益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病细胞细胞周期及相关蛋白的调控研究

目的:研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对细胞周期及相关蛋白p21在人急性髓细胞白血病(acutemyeloid leukemia,AML)中表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的作用机制。方法:NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个,分成4组。对照组予生理盐水,实验组分别予益气养阴方、扶正方、祛邪方中药制剂灌胃。采用流式细胞术法检测细胞周期;免疫组化法检测p21蛋白的表达。结果:流式细胞术法检测细胞凋亡率:益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。免疫组化法检测c-myc、survivin蛋白的表达:对照组与益气养阴组、扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药益气养阴方可升高p21蛋白的表达,诱导白血病细胞停滞在G1期,对AML治疗具有作用。     

益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病小鼠细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的观察益气养阴方及其拆方对小鼠细胞凋亡率及相关蛋白c-myc、survivin的影响,探讨其作用机制。方法 NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个造模;随机分为对照组、全方组、扶正组、祛邪组。治疗组给予相应药物灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃。采用流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组化法检测c-myc、survivin蛋白表达。结果与对照组比较,治疗组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.01);治疗组淋巴结c-myc、survivin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。全方组对各指标的影响均优于扶正组和祛邪组(P0.05)。结论益气养阴方通过降低c-myc、survivin蛋白表达,诱导白血病细胞凋亡,起到治疗作用。     

益气养阴方及其拆方对急性髓细胞白血病小鼠骨髓细胞hTERT及其启动子甲基化表达的影响

目的探讨益气养阴方治疗急性髓细胞白血病的可能作用机制。方法 40只NOD-SCID小鼠经60Co照射后,尾静脉注射KG1a细胞1×106个,建立急性髓细胞白血病动物模型后随机分成4组,每组10只。模型组予生理盐水灌胃;扶正组予扶正方浓缩药液(1.08g/ml)灌胃;祛邪组予祛邪方浓缩药液(0.92g/ml)灌胃;全方组予益气养阴方浓缩药液(2g/ml)灌胃。各组均0.2ml/次,每日2次,共28天。采用PCR-ELISA法检测骨髓细胞端粒酶活性;荧光定量PCR法检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)-mRNA及其启动子甲基化的表达。结果扶正组、祛邪组和全方组小鼠骨髓细胞端粒酶活性、hTERT-mRNA和hTERT启动子甲基化的表达较模型组明显降低(P0.05或P0.01),全方组端粒酶活性、hTERT-mRNA和hTERT启动子甲基化的表达低于扶正组与祛邪组(P0.05或P0.01)。结论益气养阴方治疗急性髓细胞白血病的机制可能与降低端粒酶活性、hTERT及其启动子甲基化的表达水平有关。     

益气养阴方对白血病细胞Caspase-3及Bcl-2表达的影响

目的研究益气养阴方对白血病细胞Caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响,探讨复方中药诱导白血病细胞凋亡的机制.方法给EL9611红白血病小鼠灌服益气养阴方水煎剂13 d后处死,取股骨骨髓细胞,用免疫组化法测细胞Ca spase-3及Bcl-2蛋白表达.结果益气养阴方组与对照组比较,Caspase-3表达阳性率增加(P＜0.01);Bc1-2表达积分下降(P＜0.01).结论益气养阴方上调白血病细胞Caspase-3表达、下调Bcl-2表达是其诱导白血病细胞凋亡的重要途径.     

益气养阴方及其拆方对急性髓系白血病细胞细胞凋亡及Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF表达的影响

目的:研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对人急性髓系白血病细胞凋亡及细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C),凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1),第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子(the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-blinding protein with low PI,Smac/Diablo),凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factors,AIF)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的可能作用机制。方法:采用NOD/SCID小鼠,以KG-1a细胞株建立人急性髓系白血病模型,随机分为全方组、祛邪组、扶正组和空白组,取NOD/SCID小鼠脾细胞制成细胞悬液,应用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠细胞凋亡率;采用免疫组化法检测NOD/SCID小鼠骨髓中线粒体相关凋亡因子CytC,Apaf-1,Smac/Diablo和AIF的表达。结果:用药后,用药组小鼠生存时间较空白组显著延长(P0.01),全方组小鼠生存时间较扶正组与祛邪组显著延长(P0.01),祛邪组小鼠生存时间较扶正组显著延长(P0.01)。用药组细胞凋亡率较空白组明显升高(P0.01),全方组较扶正组与祛邪组显著升高(P0.01),祛邪组较扶正组显著升高(P0.01)。用药组小鼠骨髓中Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达较空白组显著升高(P0.05),其中Cyt-C与Apaf-1表达显著升高(P0.01);全方组均高于扶正组与祛邪组(P0.01);祛邪组较扶正组均升高(P0.05),Cyt-C,Apaf-1和Smac/Diablo表达显著升高(P0.01)。其中对于各指标的影响全方组均优于扶正组与祛邪组,祛邪组均优于扶正组。结论:益气养阴方能够提高NOD/SCID小鼠的细胞凋亡率,上调线粒体相关凋亡因子Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达,并诱导其凋亡,抑制白血病细胞增殖,其机制可能与线粒体凋亡通路有关。     

不同扶正药物及其配伍对SMMC-7721人肝癌细胞p53、N-ras基因的影响

目的:探讨不同扶正药物及其配伍对 SMMC-7721人肝癌细胞 p53、N-ras 基因的调控作用。方法:选取临床肝癌治疗常用的益气、温阳、补肾、养阴等扶正治法的代表药物,并根据阴阳治则理论将其分别配伍为益气养阴、温阳养阴及补肾(阳)养阴等复合方治法,分别煎成汤液,采取大鼠灌胃给药后分离药物血清的方法制备药物血清,作用于体外培养的 SMMC-7721人肝癌细胞,以正常大鼠血清和维甲酸作对照。流式细胞仪分析 p53、p21~(ras)基因蛋白表达,RT-PCR 半定量观察 p53及 N-ras 基因转录情况。结果:养阴、益气养阴、温阳养阴、补肾养阴组细胞 p53蛋白表达增强,p21~(ras)蛋白表达降低,其中,又以益气养阴组的作用最为明显;益气养阴组 p53转录增强,N-ras 转录减弱。结论:养阴药北沙参、麦门冬及其与益气、温阳、补肾配伍后的药物血清具有显著的调控 SMMC-7721人肝癌细胞 p53、N-ras 基因表达的作用。     

益气养阴方对白血病细胞衰老和细胞周期的影响

目的观察益气养阴方对急性白血病细胞HL-60衰老和细胞周期的影响。方法制备益气养阴方含药血清,设对照组、低、中、高剂量含药血清组细胞,利用SA-B-Gal染色法和流式细胞仪分别检测细胞衰老和细胞周期变化。结果对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组的细胞染色阳性率分别为(3.0±0.75)%、(10.8±1.8)%、(26.7±2.9)%和(43.5±3.1)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);G_2-M期细胞分别占细胞总数的(6.6±0.1)%、(8.1±0.3)%、(11.3±0.6)%、(14.7±0.4)%,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论益气养阴方可诱导急性白血病细胞HL-60衰老和使细胞阻滞在G2-M期。     

扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞的影响及机制

目的观察扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌A549细胞生长、凋亡的影响,探讨其协同抗肿瘤的可能机制。方法应用MTT法检测扶正抗癌方(0.211、0.316、0.474、0.711、1.067、1.6、2.4、3.6 mg/m L)和吉非替尼(3.95、5.92、8.18、13.33、20、30、45、67.5!mol/L)对A549细胞增殖的影响;用流式细胞术观察对照组(完全培养液组)、中药组(扶正抗癌方,1.6 mg/m L)、西药组(吉非替尼,45!mol/L)、联合组(扶正抗癌方1.6 mg/m L+吉非替尼45!mol/L)A549细胞凋亡;用Western blot检测各组EGFR、p-EGFR、EZH2、PPAR-γ及P53蛋白表达。结果扶正抗癌方及吉非替尼均有抑制肿瘤细胞增殖作用。扶正抗癌方联合吉非替尼干预后细胞凋亡率为(12.6±4.5)%,明显高于扶正抗癌方(4.6±0.7)%及吉非替尼(7.8±2.7)%,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,联合组p-EGFR、EZH2下调(P0.05),PPAR-γ及P53蛋白上调(P0.05),西药组及中药组EZH2下调(P0.05),中药组PPAR-γ上调(P0.05);与西药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05),PPAR-γ上调(P0.05);与中药组比较,联合组p-EGFR下调(P0.05)。结论扶正抗癌方联合吉非替尼能显著抑制A549细胞的增殖生长,促使肿瘤细胞凋亡;其协同抗肿瘤活性的机制可能与下调p-EGFR、EZH2及上调PPAR-γ、P53蛋白有关。     

益气养阴方对顺铂诱导HepG2细胞Survivin表达的影响

目的 观察益气养阴方的含药血清与低浓度的顺铂(DDP)体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对HepG2细胞Survivin表达的影响,从而探讨本益气养阴方与化疗合用治疗肝癌的协同增效作用的相关机制.方法 运用血清药理学方法制备大鼠的益气养阴方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物DDP组和中药含药血清+DDP组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞,应用SP免疫细胞化学染色法及western-blot检测各组细胞24h、48h、72h后Survivin蛋白的表达变化.结果 各组作用24,48,72 h后,中药含药血清组HepG2细胞Survivin蛋白的表达量无明显变化(与对照组相比,P>0.05);DDP组HepG2细胞Survivin蛋白的表达量逐渐升高(与对照组相比,P<0.05),且具有时间依赖性;而中药含药血清+DDP组细胞Survivin蛋白的升高水平与DDP组相比明显降低(P<0.05).结论 益气养阴方含药血清可能通过抑制DDP诱导HepG2细胞中凋亡抑制蛋白Survivin的表达而降低HepG2细胞对化疗的抵抗,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一.     

中药扶正解毒方对急性白血病生存质量的影响

目的:临床运用扶正解毒方配合化疗治疗急性髓细胞白血病(AML),通过生存质量量表调查,探讨扶正解毒方对AML患者生存质量的影响。方法:运用分层随机对照试验方法,把36例AML患者分为扶正解毒方配合化疗组(观察组)和单纯化疗组(对照组);采用世界卫生组织生存质量测定量表简表(WHOQOL-BREF)对AML患者治疗前、化疗10天后分别进行生存质量调查。结果:提示观察组生存质量优于对照组(P<0.05)。     

平糖方药物血清改善INS-1胰腺β细胞脂性凋亡的作用研究

目的观察平糖方药物血清对INS-1胰腺β细胞脂性凋亡的改善作用及机制。方法以软脂酸(palmitic acid,PA)诱导INS-1胰腺β细胞脂性凋亡,采用平糖方药物血清干预。实验分为5组,即大鼠血清对照(RS)组、大鼠血清加PA(PA)组、平糖方低剂量药物血清加PA(PTR L)组、平糖方中剂量药物血清加PA(PTR M)组、平糖方高剂量药物血清加PA(PTR H)组,每组6个复孔。通过TUNEL法检测细胞凋亡,化学发光法检测Caspase-3活性,DCHF-DA掺入法检测细胞内ROS生成的变化,RT-PCR方法检测解偶联蛋白-2(UCP-2)的表达。结果 PA组比RS组的凋亡细胞增多(P0.01),PTR各组的凋亡细胞同PA组比较有降低的趋势。PA组INS-1胰腺β细胞Caspase-3酶活性增强,PTR M组同PA组比较Caspase-3酶活性降低(P0.05)。PTR L、M组可抑制由PA引起的细胞内ROS产生增多,与PA组比较差异有统计学意义(P0.05)。平糖方各组的UCP-2 mRNA表达量均较PA组降低(其中PTR L 1.286±0.373,P0.01;PTRM 1.627±0.348,P0.05)。结论平糖方药物血清对INS-1β细胞脂性凋亡有一定的保护作用,并可能通过调节ROS、UCP-2发挥作用。     

华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长及RRM2基因表达的影响

目的 研究华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤     

益气活血法对脑出血大鼠脑内VEGF及其受体Flt-1和Flk-1 mRNA表达的影响

目的观察益气活血对脑出血大鼠脑内损伤区血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及其受体Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达的影响，探讨益气活血法的作用机制。方法通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0．5U建立脑出血模型。SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组，分别灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物（剂量为临床70kg成人用量的3倍），运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测正常组及其它各组于造模术后1、4、7、14、21、28d各时间点VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的动态变化。结果正常组及假手术组不同时间点VEGFmR．NA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA均未见明显表达；模型组VEGFmRNA、Flt-1 mRNA和Flk—1 mRNA在脑出血后1d即开始表达，21d达到高峰，然后逐渐减弱；益气活血组VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达在7～21d明显高于其他各组，VEGFmRNA和Flk—1 mRNA表达在术后14d达高峰，Flt—1 mRNA在术后21d达高峰。结论益气活血法能促进脑出血大鼠脑内VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的表达而调整血管新生过程，可能是其促进组织修复的机制之一。     

川芎嗪和黄芪在子宫内膜异位症发生发展中对RANTES及受体的调节作用

目的 探讨益气活血化瘀中药川芎嗪和黄芪对子宫内膜异位症患者子宫内膜间质细胞趋化因子（regulated on activation, normal T cell expressed and secreted, RANTES）和受体CCR5表达水平的调节作用。 方法 选择卵巢内膜样囊肿患者10例为试验组,其他子宫良性病变患者10例为对照组,分离和纯化在位和异位子宫内膜间质细胞,加入不同干扰因素（黄芪注射液、川芎嗪注射液、黄芪联合川芎嗪注射液、丹那唑）,用ELISA方法和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测RANTES和CCR5表达水平。 结果 （1）异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平与在位的表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）;异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平(ng/L)阳性对照组（13.602±3.358）较阴性对照组（0.027±0.016）明显增高（P<0.05）,在位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平阳性对照组（12.850±7.997）较阴性对照组（0.027±0.016）明显增高（P<0.05）。加入不同中药干预因素后,异位子宫内膜间质细胞表达RANTES水平较阳性对照组明显下降（P<0.05）。（2）异位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平（0.759±0.039）较在位子宫内膜（0.249±0.026）明显增高（P<0.05）。异位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平阳性对照组（0.759±0.039）较阴性对照组（0.478±0.094）明显增高（P<0.01）,在位子宫内膜间质细胞表达CCR5水平阳性对照组（0.249±0.026）较阴性对照组（0.131±0.021）明显增高（P<0.01）。加入不同中药干预因素后,CCR5表达水平较阳性对照组均明显下降（P<0.01）。 结论 子宫内膜异位症患者异位子宫内膜较在位子宫内膜间质细胞表达 CCR5水平高。 川芎嗪和黄芪对子宫内膜异位症患者RANTES及其受体CCR5的自分泌作用具有明显降调节作用。     

小檗碱和葛根素对地塞米松诱导卵泡膜细胞胰岛素抵抗的影响

目的 探索地塞米松人工诱导猪卵泡膜细胞产生胰岛素抵抗,以及中药小檗碱和葛根素对胰岛素抵抗的卵泡膜细胞功能的调控作用。     

粗叶悬钩子总生物碱对急性肝损伤大鼠肝组织CYP2E1与CYP3A1酶mRNA表达的影响

目的 研究粗叶悬钩子总生物碱对肝药物代谢酶CYP2E1和CYP3A1 mRNA表达的影响。     

针药结合康复训练的方法对中风偏瘫痉挛状态的康复疗效及安全性评价

目的:探讨针药结合康复训练的方法对中风偏瘫痉挛状态的康复疗效及安全性。方法:将80例中风偏瘫患者按照抽签方法随机地均分为对照组与治疗组,各为40例。对照组仅给予康复训练治疗,治疗组在此基础上给予针药二法治疗。比较2组临床治疗疗效、治疗前后改良Ashworth分级情况、Fugl-Meyer评分、Barthel指数评分及不良反应发生情况。结果:1)对照组临床治疗总有效率为77.50%(31/40)明显小于治疗组(100.00%)(P0.05)。2)2组治疗后Ashworth分级情况改善明显优于治疗前,其差异具有统计学意义(P0.05),且治疗组治疗后的Ashworth分级情况改善程度优于对照组治疗后,其差异具有统计学意义(P0.05)。3)对照组治疗前后Fugl-Meyer评分分别为(36.78±9.59)分、(53.29±12.77)分,治疗组分别为(37.39±10.02)分、(69.05±19.38)分,2组治疗前Fugl-Meyer评分差异无统计学意义(P0.05),但治疗后治疗组Fugl-Meyer评分明显高于对照组,其差异具有统计学意义(P0.01);对照组治疗前Barthel指数评分为(32.00±5.62)分与治疗组(33.27±6.08)分相比,差异无统计学意义(P0.05),但治疗组治疗后Barthel指数评分(73.29±18.86)分明显高于对照组(57.77±14.51)分,其差异具有统计学意义(P0.01),且治疗组治疗后Barthel指数评分显著大于对照组治疗后(P0.05);4)2组治疗过程中均未出现任何不良反应。结论:针药结合康复训练的方法对中风偏瘫痉挛状态的康复疗效显著,安全性高,值得在临床上加以推广并应用。     

红景天对含表柔比星方案化疗患者的血清肌钙蛋白Ⅰ、心肌背向散射积分及左室射血分数的影响

目的探讨红景天对应用表柔比星（EPI）后患者的心肌保护作用。方法应用EPI3个化疗周期后出现心肌受损的患者42例,随机分为中药红景天组（治疗组）和对照组,比较1个月后血清肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、心肌背向散射积分（IBS）及左室射血分数（LVEF）的变化及症状改善情况。结果两组患者治疗后cTnⅠ分别为（0.54±0.05）mg/L、（0.98±0.03）mg/L,IBS分别为（55.23±5.72）%、（61.23±5.96）%;LVEF分别为（68±3）%、（57±2）%,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论红景天可明显改善应用EPI后患者的心功能,抑制cTnI和IBS的升高。     

竹节香附素A对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的探讨竹节香附素A对人肝癌细胞HepGz增殖的影响。方法将不同质量浓度的竹节香附素A与HepG。细胞共同培养,采用MTT比色法及细胞集落形成法检测竹节香附素A对HepG。细胞生长、增殖的影响。结果竹节香附素A对HepG2细胞生长的IC50为8．94μg／mL。与未处理组相比,5、10、20、40μg／mL的竹节香附素A分别与HepG2细胞共同培养72h,在培养24h时的细胞增殖抑制率分别为：（24．81±0．55）％、（39．17±1．30）％、（62．45±7．56）％、（79．93±5．48）％,在培养48h时的抑制率为（35．67±0．81）%、（49．73土9．18）％、（71．62±1．03）％、（87．06±1．84）%,在培养72h时的抑制率为（42．52±1．31）％、（59．75±7．47）％、（78．85土3．15）％、（91．36±0．84）％;顺铂对照组在细胞培养24、48、72h的抑制率分别为（2．60±0．53）％、（60．55±5．66）％、（82．61±8．95）％。竹节香附素A各剂量的作用与未处理组相比,在各时间点均有显著差异（P〈0．001）;与顺铂相比,竹节香附索A起效更快,24h检测具有显著差异（P〈0．001）;5、10、20μg／mL剂量在24h以外的时间点与顺铂相比无差异,40μg／mL剂量在各时间点对HepG2细胞的抑制作用仍较顺铂的作用强（P〈0．01）。集落形成实验显示,对照组的集落形成率为45．47％;而竹节香附素A1．25、2．5、5μg／mL3个剂量组仅分别为15．73％、7．2％、3．33％,即集落形成抑制率分别为（66．75±1．66）%、（84．25土3．11）％、（92．55±2．33）％,与对照组相比有显著差异（P〈0．001）。结论竹节香附素A对HepG：细胞增殖有明显抑制作用,在一定范围内随着试药质量浓度的升高和作用时间的延长而增强。     

癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞作用机制的实验研究

目的 研究中药癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞的作用机制。