通路干预小鼠肝纤维化进程

目的 探讨橘皮素对胆汁淤积性肝纤维化小鼠模型的治疗机制。方法 将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组（n=10）、胆总管结扎手术（biliary duct ligation, BDL）模型组（n=15）、橘皮素治疗组（n=10）及单纯橘皮素用药组（n=10）。药物治疗组中,BDL手术10d后开始橘皮素灌胃,模型建立30d后采血处死各组小鼠并留取肝组织。通过H-E染色、Masson及天狼星红染色分析各组小鼠肝组织纤维化程度;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组小鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;通过蛋白质印迹、荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学方法检测各组小鼠肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量及Notch通路各组分表达量变化;通过免疫组化法检测肝纤维经典通路TGF-β1/smads通路各组分表达量变化。结果 造模30d后,与BDL模型组相比,橘皮素治疗组小鼠肝纤维化假小叶减少,纤维化病理评分值低（P<0.05）;胶原纤维沉积减少（P<0.05）,Ⅰ型胶原纤维总量减少（P<0.05）;小鼠肝功能指标ALT、AST明显降低（P<0.05）,纤维化指标HA、LN降低（P<0.05）;Hyp含量降低（P<0.05）,Notch信号通路组分Notch1、RBPJ、Hes1、Hey1蛋白及RNA表达量均下调（均P<0.05）;肝纤维化TGF-β1/smads经典通路组分TGF-β1、smad2及smad3表达量下调（均P<0.05）。结论 橘皮素作为Notch信号通路抑制剂可通过与TGF-β1/smads通路相互作用延缓肝纤维化进程。     

异佛莱心苷抑制四氯化碳致小鼠肝纤维化的初步研究

目的探讨异佛莱心苷对四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)所致小鼠肝纤维化的抑制作用。 方法将24只C57BL6J小鼠随机分为空白对照组、肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组,每组6只。肝纤维化模型组、异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组通过腹腔注射CCl4建立肝纤维化模型,每周3次,共12周。从第6周起,异佛莱心苷治疗组小鼠每日灌胃异佛莱心苷（10 mmol/L）,水飞蓟素治疗组小鼠每日灌胃水飞蓟素100 mg/kg,连续给药6周。采集各组小鼠静脉血,血清检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）;肝组织做HE染色、Masson染色和天狼星红染色;组织免疫荧光检测TGF-β1的表达;ELISA法检测各组血清中TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western印迹法检测肝脏AKT/Smad2通路变化。 结果肝纤维化模型组血清ALT和AST较空白对照组显著升高(P<0.05),异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组小鼠血清ALT和AST均较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05),小鼠肝重和肝重/体重也较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。两组小鼠肝组织病理学形态较肝纤维化模型组有一定程度的改善。组织免疫荧光显示肝纤维化模型组TGF-β1表达较空白对照组升高;异佛莱心苷和水飞蓟素治疗后肝脏TGF-β1表达降低。异佛莱心苷治疗组和水飞蓟素治疗组炎症指标（TGF-β1、IL-1β、IL-6和TNF-α）较肝纤维化模型组显著降低(P<0.05)。Western印迹法结果显示肝纤维化后p-Smad2、Smad2和p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.05),但异佛莱心苷治疗后肝脏组织中AKT/Smad2表达下降(P<0.05),提示该通路异常激活被抑制。 结论异佛莱心苷对小鼠肝纤维化有抑制作用,其作用机制可能与抑制炎症反应和AKT/Smad2通路有关。     

肝星状细胞与脂肪性肝病和肝纤维化

脂肪性肝病和肝纤维化是最常见的两种弥漫性肝脏病理学改变,在致病因素作用下两者常相继发生或合并存在,并可进一步发展为肝硬化,严重威胁人民生命健康。近年来由于生活水平的不断提高、饮食结构的变化以及预防保健措施的相对滞后,在代谢性肝病中脂肪性肝病的发病率正在逐步上升,在我国某些地区已成为仅次于病毒性肝炎的第二大常见肝病。肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应,表现为肝内结缔组织增生与沉积,它是向肝硬化发展的中间环节。肝纤维化是肝脏细胞外基质异常生成和积累的结果,肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞、窦内…     

脂肪肝与痰涎肝

中医学之痰涎,来源于五谷,是由于机体代谢失常产生。张景岳讲到"痰即人身之津液,无非水谷之所化(按:‘化’即代谢)。此痰亦即化之物,而非不化之属也……但化得其正则形体强,营卫充……若化失其正则脏腑病,津液败而血即成痰。"李时珍也曾说过"痰之为物……入于肝则流伏,蓄聚而成胁痛"及尤在泾"左胁之痛,多因留血,右胁之痛,悉是痰积",说明肝有一特异证候,即痰涎肝。痰涎肝与脂肪肝无论生理、病理、体征等极为相似,故冠以痰涎肝之名。     

血型不合肝移植治疗肝功能衰竭

目的探讨血型不合肝移植治疗肝功能衰竭的可行性和疗效。方法回顾性分析本中心包括21例血型不合在内的66例肝移植治疗肝功能衰竭的临床资料,包括终末期肝病模型（MELD）评分、生存率和主要并发症的发生率。结果血型相同组和血型不合组受体MELD评分分别为31．7±3．2和32．8±2．9,差异无统计学意义（P=0．154）。两组平均生存时间分别为（806．0±70．0）d和（720．3±118．5）d,术后3个月、1年、2年、3年生存率分别为84．2％、77．4％、67．6％、60．1％和75．6％、64．0％、58．2％、58．2％,两组累积生存率差异无统计学意义（P=0．417）。急性排斥反应发生率分别为8．9％（4／45）和19．0％（4／21）,差异无统计学意义（P=0．253）。血型不合组术后感染和胆道并发症发生率分别为76．2％（16／21）和28．6％（6／21）显著高于相同组的48．9％（22／45,P=0．037）和8．9％（4／45,P=0．038）。严重感染和肾功能衰竭是血型不合肝移植术后早期主要死亡原因。结论在血型相同供肝严重短缺的情况下,ABO血型不同肝移植是治疗肝功能衰竭的有效手段。感染和。肾功能衰竭是围手术期最主要死因。合理的免疫抑制治疗、有效控制感染、加强围手术期的管理是提高血型不合肝移植成功率的关键。     

腹腔镜肝切除治疗肝脏良性肿瘤

目的探讨腹腔镜肝切除对肝脏良性肿瘤的治疗价值。方法不阻断肝脏血流的情况下,应用多功能手术解剖器(PMOD)进行完全腹腔镜下肝切除14例,其中肝海绵状血管瘤11例,肝脏局灶性结节性增生1例,肝脏肉芽肿性炎症1例,肝囊肿纤维化1例。结果14例腹腔镜肝切除术均获成功。无中转开腹,无术后死亡,无术后并发症发生。平均手术时间153．6min,术后平均住院时间6．4d。随访35．6个月(3～44个月)无一例复发。结论对于有症状或诊断不明的肝脏肿块,同时伴胆囊结石(需手术切除)的肝脏血管瘤患者,采用PMOD进行腹腔镜肝切除是一种安全有效的治疗手段。     

对进展期肝癌肝脏移植治疗进展

肝移植可能是根治肝癌的方法。而进展期肝癌早期易复发、长期预后较差,曾是移植的禁忌症。目前通过严格限定移植标准和术前降期治疗,患者移植术后可能获得较好的预后。笔者通过查阅近年来的相关文献,对移植标准的演进和移植前降期治疗的进展作一综述。     

脂肪肝对肝功能的影响

目的：了解脂肪肝对肝功能的影响。方法：对4009名各类人员做空腹腹部B超、肘静脉血肝功能检验、胸部X片等检查。结果：脂肪肝的发病率为35．5％，不同程度脂肪肝伴有肝功能异常者42名，占脂肪肝患者的2．9％，但基本排除由脂肪肝引起。结论：因营养过剩引起的脂肪肝一般不会导致肝功能异常。脂肪肝的真正危害性并非其对肝脏本身的影响，而在于引起脂肪肝的原因——肥胖、高脂血症、嗜酒等诱发心脑血管疾病的高危因素。     

螺旋CT肝脏分区容积研究

目的　观察正常肝脏、肝硬化肝脏和肿瘤肝脏各分区容积的变异性。方法　收集行CT扫描的住院肝硬化病人 5 0例 ,正常对照组 4 0例 ,异常对照组 (肝右叶巨块型肝癌 ) 2 9例。分别测量正常肝、肝硬化肝的 4个分区容积和异常对照组的左外区容积 ,比较三组各值和差异。结果　正常肝和肝硬化肝左外区 ,左内区 ,右前区 ,及右后区的构成比分别为 [(16 .8± 2 .6 ) %、(15 .5± 3.3) %、(30 .5± 3.2 ) %、(31.9± 3.0 ) % ]和[(13.9± 6 .8) %、(2 0 .0± 7.95 ) %、(31.35± 5 .9) %、(30 .4± 5 .8) % ];肝硬化组、正常对照组和异常对照组三组所测的左外区容积分别为 15 9.0 0ml、15 8.97ml和 2 4 7.76ml,异常对照组与其它两组差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　肝硬化时 ,左外区容积变化无差异 ,左内区、右前区和右后区均有明显缩小。右半肝巨大肝癌时 ,左外区容积代偿性增大。