兔结膜基质诱导人骨髓间质干细胞分化的初步研究

 【目的】观察人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在保存人羊膜及兔眼表结膜基质上分化的情况。【方法】24只新西兰兔随机分为2组。实验组：培养有人MSCs的羊膜移植组，将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d，用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植到兔眼表结膜缺损区；对照组，单纯羊膜移植组。分别于移植后1，2，3，4，6和8周，摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查，组织学检查移植到兔结膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况；免疫组织化学检测移植到结膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白3／12（CK3／CKl2）和角蛋白13（CK13）的表达。【结果】MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长，与羊膜共培养4d后，MSCs贴附羊膜生长迅速，组织学特征无明显改变。用羊膜负载MSCs移植到兔结膜缺损区，术后免疫组织化学检测结膜上皮层CK13表达阳性，CK3／CK12表达阴性，在重建的结膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞，未见异常增殖细胞。【结论】人羊膜可作为MSCs的载体，采用人羊膜负载MSCs行兔结膜移植，MSCs能在兔结膜上皮层存活并增殖。     

兔结膜基质诱导人骨髓间质干细胞分化的初步研究

【目的】观察人骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在保存人羊膜及兔眼表结膜基质上分化的情况。【方法】24只新西兰兔随机分为2组。实验组：培养有人MSCs的羊膜移植组，将人MSCs接种在保存人羊膜上培养4d，用5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记后移植到兔眼表结膜缺损区；对照组，单纯羊膜移植组。分别于移植后1，2，3，4，6和8周，摘取各组实验眼行组织学和免疫组织化学检查，组织学检查移植到兔结膜基质的MSCs的存活、形态变化以及移植局部的反应等情况；免疫组织化学检测移植到结膜基质的带有BrdU标记的细胞角蛋白3／12（CK3／CKl2）和角蛋白13（CK13）的表达。【结果】MSCs接种到羊膜后能在羊膜上生长，与羊膜共培养4d后，MSCs贴附羊膜生长迅速，组织学特征无明显改变。用羊膜负载MSCs移植到兔结膜缺损区，术后免疫组织化学检测结膜上皮层CK13表达阳性，CK3／CK12表达阴性，在重建的结膜上皮层可检测到BrdU核阳性细胞，未见异常增殖细胞。【结论】人羊膜可作为MSCs的载体，采用人羊膜负载MSCs行兔结膜移植，MSCs能在兔结膜上皮层存活并增殖。     

保存的人羊膜移植进行结膜表面重建

目的：观察用保存的人羊膜对结膜大片缺损患者进行结膜表面重建的效果。方法：对翼状胬肉,睑球粘连和结膜肿瘤患者手术后引起的大片结膜缺损进行保存的人羊膜移植。结果：在随访期间（4－36个月）,29例（33眼）中25例（29眼）术后没有复发,结膜上皮愈合稳定,没有出现明显的炎症和瘢痕,术后4例（4眼）患者结膜表面重建失败：初发性翼状胬肉1例（1眼）,复发性翼状胬肉2例（2眼）,睑球粘连1例（1眼。结论：羊膜移植可以用作翼状胬肉,睑球粘连,肿瘤等手术后的大片结膜缺损的结膜表面重建。     

兔眼准分子激光角膜切削术联合羊膜移植术的初步实验研究

目的：以准人子角膜切削（PTK）术后的兔眼为模型,探讨保存人羊膜移植对角膜伤口早期愈合的影响,方法：新西兰西兔12只,双眼行PTK术,一眼术后立于角膜表面移植保存的人羊膜,术后,每日进行临床观察,并分别于第3,5,7天处死动物,取角膜行光镜和电镜检查,结果：在术后3,5,7天,羊膜移植侧角膜中央上皮增生厚度均明显小于对照后角膜上皮下雾状混浊（haze)的形成中发挥作用。     

兔眼结膜上皮细胞体外培养治疗结膜缺损实验研究

目的探讨体外分离培养结膜上皮细胞治疗结膜缺损的方法。方法新西兰大白兔10只,右眼(10眼)为实验组,左眼(10眼)为对照组。术前2周取右眼穹隆部结膜1mm×1mm剪成0.5mm×0.5mm后种植于羊膜上体外培养;术中切除鼻侧结膜组织,实验组将结膜上皮植片移植于结膜创口,对照组结膜创口暴露。观察结膜上皮细胞的生长特性。结果接种在羊膜上的结膜组织,6天左右融合成膜状,细胞为复层上皮细胞。术后实验组角膜透明,结膜移植片与周围组织完全融合,未发生排斥反应;对照组为瘢痕性愈合。结论体外分离培养结膜上皮细胞是治疗结膜缺损的一种理想的好方法。     

羊膜移植在碱烧伤眼表面重建的应用

目的：探讨羊膜移植治疗眼碱性烧伤疾病的可行性。方法：对8例10眼碱烧伤患者伤后2周进行新鲜羊膜移植，术后随访观察6～23个月。结果：8例10眼术后临床上均未见急性排斥反应，眼表面上皮化良好。结论：羊膜移植可有效地用于重建结膜表面，减少炎症反应，抑制纤维组织增生。     

结膜细胞外基质移植的实验研究

目的：观察结膜细胞外基质（extracellular matrix,EcM）作为结膜组织的替代材料用于结膜成形的特点及效果。方法：饲养42只大白兔,将其中6只大白兔的球结膜制作结膜缺损模型,并将剩余的大白兔随机分为3组,每组12只。实验组兔结膜采用组织工程技术制备的结膜ECM行结膜移植修补术,对照Ⅰ组采用新鲜异体结膜移植,对照Ⅱ组采用低温冷冻保存的羊膜移植,以观察移植修补术后结膜成形的情况,并行肉眼、镜下、免疫组化及淋巴细胞毒检查。结果：动物实验组,结膜ECM移植后1周可见新生血管自移植边缘长入,8周外观已接近正常结膜,无免疫排斥反应;光镜下可见移植后4周的移植区上皮已接近正常结膜上皮。对照Ⅰ组术后2周,移植片可见大量炎性细胞浸润。对照Ⅱ组术后4周。移植区仍有部分上皮未覆盖。结论：结膜ECM为目前比较理想的结膜替代材料,并可有效地用于角、结膜表面重建。     

羊膜移植结膜囊成形术的研究

目的：观察和评价羊膜在结膜囊成形术中的应用价值。方法：采用保存入羊膜移植用于结膜囊狭窄的结膜囊成形术9例9只眼。结果：9只眼无1例感染，7d后移植的羊膜变黎明，缝合处结膜向羊膜上爬行，1个月后新生的结膜上皮完全覆盖移植区。结论：保存的人羊膜无抗原性，移植后能作为结膜上皮移行生长的载体，替代球结膜用于结膜囊成形术的效果满意。     

保存羊膜移植重建兔眼表的形态学实验研究（摘要）

观察应用保存羊膜移植重建兔眼表后的形态变化 ,以期从结构上探讨羊膜移植后恢复正常眼表功能的机制 .方法 :3 0眼分六组 .A :正常眼 ;B :中央角膜板层切除 ;C :角膜缘部切除 ;D :中央角膜板层切除后行羊膜移植 ;E :角膜缘部切除后环行羊膜移植 ;F :结膜大部切除后行羊膜移植 .术后观察眼表的愈合情况 . 2月后取材行病理检查 .结果 :术后 2月 ,B组角膜透明 ,眼表恢复正常 ;C组角膜混浊 ,角膜表面结膜上皮化 ;D组羊膜被覆上皮细胞为角膜型上皮 ,羊膜内出现的角膜基质细胞 ,胶原纤维排列规则且分层 ,羊膜与其下基质愈合 ,羊膜变透明 ,羊膜…     

兔角膜缘上皮细胞培养联合羊膜行自体移植的实验研究

目的：用体外培养的角膜缘上皮细胞联合人羊膜的方法，行自体移植治疗角膜缘干细胞完全缺乏的兔眼。方法：制作10只兔右眼于细胞缺乏的模型，取其中7只兔的左眼上方角膜缘取一小块组织进行体外培养，并传代在无上皮细胞的人羊膜上。1个月后，手术切除10只兔受伤眼角膜表面被覆的新生血管膜和结膜上皮，7眼接受了含自体培养上皮细胞的羊膜移植，另3眼仅移植无上皮细胞的羊膜。结果：1周后原代培养的角膜缘上皮细胞融合，传代至无上皮细胞的人羊膜上继续生长2～3周，角膜上皮细胞可牢固的附着于羊膜上。移植了含有角膜上皮细胞的羊膜的兔子，术后早期都形成了角膜上皮化，并明显抑制了新生血管的再生，而接受羊膜移植的兔子，术后又出现明显的新生血管。结论：利用无上皮细胞的羊膜作为载体，培养角膜缘上皮细胞并自体移植可以恢复角膜上皮化、抑制新生血管生长。     

兔眼非穿透性滤过手术联合羊膜移植的实验研究

目的:探讨两种不同术式的羊膜移植在兔眼非穿透性滤过手术中的抗瘢痕作用。方法:选取新西兰白兔15只,将30只眼随机分为3组,第1组行非穿性滤过手术联合巩膜瓣下羊膜移植,第2组行非穿透性滤过手术联合结膜瓣下羊膜移植,对照组行非穿透性滤过手术。术后观察术眼结膜及前房反应,30天时行眼球组织切片及减压腔处组织学检查,测定其胶原的平均吸光度(A)值。结果:术后30天对照组减压腔处的胶原相对含量A为(62.72±10.75)。非穿透性手术巩膜瓣下羊膜移植组为(49.91±8.60)。对照组与两实验组间差异显著(P<0.05),两实验组间差异不明显(P>0.05)。结论:巩膜瓣下,结膜瓣下放置羊膜组织均能抑制兔眼非穿透性滤过手术区瘢痕形成,且对兔眼组织无毒副作用。     

Resection and Cryotherapy Combined with Amniotic Membrane Transplantation for the Treatment of Vernal Keratoconjunctivitis with Giant Papillae

To evaluate the efficacy and safety of resection and cryotherapy combined with amniotic membrane transplantation (AMT) for the treatment of vernal keratoconjunctivitis (VKC) with giant papillae (GP). Eight patients (16 eyes involved) with VKC, characterized by GP on the upper tarsal conjunctiva, underwent resection and cryotherapy in combination with AMT. The follow-up lasted for 3-22 months. The results showed that corneal shield ulcers and superficial punctuate keratitis healed during the first week after surgery and did not recur. Fourteen eyes (87.5 %) were symptom-free 1 month after surgery, and no GP, ectropion, trichiasis and other complications were noted, but the blood vessels of upper tarsal conjunctiva could not be clearly seen and a little conjunctival scar was observed. Recurrence of GP was observed in 2 eyes (12.5 %), with the area being less and irritation milder as compared with those before the operation. Among the two eyes, one eye was treated by cyclosporine eyedrops with improvement, but the other eye showed no improvement after the treatment, and underwent a second surgery with a cotton patch soaked in fluorouracil applied onto the su-pratarsal area after resection and cryotherapy. Four months after the treatment the patient presented no symptoms and GP did not recur. It is concluded that the resection and cryotherapy combined with AMT is an effective and safe treatment for VKC with GP.     

新鲜羊膜移植治疗早期重度眼烧伤的临床观察

目的研究新鲜羊膜移植术对早期重度眼烧伤重建眼表的临床效果.方法急性重度眼烧伤24例28眼,14例14眼(Ⅲ度4眼,Ⅳ度10眼)早期(伤后3周内)行新鲜AMT;另14例14眼(Ⅲ度10眼,Ⅳ度4眼)予以药物治疗.结果术后Ⅲ度4眼眼表重建成功;手术组Ⅳ度10眼、对照组14眼均丧失正常眼表结构、发生睑球粘连,3眼角膜穿孔;所有眼视力下降;手术组眼表上皮化时间显著短于对照组(P<0.05,t检验).结论早期新鲜AMT可作为重度眼烧伤后重建眼表的第1步.     

生物羊膜在兔非穿透性小梁切除术中的实验研究

目的探讨生物羊膜植入在兔非穿透性小梁切除术（NPTS）中的抗瘢痕作用。方法选取新西兰白兔14只28眼,每只兔双眼均行非穿透性小梁切除术,随机选取1眼,将4mm×12mm生物羊膜植入巩膜瓣和结膜瓣下（实验组）,另一只眼为对照组。观察术后结膜、角膜、前房及滤过泡情况;并于术后10、20d分别处死4、10只白兔取眼球手术区组织HE染色,于光镜、电镜下观察瘢痕形成情况。结果术后10d实验组12只眼（85.2%）见弥散的滤过泡,对照组9只眼（64.3%）见滤过泡,2组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;术后20d,实验组8只眼（80.0%）有滤过泡,对照组2只眼（20.0%）有滤过泡,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;组织学检查显示：实验组滤过区纤维组织明显减少,术后20d仍有空腔存在;对照组滤过区见大量纤维瘢痕组织形成,术后20d滤过腔基本消失。结论生物羊膜在兔眼NPTS中有抗瘢痕作用,为临床应用提供动物实验基础。     

新鲜羊膜移植治疗眼表疾病的临床评价

目的 评价新鲜人羊膜在眼表重建术手术中的临床价值。方法 用新鲜羊膜移植,治疗陈旧性睑球粘连、结膜囊缺失,复发性翼状胬肉、蚕蚀性角膜溃疡、热烧伤后角膜和结膜溶解等眼表疾病的连续病例１９例（２１只眼）。结果 １９例患者的羊膜移植手术均为一次成功。平均随访１２．５个月,羊膜移植片未见免疫排斥反应或溶解吸收。手术后,患者的睑球粘连松解,结膜囊形成,蚕蚀性角膜溃疡和复发性翼状胬肉在随访期间未见复发,角膜和结     

羊膜预防椎板切除术后硬膜外粘连的实验研究

目的:探讨羊膜在预防椎板切除术后硬膜外粘连的作用及可能机制.方法:对60只中国白兔行L5水平椎板切除术后,据术前随机分组,分别在硬膜外覆盖羊膜(羊膜组)、几丁糖膜(几丁糖膜组),空白对照组不做任何覆盖.术后2、4、8、12周每组分别处死5只动物,通过双盲法对所取标本做组织学观察及计算机辅助图像分析.结果:空白对照组暴露的硬膜发生广泛粘连,硬膜外腔几乎消失;羊膜组和几丁糖膜组硬膜外瘢痕稀少,硬膜表面光滑,硬膜外形成潜在腔隙,维持了硬膜外的有效空间.不同时间段三组间粘连度评价以羊膜组最低,几丁糖膜组次之,空白组最高,差异均有显著性(P<0.05～P<0.01).结论:在硬膜和骶棘肌间放置合适的材料可预防硬膜外粘连;羊膜能预防硬膜外瘢痕向椎管内延伸,是一种有效预防硬膜外粘连的生物相容性材料.     

金因舒治疗儿童睑板腺囊肿术后疗效观察

目的观察比较儿童睑板腺囊肿术后应用金因舒滴眼液的疗效。方法36例2~8岁患睑板腺囊肿并行睑板腺囊肿摘除术的儿童,随机分为两组,A组术中及术后应用金因舒滴眼液及抗生素滴眼液;B组只单独应用抗生素滴眼液。分别于术后1周及术后1个月记录患儿结膜愈合情况。结果术中及术后应用金因舒组结膜愈合速度明显较对照组快,结膜炎症反应较对照组轻,瘢痕情况也较对照组减轻。结论金因舒可有效促进儿童睑板腺囊肿术后结膜愈合,减少炎症反应,减少瘢痕形成。     

结膜下植入羊膜治疗兔眼中度碱烧伤

目的探讨结膜下植入羊膜联合地塞米松等药物点眼对中度兔眼碱烧伤的治疗作用。方法 48只新西兰大白兔48只眼制作碱烧伤模型,随机分为2组。A组局部给氧氟沙星眼液,地塞米松眼液,10%枸橼酸钠,结膜下注射维生素C＋庆大霉素。B组除接受与A组相同的治疗外,在结膜下植入羊膜。比较两组的疗效。结果烧伤后第1天球结膜充血程度B组明显比A组轻（P〈0.05）。烧伤后第30天角膜透明度两组无明显差异（P〉0.05）,但B组眼部疤痕明显好于A组（P〈0.05）,角膜新生血管及透明度无明显差异（P〉0.05）,光镜下A组纤维结缔组织增生,B组结膜组织的上皮层和固有层清晰可见,未见纤维组织增生。结论结膜下植入羊膜有利于碱烧伤后结膜的修复,减轻结膜的纤维增生,减少睑球粘连的发生。     

保存人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼表疾病

目的：观察和评价羊膜移植在重建眼表面手术中的应用价值。方法：采用保存人羊膜联合自体或亲属健康眼的角膜缘移植治疗眼表面疾病４８例５２只眼。结果：术后随访６０～９２周,５２只眼中,４７只眼获得稳定的眼表面（除周边部有少量纤维血管翳外,中央部无新生血管及复发性上皮缺损发生）,３７只眼角膜透明或半透明,３１只眼脱盲。结论：羊膜移植不是上皮移植,而是改良基底的手术,以保存人羊膜为基底膜,自体或亲属健康眼的角膜缘为上皮细胞来源,重建眼表面治疗眼表面疾病,初步结果显示是一种有价值的方法,其作用机制尚不清楚。     

积雪草提取物溶液治疗兔眼角膜瘢痕实验研究

目的：通过动物实验研究积雪草提取物溶液在兔眼角膜瘢痕治疗中的作用,为积雪草在眼科临床应用提供实验依据。方法：取30只兔（60只眼）,用烧灼法制作角膜瘢痕的动物模型,随机分为3组：A组生理盐液对照组（20只眼）;B组1%积雪草提取物溶液治疗组（20只眼）;C组0.2%透明质酸钠溶液对照组（20只眼）。60天后随机数字表法,分别观察兔眼角膜瘢痕的变化,并结合病理学和光镜结构变化。结果：积雪草提取物溶液组治疗后,角膜瘢痕面积、厚度与透明质酸钠溶液对照组及生理盐液对照组相比较明显减小,有显著性差异（P〈0.05）。组织病理学显示积雪草提取物溶液组角膜基质层成纤维母细胞排列较透明质酸钠溶液对照组及生理盐液对照组规则。结论：积雪草提取物溶液能有效抑制胶原形成细胞的增殖及胶原的合成,是一种有效的治疗角膜瘢痕的药物。