低强度脉冲超声波对体外培养的兔骨髓基质细胞成骨作用的影响

目的：研究低强度脉冲超声波（LIPUS）对体外培养的兔骨髓基质细胞（BMSCs）成骨能力的影响。方法：抽取新西兰白兔的骨髓，体外分离纯化获取BMSCs，加入条件培养基后随机分为实验组和对照组；实验组应用LIPUS对BMSCs每天作用20min，对照组未予作用。通过倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况，分别于1、2、3周后停止LIPUS作用，应用碱性磷酸酶（ALP）和Von Kossa染色的方法鉴定细胞成骨性能。结果：BMSCs经LIPUS刺激后，细胞形态变大，核增大，核质比减小；而对照组细胞相对扁平，折光率降低。BMSCs经LIPUS刺激1、2、3周后，ALP活性均较对照组明显增高（P〈0．05）。LIPUS刺激3周后，实验组钙结节像素值较对照组像素值明显增多（P〈O．05）。结论：LIPUS能促进条件培养基中的BMSCs向成骨细胞转化。     

鸢尾素与血管钙化的研究进展

血管钙化( vascular calcification,VC)是一种活跃、复杂的生物过程,并非简单的血液钙磷稳态破坏后所产生的异常沉积,而是由血管内皮细胞和平滑肌细胞( vascular smooth muscle cells,VSMCs)所分化成为类成骨/软骨细胞,进而分泌有机质所导致的钙沉积.血管钙化是多种钙化促...     

低强度脉冲超声波促进脊柱融合的研究进展

脊柱融合术是重建脊柱稳定性的常用手术方案,但是面临融合失败、假关节形成等并发症。研究发现低强度脉冲超声波(low-intensity pulsed ultrasound, LIPUS)可以明显促进脊柱融合,减少融合失败发生率,其病理基础为软骨细胞增殖和分化的软骨内成骨。进一步研究发现,LIPUS不仅可以直接促进间充质干细胞向成骨区域转移,促进成骨细胞和软骨细胞增殖、分化,同时,动物实验还证实LIPUS可以促进成骨区域血管新生和神经支配,进而促进植骨融合。     

高磷、高钙诱导人血管平滑肌细胞钙化的研究

目的：探讨高磷及高钙诱导血管平滑肌细胞发生钙化的分子机制。方法：以人血管平滑肌细胞（ VSMCs）为模型,采用不同钙磷浓度的培养基与细胞共培养12 d,将细胞分为正常钙、磷组（对照组）、高磷组、高钙组和高磷﹢高钙组,分别采用免疫印迹（ western-blot）技术、逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测人血管平滑肌细胞核心结合因子α1（Cbfα1）、骨钙素、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和mRNA的表达;高磷﹢高钙条件孵育下的细胞加入ZVAD-FMK干预后,再次采用western-blot技术检测Cbfα1、骨钙素蛋白质表达的情况。结果：试验组Cbfα1、骨钙素表达增强（ P=0.013;P=0.007）,而肌成纤维细胞的特异性标志物α-SMA表达下降（P=0.009）,对照组上述3个指标无明显变化（P=0.055、P=0.074、P=0.63）;加入ZVAD-FMK与高磷﹢高钙组细胞共培养后,Cbfα1、骨钙素蛋白质的表达受到明显抑制。结论：高磷或（和）高钙通过使血管平滑肌细胞转化为成骨样细胞而导致钙化的发生;ZVAD-FMK可以在一定程度上抑制这一病理生理进程,提示凋亡和成骨分化均参与了钙化过程。     

腺嘌呤诱导慢性肾脏病大鼠模型的骨与矿物质代谢异常

目的观察腺嘌呤诱导的慢性肾脏病(CKD)大鼠模型矿物质代谢生化标志物、血管钙化和肾性骨病改变的特点。方法 20只雄性SD大鼠随机分2组:正常对照组和CKD组。第2周末,行血清生化标志物检测。第6周末处死大鼠,行血清生化标志物检测、主动脉血管病理学检查和血管钙磷含量测定,取股骨和第五腰椎做骨密度(BMD)检查、骨形态计量学分析。结果在第2和第6周末,CKD组大鼠血肌酐、尿素氮、血磷、血清甲状旁腺激素较正常对照组均明显升高,血钙明显下降。CKD组有50%的大鼠发生中膜血管钙化,正常对照组无血管钙化发生。CKD组的血管钙、磷含量均明显大于正常对照组。BMD检查,与正常对照组比较,CKD组的全股骨、股骨皮质骨、股骨小梁骨和第五腰椎BMD均明显降低。骨形态计量学方面,CKD组大鼠的小梁骨骨吸收和骨形成均处于高水平,处于高转换状态;CKD组大鼠小梁骨和皮质骨骨量明显低于正常对照组大鼠;CKD组大鼠小梁骨骨矿化与正常对照组大鼠比较无明显差别。结论腺嘌呤诱导的CKD大鼠模型表现为低血钙、高血磷和高血清甲状旁腺激素;血管钙化表现为中膜钙化;肾性骨病表现为小梁骨高转换、正常矿化和低皮质骨和小梁骨骨量,也符合纤维性骨炎的特点。腺嘌呤诱导的慢性肾脏病大鼠模型可以作为未来开展慢性肾脏病骨及矿物质代谢异常研究的良好载体。     

雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究

目的探讨雌性激素在血管钙化中的作用。方法制备30例维生素D3加尼古丁诱导雌性大鼠血管钙化模型,比较去势和去势补充雌激素对血管钙化的影响。放射免疫法测定血浆雌激素水平,并进行VonKossa染色、钙含量、45Ca2+沉积及碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性测定。结果钙化组大鼠血管主动脉平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积,主动脉钙含量、45Ca2+沉积及ALP活性分别较对照高2.5倍、3.3倍和2.4倍(均P<0.01)。预先去势的动物(去势+钙化组)钙含量、45Ca2+沉积及ALP活性分别较单纯钙化组升高28%、34%和20%(均P<0.01)。补充雌激素减轻去势+钙化组钙含量、45Ca2+及ALP活性分别低37%、37%和31%(均P<0.01)。结论去卵巢大鼠主动脉钙化程度加重,补充雌激素能减轻钙化,提示雌激素具有保护血管、拮抗钙化的效应。     

microRNA在高磷诱导血管平滑肌细胞钙化早期的动态变化

目的：观察高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化早期microRNA表达变化,分析其可能参与的信号通路途径。方法：采用高磷（无机磷 2.6 mmol/L）刺激大鼠血管平滑肌细胞系A7r5钙化7 d,邻甲酚酞络合酮比色法和考马斯亮蓝法检测细胞内钙含量,RT PCR法检测平滑肌细胞表型和钙化相关基因的表达变化,茜素红染色观察钙结节。microRNA microarray 法检测高磷刺激后0、3、12 h,680种microRNA表达变化。采用TAM软件分析不同时间点间信号激活情况。结果：高磷诱导的A7r5细胞钙盐含量升高9.6倍（P<0.05）,平滑肌细胞表型mRNA（SM-α actin,SM22）下调（P<0.05）, 钙化相关mRNA（BMP2、MSX2、Runx2）上调（P<0.05）,茜素红染色后可见高磷刺激组有明显钙结节。680种microRNA在3个时间点的表达各不相同,只有6种microRNA分别逐级上调或渐渐下调。26种信号通路被明显激活,其中包括细胞凋亡、分化增殖等已知与钙化相关的信号通路。结论：microRNA参与调节血管钙化是一种动态微调的过程,为血管钙化研究带来新的思路。     

醛固酮促进大鼠血管钙化的可能机制

目的:在大鼠血管钙化模型上,探讨醛固酮(aldosterone,Aldo)在血管钙化中的作用及其可能机制。方法:肌注维生素D3和灌胃尼古丁(VDN)诱导大鼠血管钙化,运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量、45Ca2+沉积及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度,半定量RT-PCR方法测定骨桥蛋白(OPN)mRNA水平;放射免疫法测定血浆和血管组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和Aldo含量。结果:VDN处理组大鼠血管von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量棕黑色颗粒聚集;主动脉钙含量较对照组高5.8倍(P<0.01);血管组织45Ca2+聚积和ALP活性分别较对照组高3倍和2.5倍(P<0.01);血管OPN mRNA表达明显上调58%(P<0.01);AngⅡ和Aldo含量分别较对照组高58%和80%(P<0.01)。运用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和Aldo受体阻断剂可明显改善上述指标变化,与单纯VDN处理组大鼠相比较,VDN+captopril组主动脉钙含量、45Ca2+聚积及ALP活性分别较单纯钙化组低37%、59%和62%(均P<0.01)。而VDN+spironolactone组分别低32%、44%和60%(均P<0.01)。血管OPN mRNA水平亦较单纯钙化组低30%和29%(P<0.01)。结论:VDN诱导的血管钙化大鼠血管组织AngⅡ和Aldo生成增加,ACEI和Aldo受体阻断剂明显减轻血管钙化,提示Aldo促进血管钙化并参与钙化发生。     

酸性环境抑制高磷诱导大鼠VSMCs 钙化的机制研究

目的 探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响及其机制。 方法 体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs 按随机数字表法分为正常对照组、 高磷＋ pH 7.4 组、高磷＋ pH 7.1 组。刺激4 d 后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot 检测活化T 细胞 核因子c1（NFATc1）、Runt 相关转录因子2（Runx2）基因和蛋白的表达。刺激14 d 后,对各组细胞进行 钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性测定。结果 与正常对照组比较,高磷＋ pH 7.4 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达升高（P <0.05）;与高磷＋ pH 7.4 组比较,高磷＋ pH 7.1 组的钙含量、 ALP 活性、Runx2 和NFATc1 表达降低（P <0.05）。相关性分析发现,NFATc1 蛋白表达水平与ALP 活性、 Runx2 蛋白表达水平呈正相关（P <0.05）。结论 酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs 钙化,其机制可 能是通过降低NFATc1 表达,抑制VSMCs 表型转化来实现的。     

血管外膜成纤维细胞在血管重构中的作用

血管重构促进心血管病病程进展，是导致心血管事件和影响预后的关键因素，阻止病理性血管重构是防治心血管病并发症和改善预后的重要策略。传统观点认为血管外膜对血管起支持保护作用，而现在认为血管外膜是血管的信号分析处理中心，直接调控血管的结构和功能，在心血管病的血管重构特别是病程进展和转归中起关键作用。血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要细胞成分，在血管重构发生发展中的作用尤为突出。本文主要论述血管外膜成纤维细胞在血管重构中的作用与机制，特别是其在高血压、动脉粥样硬化、主动脉瘤和主动脉夹层血管重构中的作用。     

Cerebral vascular disorder

<正>209527 Transvenous embolization of cavernous sinus dural arteriovenous fistulaes/Liu Lian(刘恋, Beijing Neurosurg Inst,Cap Univ Med Sci,Beijing 100050)…∥Chin J Neurosurg. -2009,25(8). -695 ～698     

头帕肿瘤综合征蛋白在血管新生内膜形成及血管重构中的作用

目的 探讨去泛素化酶头帕肿瘤综合征蛋白(CYLD)在血管新生内膜增生和血管平滑肌细胞表型(增殖、凋亡、炎症和分化)转化中的作用。 方法 利用 Cyld 基因敲除(Cyld^-/-)小鼠,建立血管损伤(颈总动脉结扎)模型,通过病理染色及免疫组化检测血管新生内膜的形成(H&E、Van Gieson)、细胞增殖(Ki67)、凋亡(TUNEL)以及分化簇3(CD3)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达;通过qRT-PCR法检测颈动脉组织中炎性细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和抗炎细胞因子白介素10(IL-10)的表达。提取Cyld^-/-小鼠的主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),利用免疫荧光验证CYLD的表达,并通过生长曲线和［³H］胸腺嘧啶摄取实验观察VSMCs的生长速度,通过单核细胞黏附实验观察TNFɑ作用下VSMCs对单核细胞(THP1)的黏附作用,采用Western blotting法检测VSMCs中表型相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌22α(SM22α)的表达。 结果 颈总动脉结扎4周后,Cyld^-/-小鼠的血管新生内膜增生及细胞增殖程度明显高于野生型(WT)小鼠(P<0.01);而新生内膜中细胞凋亡无明显差别。Cyld^-/-小鼠血管新生内膜中CD3、MCP-1表达及促炎因子TNFɑ、IL-1β和IL-6表达高于WT小鼠,尤其是IL-6水平显著增加(P<0.01),而抗炎因子IL-10的表达Cyld^-/-小鼠明显低于WT小鼠(P<0.01)。CYLD在Cyld^-/-小鼠的VSMCs传代过程中持续低表达。Cyld^-/-小鼠VSMCs的细胞增殖速度明显高于WT小鼠(P<0.05);在TNFɑ作用下,Cyld^-/-小鼠VSMCs对THP-1的黏附作用明显高于WT小鼠(P<0.05);Cyld^-/-小鼠VSMCs中表型相关蛋白α-SMA和SM22α的表达明显低于WT小鼠。 结论 在血管损伤过程中,去泛素化酶CYLD通过影响血管平滑肌细胞表型(增殖、凋亡、炎症和分化)转化,参与血管新生内膜的形成,从而在血管修复及重构中发挥关键作用。