酶偶联法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶方法学的建立

目的 建立葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的酶偶联测定法.方法 用葡萄糖-6-磷酸作为底物启动酶促反应,于波长340nm连续监测NADPH生成速率.结果 酶的反应的最适pH 9.0,线性可达1000U/L,批内变异为3%～5%,回收率为98.9%～101.5%,与既往所述的方法具有良好的相关,r=0.99,Y=0.989X+0.035.结论 应用酶偶联法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶能较好的排除干扰、结果准确,是一种值得广泛推广应用的方法.     

羟丙基-β-环糊精的合成及其表征

目的：建立合成羟丙基-β-环糊精的方法。方法：以β-环糊精为原料,在NaOH催化下,分别以环氧丙烷（C3H6O）和环氧氯丙烷为缩合剂合成羟丙基-β-环糊精;并研究了缩合剂、反应时间、反应温度及氢氧化钠浓度对产率的影响。结果：以环氧丙烷为缩合剂,当反应物配料比为n（NaOH）∶n（β-CD）∶n（C3H6O）为10∶1∶10,30℃下反应24 h,可以获得37%的收率,羟丙基-β-环糊精的平均取代度为2.82。结论：以环氧丙烷为缩合剂能较高产率地合成羟丙基-β-环糊精。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在糖尿病及其并发症中的作用及机制

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是磷酸戊糖途径的限速酶,对维持细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和氧化还原反应的平衡起着重要作用。G6PD缺乏症是人类最常见的遗传性细胞酶病,以往的研究多集中在溶血、贫血等方面。然而,近年来的研究发现G6PD在机体发育、多种疾病的发生和发展等方面也具有重要作用。     

双功能酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶4(PFKFB4)在肿瘤中的作用与研究进展

即使微环境中氧气充足,肿瘤细胞仍以较高的糖酵解率来代谢葡萄糖,这种独特的代谢方式称为有氧糖酵解(Warburg效应)。这种肿瘤细胞的代谢重编程可诱导肿瘤细胞中代谢酶系和代谢方式的改变。代谢酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatases,PFKFB)家族成员是果糖-2,6-二磷酸(F-2,6-BP)的最强变构激活剂,F-2,6-BP可变构激活糖酵解反应的关键酶磷酸果糖激酶-1(PFK-1),控制糖酵解通量,影响肿瘤生长。PFKFB4在多种肿瘤中过表达,是癌细胞生存和生长所必需的。本文综述了肿瘤进展中PFKFB4在糖酵解及糖酵解以外的功能,并讨论了靶向PFKFB4治疗的研究进展。     

2-2-苯骈噻唑硫基-5-p-氯苯亚甲基-4H-咪唑啉酮-4合成的实验探索

目的 :探索出在咪唑啉酮 2号位引入 2 -巯基苯骈噻唑的适宜反应条件。方法 :利用膦亚胺叶立德的aza -Wittig反应 ,直接通过 2 -巯基苯骈噻唑亲核试剂与碳二亚胺的成环反应制得在 2号位上引入杂环结构的咪唑啉酮。结果 :得到在咪唑啉酮 2号位引入 2 -巯基苯骈噻唑的适宜反应条件并对结构作了质谱表征。结论 :反应温度在 30℃左右 ,以K2 CO3作为催化剂 ,用量为反应物的 1 /4- 1 /5(物质的量比 )最佳     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症及相关疾病研究进展

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）是细胞氧化还原反应中的一个重要功能酶。本文就G6PD遗传及其蛋白质结构，G6PD缺乏症病理机制及表型特征，G6PD缺乏症与疟疾、病毒感染、糖尿病、肿瘤、白内障、地中海贫血等疾病之间的关系进行综述。     

大鼠心肌葡萄糖-6-磷酸酶活性的电镜观察

作者报告电镜下大鼠心肌内葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的分布情况。结果表明,G-6-Pase定位在心肌细胞的肌质网膜、核内外膜、线粒体的内外膜和嵴、闰盘处的肌膜、肌间毛细血管内皮细胞的核膜和内质网膜以及红细胞膜上。在上述的不同部位中,该酶的活性是不同的。     

2,6-二巯基嘌呤和2,6-二氯嘌呤的工业化合成

2-巯基-6-羟基-4，5-二氨基嘧啶和甲酰胺环化缩合，巯基化后得到2，6-二巯基嘌呤，再经氯化得到2，6-二氯嘌呤。对以上巯基化和氯化两个反应过程，在反应条件上分别采用盐酸代替醋酸和直接在浓盐酸体系中氯化进行改进，并用于工业生产。     

4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸的合成

目的改进可能具有抗流感病毒活性的化合物4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸的合成方法。方法以间羟基苯甲酸为原料,经酯化、硝化、催化氢化、烷基化、酰化及水解6步反应制备4-乙酰氨基-3-（3-戊氧基）苯甲酸。结果甲酯化收率86.9%;硝化反应采用硝酸/乙酸酐混酸作硝化试剂,收率23.5%;硝基还原用质量分数5%钯-碳作催化剂催化氢化,收率95.8%;烷基化反应中先使酚羟基与氢化钠成盐,然后再与3-溴戊烷反应,收率44.4%;酰化反应用DMAP作催化剂,采用向碎冰上倾倒反应液使产物析出的后处理方法,收率82.8%;酯水解中改用丙酮做溶剂,反应时间由15h缩短至4h,收率86.8%。各中间体和目标化合物结构经1H-NMR确证。结论改进的反应条件缩短了反应时间,简化了后处理步骤,为今后该类流感药物的研发奠定了基础。     

1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌抑制卵巢癌细胞SKOV3侵润转移的研究

目的:研究化合物1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌抑制卵巢癌细胞SKOV3侵润转移作用。方法:利用细胞划痕实验、MTT法、明胶酶谱实验等方法,研究1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌对SKOV3细胞侵润、黏附和迁移能力的影响。结果:1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌具有抑制SKOV3细胞运动迁移能力和抑制SKOV3细胞的黏附能力;无细胞毒作用浓度的1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌处理SKOV3细胞后,基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性均有一定程度的降低。结论:1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌具有抑制SKOV3细胞侵润、黏附和迁移能力。     

环氧/氰酸酯体系的固化反应动力学

用K issinger法对环氧/氰酸酯体系进行动力学研究,得到了不同催化剂作用下的反应活化能、反应级数和频率因子。研究表明:加入催化剂后各样品的固化反应活化能都有所降低,其中乙酰丙酮铜可使反应活化能下降30%,催化反应的级数为2;钛酸四正丁酯、二丁基二月桂酸锡和乙酰丙酮钴也能降低固化反应活化能15%以上,二丁基二月桂酸锡和乙酰丙酮钴能大幅降低固化反应温度。以钛酸四正丁酯、二丁基二月桂酸锡催化与不加催化剂的氰酸酯/环氧体系的固化反应级数均为1。钛酸四正丁酯催化氰酸酯与环氧树脂的固化交联反应是一步连续进行的,而以其他催化剂催化和不加催化剂的固化反应是二步交替进行的。     

大鼠精子顶体蛋白酶的增龄变化

采用固定明胶底物薄膜法，对不同月龄大鼠精子顶体蛋白酶的活性进行检测。结果：青年组大鼠精子顶体蛋白酶活性反应阳性率高，反应出现时间早，反应晕直径大且亮度强；中年组反应阳性率低，反应时间延迟，反应晕直径小且亮度弱；老年组反应极不明显。表明大鼠随年龄的增长和机体的老化，其精子顶体蛋白酶活性逐渐降低甚至消失。     

几丁糖促进兔角膜碱烧伤愈合的作用

目的 观察2％医用几丁糖在兔角膜碱烧伤早期对角膜上皮愈合，抗过氧化损伤和炎症反应的影响。方法 用15只新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型，设立几丁糖组(右眼)和磷酸盐缓冲液对照组(左眼)。裂隙灯观察角膜烧伤后角膜炎症反应及上皮修复过程。于烧伤后第7，14，28天各随机处死5只兔，取角膜和房水检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，并观察角膜组织病理学变化。结果 医用几丁糖组较对照组同期角膜上皮修复快，SOD活性高，MDA生成量少。角膜炎症反应轻。结论 几丁糖在角膜碱烧伤急性期治疗中具有较强的促进上皮修复，抗过氧化损伤及抑制炎症的作用。     

成年小鼠胸腺基质细胞的组织化学观察

对成年BALB/c小鼠胸腺冰冻切片进行了AcP,5’-NT,ATPase,AIP,NsE,SDH,LDH酶组织化学和PAS反应。结果表明,上皮网状细胞酶活性较低,PAS呈弱反应,在被膜下核细胞呈ATP酶强阳性,在髓质某些细胞的NsE和PAS反应很强。巨噬细胞具有强酶活性和PAS强反应,在皮髓交界区尤为明显。胸腺哺育细胞和交错突细胞也具有某些酶活性。这提示胸腺微环境中各种基质细胞有着不同的功能表达。     

糖尿病新型分子靶点葡萄糖-6-磷酸酶活性的检测及应用

目的:研究利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性,并推荐其作为一种常用的实验室检测方法。方法:以胶原酶原位灌注消化的方法分离大鼠肝细胞,用含10?S的1640培养液进行原代培养。待细胞贴壁后分别换用新鲜的含葡萄糖和不同浓度栎精的培养液培养16 h,随后利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定酶的活性。结果:各组G-6-Pase的活性不全相同,其差别具有统计学意义(F=114.423,P<0.05);高糖组与对照组相比较,G-6-Pase的活性明显增加(P<0.05);不同浓度栎精组G-6-Pase的活性下降,均低于高糖组(P<0.05),但其组间差异无统计学意义(P>0.05),没有呈现出剂量依赖性变化。结论:利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖-6-磷酸酶活性,是目前值得推崇的一个检测速度较快、结果较稳定的方法。此外,栎精能够有效逆转高糖诱导的G-6-Pase活性增加,利用它对于G-6-Pase活性的干预作用可能改善糖尿患者的高血糖状态。     

γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究

目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁,经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后,采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25～35℃的温度范围有很好的耐受性,在碱性条件下保持一定的活性,最适反应温度为45℃,最适反应pH值为8.0,Ca2＋、Mg2＋等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。     

植物多酚清除自由基活性高通量筛选技术研究

目的:构建植物化学物在线清除自由基活性高通量筛选技术,创建植物化学物抗氧化活性研究新方法.方法:以附带2个检测器的高效液相色谱(HPLC)装置和流动注射技术为手段,引入二苯基三硝基苯肼(DPPH)有机自由基分别与经HPLC分离的植物化学物发生在线清除反应,优化流速、反应管尺寸等条件,比较反应前后DPPH吸收信号的变化.结果:确定和验证了两类植物多酚化学物茶多酚和丹酚酸在线清除自由基活性HPLC-DPPH表征方法.反应环聚醚醚酮(PEEK)盘管规格为长10 m、内径0.254 nnn.DPPH浓度为1.0×10-5 moL/L.流速为0.7～0.8 ml/min.结论:HPLC-DPPH流动注射在线表征技术能够实现对多组分植物化学物抗氧化能力的高通量筛选.     

硒化壳聚糖对NB4细胞增殖的影响及其与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系

目的:研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系。方法:MTT法检测对细胞生长的抑制作用;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERTmRNA水平。结果:硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,50～200mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞48h,可明显降低端粒酶活性和hTERTmRNA水平。结论:硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调hTERT基因表达来抑制NB4细胞的增殖。     

乙酰胆碱酯酶在家兔小脑内的分布

研究了11只家兔小脑内AChE活性的分布。采用改良的经典组织化学技术来显示AChE活性。小脑皮质颗粒层一般有很强的AChE活性,而浦肯野细胞层的分子层的浅部则呈AChE反应阴性。分子层的深部和小脑白质的AChE活性较弱。而且有很多阳性神经元出现在后叶的分子层中,以X小叶最为密集。在小脑白质中,发现5条与正中面相平行的AChE活性较强的纵带。其中蚓状正中面上的正中带出现在除Ⅵ、Ⅶ小叶以外的各小叶中;对称分布的内侧带出现在前叶的Ⅱ到Ⅴ小叶和后叶的Ⅷ、Ⅸ小叶;外侧带只出现在Ⅸc和Ⅸd分叶。小脑中央核显示很强的AChE活性。在颗粒层的胶质细胞和白质中发现有丁酰胆碱酯酶(BuChE)的活性,而且在近颗粒层的白质活性更强。     

MicroRNA 基因单核苷酸多态性与类风湿关节炎的相关性研究

目的 分析类风湿关节炎（RA）患者和健康人群microRNA-146a（miR-146a）、miR-499a、 miR-149 及miR-196a 多态性位点的相关rs2910164、rs3746444、rs2292832 及rs11614913 等位基因和基因型 频率分布的差异。探讨其与类风湿关节炎（RA）发病风险的相关性,以及与疾病活动性及严重性的关系。 方法 收集600 例RA 患者和398 例健康人群的外周静脉血,提取基因组DNA,采用基于连接酶检测反应的 单核苷酸多态位点（SNP）分型技术对研究对象的4 个SNP 位点进行检测。结果 rs3746444 位点的CT 基 因型与中国汉族人群RA 疾病的活动性和严重性相关,并且rs11614913 位点（miR-196a）与性别存在交互作用, 可能与RA 发病有关。结论 miR-499a 的rs3746444 位点的CT 基因型可能与中国汉族人群RA 疾病的活动 性和严重性相关。