辣根过氧化物酶-抗过氧化物酶染色法对念珠菌体内播散的检测

内源性感染是近代医学科学发展中的一个重要课题。为研究烧伤后肠源性感染问题,我所已成功应用异硫氰荧光素直接标菌。为了丰富检测手段提供更易于推广的方法,我们将常用的辣根过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法,略加改进用于肠源性白色念珠菌体内播散的检测,获得成功。PAP法用于特定的白色念珠菌在体内播散的检测,至今尚未见有报     

慢性乙型肝炎患者肝组织内HBcAg表达的临床研究

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织内HBcAg的表达与肝组织的炎症、纤维化程度、血清中的HBV DNA、HBsAg以及HBeAg定量之间的关系。方法 选择安徽医科大学第一附属医院2013年3月至2014年3月收治的103例CHB患者,按病理学结果分为S1组（36例）和S2~3组（67例）。利用免疫组化技术检测肝细胞内HBcAg的表达,同时利用FirbScan仪器测定患者的肝纤维化程度。结果 在S2~3组中,肝组织HBcAg的表达与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平及肝纤维化指标均呈现显著的相关性（P<0.05）,在S1组中均无显著相关（P>0.05）。结论 HBcAg在肝细胞中的表达与机体血清中DNA、HBsAg、HBeAg水平及无创肝纤维化程度存在一定的相关性。     

改良过氧化物酶染色法实验应用

<正> 过氧化物酶染色在粒细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、单核细胞性白血病的鉴别诊断方面深受临床血液学检验工作备的重视,并具有较高的临床诊断价值。然而长期以来借助联苯胺脱氧催化,其毒性大,致癌性强,废液往往造成实验室污染。笔者用二盐酸联苯胺代替联苯胺进行染色反应,经长期实验应用表明此法不仅克服了旧法的缺点,且操作简便快速,结果准确可靠。现报告如下。     

双位点酶免疫测定中采用一种通用试剂:过氧化物酶-抗过氧化物酶体系

在通常的酶免疫分析中,辣根过氧化物酶(HR-P)与抗体 IgG 以共价联接,但往往使 HRP 结合能力丧失50%,而且联接物中 HRP 的活性也会降低75%。为此,本文作者采用 HRP 与抗 HRP 抗体,通过免疫联接,形成一种可溶性的 PAP 复合物,从而克服 HRP 失活的缺点,并做为一种通用的试剂,应用于简化酶免疫测定(EIA)和 PAPEIA 测定。简化 EIA 的原理是 PAP 复合物直接与第二抗体包被固相进行免疫结合;而 PAP-EIA 的原理是:     

快速经皮肝活体组织穿刺检查术改良

快速经皮肝活体组织穿刺检查术改良常熟市第一人民医院（２１５５００）苏子学参照Ｍｅｎｇｈｉｎｉ针原理，改用９号腰椎穿刺针改良快速肝穿刺活检术，现介绍如下。１资料与方法１．１一般资料本组５２例中，男４１例，女１１例，年龄１４～７６岁。原发性肝癌６例，转移...     

肝组织内HBsAg、HBcAg双重免疫染色方法及其意义

本研究建立了非洗脱法显示同一肝组织切片中HBsxg、HBcAg的双重兔疫染色方法,使两种抗原分别呈棕色和蓝色。双染色过程中,第一次反应选用敏感性及特异性高的方法显示表达量少的抗原及DAB作为显色剂,效果良好。文中讨论了肝组织中HBsAg、HBcAg双重免疫染色的关键步骤及双染色技术在乙肝免疫病理中的意义。     

慢性乙型肝炎肝组织内HBsAg、HBcAg定位形态及其临床意义

本本用ABC法对36例各型慢性肝炎患者肝活检标本进行了HBsAg、HBcAg的检测。检出HBsAg和/或HBcAg12例,总阳性率32.4％。发现慢活肝不仅HBV复制标志检出率高达44.0％(11/25),且HBV复制活跃。还发现HBV复制程度与脏活动性病变程度基本呈平行关系,呈强阳性显色者,慢活肝都属中、重型。本文还见HBV复制活跃,病变活跃,肝内HBsAg主要呈弥漫型,HBcAg主要呈胞核,细浆型。上述结果提示:HBV复制和肝炎的病变活动有关。     

慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达与血清HBV-DNA含量、肝组织中HBV-DNA含量、肝组织病理及临床之间的关系。方法选择慢性乙肝患者83例,检测血清HBV-DNA的含量,并行肝穿刺取肝组织,用免疫组化法检测乙肝患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达并检测肝组织中HBV-DNA的含量,同时行常规肝组织病理染色。结果在慢性乙型肝炎患者肝组织内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为81.9%和53%。HBsAg 98.5%是浆膜型;HBcAg浆膜型占62.8%、胞核型占37.2%,浆膜型的肝组织炎症、纤维化较胞核型明显。HBsAg表达强度与血清HBV-DNA定量、肝组织HBV-DNA定量及肝组织炎症和纤维化之间均无相关性。HBcAg表达强度随着血清HBV-DNA定量的增加而增加,呈正向关联（r=0.291,P=0.008）,与肝组织HBV-DNA定量呈现明显的正向关联（r=0.664,P〈0.001）,与肝组织炎症、纤维化分级也呈正相关（r=0.611,0.841,P〈0.001）。结论慢性乙肝患者肝组织免疫损伤发生的免疫应答的主要抗原是HBcAg。将肝组织中HBcAg的表达结合HBV-DNA载量作为抗病毒治疗指标更可靠。     

亲和层析纯化兔肝谷胱甘肽过氧化物酶

兔肝GSH-px纯化包括:硫酸铵沉淀、亲和层析和DEAE-Sephadex A-25层析。在最后一步中GSH-px被纯化均一。纯化倍数340,比活102,回收率33.7%,SDS-PAGE表明为单一区带。亚基分子量为19842u。     

人肝谷胱甘肽过氧化物酶的动力学性质

从人肝中分离获得谷胱甘肽过氧化物酶，其最适ｐＨ为８．５，最适温度为３７℃。该酶以Ｈ２Ｏ２或ＧＳＨ为底物时表现Ｋｍ值分别为０．２７ｍｍｏｌ／Ｌ和１．３ｍｍｏｌ／Ｌ。酶与多分子底物作用的动力学研究表明人肝谷胱甘肽过氧化物酶的作用为乒乓机制。并观察了一些金属离子和烷化剂对该酶具有不同程度的抑制作用。     

人肝谷胱甘肽过氧化物酶的动力学性质

从人肝中分离获得谷胱甘肽过氧化物酶，其最适pH为8．5，最适温度为37℃。该酶以H2O2或GSH为鹿物时表观Km值分别为0．27mmol／L和1．3mmol／L。酶与多分子鹿物作用的动力学研究表明人肝谷胱甘肽过氧化物酶的作用为乒乓机制。并观察了一些金属离子和烷化剂对该酶具有不同程度的抑制作用。     

肝组织中HDAg和HBcAg的检测及其意义

采用免疫酶染色法检查了２２例丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染者肝组织连续切片上的ＨＤＡｇ和ＨＢｃＡｇ，同时对照检查了４２例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）单纯感染者肝组织中的ＨＢｃＡｇ。结果发现ＨＤＡｇ主要存在于细胞核内，阳性细胞散在分布于肝组织中，细胞形态基本正常，少数细胞肿胀。ＨＢＶ合并ＨＤＶ感染者肝组织中的ＨＢｃＡｇ细胞核多呈阳性，细胞浆中较少有ＨＢｃＡｇ的阳性颗粒。在单纯ＨＢＶ感染中，可在其胸核及胞浆中同时查到ＨＢｃＡｇ的阳性颗粒，ＨＢＶ合并ＨＤＶ感染者肝组织中的ＨＢｃＡｇ阳性细胞数为６．６４±３．６０，单纯ＨＢＶ感染者为８．８５±３．７３，两者差异有显著性。对ＨＤＡｇ的表达与血清ＧＰＴ的相关性研究发现，ＨＤＡｇ的阳性细胞数与血清ＧＰＴ水平有相关性（ｒ＝０．４３２）。表明ＨＤＶ合并感染后对ＨＢＶ的复制有抑制作用，ＨＤＶ的细胞毒作用与肝细胞损伤有一定相关性     

慢性肝炎肝组织HBsAg及HBcAg表达与肝血管病变的关系

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)肝组织HBsAg，HBcAg表达类型及分布部位与肝血管和肝窦病变的关系。方法 选160例HBsAg，HBcAg免疫组化阳性的肝组织及31例CHB首、末2次随访的肝活检样品进行观察。结果 肝组织HBsAg及HBcAg表达有以下特点：①肝细胞HBsAg阳性主要分布于近血管区域，而强阳性者多分布于小血管、血管束及扩张的肝窦周围；②肝窦壁、肝血管内皮细胞、胆管上皮细胞HBsAg阳性与纤维化及肝硬变有关；③血清HBeAg，HBV-DNA与肝组织HBcAg一致者占74％，血清HBeAg及肝组织HBcAg转阴者末次肝活检肝血管病变改善。结论 循环中HBV以配体形式与肝血管及肝窦内皮细胞膜受体结合并在其中复制，引起炎症反应，进而破坏其结构，致一系列肝组织的病变。     

复肝解毒方对酒精性肝病大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ的激活作用

目的从分子水平探讨中药复方复肝解毒方治疗酒精性肝病的作用机制.方法选用40只Wister大鼠随机分为正常对照组(10只)、模型组(30只),16周末断头处死正常对照组(10只)和模型组部分大鼠(9只),取血清和肝组织标本.模型组另20只随机分为中药治疗组和治疗对照组,每组10只大鼠,24周后一并处死.分别以HE、SudanⅣ、Masson三色染色观察各组大鼠肝组织光镜下的病理改变和电镜下超微结构的变化.以免疫组织化学染色和RT-PCR观察复肝解毒方对过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)蛋白和基因表达的影响.结果模型组大鼠血清丙氨酸转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNFα)水平和肝匀浆丙二醛(MDA)含量增高,肝组织表现有明显的脂肪变性、炎症、坏死和纤维化,PPARγ蛋白和mRNA的表达减弱;中药治疗组肝组织脂变、炎症和纤维化程度显著减轻,接近正常对照组,PPARγ蛋白和mRNA的表达增强(与治疗对照组比较P<0.05); 治疗对照组血清ALT水平和肝细胞脂变程度较模型组减轻,但炎症、纤维化和PPARγ的表达无显著变化.结论复肝解毒方可以有效逆转酒精所致的肝损伤,这与本方可以活化核因子PPARγ,抑制酒精性肝损伤的炎症反应有关.     

辣根过氧化物酶ELISA测定抗DNA抗体

用紫外线(UV)照射聚苯乙烯酶标板可明显提高DNA的包被效果,从而解决了酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗DNA抗体的问题。在此基础上,作者用碱性磷酸酶(AP)标记抗人IgG作为第二抗体,建立了测定抗DNA抗体的间接ELISA法,并进一步探讨了国内常用的辣根过氧化物酶(HRP)系统测定抗DNA抗体的可能性。经50例正常人、39例系统性红斑狼疮(SLE)病人及52例非SLE其     

对二盐酸联苯胺辣根过氧化物酶方法的改良

众所周知,用辣根过氧化物酶追踪中枢神经系某些特定部位的传入联系的方法作为神经解剖学研究的一种强有力的手段已为国内外广大解剖学工作者们所采用。但随着这项工作的逐步深入,也出现了不少问题,其中最为突出的可能要数给药范围的控制和成色反应敏感度之间的矛盾。国外大多采用目前据说是最为敏感的四甲基联苯胺(TMB)法,但国内由于试剂来源不足,多数从事这一工作的单位仍不得不沿用 Mesulam 第八法或别的方法,以致难以得到满意的结果。我们经过一段时间的摸索,觉得经 Riley-Marchand 改良的 Mesulam 第八法较原法更为敏感,在没有四甲基联苯胺的情况下不失为一种较好的成色反应的方法,尤以应用于微电泳法时更佳。今特将原文译出,奉献给国内同仁,以供参考。     

生物素标记HBVDNA探针原位杂交碱性磷酸酶过氧化物酶显色检测肝内HBVDNA

本研究应用国产生物素标记HBVDNA探针,于福尔马林固定,石蜡包埋肝组织切片上,建立了碱性磷酸酶过氧化物酶显色的原位杂交技术,在此过程中发现,蛋白酶的消化是杂交能否成功的关键因素,酸、三乙醇酐、洋地黄的预处理,能促进探针参入,降低非特异背景,减低蛋白酶作用浓度或作用时间,因而提高实验稳定性、特异性。并用这一技术检测了34例肝活检和4例尸检肝组织,结果:尸肝组织均检出了HBV—DNA,其中2例核型见于肝硬化,肝癌旁组织,而2例浆型HBV—DNA见于慢活肝,亚重肝。34例肝活检组织中,只检出12例浆型HBV—DNA,其中CAH—CPH无症状携带者中检出率分别为42.9％,38.8％,33.3％,均明显高于肝硬化组织(16.7％)(P<0.05)。由此可见浆型HBV—DNA分布同病变轻重程度的关系可能并不密切,不同分布型的HBV—DNA可能只反映HBV的复制状态。