噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌丁胺卡那耐药性研究

目的建立快速测定结核分枝杆菌丁胺卡那霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌丁胺卡那霉素耐药性测定中的应用价值。探讨噬菌体检测技术（PhaB）快速检测丁胺卡那霉素抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。方法应用PhaB测定103株结核分枝杆菌（MTB）临床分离株对丁胺卡那霉素的耐药性,并与绝对浓度法药敏结果比较,对两法检测结果不符的菌株进行比例法测定。结果以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则PhaB检测丁胺卡那霉素的敏感度、特异度及准确性分别为85.7%、89.2%和87.4%;共有13株菌株PhaB法药敏结果与绝对浓度法检测结果不符,其中9株PhaB法药敏结果与比例法相符合。结论 PhaB检测丁胺卡那霉素药敏结果与绝对浓度法有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。     

显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究

目的建立快速测定耐药结核分枝杆菌(MTB)的显微镜观察药敏检测(MODS)技术,并评价其临床应用价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对最佳检测条件进行探讨。应用该技术对192株MTB临床分离株进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的药敏检测,并与传统绝对浓度法药敏结果进行比较,对两法检测结果不一致的菌株进行BACTEC-960测定。结果 MODS药敏检测时间中位数为6d。以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS技术进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星药敏检测的敏感度分别为97.8%、98.7%、88.4%、93.2%、96.4%;特异度分别为98.0%、94.8%、94.3%、99.0%、95.6%;符合率分别为97.9%、96.4%、92.1%、96.4%、95.8%。结结论 MODS技术可作为MTB耐药性的快速检测方法。     

结核分枝杆菌耐砒嗪酰胺pncA基因突变的检测

目的 了解青岛市结核分枝杆菌(MTB)耐砒嗪酰胺(PZA)分离株pncA基因的突变情况,探讨其与耐PZA之间的关系.方法 应用BacT/ALERT 3D培养系统对25例MTB临床分离株进行常规培养和药敏检测,通过PCR扩增pncA全长基因,DNA序列分析检测pncA基因的突变情况.结果 25株MTB临床分离株有22株扩增出含pncA全基因的序列,进行DNA序列分析表明有6例发生了pncA基因的突变,突变发生在pncA基因29、349、428、533、539、541位的核苷酸,并导致PZA酶氨基酸序列的改变.结论 pncA基因突变是青岛市MTB临床分离株耐PZA的分子机制之一.     

PCR-探针熔解分析法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的临床应用

目的评价PCR-探针熔解分析法(probe melting analysis assay,PMAA)检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平(rifampin,RFP)耐药性的临床应用价值。方法采用常规比例法和PCR-PMAA对512株MTB临床分离株进行RFP药敏试验,并进行RFP耐药相关基因rpoB DNA测序。结果以常规比例法为标准,PCR-PMAA检测RFP耐药性的敏感性、特异性分别为97.5%、96.2%,阳性和阴性预测值分别为94.1%、98.4%、符合率及约登指数分别为96.7%及0.93。193株比例法和PCR-PMAA两法检测均耐药的菌株,经DNA测序证实174株rpoB基因RFP耐药决定区(RFP resistance determining region,RRDR)发生单位点密码子突变,19株RRDR发生不同组合型的双位点密码子联合突变;5株比例法检出耐药、PCR-PMAA敏感的菌株,DNA测序rpoB基因未见突变;12株比例法检出敏感、PCR-PMAA耐药的菌株,DNA测序证实其中7株511位点密码子突变,5株533位点密码子突变;302株两法检测均敏感菌株DNA测序结果未见rpoB耐药相关的基因位点突变。PCR-PMAA检测MTB临床分离株rpoB基因突变结果与DNA测序结果完全一致。结论 PCR-PMAA法能高效检出MTB对RFP耐药的相关基因突变,用于检测MTB对RFP耐药性的敏感性高、特异性强,方法简便、快速、价廉,具有良好的临床应用前景。     

DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性方法的建立

目的:利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌(MTB)对链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药性的技术平台建立.方法:应用基因芯片法测定160株MTB临床分离株的SM和EMB耐药性,并与BAC了EC960法结果进行比较,分别对结果相符与不相符的菌株进行测序.结果:基因芯片法测定160株MTB临床分离株,结果显示SM敏感111株、耐药49株,以rpsL 43、88位aag突变为agg为主.芯片检测结果EMB敏感142株、耐药18株,耐EMB的MTB以embB 306位atg突变为gtg为主.基阅芯片法检测链霉素、乙胺丁醇耐药的敏感性、特异性分别为80.0%、99%和60.0%、100%.两种测定方法结果不符的菌株中,采用基因测序法测定,结果显示基因芯片法检测点突变具有高度的特异性.结论:基阅芯片法检测MTB对SM与EMB耐药性方法具有快速、简单,特异性高,准确性高,可作为MTB的SM与EMB耐药性快速筛选方法.     

噬菌体生物扩增技术在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的探讨噬菌体生物扩增技术(PhaB)在结核分枝杆菌(MTB)耐药研究中的应用价值。方法应用PhaB法同时测定233株结核分枝杆菌分离株对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)及左旋氧氟沙星(LEV)的耐药性,并用改良罗氏培养法(LJ)做对照,比较两种方法的检测结果。结果PhaB法检测INH、SM、RFP、LEV的药敏结果与改良罗氏培养法药敏结果相比符合率分别为97.4%、96.6%、95.3%、96.9%。同时检出耐多药菌株26株,占11.1%。结论PhaB法能快速进行结核分枝杆菌的药敏检测并与金标法LJ符合率高,可作为基层结防单位MTB耐药性的快速筛选方法。     

结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性检测方法比较

目的  探讨基因芯片法和改良罗氏培养及比例法药敏试验在结核分枝杆菌（MTB）利福平（RFP）和异烟肼（INH）耐药性测定中的应用价值。方法  应用基因芯片法检测200株MTB临床分离株RFP耐药基因rpoB的6个位点、13种突变型,INH耐药基因katG的1个位点、2个突变型和INH inhA基因启动子-15位、1个C→T突变型。同时对MTB菌株进行罗氏培养及比例法药敏试验,并比较测定结果的敏感性、特异性和符合率。结果  基因芯片法检测敏感株152株、耐药株48株,罗氏比例法检测敏感株161株、耐药株39株。若以罗氏比例法测定结果为判断标准,基因芯片法检测RFP耐药性的敏感性、特异性和符合率分别为85.0%、98.8%和97.5%;检测INH耐药性的敏感性、特异性、符合率分别为82.8%、92.4%和91.0%。结论  基因芯片法对结核菌耐药菌株可做出初筛,与结核菌药敏试验联合检测可提高诊断率。

     

耐多药结核病快速诊断试剂盒检测耐药结核分枝杆菌的探讨

目的:探讨耐多药结核病快速诊断试剂盒检验耐药结核分枝杆菌的具体效果。方法:选取50株MTB临床分离株,并采用耐多药结核病快速诊断试剂盒来对其中的耐药MTB进行检测,分析其特异度、敏感度和可重复性,并与传统的试验方法相比较。结果:两种方式的特异度和敏感度对比结果:在50株临床分离株中,药物敏感度的实验结果为限制耐多药菌株32株,单耐异烟肼菌株8株,单耐利福平菌株3株,全敏感菌株5株。而将其用于耐多药结核病快速诊断试剂盒中进行评估,结果为35株利福平耐药菌株中检测出33株,敏感度达到了94.3%;在40株耐异烟肼菌株中检测出33株,敏感度达到了82.5%。而剩余的全敏感菌株全部符合标准,特异度达到了100%。而与测序结果进行比较,50株临床分离株中除了1个奶多样样本的rpoB基因与测序结果不符,其余所有突变位点的测序结果都完全一致,且重复性实验的结果也证实了其重复性达到了100%。结论:耐多药结核病快速诊断试剂盒有着非常出众的效果,对耐利福平具有非常显著的特异度和敏感度,因而具有重要的临床价值,可以在今后的临床工作中被广泛使用。     

青岛地区结核分支杆菌吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测

目的 了解青岛地区结核分支杆菌耐吡嗪酰胺（PZA）分离株pncA基因突变的情况，探讨其与耐PZA之间的关系。方法 应用BACTEC-460培养系统对76例结核分支杆菌临床分离株进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测，聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测pncA基因的突变。结果 76株结核分支杆菌临床分离株均经PCR扩增出结核分支杆菌复合群保守序列IS6110基因片段，69株扩增出pncA基因的特异序列。后者包括：SSCP泳动异常者18株，其中耐药株13株，敏感株5株；SSCP泳动正常者51株，其中耐药株14株，敏感株37株。结论 青岛地区结核分支杆菌临床分离株耐PZA主要分子机制之一为pncA基因的突变；PCR—SSCP技术能快速准确地检测结核分支杆菌耐PZA基因pncA的突变，可弥补常规药敏试验的不足。     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的结果分析及临床价值

目的：分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌（ MTB）对异烟肼耐药性的结果,评价该技术的临床应用价值。方法同时采用罗氏固体培养法及基因芯片技术对57例疑似耐多药结核涂阳患者的痰标本进行MTB对异烟肼的敏感性检测,分析菌株耐药及突变情况结果,并以罗氏固体培养法为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价。结果57份痰标本中,罗氏固体培养法及药敏试验结果显示,8例为非结核分枝杆菌,49例为MTB,其中对异烟肼耐药13株,耐药率为26．53％（13／49）;49株MTB基因芯片技术检测结果显示,野生型37例,突变株12例,突变率为24．49％（12／49）,突变株中KatG315突变11株,inhA-15突变仅1株。以罗氏固体培养法的药敏结果为金标准,基因芯片法检测的准确率为89．80％,敏感度为94．44％,特异度为76．92％,阳性预测值为91．89％,阴性预测值为83．33％。结论 MTB对异烟肼的耐药突变率较高,突变位点主要是KatG315。采用基因芯片技术检测MTB 对异烟肼的敏感性具有快速、灵敏、准确的特点。     

结核分枝杆菌耐药性检测方法比较

目的:对结核分枝杆菌耐药性的传统检测和基因检测技术进行比较,为临床药敏试验提供参考。方法:收集我市结核病防治研究所临床送检及分离的结核菌株30例,用绝对浓度法检测其耐药性。单链探针反向杂交技术(LiPA)检测其中9例单耐利福平的菌株。结果:绝对浓度法和LiPA技术检测结果吻合度为77.8%,LiPA检测技术所需时间为24~48h,绝对浓度法检测所需时间为4周。结论:LiPA技术检测结核分枝杆菌耐药性与传统检测方法相比较,在时间上具有较大优势,但该技术仅用于耐药基因已经明确的耐药菌株的检测,在临床上可与常规的药敏试验相结合,提高耐药菌株检测的可信度。     

3种常规结核分枝杆菌及耐药突变检测方法的对比研究

目的 评价3种实验室常规检测方法用于诊断肺结核患者结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）及耐药突变情况的应用价值。 方法 回顾性分析经临床确诊的肺结核患者246例,应用Gene Xpert MTB/RIF技术（Xpert法）、BD960液体快速培养法（BD960法）联合快速药物敏感试验（药敏试验）、MTB核酸检测联合MTB耐药基因（DNA芯片法）检测诊断 MTB及耐药突变检出情况。 结果 BD960法对MTB的阳性检出率低于MTB核酸检测和Xpert法,差异有统计学意义（P＜0.05）。药敏试验、MTB耐药基因检测和Xpert法利福平耐药检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。与药敏试验利福平耐药结果相比,MTB耐药基因检测和Xpert法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度和约登指数分别为91.30%、95.32%、84.00%、97.60%、94.47%、86.63%和95.65%、93.57%、80.00%、98.77%、94.01%、89.22%,X-pert 法和MTB耐药基因检测利福平耐药结果高度一致（Kappa值=0.833,0.840）。药物敏感试验和MTB耐药基因检测异烟肼耐药检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 BD960法、Xpert法和MTB核酸检测均能准确检测样本中的MTB,药敏试验、MTB耐药基因检测和Xpert法能分析MTB利福平（异烟肼）耐药情况,MTB耐药基因检测和Xpert法且具有较高的敏感度和特异度,可结合实际需求在耐多药结核病防治中应用。     

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

目的：评估荧光PCR熔解曲线法（熔解曲线法）检测肺结核患者涂阳痰样本结核分枝杆菌（MTB）对一线抗结核药物耐药性价值及耐药特征分析。方法：收集涂阳且培养阳性肺结核患者痰样本和相应MTB菌株各142例,采用熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）耐药情况,同时采用液体药敏法对相应MTB菌株耐药性检测,对两种检测结果行方法学比较。结果：以液体药敏法为标准,熔解曲线法检测痰样本MTB对4种抗结核药物耐药性结果差异无统计学意义（P>0.05）,熔解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB耐药性的敏感度分别为：78.57% (11/14),70.00% (14/20),100.00% (12/12),71.43% (5/7);特异度分别为：92.97%(119/128),96.72%(118/122),97.69%(127/130),100%(135/135);两者符合率分别为：91.55%(130/142),92.96%(132/142),97.89%(139/142),98.59%(140/142);Kappa值分别为：0.601,0.696,0.877,0.826。结论：与传统液体药敏检测相比,熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物SM、INH、RFP、EMB的耐药性效能一致,特异度和符合率均较高。该法对结核患者涂阳痰样本MTB耐药性检测有较好临床参考价值。     

结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒诊断结核分枝杆菌耐药效果研究

目的 评价结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒（GenoType MTBDRplus VER2.0,简称MTBDRplus 2.0）检测利福平和异烟肼耐药的灵敏度和特异度等效能指标,为提高结核分枝杆菌耐药性检测水平提供依据。方法 收集2022年1—12月云南省32个县（市、区）级结核病定点治疗医院分离培养的阳性菌株,经MTBDRplus 2.0检出结核分枝杆菌880株,进行最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）法药敏试验检测。结果 以MIC法为金标准,MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药的灵敏度为67.69%,特异度为98.40%,阳性预测值为77.19%,阴性预测值为97.45%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测异烟肼耐药结果一致性中等,Kappa为0.701(P<0.001);检测利福平耐药的灵敏度为87.80%,特异度为99.40%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为99.40%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测利福平耐药结果一致性较好,Kappa为0.872(P<0.001)。MTBDR...     

荧光PCR溶解曲线法快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变

目的运用荧光PCR溶解曲线法快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变,并将其与传统药敏试验进行比较,从而评价其敏感性、特异性及应用价值。方法收集南通市第六人民医院2014年45株结核分枝杆菌临床分离株,运用荧光PCR溶解曲线法和传统药敏法分别检测其对利福平和异烟肼的耐药性,评价两种方法检测的一致性。结果以传统药敏试验为金标准,荧光PCR溶解曲线法检测利福平耐药突变的灵敏度90.0%(9/10)、特异度93.9%(31/33)、阳性预测值81.8%(9/11)、阴性预测值96.9%(31/32)、符合率93.0%(40/43),其中有2例出现不均一突变,判为敏感;检测异烟肼耐药突变的灵敏度80.0%(12/15)、特异度96.4%(27/28)、阳性预测值92.3%(12/13)、阴性预测值90.0%(27/30)、符合率90.7%(39/43)。与传统药敏有很好的一致性。传统药敏试验和荣光PCR溶解曲线不符合的12株菌株经测序分析,结果荧光PCR溶解曲线法与测序结果保持高度一致性(除20、21号)。结论荧光PCR溶解曲线法能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变,并且有很好的灵敏性和特异性,可用于耐药结核分枝杆菌临床快速筛查。     

微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的 探讨微孔板变色硅胶显色法快速检测利福平(RIF)耐药结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值.方法 对江苏省南通市第六人民医院结核病实验室保存的50株MTB临床分离株用微孔板变色硅胶显色法检测RIF耐药性,并与Bactec MGIT960作比较.再对40份临床涂阳痰标本使用微孔板变色硅胶显色法与Bactec MGIT960同时进行RIF药敏检测,并比较检测结果的灵敏度、特异度、准确度.结果 微孔板变色硅胶显色法最佳接种菌量为10-3 mg/mL、检测最佳时间为7～10 d、RIF的最低抑菌浓度(MIC)判断界值为1.00μg/mL.以Bactec MGIT960检测法为金标准,微孔板变色硅胶显色法对涂阳痰标本RIF药敏检测灵敏度达94.12％,特异度为100％,准确度为97.37％.结论 微孔板变色硅胶显色法可直接检测痰标本中MTB对RIF的药物敏感性.     

基因芯片技术在结核分枝杆菌对利福平敏感性检测中的临床价值

目的 探讨基因芯片技术在结核分枝杆菌(MTB)对利福平敏感性检测中的临床价值.方法 同时采用罗氏固体培养法及基因芯片技术对2015年7月至2016年2月就诊于常州市第三人民医院的76例疑似耐多药结核涂阳患者的痰标本进行MTB对利福平的敏感性检测,以罗氏固体培养法为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 76例标本中,经罗氏固体培养法常规培养及药敏试验初步鉴别,12例为非结核分枝杆菌,MTB标本共64例;经基因芯片技术检测,其中野生型54例,突变株10例,突变率为15.63%(10/64),突变株中rpoB526突变5例、rpoB531突变2例、rpoB511突变、rpoB516突变及rpoB511、rpoB516两者联合突变各1例.以罗氏固体培养法的药敏结果为金标准,基因芯片法药敏检测的准确率为98.44%,敏感度为98.18%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为90.00%.结论 采用基因芯片技术检测MTB对利福平的敏感性具有快速、灵敏、准确的特点.     

吡嗪酰胺敏感性检测在结核病治疗中的应用

目的：了解中国南方地区结核分枝杆菌对吡嗪酰胺（ PZA）耐药的分子特征,同时探讨PZA耐药性对菌阳肺结核治疗效果的影响。方法采用MGIT960系统检测161株结核分枝杆菌的PZA耐药性。同时对上述菌株的pncA和rpsA基因进行测序,分析PZA耐药株与敏感株的突变特征。对161例菌阳结核病患者进行回顾性分析,根据结核分枝杆菌药敏试验结果进行分组,对PZA敏感,非耐多药结核病（ MDR－TB ）患者为组1;对PZA耐药,非MDR－TB患者为组2;对PZA敏感,MDR－TB患者为组3;对PZA耐药,MDR－TB为组4。以上患者强化期均使用PZA治疗,在强化期结束后,对痰菌转阴和病灶吸收情况进行分析。结果（1）161株结核分枝杆菌中,PZA耐药52株,耐药率32.3％（52／161）,敏感109株。57例 MDR－TB 患者中, PZA 耐药39例,耐药率68.4％（39／57）,104例非MDR－TB患者中,PZA耐药13例,耐药率12.5％（13／104）。（2）52株PZA耐药株中,44株pncA基因发生突变,突变率84.6％（44／52）,109株PZA敏感株pncA基因没有发生突变;3株PZA耐药株rp-sA基因发生突变,1株敏感株发生rpsA突变。（3）强化期结束后,组1、组2、组3、组4痰菌阴转率分别为82.42％、46.15％、61.11％和33.33％,组2、组3、组4分别与组1比较,组3与组4比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）;组2与组4比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）与治疗前相比,强化期结束后,组1、组2、组3、组4病灶吸收好转率分别是84.62％、46.15％、61.10％和35.90％。组2、3、4分别与组1比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）,组2与组4,组3与组4比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论（1）pncA基因突变是结核分枝杆菌PZA耐药的主要机制,突变特征是高度多样性。（2）使用MGIT960系统分析结合对PZA耐药相关基因进行测序分析,所得PZA敏感性结果基本与临床治疗结果一致。（3） PZA在MDR－TB患者中耐药率较高。基于其疗效较对PZA敏感的耐多药结核病差,同时鉴于PZA可导致肝毒性,应避免在PZA耐药的结核病患者中继续使用PZA。     

美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌药物敏感性

目的探讨美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌(MTB)药物敏感性,以建立一种简单、快速、敏感和低成本的药敏方法。方法用美蓝还原法测定50株结核分枝杆菌抗结核药物的药敏性,并将结果与传统改良罗氏培养基的绝对浓度法的结果进行比较分析。结果美蓝还原法进行INH、RFP、EMB、SM、LVFX药敏试验的敏感性分别为88.2%、94.7%、90%、91.2%、85.7%;特异性分别为93.8%、93.5%、100%、93.8%、95.3%;准确性分别为90.0%、94.0%、94.0%、96.0%、94.0%。两种方法测得MIC的相同率分别为88.0%、94.0%、90.0%、96.0%、92.0%。结论通过与绝对浓度法比较,美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌药物敏感性具有简单、快速、成本低廉且敏感性较高的优点,可以成为抗结核药物药敏试验方法之一。     

Xpert MTB/RIF试验检测结核分枝杆菌及其耐药性研究

目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)在检测结核分枝杆菌(M.tubercutosis,MTB)及其利福平耐药性方面的应用价值.方法 收集151例疑似结核患者标本,分别进行液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性的敏感度和特异度.结果 以液体变色培养基培养试验作为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测MTB的敏感度和特异度分别为75.8％(25/33)和79.7％(94/118),两者一致性好(K=0.472).以传统比例法药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为80.0％(4/5)和89.3％(25/28),两者一致性好(K=o.595).结论 Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性具有较高的灵敏度和特异度.