BCAT1对HSC-LX2人肝星状细胞纤维化相关基因表达的影响

[摘要] 目的 探讨支链氨基酸转氨酶1（BCAT1）对HSC-LX2人肝星状细胞纤维化相关基因表达的影响。方法 构建携带BCAT1基因的慢病毒载体,将病毒转染HSC-LX2细胞,运用qRT-PCR和Western blotting检测转染BCAT1过表达病毒后的HSC-LX2细胞中BCAT1、ACTA2、TIMP1、MMP2和COL1A1基因的表达情况。结果 携带BCAT1基因的慢病毒转染HSC-LX2细胞后,实验组（转染p-BCAT1）HSC-LX2细胞和对照组（转染Vec）HSC-LX2细胞相比,促进纤维化的ACTA2、TIMP1、COL1A1基因的mRNA及蛋白表达均升高,抗纤维化的MMP2基因的mRNA及蛋白表达均下降,两者的差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论 BCAT1增强HSC-LX2人肝星状细胞中ACTA2、TIMP1、COL1A1促纤维化相关基因的表达,抑制抗纤维化相关基因MMP2的表达。     

HIV与HBV共感染对肝星状细胞纤维化相关基因表达的影响

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)与乙型肝炎病毒(HBV)共感染对人肝星状细胞纤维化部分相关基因表达的影响。方法人肝星状细胞(HSC LX2)分别与HIV X4株(CXCR4噬性)、HIV R5株(CCR5噬性)、HBV、HIV X4+HBV和HIV R5+HBV共同孵育3 d后,采用RTPCR检测细胞中的前胶原蛋白α1(COL1A)、基质金属蛋白酶3(MMP3)及金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)的mRNA表达水平,采用ELISA检测细胞上悬液中相应蛋白含量,结果分别与相应对照样本进行比较。结果HIV和HBV共同作用于HSC LX2细胞比HIV或HBV单独作用更能促进COL1A蛋白合成(P均0.05)。实验组和对照组中MMP3 mRNA和蛋白表达水平差异虽无统计学意义,但实验数据显示,病毒有抑制MMP3基因表达的趋势。HIV、HBV分别作用于HSC LX2细胞可促进TIMP1mRNA以及TIMP1蛋白表达(P均0.05)。HIV和HBV共同作用能进一步提高TIMP1 mRNA以及TIMP1蛋白表达(P均0.05)。结论HIV、HBV分别作用于HSC LX2细胞,能促进TIMP1 mRNA以及蛋白的表达。HIV、HBV共同作用于HSC LX2细胞比单一病毒更能促进COL1A蛋白的合成以及TIMP1 mRNA转录和蛋白的合成。     

TGF-β1和CTGF在周围神经卡压后骨骼肌纤维化中的作用

目的 研究TGF-β1和CTGF在周围神经卡压后骨骼肌纤维化中的表达及与Ⅰ型胶原纤维沉积的关系,并探讨其在周围神经卡压后骨骼肌纤维化中的作用. 方法 取清洁雄性SD大鼠50只,随机分为A组(假手术组,仅分离暴露坐骨神经)和B组(坐骨神经慢性卡压组).术后2、4、6、8和10周,切取各组大鼠卡压侧腓肠肌,行苏木精-伊红、Masson、免疫组化染色和RT-RCR、Western blot检测,观察腓肠肌萎缩和纤维化程度以及TGF-β1、CTGF和Ⅰ型胶原纤维的表达情况. 结果 在各取材时间点B组与A组相比,肌纤维萎缩,细胞外基质中胶原纤维随卡压时间延长逐渐增多;TGF-β1和CT-GF的表达在卡压初期逐渐缓慢升高,于6周左右达到高峰,其后缓慢下降,仍维持长时间高表达. 结论 周围神经卡压后其支配的骨骼肌发生纤维化;在纤维化过程中,骨骼肌组织中TGF-β1和CTGF的表达显著上调,且长时间高表达,Ⅰ型胶原纤维的沉积与TGF-β1和CTGF的表达有关,TGF-β1和CTGF在周围神经卡压后骨骼肌纤维化中发挥重要作用.     

甘草酸二胺对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及机制

目的：探讨甘草酸二胺对肾间质纤维化的作用及其机制。方法：以Wistar大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）为模型，在不同的时间点（7d、14d、28d）观察梗阻侧肾间质纤维化指数；致纤维化的转化生长因子β1（TGF-β1）的表达情况；肾皮质中与肾脏纤维化相关的Smurf2、Smad7信号蛋白等的mRNA及蛋白表达。结果：（1）随着梗阻时间的延长，肾间质纤维化程度逐渐加重，Smurf2基因和蛋白质明显上调，呈时间依赖性（P〈0．01）；Smad7蛋白呈时间依赖性下调（P〈0．01），Smad7基因在各个时间点无明显变化；TGF-β1基因在UUO后第7d达高峰，此后逐渐下降，但仍然高于假手术组（P〈0．01）。（2）甘草酸能改善UUO所致的肾间质纤维化程度（P〈0．01），下调肾脏组织TGF-β1基因的表达（尸〈0．01）；减少Smurf2基因和蛋白质的表达，同时上调TGF-β1信号传导中抑制性因子Smad7的表达（P〈0．01）。结论：甘草酸二胺能保护UUO所致的肾间质纤维化损伤。其可能的作用机制为减少Smurf2核酸和蛋白质的表达，增加抗纤维化作用的Smad7蛋白表达；减少TGF-β1表达，阻止TGF-β1信号传导，从而阻断肾间质的纤维化。     

HIF1A与VEGF在小鼠月经样模型的表达与共定位

目的在小鼠月经模型基础上,研究低氧诱导因子(HIF1A)与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达与定位,探索HIF1A与VEGF在月经发生中可能的调控机制。方法建立小鼠月经样模型,假孕小鼠通过花生油子宫腔注射的方法诱导小鼠子宫内膜发生蜕膜化,切除卵巢致孕酮(P4)撤退以模拟月经的发生。在P4撤退后0、8、12、16、24h分别收集小鼠子宫;利用免疫组化与Western blot方法检测HIF1A、VEGF的定位与表达量,利用Real-time PCR检测二者mRNA相对表达量;分析HIF1A与VEGF的表达变化趋势与相关性。结果 P4撤退后,小鼠子宫内膜发生崩解出血,模拟月经发生。免疫组化结果显示,HIF1A蛋白在P4撤退后12、16h,内膜基质蜕膜细胞核中的表达量逐渐升高;HIF1A表达区域与VEGF表达的区域均集中在子宫内膜蜕膜化区域外周,即崩解组织与基底层交界区域。Western blot蛋白定量结果显示,细胞核中HIF1A蛋白表达量在P4撤退后8、12、16h显著增高,VEGF在细胞质中的表达量在P4撤退后0、8、12h较高。HIF1A与VEGF mRNA的表达变化趋势非常相似,即P4撤退后,逐渐升高,在12h达到峰值,随后逐渐下降。结论结果提示月经发生子宫内膜崩解中,HIF1A转录因子功能激活并调节VEGF mRNA的表达。     

前列腺癌组织中分化抑制蛋白1相互结合蛋白的分离

目的:分离前列腺癌组织中细胞分化抑制蛋白1(Id1)的相互结合蛋白,以探讨Id1在前列腺癌中的作用途径和机制。方法:首先构建PolyHis-Id1的表达载体pET-28a/Id1,并在大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,然后采用牵出试验钓取前列腺癌组织中的Id1相互结合蛋白。结果:蛋白电泳并染色后发现一清晰蛋白条带,用活化转录因子3抗体经Western印迹尝试检测发现其确为活化转录因子3。结论:在人前列腺癌组织中,Id1可能与活化转录因子3相互结合发挥效应。     

创伤后IL-2表达受抑与核转录NFAT和AP-1变化的关系

目的探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系.方法采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后6、12h,1、4、7、10、14d处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL-2活性;提取脾细胞RNA以测定IL-2 mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NFAT、AP-1的DNA结合活性,用免疫蛋白印迹法(Western blot assay)检测c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达.结果和正常对照组相比,创伤后IL-2活性均有不同程度的降低,其受抑的程度在创伤后4d更为明显.创伤后脾细胞NFAT和AP-1的DNA结合活性亦逐渐下降,至伤后4d时下降最明显,为正常对照组的41%和49%.这与创伤后脾细胞IL-2的活性和IL-2 mRNA的降低相一致.c-Fos蛋白水平在伤后1、4d明显降低;c-Fos蛋白表达无明显变化;JunB蛋白水平仅在伤后1d明显表达.结论上述结果提示,创伤后脾细胞IL-2表达受抑至少部分是由于核转录因子NFAT和AP-1的DNA结合活性降低所导致;而NFAT和AP-1的DNA结合活性降低可能部分由于创伤影响c-Fos蛋白的生成所致.     

普伐他汀抑制羧甲赖氨酸修饰白蛋白诱导足细胞表达单核细胞趋化蛋白1

目的研究普伐他汀对羧甲基赖氨酸修饰白蛋白（CML-BSA）诱导的小鼠足细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的干预作用。方法使用RT-PCR和ELISA方法检测MCP-1的表达水平及细胞上清液MCP-1含量。共聚焦显微镜测量对二氯荧光黄敏感的细胞内活性氧（ROS）的产量。Western印迹法和免疫组化技术检测活化的细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、核因子κB（NF-κB）和转录因子Sp1的表达。结果CML-BSA呈时间和浓度依赖的方式诱导MCP-1的表达。0.1或1.0 mmol/L普伐他汀可抑制CML-BSA诱导的MCP-1 mRNA和蛋白的表达。CML-BSA可迅速诱导足细胞内ROS的生成。普伐他汀不影响细胞ROS生成。CML-BSA诱导足细胞磷酸化ERK（p-ERK）表达升高,而普伐他汀可以浓度依赖方式对此加以阻断。Western印迹法和免疫组化实验结果均提示普伐他汀预处理足细胞可以阻断CML-BSA诱导的NF-κB和Sp1的易位。结论普伐他汀能够通过调节足细胞内ERK、NF-κB和Sp1信号途径,阻断CML-BSA诱导MCP-1的表达。     

海昆肾喜对UUO大鼠肾组织及体外培养肾小管上皮细胞MMP9/TIMP1表达的影响

目的：探讨海昆肾喜对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral occlusion,UUO）大鼠肾组织中的MMP9/TIMP1及LPS刺激体外培养肾小管上皮细胞不同时段MMP9、TIMP1表达的影响。方法：采用UUO大鼠模型,将57只大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、苯那普利组和海昆肾喜组。药物干预4周处死大鼠观察肾组织病理改变,应用免疫组化学方法检测肾组织MMP9/TIMP1的表达;以含100μg/ml纯品海昆肾喜的5%BCSDMEM培养肾小管上皮细胞,分别于LPS刺激24h及48h采用免疫组化及Westernbloting方法检测各组MMP9、TIMP1的表达。结果：模型组肾间质表现为明显的纤维化病理改变,而海昆肾喜组纤维化病理改变明显减轻。正常组及假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度MMP9/TIMP1表达;模型组MMP9表达明显减少而TIMP1则呈强阳性表达。海昆肾喜组与模型组比,MMP9强阳性表达明显增强（P〈0.05）,TIMP1的表达较模型组明显减少（P〈0.05）。LPS刺激肾小管上皮细胞12h后,细胞胞浆内MMP9活性逐渐增强;24h达到高峰;TIMP1于LPS刺激24h逐渐增强,48h达到高峰上。海昆肾喜降低24h时MMP9的表达,同时也降低48h时TIMP1的表达。结论：海昆肾喜可以调节UUO大鼠肾组织MMP9/TIMP1的表达;海昆肾喜能抑制体外培养肾小管上皮细胞早期MMP9的表达,可降低MMP9早期对基膜的破坏引起的上皮细胞转化,同时又降低后期TIMP1的表达,从而促进细胞外基质的降解。其双向调节作用可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。     

基于数据库挖掘分析COL4A1基因在结直肠癌中的表达及意义

目的利用公开的生物信息学数据库分析COL4A1基因在结直肠癌中的表达以及意义。方法应用Oncomine数据库探讨COL4A1基因在结直肠癌组织中的表达;应用GEPIA数据库分析COL4A1基因的表达水平,在结直肠癌患者中的病理分期以及生存期的相关性分析;应用MethHC甲基化数据库分析COL4A1基因启动子区的甲基化水平,分析COL4A1的表达与甲基化的关系;应用String数据库分析与COL4A1蛋白相互作用的蛋白网络及可能参与的机制。结果在结直肠癌肿瘤组织中,COL4A1基因的mRNA表达水平显著地高于正常结直肠组织,COL4A1基因的mRNA表达水平与结直肠癌患者的临床病理分级及患者总体生存持续时间水平无显著的相关性。结直肠癌中COL4A1基因DNA启动子区的甲基化表达水平较正常的结直肠黏膜组织显著升高,且COL4A1基因表达与结肠癌组织中COL4A1启动子区甲基化表达水平呈正相关。COL4A1基因可能ECM受体相互作用、局部受体粘附等信号传递通路中发挥作用。结论结直肠癌组织中COL4A1基因高表达,其在结直肠癌中的作用及机制需进一步研究阐明。     

Tumors with EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions: the current status

EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 are gene fusions of which one or both have now been consistently described in 5 histopathologically and behaviorally diverse neoplasms: angiomatoid fibrous histiocytoma, conventional clear cell sarcoma (of tendons and aponeuroses), clear cell sarcoma-like tumor of the gastrointestinal tract, hyalinizing clear cell carcinoma of the salivary gland, and primary pulmonary myxoid sarcoma. Some of the tumors in this group have been described only recently, and others have been the subject of recent genetic insights contributing to their characterization. These neoplasms are all rare; yet, the increasing frequency with which EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions are being described in separate entities is noteworthy. The additional molecular mechanisms by which tumors with such variable morphologic, immunohistochemical, and clinical phenotypes are generated are yet to be understood. We review the clinicopathologic and molecular features of this group of neoplasms unified by the presence of EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 genetic fusions.     

重症急性胰腺炎治疗的发展

重症急性胰腺炎治疗的发展大体可以分为三个阶段。１　重症急性胰腺炎主治科别的讨论第一个阶段为重症急性胰腺炎的主治科别的讨论,即以内科治疗为好,还是以外科医治为好。这个阶段起始于１８８９年,Ｆｉｔｚ首先系统地描写了重症急性胰腺炎,在这阶段,出现两次反复,主治科由外科到内科,然后又由内科到外科,直到１９３８年,Ｎｏｒｄｍａｎｎ在德国外科大会上对重症急性胰腺炎作了总结报告,认为外科手术对重症急性胰腺炎有害无益。这样,重症急性胰腺炎进入了全面的内科保守治疗的时代,一直延续了３０年。到６０年代后期,由于Ｗａ…     

Plasma glutathione S-transferase pi 1-1 AND alpha 1-1 levels in patients with bladder cancer

PURPOSE: Transitional cell carcinomas of the human bladder and many gastrointestinal tumors often contain high amounts of the detoxification enzyme glutathione S-transferase pi (GSTP1-1). Elevated levels of GSTP1-1 have been found in serum and plasma from patients with gastrointestinal, lung or head and neck cancer. GSTP1-1 and glutathione S-transferase alpha (GSTA1-1) have been reported to be increased in 10 of 15 patients (67%) with bladder cancer. We evaluate the role of GSTP1-1 and GSTA1-1 as plasma tumor markers in 50 patients with bladder cancer before and after treatment. MATERIALS AND METHODS: Blood from patients with bladder cancer was sampled in ethylenediaminetetraacetic acid tubes. Plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 were measured using the sensitive and specific sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Respective plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 levels were above the upper normal reference limit in 2 (4%) and 14 (28%) of the 50 patients with bladder cancer. No significant decrease in plasma GSTA1-1 or GSTP1-1 was noted in matched pairs of plasma samples collected before and after treatment. CONCLUSIONS: In contrast to earlier reports, only a limited number of patients with bladder cancer had increased plasma GSTA1-1 or GSTP1-1, which did not decrease after tumor resection. These findings argue against the use of GSTP1-1 or GSTA1-1 as plasma markers for bladder cancer.     

Alpha1-antitrypsin deficiency. 1: epidemiology of alpha1-antitrypsin deficiency

The protein and molecular characteristics of variants of the alpha1-antitrypsin (AAT) gene are described, and available data on the genetic epidemiology of AAT deficiency are presented.     

The HLA-DPB1--associated component of the IDDM1 and its relationship to the major loci HLA-DQB1, -DQA1, and -DRB1

The major histocompatibility complex (MHC) HLA region on chromosome 6p21 contains the major locus of type 1 diabetes (IDDM1). Common allelic variants at the class II HLA-DRB1, -DQA1, and -DQB1 loci account for the major part of IDDM1. Previous studies suggested that other MHC loci are likely to contribute to IDDM1, but determination of their relative contributions and identities is difficult because of strong linkage disequilibrium between MHC loci. One prime candidate is the polymorphic HLA-DPB1 locus, which (with the DPA1 locus) encodes the third class II antigen-presenting molecule. However, the results obtained in previous studies appear to be contradictory. Therefore, we have analyzed 408 white European families (200 from Sardinia and 208 from the U.K.) using a combination of association tests designed to directly compare the effect of DPB1 variation on the relative predisposition of DR-DQ haplotypes, taking into account linkage disequilibrium between DPB1 and the DRB1, DQA1, and DQB1 loci. In these populations, the overall contribution of DPB1 to IDDM1 is small. The main component of the DPB1 contribution to IDDM1 in these populations appears to be the protection associated with DPB1*0402 on DR4-negative haplotypes. We suggest that the HLA-DP molecule itself contributes to IDDM1.