大鼠脑缺血再灌注诱导自体神经干细胞原位增殖的研究

目的研究缺血性脑损伤对内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。方法参照Pulsinelli-Brierley法制作短暂性全脑缺血动物模型,全脑缺血10min后再灌注,采用SABC免疫组化染色显示5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)阳性细胞和神经巢蛋白(Nestin)阳性细胞,光镜下观察并统计分析脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖、迁移的变化过程。结果脑缺血再灌流24h后,海马、齿状回和室管膜下区的BrdU阳性细胞和Nestin阳性细胞增多,7～10d达到高峰,术后20d仍有表达;在室管膜下区,BrdU阳性细胞和Nestin阳性细胞有向皮质、海马迁移的现象。结论①成年大鼠全脑缺血后7～10d,内源性神经干细胞的增殖达到高峰。②增殖的内源性神经干细胞存在由增殖区向靶区迁移的现象。     

自体骨髓单个核细胞移植对脑梗死大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的研究骨髓单个核细胞对脑梗死后脑源性神经营养因子(BDNF)及室管膜下区神经干细胞增殖的影响,探讨骨髓单个核细胞对脑梗死治疗作用的可能机制。方法成年雄性SD大鼠72只,体质量250~300g。梯度离心法分离骨髓单个核细胞,流式细胞术检测细胞纯度,将由模型动物股骨骨髓腔内分离出的单个核细胞经尾静脉途径移植到大鼠体内;线栓法制作脑梗死动物模型,分别于脑梗死后24h、72h通过Western blot技术检测脑部BDNF的表达;室管膜下区神经干细胞的增殖情况于脑梗死7d时通过BrdU/Nestin免疫荧光双染技术进行检测。结果经骨髓单个核细胞移植24h、72h时,BDNF表达的水平在脑梗死大鼠脑部明显增高,与模型组及溶剂组比较,差异有统计学意义(P0.01)。自体骨髓单个核细胞移植还促进了脑梗死7d时室管膜下区神经干细胞的增殖,骨髓单个核细胞移植组与模型组以及溶剂治疗组比较,差异亦具有统计学意义(P0.01)。结论自体骨髓单个核细胞移植可以显著增加脑梗死大鼠脑部BDNF的表达、并促进室管膜下区神经干细胞的动员。骨髓单个核细胞促进神经干细胞增殖的作用可能与骨髓单个核细胞的神经保护作用有关。     

成年大鼠脑创伤后神经前体细胞的增殖及迁移

目的 研究液压冲击性脑损伤后成年大鼠神经前体细胞的增殖及迁移。方法 制作液压冲击性脑损伤模型，免疫组织化学方法动态检测巢蛋白（Nestin）和5溴脱氧尿苷（BrdU）的表达。BrdU标记方法确定增列殖的前体细胞；Nestin的表达用于确定神经前体细胞。结果 同正常对照组相比较，伤侧皮层、海马及室下区的Nestin阳性细胞数于伤后1d明显增多，7d达高峰,30d消失；BrdU阳性细胞数于作后3d达高峰，而7d以后逐渐减小，室下区BrdU阳性细胞及Nestin阳性细胞经胼胝体向对侧迁移。结论 液压冲击性脑损伤可激发成年大鼠神经前体细胞增殖及迁移。     

脑出血大鼠脑内神经干细胞移植的研究

目的分离并克隆新生大鼠神经干细胞,研究其移植入脑出血大鼠脑内的生物学特征,了解神经干细胞移植治疗脑出血的可行性.方法用尾状核注射Ⅶ型胶原酶制作脑出血模型,从Wistar新生大鼠脑室下区分离并克隆神经干细胞,经Brdu(5-溴脱氧尿嘧啶)掺入标记后移植入脑出血同侧的侧脑室或脑出血对侧的尾状核中.经免疫组织化学鉴定了解移植细胞在大鼠脑内的生存、迁移及分化情况.结果将稳定培养的神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内,发现移植后4 d移植细胞仍存在.侧脑室移植组中移植细胞多在侧脑室周边区存在,尾状核移植组可见移植细胞开始向对侧迁移.免疫荧光双标证实细胞大多分化成神经元,少部分分化成胶质细胞.结论神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内后能够存活,并能有效地穿过室管膜和向脑出血部位迁移.移植细胞在脑内大部分分化成神经元,少部分分化成胶质细胞.     

半乳凝素1对脑损伤大鼠室管膜下区内源性神经干细胞原位增殖及迁移的影响

背景：半乳凝素1表达于室管膜下区的星形胶质细胞中并诱导其分化，分化的星形胶质细胞可明显提高脑源性神经生长因子的产生。 目的：观察侧脑室注入半乳凝素1对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。 设计、时间及地点：细胞学体内观察实验，于2007-03/11在佳木斯大学神经科学研究所完成。 材料：纯种清洁级成年Wistar大鼠48只，随机分为模型组、药物组，24只/组。半乳凝素1为北京晶美生物工程公司产品。 方法：两组大鼠均采用线栓法制作局灶性大脑中动脉闭塞模型。造模后24 h，药物组经右侧侧脑室注入10 μL浓度为0.2 g/L的半乳凝素1，模型组注射等量生理盐水。分别于缺血再灌注后3，7，14，28 d处死大鼠，取脑组织制作石蜡切片，处死前1 d腹腔注射BrdU。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测大脑室管膜下区BrdU和巢蛋白阳性细胞的表达。 结果：模型组缺血再灌注3 d后大脑室管膜下区BrdU、巢蛋白阳性细胞开始增加，7 d增殖达高峰，14 d后表达开始下降，28 d后下降至最低。药物组缺血再灌注3 d后大脑室管膜下区两种阳性细胞均明显增加；7 d 增殖达高峰，半定量分析BrdU、巢蛋白阳性细胞数分别是模型组的2倍和1.5倍，且BrdU阳性细胞向腹外侧迁移，巢蛋白阳性细胞胞体变大，突起增长，并有向外侧迁移进入脑实质的迹象；14 d后开始下降；28 d降至最低，但仍明显多于模型组（P < 0.05）。 结论：经侧脑室注入半乳凝素1在大鼠脑缺血后可激活内源性神经干细胞原位增殖，并存在由增殖区向外周脑实质迁移的趋势。     

缺血性脑损伤诱导大鼠巢蛋白表达的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤对内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。方法选用健康雄性SD大鼠62只，随机分为正常组（6只）、脑缺血10min再灌流1、3、5、7、10、15、20d组（简称手术组，每时间点6只）、假手术对照组（14只，每时间点2只），参照Pulsinelli—Brierley方法制作短暂性全脑缺血动物模型：用SABC免疫组化法显示巢蛋白（nestin）阳性细胞；光镜下观察nestin阳性细胞的形态学变化并计数，半定量分析脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖、迁移的变化过程。结果手术组的nestin阳性细胞在缺血再灌流24h后表达增多，7～10d到高峰，15d时仍有显著表达；在室管膜下区的nestin阳性细胞有向皮质、海马迁移的迹象。结论缺血性脑损伤能诱导内源性神经干细胞增殖，这可能对脑损伤后的修复发挥作用。     

黄芩苷协同人脐血间充质干细胞静脉移植治疗幼鼠缺氧缺血性脑损伤☆

背景：最近研究证实黄芩苷对多种脑损伤具有广泛的神经系统保护作用。 目的：探讨中药单体黄芩苷干预并协同人脐血间充质干细胞静脉移植治疗幼鼠缺氧缺血性脑损伤的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-02/2008-01在南昌大学第一附属医院神经内科实验室完成。 材料：健康孕妇足月顺产儿的脐带血10份,取自南昌大学一附院产科。清洁级7 d龄SD新生鼠85只,随机分为正常对照组15只、模型组20只、细胞移植组25只、细胞移植+黄芩苷组25只。 方法：采用明胶沉降+密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,体外扩增至第5代用于移植,使用前6~12 h行DAPI标记。模型组、细胞移植组、细胞移植+黄芩苷组新生鼠建立缺氧缺血性脑损伤模型,空白对照组不作任何处理。分别于造模后2,3,4,5周,细胞移植组、细胞移植+黄芩苷组经尾静脉注射DAPI标记好的人脐血间充质干细胞悬液5~10 μL/g,细胞浓度为1×109 L-1。从细胞移植第1天起,细胞移植+黄芩苷组动物经腹腔注射120 mg/kg黄芩苷,1次/d,连续3 d。 主要观察指标：脑组织病变情况,脑组织DAPI阳性细胞数,脐血间充质干细胞移植后定位情况。 结果：移植后4周,细胞移植+黄芩苷组脑组织病变率明显低于模型组、细胞移植组(P < 0.05)。与细胞移植组比较,第1,2,4周细胞移植+黄芩苷组DAPI阳性细胞数均显著增加(P < 0.01)。造模后第3周开始细胞移植的病灶脑组织,在黄芩苷的协同作用下可见大量DAPI阳性细胞集中分布于病灶区周围,与宿主脑整合,没有明显的界限,而对侧非缺血区很少见到DAPI阳性的脐血间充质干细胞分布;造模后第4,5周开始细胞移植的病灶脑组织,其DAPI阳性细胞明显减少。 结论：选择缺氧缺血性脑损伤后第3周进行细胞移植效果较佳,黄芩苷能够协同人脐血间充质干细胞有效地透过血脑屏障,在病灶脑组织周围迁移、扩散、整合。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后骨髓基质细胞移植时间的选择☆

目的：众多研究已证实骨髓基质细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤是有效的，但移植时间点的选择尚无定论。在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间点进行骨髓基质细胞移植，通过对其远期行为学及组织学检测，探讨最佳的移植时间窗。 方法：实验于2005-06/2006-06在中南大学湘雅医院中心实验室完成。①动物：选取清洁级7 d龄SD大鼠50只，随机数字表法分为5组：正常对照组、模型对照组、24 h，72 h，7 d细胞移植组，10只/组。另取4周龄SD大鼠10只用于骨髓基质细胞的培养。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：除正常对照组外，其余组大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型。在脑立体定位仪下，24 h，72 h，7 d细胞移植组分别于造模后对应时间点，将体外培养3~5代且经Hochest33324标记24 h的鼠骨髓基质细胞2 μL脑内移植于左侧海马，约105个细胞。③实验评估：各组大鼠40 d日龄时进行迷宫觅水测试，记录觅水时间、错误次数、重复次数。行为学测试后取脑组织片行尼氏染色，计数左侧海马CA1区神经元数。在荧光显微镜下观察骨髓基质细胞的存活、增殖，用免疫组化法检测骨髓基质细胞神经元特异性烯醇化酶的阳性率。 结果：50只大鼠均进入结果分析。①放射臂迷宫实验检测：模型对照组觅水时间、错误次数、重复次数均高于正常对照组和各细胞移植组（P < 0.01），24 h细胞移植组上述3项指标均低于72 h，7 d细胞移植组（P < 0.05）。②左侧海马CA1区神经元尼氏染色结果：模型对照组神经元数较正常对照组明显减少（P < 0.01），且排列紊乱，丢失明显；24 h，72 h，7 d细胞移植组神经元数均较模型对照组显著增加（P < 0.01），排列整齐；24 h细胞移植组神经元数较72 h，7 d细胞移植组明显增多（P < 0.05）。③骨髓基质细胞体内增殖和神经分化情况：骨髓基质细胞移植后30~40 d仍可在移植部位及左侧皮质区存活、增殖。24 h细胞移植组左脑神经元特异性烯醇化酶阳性表达率显著高于72 h，7 d细胞移植组（P < 0.01）。 结论：新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后24 h接受骨髓基质细胞移植可最大程度改善脑损伤所导致的远期行为学障碍，其机制可能与早期移植可有效减轻神经元的坏死、凋亡，且有利于骨髓基质细胞的迁移、分化有关。     

经枕大池神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的研究

目的 将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中并观察其存活、迁移和分化,从而为神经干细胞的体内存活、迁移和分化机理研究和临床应用提供实验依据.方法 体外培养BrdU标记的胚胎神经干细胞并应用免疫荧光细胞化学染色对BrdU、神经干细胞标记物nestin的表达进行鉴定:采用Feeney自由落体撞击法制做大鼠脑损伤模型,伤后24 h将BrdU标记的胚胎神经十细胞经立体定向注射移植到蛛网膜下腔;制作大鼠脑绢织石蜡切片,应用免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;伤前24h、伤后24 h及1、2周行动物运动神经功能评分.结果 免疫荧光检测显示神经球的表面细胞表达nestin及BrdU:免疫组织化学染色检测到脑内损伤灶存在BrdU阳性神经干细胞、MAP2阳性神经元和GFAP阳性胶质细胞;接受神经十细胞移植的大鼠神经运动功能评分的恢复较对照组有明显提高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经枕大池移植到脑损伤大鼠蛛网膜下腔中的神经干细胞能存活且具有远距离迁移能力,并明显有助于脑损伤大鼠神经运动功能的恢复.     

人脐带间质干细胞大鼠脑内移植的实验研究

目的探讨人脐带间质干细胞(UCMSC)在大鼠脑组织移植后的存活、迁移及分化。方法体外培养、扩增人脐带MSC,取第6代以内标记后的脐带MSC移植到成年大鼠海马CA1段。分别用荧光显微镜及免疫组织化学方法观察不同时间段移植细胞在体内的存活、迁移情况,并检测移植细胞NSE、NF、GFA P的表达。结果人脐带可大量扩增间质干细胞;大鼠海马CA1段移植UCMSCs后,移植细胞至少可存活6周以上,向注射点临近脑组织移行超过1mm,并向远隔部位如室管膜下区迁移;免疫组织化学检测表明部分细胞表达NSE、NF。结论人UCMSC大鼠脑组织内移植后可长期存活,向室管膜下区迁移并有部分细胞转化为神经元。     

梗死灶切除治疗重型颅脑外伤合并大面积脑梗死

目的探讨重型颅脑外伤合并大面积脑梗死的最佳外科处理方式.方法对53例重型颅脑外伤病人行开颅血肿、挫伤脑组织清除术加去骨瓣减压术,其中31例未行梗死灶切除(第1组),22例行梗死灶切除(第2组).术后1个月、12个月评价两组的GOS,并行χ2检验.结果术后第1组死亡7例,植物生存5例,重残8例,轻残11例;第2组死亡1例,植物生存2例,重残9例,轻残10例.两组不良结果率(死亡 植物状态)有显著性差异,P＜0.05.结论对重型颅脑外伤合并大面积脑梗死的病人行挫伤脑组织和血肿加梗死灶切除,对降低病死率、提高有效生存率有明显作用.     

Adjuvant whole brain radiation following resection of brain metastases

Brain metastasis is a common complication of systemic cancer and significant cause of suffering in oncology patients. Despite a plethora of available treatment modalities, the prognosis is poor with a median survival time of approximately one year. For patients with controlled systemic disease, good performance status, and a limited number of metastases, treatment typically entails surgical resection or radiosurgery, followed by whole brain radiotherapy (WBRT) to control microscopic disease. WBRT is known to control the progression of cancer in the brain, but it can also have toxic effects, particularly with regard to neurocognition. There is no consensus as to whether the benefit of WBRT outweighs the potential harm. We review the evidence related to the question of whether patients undergoing surgical resection of brain metastases should receive adjuvant WBRT.     

颅脑损伤术后并发脑梗死的临床分析

目的探讨颅脑损伤术后脑梗死的发生机制及治疗方法。方法回顾分析24例颅脑损伤术后病人发生脑梗死的临床资料。结果保守治疗19例,开颅减压5例,死亡7例。结论颅脑损伤后如手术指征明确则须及时手术。术后注意病情变化采取综合治疗措施。应积极保持脑灌注压、维持血压及血氧,降低颅内压,改善脑血管痉挛,早期扩管改善微循环,有利于降低死残率,改善预后。     

Sleep: big brain meets little brain

2001 Harcourt Publishers Ltd     

Effect of brain structure, brain function, and brain connectivity on relapse in alcohol-dependent patients

CONTEXT In alcohol-dependent patients, brain atrophy and functional brain activation elicited by alcohol-associated stimuli may predict relapse. However, to date, the interaction between both factors has not been studied. OBJECTIVE To determine whether results from structural and functional magnetic resonance imaging are associated with relapse in detoxified alcohol-dependent patients. DESIGN A cue-reactivity functional magnetic resonance experiment with alcohol-associated and neutral stimuli. After a follow-up period of 3 months, the group of 46 detoxified alcohol-dependent patients was subdivided into 16 abstainers and 30 relapsers. SETTING Faculty for Clinical Medicine Mannheim at the University of Heidelberg, Germany. PARTICIPANTS A total of 46 detoxified alcohol-dependent patients and 46 age- and sex-matched healthy control subjects MAIN OUTCOME MEASURES Local gray matter volume, local stimulus-related functional magnetic resonance imaging activation, joint analyses of structural and functional data with Biological Parametric Mapping, and connectivity analyses adopting the psychophysiological interaction approach. RESULTS Subsequent relapsers showed pronounced atrophy in the bilateral orbitofrontal cortex and in the right medial prefrontal and anterior cingulate cortex, compared with healthy controls and patients who remained abstinent. The local gray matter volume-corrected brain response elicited by alcohol-associated vs neutral stimuli in the left medial prefrontal cortex was enhanced for subsequent relapsers, whereas abstainers displayed an increased neural response in the midbrain (the ventral tegmental area extending into the subthalamic nucleus) and ventral striatum. For alcohol-associated vs neutral stimuli in abstainers compared with relapsers, the analyses of the psychophysiological interaction showed a stronger functional connectivity between the midbrain and the left amygdala and between the midbrain and the left orbitofrontal cortex. CONCLUSIONS Subsequent relapsers displayed increased brain atrophy in brain areas associated with error monitoring and behavioral control. Correcting for gray matter reductions, we found that, in these patients, alcohol-related cues elicited increased activation in brain areas associated with attentional bias toward these cues and that, in patients who remained abstinent, increased activation and connectivity were observed in brain areas associated with processing of salient or aversive stimuli.     

The features of the brain immune system in brain neoplasms

Examining responses of the local immune system of the brain in neurocancer patients suggests that the immune system is involved in the neuroimmune interaction of both physiological and pathological conditions in the central nervous system (CNS). The setting off the local immune system of the brain is of functional nature, similar to functional analogy with the local system of the mucosae. By functional analogy, the aggregate of immune responses in the nervous tissue and cerebrospinal fluid should be called local and the system that includes these responses should named the local immune system of the brain. Due to the fact that nervous, endocrine, and immune regulatory pathways intersect in the CNS (hypothalamus), it is expedient to call this aggregate of defensive factors and mechanisms in CNS more broadly--the neuroimmune system.