临床分离多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因分析

目的 了解多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因的存在情况。方法 收集2004年11月～2005年4月从临床七分离的17株多重耐药铜绿假单胞菌进行6种β-内酰胺酶基因的检测。结果 17株菌中检出TEM基因为8株（47．1％），VIM、OprD2基因均为2株（11．8％），而IMP、SHV、OXA基因均为阴性。结论 我院多重耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因主要是TEM基因，其次为VIM基因，OprD2缺失阳性率低，提示铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的机制不是单一的。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶和膜孔蛋白基因研究

目的了解多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因存在状况，为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法收集本院临床分离的铜绿假单胞菌共30株，采用纸片扩散法进行药敏试验；用聚合酶链反应（PCR）及序列分析方法，分析20种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、OXA-1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、IMI、VIM、SPM、GIM、SIM、DHA）和膜孔蛋白基因（OprD2）。结果30株多重耐药铜绿假单胞菌中TEM基因阳性28株，阳性率93．3％。CARB基因阳性1株，阳性率3．3％；膜孔蛋白编码基因OprD2缺失29株，阳性率96．7％。未检出其他β-内酰胺酶基因。结论烟台地区铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因（TEM）和膜孔蛋白编码基因OprD2缺失株检出率均在90％以上。     

IRPA对β-内酰胺酶类抗菌药物主要耐药机制研究

目的研究该院耐亚胺培南的铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的基因分布、膜孔蛋白OprD2的缺失情况及外排泵MexAB-OprM的表达情况。方法收集该院2015年4月至2016年7月由全自动细菌鉴定仪筛选出来的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌,采用K-B法进行耐药表型确认,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因IMP、VIM、SIM、GIM、SPM,超广谱β-内酰胺酶基因TEM、VEB、SHV、PER、OXA-2、OXA-10;对扩增阳性产物进行基因测序,采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2的缺失情况及mexA的表达水平。结果该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因均未检出;超广谱β-内酰胺酶基因TEM阳性20株(83.3%),其他型未有检出;阳性产物基因测序经比对确认为TEM-1型;膜孔蛋白OprD2缺失6株(25%),外排泵MexAB-OprM过度表达6株(25%)。结论该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类的耐药机制主要以由超广谱β-内酰胺酶基因TEM-1型介导为主,膜孔蛋白OprD2缺失以及主动外排泵MexAB-OprM过度表达为辅。     

绿脓假单胞菌β内酰胺类耐药基因研究

目的 调查湖北襄樊地区绿脓假单胞菌多重耐药菌株中β内酰胺酶编码基因及oprD2基因存在状况。方法 采用PCR方法检测分离自本地区的35株绿脓假单胞菌耐药菌株各种β内酰胺酶编码基因TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、质粒型AmpC酶DHA、MIR及OprD2。结果 35株β内酰胺类耐药基因TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA的阳性率分别为51．4％、17．1％、2．9％，OprD2基因缺失率100％，而SHV、PER、GES、IMP、VIM、MIR基因检测均阴性。结论研究表明，携带TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA以及OprD2基因缺失是导致本组绿脓假单胞菌多重耐药菌株对β内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药敏表型及耐药基因的研究

目的了解该院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类制剂的耐药情况以及相关耐药基因的携带现况。方法自临床分离的119株铜绿假单胞菌均采用PCR检测耐药基因(TEM、SHV、CTX-M、DHA-1、OXA、CARB、VEB-1、PER-1、GES-2、AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、OprD和IntⅠ)并对检出的耐药基因进行DNA测序。结果 119株铜绿假单胞菌中TEM阳性103株(86.6%),AmpC阳性77株(64.7%),IntⅠ阳性54株(45.4%),OprD缺失54株(45.4%),VIM-2阳性19株(16.0%),CARB阳性14株(11.8%),SHV阳性2株(1.7%),OXA阳性2株(1.7%),DHA-1阳性1株(0.8%),其余基因均为阴性。结论该院铜绿假单胞菌TEM、AmpC、IntⅠ、VIM-2等耐药基因的携带率及OprD缺失均较高,多重耐药严重。     

铜绿假单胞菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究

目的了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的存在类型。方法用API鉴定系统鉴定细菌,K-B法做药敏试验,从175株铜绿假单胞菌中筛选出20株多重耐药且产ESBLs的菌株,用PCR检测ESBLs基因。结果175株铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为18.9%,而对其余10种抗生素耐药率为30.3%~88.6%;20株多重耐药的菌株中,CARB基因阳性3株(15%),20株OprD2基因均缺失(100%),其余基因阴性。结论临床分离的铜绿假单胞菌对11种常用抗生素耐药率高,可能与OprD2基因缺失有关。CARB基因国内罕见报道。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

50株铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因分析

目的分析铜绿假单胞菌的耐药性及其耐药基因类型,指导临床合理应用抗生素。方法收集广州中医药大学第一附属医院临床送检标本中分离的50株铜绿假单胞菌,用K-B纸片扩散法进行抗生素敏感性试验;筛选出20株多重耐药铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶基因类型。结果铜绿假单胞菌对临床常用抗生素存在不同程度的耐药现象,其中最常用的亚胺培南耐药率达96%,20株多重耐药铜绿假单胞菌中检出TEM(40%)、OXA-2群(5%)、OXA-10群(5%)、CARB(30%)4种β-内酰胺酶基因,未检出质粒型AmpC酶和金属β-内酰胺酶基因。膜孔蛋白编码基因oprD2均为缺失型。结论铜绿假单胞菌的耐药现象严重,其原因可能与铜绿假单胞菌多耐药基因表达有关。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均>50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和aac(3)-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类、β-内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 调查淮北地区临床分离多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa PA)的氨基糖昔类、β-内酰胺类耐药相关基因流行状况.方法 采用K-B法和MIC法检测36株多重耐药铜绿假单胞菌对14种临床常用抗生素的耐药性:聚合酶链反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶基因、β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因.结果 36株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的耐药率为38.9%～100.0%;氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、aac(6')-I、aac(3)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ检出率分别为63.9%、58.3%、50.0%、38.9%和36.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶编码基因TEM、DHA、CTX-Ge和CARB的检出率分别为77.8%、69.2%、27.8%和25.0%,OXA-1、OXA-10的检出率均为16.7%,VIM-2的检出率为13.9%,IMP-1的检出率为2.8%.未检出VEB、SHV、GES、PER、GIM和SPM-2基冈,有58.3%的菌株存在外膜通道蛋白OprD2基因缺失.结论 淮北地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant(3")-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、龃c(6')-Ⅰ有关;对β-内酰胺类抗生素耐药主要与TEM、DHA、CTX-Ge、CARB及外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关.     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制

目的探讨该院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制。方法采用ATB Expression进行细菌鉴定和药物敏感试验。应用PCR法对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药基因IMP、VIM和外膜孔蛋白基因OprD2进行检测。结果 70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对多黏菌素、阿米卡星、庆大霉素耐药率分别为1.4%、47.1%、65.7%,对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星的耐药率分别为64.3%、60.3%、71.4%;70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中,IMP阳性30株(42.9%)、VIM阳性13株(17.6%),膜微孔蛋白OprD2缺失70株(100.0%)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌多重耐药情况严重。外膜孔蛋白基因OprD2的缺失是该院铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物的主要机制。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均〉50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

云浮地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的研究云浮地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用K-B法进行药敏实验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因检测,并进行测序。结果 25株铜绿假单胞菌未发现对多黏菌素B耐药,其余抗生素耐药率均大于50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为20%、32%、24%、28%和24%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、SHV、DHA-1、PER和IMP-9基因阳性率分别为32%、12%、8%、12%、12%和12%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60%。结论本地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

多重耐药的铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与其多重耐药基因的相关性分析

目的 调查本院多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的存在状况,Ⅰ类整合子的分布情况以及其与多重耐药基因相关性分析.方法 采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对15种药物的耐药性,筛选出35株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因、氨基糖苷类修饰基因和Ⅰ类整合子基因.结果 35株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1、TEM、SHV的检出率分别为51.4%、31.4%、14.0%;OPrD2基因的阳性率为28.6%;氨基糖苷类修饰基因aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅱ的阳性率分别为20%、2.86%、14.3%和17.1%;Ⅰ类整合子阳性的菌株中,CTX-M-1、TEM、SHV、aac(6′)-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ的检出率为45.4%、9.1%、27.3%、36.4%和27.3%,未检出aac(6″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因.结论 本院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,常见的有β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因和氨基糖苷类基因.Ⅰ类整合子广泛存在于多重耐药的铜绿假单胞菌中,并携带多种耐药基因参与形成铜绿假单胞菌的多重耐药.     

胸腔积液分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的分析该院近3年来感染患者胸腔积液培养所分离的铜绿假单胞菌的耐药表型,并检测相关耐药基因,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用法国梅里埃Bact/ALERT 3D120型血培养仪培养胸腔积液标本。西门子MicroScan WalkAway 96微生物鉴定系统和进行药敏试验。亚胺培南-EDTA双纸片法检测金属酶。PCR检测耐药基因(OprD、VIM和IMP)。结果 38株铜绿假单胞菌中14株对亚胺培南耐药,其中有2株为多重耐药株,4株产金属酶。14株耐药株中OprD基因PCR检测发现两株缺失,而IMP、VIM金属酶基因检测结果有2株为阳性。结论胸腔积液分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高,耐药机制包括产金属酶(VIM和IMP基因)和OprD缺失。     

烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因研究

目的探讨烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因。方法选取2015年2月至2017年2月该院烧伤科收集的31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌,采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因及外膜蛋白基因OprD2,琼脂稀释法检测氰氯苯腙对亚胺培南最小抑菌浓度(MIC)的影响。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢哌酮、头孢吡肟、氨曲南耐药率较高,耐药率均大于60.00%;31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中,IMP基因阳性6株,阳性率为19.35%;VIM基因阳性3株,阳性率为9.68%;OprD2基因缺失5株,阳性率为16.13%。OXA-10和GES耐药基因未检测到;16.13%的菌株存在主动外排的耐药机制。结论亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物耐药率较高,其耐药机制与细菌膜微孔蛋白基因OprD2缺失、细菌产IMP型金属-内酰胺酶及细胞主动外排机制有关;临床上应加强细菌耐药的监测以及抗菌药物的合理应用,减少耐药菌株的产生。     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的检测及分析

目的对多重耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶进行检测分析。方法采用K—B法或MIC法进行药物敏感试验筛选多重耐药铜绿假单胞菌：再进行改良三维试验．对多重耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶进行分析。结果在93株多重耐药铜绿假单胞菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）有16株（17．20％），8株高产AmpCβ-内酰胺酶（8．60％），6株为金属β-内酰胺酶（MBL）（6．45％），有2株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶（2．15％），2株菌（2．15％）可能产丝氨酸碳青霉烯酶或有胞壁屏障。总产酶率为36．56％。结论产β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一．研究铜绿假单胞菌β-内酰胺酶，正确认识它的耐药机制，有助于了解和控制医院内感染以及医院内耐药基因的播散和流行。     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的检测及分析

目的对多重耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶进行检测分析。方法采用K—B法或MIC法进行药物敏感试验筛选多重耐药铜绿假单胞菌：再进行改良三维试验．对多重耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶进行分析。结果在93株多重耐药铜绿假单胞菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）有16株（17．20％），8株高产AmpCβ-内酰胺酶（8．60％），6株为金属β-内酰胺酶（MBL）（6．45％），有2株同时产ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶（2．15％），2株菌（2．15％）可能产丝氨酸碳青霉烯酶或有胞壁屏障。总产酶率为36．56％。结论产β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一．研究铜绿假单胞菌β-内酰胺酶，正确认识它的耐药机制，有助于了解和控制医院内感染以及医院内耐药基因的播散和流行。     

泛耐药铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制研究

目的探讨泛耐药(pan-drug resistant,PDR)铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制。方法以相应方法分别检测PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制:常见β内酰胺酶的表达,膜孔蛋白OprD的缺失,及耐药结节分化家族(RND)主动外排系统的激活。结果 20株PDR铜绿假单胞菌中,可检出的产β内酰胺酶的菌株16株(80%):产AmpCs酶菌株16株(80%),其中产超广谱AmpCs酶(extended-spectrum AmpCβ-lactamases,ESACs)12株(60%),产ES-BLs菌株14株(70%),产金属β内酰胺酶(MBLs)1株(5%);膜孔蛋白OprD呈不同程度缺失的菌株11株(55%);主动外排系统中MexA-MexB-OprM、MexC-MexD-OprJ、MexE-MexF-OprN、MexX-MexY-OprM呈过度激活的菌株分别为5株(25%)、3株(15%)、4株(20%)、1株(5%)。65%PDR铜绿假单胞菌存在2种或2种以上耐药机制,以高产β内酰胺酶合并膜孔蛋白OprD缺失最多见。结论高产AmpCs和(或)ESBLs,合并膜孔蛋白OprD的缺失或主动外排泵的激活,是PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制。