结直肠癌中RNA结合基序蛋白3的表达及临床意义

目的探讨RNA结合基序蛋白3(RNA-binding motif protein 3, RBM3)在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)中的表达及其与临床病理学特征、预后的关系。方法收集上海市杨浦区控江医院病理科存档的CRC组织150例及肠镜活检正常结直肠黏膜组织46例。采用免疫组化SP法检测RBM3蛋白表达,采用χ²检验和Kaplan-Meier法比较RBM3不同表达的临床病理特征和生存率的差异。结果 CRC组织中RBM3高表达率为34.0%,显著低于正常结直肠黏膜组织(69.6%)(χ²=18.239,P<0.001)。RBM3高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期均呈负相关(P均<0.05)。RBM3高表达者生存率显著高于低表达者(χ²=4.128,P=0.042)。结论 RBM3高表达与CRC发生、发展中的不良事件如肿瘤浸润、远处转移等呈负相关,且与术后良好预后有关。RBM3有望成为CRC诊断和预后的生物学标志物。     

Argonaute蛋白家族在RNAi中的作用

RNA干扰是一种双链RNA诱导的基因沉默现象。Argonaute蛋白组成了一个高度保守的家族,该蛋白家族包括许多成员,它们组成了RNA诱导的沉默复合体的核心元件,是RNA干扰所必须的。Argo-naute蛋白选择性地与miRNA和siRNA结合,并与Dicer酶相互作用,其PIWI盒子与Dicer的RNaseⅢ结构域直接相互作用,PIWI与Dicer之间的相互作用可能会促进miRNA/siRNA的释放。Argonaute蛋白很可能是RNA干扰中核酸内切酶活性的执行者。     

DExD/H-box家族蛋白在肿瘤中的研究进展

人类DExD/H-box家族蛋白是一种重要的RNA解旋酶,在RNA的加工过程中发挥重要的作用,其生物学特点与功能有待深入研究.随着对RNA在生命进程中作用的研究,发现DExD/H-box家族蛋白作为一种重要的RNA解旋酶几乎涉及RNA生命进程(包括pre-mRNA剪接、核糖体生物合成、基因转录等)中的所有环节.近年来该家族在恶性肿瘤中的作用备受关注,研究发现其在肿瘤的发生发展中起重要作用.本文将对该家族蛋白在恶性肿瘤中的研究进展进行概述.     

靶向Kaiso基因的shRNA技术对人肺癌细胞生物学行为的影响

目的 转录因子Kaiso是BTB/POZ蛋白家族的重要成员,能够调控多种重要的侵袭、增殖相关基因的表达.本研究拟通过shRNA(small hairpin RNA)技术干扰Kaiso蛋白的表达,观察Kaiso对肺癌细胞系增殖和侵袭等生物学行为的影响.方法 运用shRNA重组质粒转染肺癌细胞系LTE和SPC,特异性下调K...     

MDA-7/IL-24蛋白的功能研究进展

 mda-7/IL-24基因最初被命名为黑色素瘤分化相关基因-7（melanoma differentiation associated gene-7），是1995年Jiang等[1]利用减数杂交技术从β干扰素和蛋白激酶C活化剂mezerin诱导的人黑色素瘤细胞HO-1中鉴定并克隆出来的。基于结构、序列同源性、基因定位等方面的考虑，MDA-7蛋白被归为IL-10家族，并被命名为MDA-7/IL-24蛋白。mda-7/IL-24基因在进化过程中比较保守，在酵母、猴子、牛、狗和猫的基因组DNA中都发现了mda-7/IL-24基因的同源基因[2]。人mda-7/IL-24基因是单拷贝基因，定位于1号染色体（1q32.2-q41），由7个外显子和6个内含子组成，其mRNA长约2 kb，编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23 800的蛋白质。序列分析表明，MDA-7/ IL-24蛋白的N端有一个由49个氨基酸组成的信号肽，与蛋白的切割和分泌有关；此外，MDA-7/IL-24蛋白序列上有3个N-糖基化位点、3个蛋白激酶C位点、6个磷酸化位点[3-4]。MDA-7/IL-24蛋白作为IL-10家族中的一员，具有重要的免疫调节作用，主要在与免疫系统相关的组织中表达，如胸腺、脾、外周血白细胞等。MDA-7/IL-24蛋白的受体属于Ⅱ型细胞因子受体，由2个异源二聚体（IL-20R1/IL-20R2和IL-22R1/IL20R2）组成。MDA-7/IL-24蛋白与受体结合后，通过激活JAK/STAT信号通路而发挥其生理功能[5]。另有研究发现，利用质粒或腺病毒表达载体将mda-7/IL-24基因转入肿瘤细胞后，mda-7/IL-24基因的异位表达能特异性抑制多种肿瘤细胞的生长，诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞没有影响[8, 10-12, 14]。本文就MDA-7/IL-24蛋白的抗肿瘤和免疫调节作用研究进展及其临床应用作一综述。     

PIWI/piRNA的生物学功能及在肿瘤中的作用

PIWI-interacting RNA(piRNA)是近年来新发现的一类小RNA分子,属于非编码RNA家族中的一员,通过结合argonaute蛋白的PIWI亚家族发挥作用。piRNA与生殖干细胞干性的维持、配子形成、胚胎发育等生殖事件和多种疾病的发生发展密切相关。PIWI/piRNA途径参与调控肿瘤的增殖、转移和侵袭,并与预后相关。本文着重介绍PIWI/piRNA的生物学功能以及在肿瘤中的研究进展。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

DHRS4反义RNA结合蛋白的高通量检测与分析

目的 DHRS4是细胞内NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶家族成员4的编码基因。与人类DHRS4基因以头对头形式存在的反义转录本AS1DHRS4,可以调控DHRS4基因的转录。本研究高通量检测分析DHRS4反义RNA结合的蛋白以探讨DHRS4反义转录本调控正义基因表达的作用机制。方法采用甲醛交联细胞内的核酸-蛋白复合物,然后通过生物素标记的奇数组和偶数组寡核苷酸作为探针pull-down AS1DHRS4结合的蛋白,LCMS/MS鉴定后数据库比对分析DHRS4反义RNA结合的蛋白。结果奇数组和偶数组探针pull-down后分别鉴定得到650种和508种蛋白,两组探针检测的共同蛋白434种。大部分蛋白为结合蛋白并与RNA的加工和修饰相关。结论 DHRS4反义RNA结合的蛋白的检测和分析为今后进一步研究反义RNA功能和机制提供了线索和基础。     

一个新的阴道毛滴虫Ras同源cDNA克隆的分离及其特征分析

Ras超家族是由一群具有保守氨基酸基序的GTP结合蛋白组成,作为双向分子开关对细胞的多种功能具有调节重要的作用。本文报告分离得到一个新的阴道毛滴虫Ras cDNA克隆,命名为TvRasC。TvRasC cDNA编码一个194氨基酸的蛋白,与其它Ras亚家族成员蛋白序列的一致性在46 %到52 %之间。序列分析表明,该蛋白序列拥有Ras亚家族保守的结合GTP结构域。进化树分析发现该基因与人类的Rit基因位于同一亚群。由于Rit家族成员不含有CAAX异戊烯化基序,而TvRasC在羧基末端有一个典型的CAAX异戊烯化基序,因此TvRasC不属于Rit家族成员。在TvRasC的效应结构域内,与位于HRas第33位的天冬氨酸对应的氨基酸残基是天冬酰胺,有研究表明这种变化将大大削弱Ras基因家族与下游效应分子Raf的结合能力。因此我们预测TvRasC可能只有低水平的GTP酶活性,这种替换有可能使Raf失去与Ras结合域相互作用,并可能导致有活性有丝分裂蛋白激酶没有刺激效应。有关TvRasC在寄生性阴道毛滴虫原虫中的作用有待进一步研究。     

DEAD-box RNA解旋酶与疾病的研究进展

<正>DEAD-box家族蛋白是一类ATP酶(ATPase)活性依赖的RNA解旋酶,在进化上高度保守,广泛分布在真核生物体内。自20世纪80年代eIF4A(eukaryotic initiation factor 4A)被发现至今,不论是病毒的复制还是哺乳动物体内信号调控,DEADbox家族蛋白几乎涉及与RNA相关的一切生命活动~([1])。DEAD-box蛋白家族成员除了作为ATPase活性依赖性的RNA解旋酶外,还可以作为共激活转录因子调控细胞生理活动,甚至     

SR蛋白在几种生物中的缺陷型研究进展

SR蛋白是在真核生物RNA剪接中发挥重要功能的一类剪接因子。它们可以结合特定的RNA ,参与识别 5′及 3′剪接位点 ,与snRNP及其他剪接因子共同完成RNA的组成性和选择性剪接。这对于生物体的发育、分化等具有决定性作用。在多种生物中 ,SR蛋白家族的某一成员功能缺陷往往会导致发育停滞、分化障碍和致死效应。本文就几种SR蛋白在不同生物中的缺陷型研究进行了综述。     

与剪接、翻译偶联的PTC-mRNA NMD降解机制

最新研究发现 ,真核细胞前体 m RNA剪接不仅仅是前体 m RNA的加工步骤 ,而且在翻译过程中也起到重要的监控作用。通过剪接 ,外显子 -外显子连接点复合物结合于 m RNA剪接位点上游 2 0 bp处。如果 m RNA剪接位点上游大于 5 0～ 5 5 bp处出现无义突变 ,则这种翻译提前终止密码子 m RNA将会在最后的翻译过程中通过外显子 -外显子连接点复合物、Upf蛋白以及帽结合蛋白之间的相互作用 ,被引入脱帽、降解过程     

ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

一类新的基因沉默小RNA-piRNA(piwi-interacting RNA)

piRNA是单链非编码小分子RNA,长度约26～3l nt,大部分集中在29～30 nt,5'端具有尿嘧啶偏向性(约86 %),能够与Argonaute蛋白家族中的Piwi亚家族蛋白相互结合而产生作用.piRNA的功能主要是维持基因组中转座子的正常沉默状态,以防止基因组中转座子爆发而引起相应基因的改变.piRNA与siRNA及miRNA均是近些年发现的非编码小RNA,它们均可通过一套相应的机制进行RNA干扰,在转录、转录后甚至翻译水平对靶基因及蛋白进行调节,它们之间既有联系又有区别.piRNA数据库的建立将对这类小分子RNA的研究有很大的促进作用.     

12个非综合征型遗传性耳聋家系mtDNA12SrRNA,tRNA~(Leu(UUR)),tRNA~(Ser(UCN))及16SrRNA基因序列分析

目的　探讨 mt DNA突变与遗传性耳聋的关系 ,以及突变家系对氨基糖甙类抗生素(aminoglycoside antibiotic,Am An)耳毒敏感性差异的原因。方法　调查了 12个非综合征型耳聋家系 ;抽取外周血 ,提取 DNA;PCR扩增线粒体 DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)目的片段 ,分别以 Alw2 6 、Apa 及 Xba 限制性内切酶检测 15 5 5 G、32 43G及 744 5 G 点突变 ;行 mt DNA 12 S r RNA、t RNALeu(UUR) 、t RNASer(UCN)及 16 S r RNA基因序列测定。结果　经酶切及测序证实 12个家系具有 mt DNA突变 ,形式为 :15 5 5 G突变家系 10个 ,744 5 G突变家系 2个 ,未发现 32 43G 突变家系。基因测序显示 mt DNA 16 S r RNA基因序列变化形式为 :2 2 30 G点突变、2 2 30 AG插入、2 2 43AG插入及 2 2 30 AA插入突变 ,它们在家族性 Am An耳毒敏感性家系中被发现 ,且呈母系遗传 ;在 Am An不敏感家系中未被发现。结论　单纯 15 5 5 G或 744 5 G突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性聋 ;15 5 5 G或 744 5 G突变合并 16 S r RNA基因突变者对Am An高度敏感 ,表现为家族性敏感致聋。     

NFAT转录因子家族的结构和功能

活化T细胞核因子（NFAT）在许多免疫细胞中表达。在细胞因子基因和其它一些对免疫反应很重要的基因转录中起关键作用。NFAT蛋白活性受依赖Ca^2 /钙调蛋白磷酸脂酶C调节。NFAT的DNA结合区和Rel蛋白家族的DNA结合区相似,且两种蛋白在结合某些细胞因子的调节位点时表现出部分重叠。NFAT蛋白还可与AP－1（Fos/Jum)转录因子家族组成NFAT：AP－1部位,该部位在许多免疫细胞诱导转录的基因调节中均有发现。     

非小细胞肺癌p16基因异常与临床病理相关性研究

目的　探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌中的失活方式、mRNA和p16蛋白表达与临床病理因素的相关性。方法　应用对比性多重聚合酶链式反应检测 6 4例非小细胞肺癌中p16基因启动子的甲基化状况 ,同时应用原位杂交和免疫组织化学方法 [链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法 ]检测p16基因的mRNA和蛋白表达水平 ,并将上述结果与非小细胞肺癌之临床病理因素进行了相关性研究。结果　 5 6 3% (36 / 6 4 )的肺癌标本被检出有p16基因启动子甲基化 ,且甲基化与p16蛋白表达呈负相关 (P <0 0 5 ) ;免疫组织化学检测结果显示 ,5 7 8% (37/ 6 4 )的标本呈现p16蛋白表达缺失 ;原位杂交检测有 2 0 3% (13/ 6 4 )的标本被检出p16mRNA表达 ,且这 13例阳性者的p16蛋白也表达。同时具有p16基因启动子甲基化和蛋白表达缺失的非小细胞肺癌患者淋巴结转移率明显增高 ,术后生存期明显降低 (P <0 0 5 )。结论　启动子甲基化是导致非小细胞肺癌p16基因失活的主要方式 ,同时具有p16基因启动子甲基化及p16蛋白表达异常的患者预后不良     

长链非编码RNA在肺癌中的研究进展

长链非编码RNA（LncRNA）是一类转录本长度超过200nt的RNA,不编码蛋白,大多数位于细胞核,以RNA的形式在多层面上（表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等）调控基因的表达水平。其广泛参与机体的生理和病理过程,在恶性肿瘤的发生和发展中起着重要作用。     

ARK5 is associated with the invasive and metastatic of breast carcinoma

目的 探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义.方法 采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达.应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况.通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化.ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达.结果 乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性.转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435.转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低.ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低.结论 应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用.     

NOD/SCID小鼠抗原对脐血T细胞上TCRVβ亚家族基因克隆性的影响

目的：了解脐血单个核细胞（MNC）体外与NOD/SCID小鼠抗原共培养后, TCRVβ亚家族T细胞分布和克隆性增殖的特点.方法：将NOD/SCID小鼠外周血MNC、骨髓、胸腺及脾细胞反复冻融3次制成可溶性抗原, 分别与Ficoll-Hypaque法分离的脐血MNC共培养.第15天和第20天, 分别收集细胞提取RNA, 用RT-PCR扩增人TCRVβ亚家族基因, 并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果：扩增前脐血T细胞表达大部分Vβ亚家族, 经NOD/SCID小鼠抗原诱导后, TCRVβ亚家族T细胞呈限制性表达, 某些Vβ亚家族基因（Vβ10、 11）呈寡克隆性增殖, 而某些Vβ亚家族基因（Vβ2、 15、 16、 19）呈寡克隆表达的趋势.结论：NOD/SCID小鼠抗原可刺激脐血T细胞选择性增殖, 提示在建立人源化NOD/SCID小鼠免疫模型时应考虑所存在的GVHR问题.