限定骨骼肌提取液（ME,10—50kDa）影响培养的大鼠脊髓腰段运动神经元生长的

用胎鼠的限定骨骼肌提取液（ＭＥ，１０￣１５ｋＤａ）作用于无血清培养的胚胎大鼠脊髓腰段腹角细胞后，用四唑盐（ＭＴＴ）微量自动比色定量法和ＬＤＨ活性测定检测了骨骼肌提取液对大鼠脊髓运动神经元生长存活的生物活性，结果显示：细胞培养４ｄｉｖ后，ＭＴＴ微量比色的ＯＤ值随加入骨骼肌提取液浓度的增加而升高，含骨骼肌提取液２００和４００ｕｇ／ｍｌ蛋白的实验孔与单纯无血清的对照孔比较有极显著差异（Ｐ〈０．００１），     

用MTT－LAI方法鉴定人胃癌特异性转移因子的免疫活性

本文以四唑翁盐－白细胞粘附抑制实验（ＭＴＴ－ＬＡＩ）代替同位素－ＬＡＩ实验，用于胃癌特异性转移因子（ｓｐ－ＴＦ＿１）抗原持异活性的检测，克服了同位素法的不便。在摸索到的最佳ｓｐ－ＴＦ＿１浓度（１０￣（－４）ｕ／ｍｌ）和胃癌抗原浓度（１０￣（－３）ｕｇ／ｍｌ）条件下的实验结果表明：在胃癌抗原（ｓｃＡｇ）存在下，ｓｐ－ＴＦ＿１能明显抑制白细胞的粘附；而非特异性转移因子（ＴＦｎ）则无此作用。且ｓｐ－ＴＦ＿１与乙脑病毒（ＥＢｖ）或乙肝抗原（ＨＢｓＡｇ）共同温育也不表现出粘附抑制活性。实验证明：ＭＴＴ－ＬＡＩ实验是体外检测特异性转移因子细胞免疫活性的快速、简便的方法。此外．本文用该法观察了不同温度下ｓｐ－ＴＦ＿１活性的稳定性。     

骨骼肌提取液对大鼠坐骨神经损伤所致腰段脊髓腹角和背根节神…

用ＣＴ－ＨＲＰ逆行追踪法及ＣｈＡＴ单克隆抗体的ＡＢＣ免疫组织化学研究了新生大鼠骨骼肌提取液（ＭＥ，２０－５０ｋＤ）对钳夹大鼠坐骨神经所致的腰骶部脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响。实验结果显示：注射ＭＥ实验组的脊髓腹角运动神经元和背根节细胞的存活元旦数与注射直的对照组相比，其比值为６：０，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示骨骼肌提取液（２０－５０ｋＤ）对脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经细胞的溃变     

脊髓提取液对体外培养的神经细胞在缺气损伤环境中的作用

本实验目的在于研究小鼠胚胎脊髓提取液对损伤环境中的体外培养脊髓和背根节神经细胞的保护作用。神经细胞取自１２～１４ ｄ 胚胎小鼠脊髓和背根节,接种于２４ 孔板中。培养第５ ｄ 时在培养板中加入２５０ ｍ ｇ／Ｌ 脊髓提取液,对照组不加;培养第１０ ｄ 在液体表面加入液体石蜡造成缺气损伤。继续培养４、８、１２、２４ ｈ,然后去除液体石蜡,观察细胞形态和Ｋ＋ 、ＬＤＨ 的变化,用Ｍ ＴＴ 方法检测细胞活性,通过ＮＳＥ免疫组化反应显示神经元存活状况。结果表明：损伤神经元出现细胞肿胀、失去折光性、核偏位以及ＮＳＥ 染色变弱;而在培养液中加入脊髓提取液,可以减轻这种“缺气”造成的损伤,提高体外培养神经元在损伤环境中的生存率,保持细胞的活性和细胞膜的通透性。     

肝癌单抗JH11－ADM交联物的制备及其细胞毒作用

以葡聚糖（Ｄｅｘ）为中间载体，通过碘酸氧化法制备阿霉素（ＡＤＭ）与肝癌单抗ＪＨ１１的交联物ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＪＨ１１，交联物中ＡＤＭ与ＪＨ１１的克分子比为７１：１．经ＩＦＡ测定交联物的抗体活性大部分保持。体外细胞毒试验显示，ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＪＨ１１对ＢＥＬ－７４０２细胞的杀伤作用比游离的ＡＤＭ强．其ＩＣ５０分别为０．９６μｇ／ｍｌ和１．５２μｇ／ｍｌ，对非靶细胞ＭＧｃ－８０３和Ｌ３４２的毒性很弱，它们的ＩＣ５０＞１０μｇ／ｍｌ．集落形成抑制试验表明，ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＪＨ１１在低浓度时即对ＢＥＬ－７４０２集落形成有显著抑制作用，ＩＣ５０为０．０６３μｇ／ｍｌ，结果提示，ＡＤＭ－Ｄｅｘ－ＪＨ１１具有选择性细胞杀伤作用．     

孕早期绒毛LDH及同工酶,CK和AST的测定及意义

本文用自动生化分析仪测定了１００例２２－３５岁的正常孕妇、人工流产６－９周的胎盘绒毛组织乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）和谷草转氨酶（ＡＳＴ）总活性。其参考值分别为３．０６－５．８８ＩＵ／ｍｇ蛋白；２．１１－３．９９１Ｕ／ｍｇ蛋白：１．７１－３．１９１Ｕ／ｍｇ蛋白。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了５０例ＬＤＨ同工酶。巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）阳性的２份绒毛组织ＬＤＨ总活性及同工酶ＬＤＨ３明显增高。用Ｂｙａｄｆｃｒｄ微量蛋白法测定了绒毛组织的蛋白含量，以酶单位（ＩＵ）／ｍｇ蛋白代替ＩＵ／ｇ湿重，以排除在处理绒毛过程中受称重、研磨程度、丢失和稀释等因素的影响。     

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。     

骨骼肌提取液对大鼠坐骨神经损伤所致腰段脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响

用ＣＴ－ＨＲＰ逆行追踪法及ＣｈＡＴ单克隆抗体的ＡＢＣ免疫组织化学技术研究了新生大鼠骨骼肌提取液（ＭＥ，２０～５０ｋＤ）对钳夹大鼠坐骨神经所致的腰骶部脊髓腹角和背根节神经细胞溃变的影响。实验结果显示：注射ＭＥ实验组的脊髓腹角运动神经元和背根节细胞的存活均数与注射盐水的对照组相比，其比值为６：０，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示骨骼肌提取液（２０～５０ｋＤ）对脊髓腹角运动神经元和背根节感觉神经细胞的演变有明显的保护作用。     

MTT比色法检测IL—2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细     

Ox-LDL对内皮细胞粘附分子表达及粘附功能影响的研究

目的 :大量的研究已证明高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素 ,血脂异常可引起血管内皮细胞和血细胞的功能改变。近年来的研究发现 ,其中氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ ＬＤＬ)起主要作用。故尔观测Ｏｘ ＬＤＬ对血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ 1、ＶＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ表达和粘附作用的影响。方法 :本研究采用人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)作研究载体 ,采用单核细胞系Ｕ937细胞观测Ｏｘ ＬＤＬ对内皮细胞 (ＥＣ)粘附功能的影响 ,采用免疫组化ＡＢＣ法和ＥＬＩＳＡ二种方法观测Ｏｘ ＬＤＬ(10 0 μｇ/ｍｌ和 2 0 0 μｇ/ｍｌ二种浓度 …     

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 ,以乳鼠肌源性神经营养因子的效果为最好     

肌萎灵注射液对大鼠原代培养运动神经元生长的影响

为了观察中药制剂肌萎灵注射液对大鼠原代培养脊髓运动神经元生长的影响,本研究采用MTT方法观察神经元活力,并通过免疫组织化学技术进行NF 200染色后图像分析测定突起长度。结果表明:浓度为0. 5% ~5%的肌萎灵注射液能增加培养神经元活力,浓度为0. 5% ~1%的肌萎灵能促进神经元突起生长。本研究结果提示:肌萎灵注射液对培养的大鼠脊髓运动神经元生长有促进作用。     

BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素Ⅰ与突触囊泡素表达的影响

探讨BDNF对体外培养的大鼠脊髓前角神经元内突触素I与突触囊泡素(SYN)表达的影响。取孕14d大鼠子宫内胎鼠的脊髓腹侧部分神经元,体外有血清培养。在培养7d后,随机分成对照组、BDNF组和抗BDNF组。BDNF组培养液中加入BDNF(20ng/ml),抗BDNF组培养液中加入BDNF抗体(20μg/ml),对照组加入等量Hanks液。3d后在倒置显微镜下计数三组神经元存活数,并用NF200、MAP2、NSE的免疫组化反应对神经细胞进行鉴定。行突触素I与SYN免疫组化反应,对部分细胞行突触素ImRNA原位杂交反应,运用图像分析系统对突触素I与SYN免疫组织反应阳性产物以及突触素I原位杂交反应阳性产物作光密度分析。结果发现有血清培养时各组脊髓前角神经元的存活数无显著差异(P>0.05);BDNF组突触素I与SYN免疫反应阳性产物的平均光密度值高于其它两组,抗BDNF组最低(P<0.01)。BDNF组突触素ImRNA阳性产物的平均光密度值明显高于其它两组,抗BDNF组突触素ImRNA阳性产物的平均光密度值最低(P<0.01)。本研究结果提示BDNF对有血清培养时脊髓前角神经元的存活没有明显影响,但BDNF可明显上调培养的脊髓前角神经元内突触素I与SYN的表达。     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。     

嗅鞘细胞培养上清液对体外培养脊髓神经元存活及活性的影响

目的:通过检测鞘嗅细胞培养上清液,研究其是否能够分泌促进神经元存活及活性的物质,以便为CNS神经损伤修复提供相关移植的理论依据。方法:分离培养嗅神经及嗅球颗粒层(ONGL)细胞,经过传代培养进行纯化嗅鞘细胞,最后收集其培养上清液。浓缩并检测其蛋白浓度,分别以10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml的浓度加到培养的脊髓神经元的存活及活性指标。结果:嗅鞘细胞培养上清的蛋白浓度为40ug/ml、80ug/ml时对神经元夏活具有促进作用(与对照组相比P<0.01),而80ug/ml时对神经元活性具有促进作用(P<0.01)。结论:嗅鞘细胞在培养状态能够分泌一些活性物质,这些活性物质对神经元的存活和活性有明显的促进作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对培养的背根神经节的影响

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在体外促进正常胚胎大鼠背根神经节(DRGn)的存活及突起生长情况。方法 用原代分离培养法建立体外胚胎大鼠背根神经节单细胞培养体系，通过活体观察、MTT微量比色法、NSE免疫组织化学染色观察不同浓度GDNF对体外培养的正常感觉神经元的影响。结果 GDNF组培养的DRG神经元存活数量增加，神经元突起的长度比对照组明显增长。结论 GDNF能明显促进体外培养的正常大鼠胚胎背根神经节感觉神经元的存活及突起生长，表明GDNF对正常大鼠胚胎发育期感觉神经元具有神经营养作用。     

Measurement of cellular 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction activity and lactate dehydrogenase release using MTT

3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction assay and lactate dehydrogenase (LDH) release assay have been widely used for evaluating cell viability in culture. MTT reduction assay measures the redox activity of living cells, while LDH assay measures the activity of LDH released into the medium from dead cells. In this paper, we introduce a quick and simple method of measuring cellular MTT reduction and LDH release with the same dye, MTT. The substrate mixture for measuring LDH activity contained lactate, beta-nicotinamide adenine dinucleotide, 1-methoxyphenazine methosulfate, MTT and Triton X-100. When the medium containing LDH was mixed with the substrates, MTT was converted into MTT formazan in proportion to LDH activity. This method was successfully applied for evaluating t-butyl hydroperoxide toxicity in cultured rat cortical astrocytes and glutamate toxicity in cultured rat hippocampal neurons. Our method is economical and convenient especially for measuring cellular MTT reduction and LDH release in the same culture.     

Evidence for neuron-survival and neurite-promoting factors from skeletal muscle: Their effects on embryonic spinal cord

Explants of 8- and 9-day embryonic chick spinal cord were cultured for 4 days in medium which had been conditioned by skeletal muscle cells. When the conditioned medium was preincubated over polylysine substrata, it lost the ability to induce extensive neuritic outgrowth from the spinal cord. This ability was restored when the spinal cord was exposed to preincubated conditioned medium on preincubated polylysine substrata. Skeletal muscle thus appears to contain two separable components; one is a soluble factor which supports neuronal survival, and the other is an adsorbable factor which binds to appropriate substrata and promotes neuritic outgrowth.