血管紧张素Ⅱ通过CaMKⅡ诱导心肌细胞自噬

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大过程中是否有细胞自噬的参与,以及钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在该过程中的作用。方法 体外培养H9C2细胞系,将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ处理组、坎地沙坦处理AngⅡ组、KN-62处理AngⅡ组。通过激光共聚焦观察心肌细胞肥大情况;荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测CaMKⅡmRNA表达情况;Western blot检测CaMKⅡ蛋白及相关蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1）的水平。结果 AngⅡ能够诱导心肌细胞肥大。与正常对照组相比,AngⅡ处理组CaMKⅡmRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;坎地沙坦能够抑制AngⅡ诱导的CaMKⅡmRNA及蛋白表达升高（P<0.05）。与正常对照组相比,AngⅡ处理组的LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平明显升高（P<0.05）;坎地沙坦和KN-62均能降低LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平（P<0.05）。结论 CaMKⅡ可能不仅参与AngⅡ诱导心肌肥大,而且参与细胞自噬。     

低温缺氧/复氧后大鼠心肌成纤维细胞对心肌H9c2细胞间通讯的影响

目的 观察低温缺氧/复氧（hypothermia hypoxia/reoxygen,H/R）后大鼠心肌成纤维细胞（rat cardiac fibroblasts,RCFs）对心肌H9c2细胞间通讯的影响并探讨其可能机制。方法 将RCFs细胞与H9c2细胞以2:1数量比Transwell共培养后随机分为6组。其中T+AngⅡ组及H/R-T+AngⅡ组加入1.5 nmol/L AngⅡ，T+ARB组及H/R-T+ARB组加入1 nmol/L缬沙坦。T组、T+AngⅡ组及T+ARB组进行正常培养，H/R-T组、H/R-T+AngⅡ及H/R-T+ARB组进行H/R处理。检测各组培养液中AngⅡ含量；H9c2细胞Cx43、ERK1/2表达量及磷酸化及细胞间通讯情况。结果 与T组相比，H/R-T组及T+AngⅡ组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平降低（P <0.05），细胞间通讯减弱（P <0.05）;T+ARB组H9c2细胞ERK1/2、Cx43表达及磷酸化水平增高（P <0.05），细胞间通讯增强（P <0.05）。与H/R-T组相比，H/R-T+Ang...     

异丙酚对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨不同剂量异丙酚对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用和机制。方法 100只出生1~3 d的Wistar大鼠进行心肌成纤维细胞的分离与培养后,将细胞分为对照组(细胞培养基中加入1 mL含体积分数1%小牛血清的DMEM培养基)、AngⅡ组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+0.5 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.0 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.5 mmol/L异丙酚)。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,采用PCR法检测各组细胞α-SMA mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞总蛋白含量。结果培养48 h,AngⅡ组细胞生长抑制率[(14.23±1.17)%]低于对照组[(23.32±2.15)%]、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组[(24.19±1.36)%]、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组[(29.25±2.30)%]及AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组[(31.37±2.19)%](P<0.05),AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组细胞生长抑制率依次降低(P<0.05);AngⅡ组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量(2.05±0.23)、总蛋白含量(225.06±18.66)均高于对照组(0.98±0.12、150.65±11.23)、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(1.78±0.25、197.54±11.56)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(1.50±0.11、182.51±10.14)和AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(1.12±0.05、168.26±11.05)(P<0.05),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组及对照组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量及总蛋白含量依次降低(P<0.05)。结论异丙酚具有抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的作用,且随剂量增加,抗心肌成纤维的作用逐渐增强。     

基于Postn介导的TGF-β/NF-κB通路探讨绿原酸改善心肌肥大的作用及机制研究

目的 探究绿原酸介导Postn/TGF-β/NF-κB通路改善心肌肥大的作用机制。方法 采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9c2心肌细胞,构建心肌肥大模型。随机将细胞分为对照组、模型组、Postn-siRNA组、绿原酸组和Postn-siRNA+绿原酸组。测定各组细胞表面积及活性,各组心肌细胞Postn/TGF-β/NF-κB通路相关蛋白和mRNA表达情况,流式细胞术测定各组凋亡率。结果 与对照组比较,模型组细胞表面积和凋亡率明显增大,细胞活性明显减少（P<0.05）;与模型组比较,Postn-siRNA组和绿原酸组细胞表面积和凋亡率明显减小,细胞活性明显增加（P<0.05）;与Postn-siRNA组和绿原酸组相比,Postn-siRNA+绿原酸组细胞表面积和凋亡率明显减小,细胞活性明显增加（P<0.05）。与对照组比较,模型组Postn、α3、α5、β3、β5、NF-κB、TGF-β1蛋白及mRNA表达明显上调,ANP、BNP和β-MHC蛋白表达明显上调（P<0.05）;与模型组比较,Postn-siRNA组和绿原酸组细胞上述蛋白及mRNA表达明显下调（P&...     

血管紧张素Ⅱ诱导TR3+/+和TR3-/-小鼠心肌肥大的超声对比实验研究

目的 应用超声技术对比研究血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的TR3敲除C57BL/6小鼠(TR3-/-小鼠)和野生型C57BL/6小鼠(TR3+/+小鼠)心肌肥大后心肌厚度的变化,初步探讨TR3是否参与心肌肥大的过程.方法 将26只TR3 -/-小鼠及33只TR3+/+小鼠根据是否给予AngⅡ按随机原则分为TR3+/+ + AngⅡ组(27只)、TR3+/+ +PBS组(6只)、TR3-/- +AngⅡ组(20只)、TR3-/- +PBS组(6只)共4组.将注有AngⅡ或PBS的皮下渗透微泵埋入小鼠皮下释放4周,构建小鼠高血压模型,分别于埋泵前2d、埋泵后第1、2、3、4周共5次超声测量小鼠舒张末期室间隔厚度(IVSd)及右室后壁厚度(LVPWd).之后处死小鼠,取心肌组织进行HE染色、Western Blotting检测,对比各组差异.结果 ①超声心动图:TR3+/+ +组及TR3-/-组小鼠在埋泵前,IVSd及LVPWd未见明显差异(P＞0.05);埋泵后第1～2周,TR3-/- + AngⅡ组和TR3+/+ + AngⅡ组小鼠IVSd及LVPWd达到峰值;埋泵后第2周,TR3+/+ +AngⅡ组小鼠IVSd及LVPWd明显高于TR3+/+ +PBS组(P＜0.05);TR3-/- +AngⅡ组小鼠IVSd及LVPWd略高于TR3-/- +PBS组(P ＜0.05);TR3+/+ + AngⅡ组小鼠IVSd及LVPWd较TR3-/- +AngⅡ组小鼠明显增高(P＜0.05);给药至第4周,IVSd及LVPWd与第2周比较差异无统计学意义(P＞0.05).②心肌组织HE染色:注射AngⅡ的TR3+/+小鼠心肌细胞出现了明显增大,而TR3-/-小鼠心肌细胞增大不明显.③Western blotting:注射AngⅡ的TR3+/+小鼠心肌细胞TR3表达明显增高(P＜0.05).结论 TR3参与了AgⅡ诱导的小鼠心肌肥大过程,TR3是小鼠受到AngⅡ刺激后引起心肌肥大的关键因素.     

共聚焦显微技术分析卡维地洛对人心房肌细胞内钙离子的影响

目的:研究卡维地洛对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人心房肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法:急性分离单个人心房肌细胞。实验分4组:正常对照组; AngⅡ组:加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ;卡维地洛组:加入终浓度为1μmol/L的卡维地洛; AngⅡ+卡维地洛组:卡维地洛1μmol/L与AngⅡ0.1μmol/L同时加入。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化。结果:对照组和卡维地洛组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.05)。而AngⅡ+卡维地洛组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内Ca2+超载,卡维地洛能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载。     

内源性缓激肽对血管紧张素Ⅰ诱导乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的探讨内源性缓激肽对血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用。方法体外原代培养新生Wistar大鼠的心肌细胞,随机分为对照组、AngⅠ组(10-9～10-5mol/L)、AngⅠ(10-6mol/L)+氯沙坦(losartan,Los)组、AngⅠ+卡托普利(captopril,Capt)组、AngⅠ+Capt+缓激肽B2受体拮抗剂(Hoe-140)组和AngⅠ+Capt+左旋硝基精氨酸(L-NNA)组,测量心肌细胞3H-亮氨酸掺入量、蛋白含量、细胞体积和搏动频率。结果 (1)AngⅠ可使培养的心肌细胞肥大,其作用有剂量依赖性。AngⅠ(10-6mol/L)引起心肌细胞肥大的作用与AngⅡ(10-7mol/L)相似;(2)Los可抑制AngⅠ的促肥大作用,与AngⅠ组相比,Los能使诱导3H-亮氨酸掺入量、总蛋白、细胞体积和搏动频率分别减少18.83%、18.66%、27.18%和26.37%(P<0.05);(3)Capt可抑制AngⅠ引起的心肌细胞肥大,其作用可被Hoe-140和L-NNA完全抑制。结论培养的心肌细胞可以将AngⅠ转化成AngⅡ,后者可使心肌细胞蛋白质合成增加、细胞体积增大,Capt通过减少AngⅡ生成和减少缓激肽降解抑制心肌细胞肥大。     

丹参酮ⅡA抑制新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制

目的本研究在原代培养的新生大鼠心肌细胞的基础上,观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐(STS)对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响,以探讨STS在钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路心肌肥大中的作用。方法以培养的原代心肌细胞为模型,用AngⅡ刺激细胞外Ca2 内流,丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂维拉帕米(Ver)进行干预,检测心肌细胞[Ca2 ]i及CaN活性;[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标。用Western blot法检测心肌细胞CaN蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos mRNA的表达。结果AngⅡ组[Ca2 ]i水平、CaN蛋白的表达及蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P<0.01),而STS能有效地降低由AngⅡ剌激引起的[Ca2 ]i增高(P<0.01),明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加(P<0.01)。AngⅡ组CaN活性、蛋白表达以及c-fos mRNA的表达与对照组相比差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。STS及维拉帕米抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN活性、蛋白表达以及c-fos mRNA表达的增高。结论CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;STS具有Ca2 阻滞剂的特点,能有效降低由AngⅡ剌激引起的[Ca2 ]i增高,降低CaN活性及其蛋白表达,从而降低c-fos mRNA的表达,抑制心肌肥大的发生和发展。     

PKCα对AngⅡ作用的心肌成纤维细胞增殖活性和NO分泌的影响

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后的心肌成纤维细胞增殖活性和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组(正常培养)、AngⅡ组(AngⅡ处理)、实验组(PKCα抑制剂D4681和AngⅡ处理)。实时定量PCR和Western blot法测定细胞中的PKCαmRNA和蛋白水平。用PKCα抑制剂和AngⅡ共同处理心肌成纤维细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖活性,硝酸还原法测定细胞分泌的NO水平,酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养液中的诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)含量,羟脯氨酸法测定细胞合成胶原蛋白水平,Western blot法测定各组细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Ⅰ型胶原(COLLⅠ)、Ⅱ型胶原(COLLⅡ)水平。结果 AngⅡ组心肌成纤维细胞中的PKCαmRNA和蛋白水平均明显高于对照组(P0.05)。AngⅡ组心肌成纤维细胞增殖活性升高,细胞分泌的NO含量和i NOS活性均下降,细胞合成胶原蛋白水平升高,细胞中的MMP-1、MMP-2蛋白水平下降,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。实验组心肌成纤维细胞增殖活性降低,细胞分泌的NO含量和i NOS活性升高,胶原蛋白合成减少,细胞中MMP-1、MMP-2蛋白表达增多,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达减少,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论 PKCα在AngⅡ作用后的心肌成纤维细胞中表达升高,抑制PKCα可以减弱AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖作用,促进细胞分泌NO。     

过表达肌浆网Ca2+-ATP酶对慢性心力衰竭犬神经内分泌系统的影响

目的研究心肌过表达肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因对慢性心力衰竭犬神经内分泌系统的影响。方法超声心动图检测SERCA2a基因转导对慢性心力衰竭犬心脏收缩功能的影响,放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ与心房利钠肽、内皮素-1、肿瘤坏死因子-α、白介素-6等神经内分泌因子。结果 SERCA2a基因转导后心力衰竭犬的心脏收缩功能得到改善(P<0.05),同时上述神经内分泌因子水平均减低(P<0.05)。结论 SERCA2a过表达能改善心肌收缩功能,阻断神经内分泌系统的恶性循环,可能阻止或逆转心肌重塑。     

心肌肥大的机制:丝裂素活化蛋白激酶抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体表达的影响

背景血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是诱导心肌肥大的强刺激因子,血小板衍生生长因子(platelet-derived growthfactor,PDGF)也是致心肌肥大因素之一,AngⅡ是否可以通过诱导PDGF受体表达进一步促使心肌肥大?目的探讨丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ致心肌细胞肥大的作用,为心肌肥大的防治提供理论依据.设计以分离纯化培养的Wistar乳鼠心肌细胞为研究对象的对照性实验研究.单位一所大学的病理生理教研室.材料实验在北京大学医学院病理生理学实验室进行.实验动物为80只出生1～3 d的Wistar乳鼠(北京大学医学部动物中心提供),雌雄不限.均在细胞培养室取出心脏做心肌细胞培养.干预分离纯化培养的乳鼠心肌细胞,分为3组,以1×10-7 mol/L AngⅡ刺激为AngⅡ组;以1×10-5 mol/L PD98059(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂)预孵育30 min后再用AngⅡ刺激为PD98059组;以正常的乳鼠心肌细胞为对照组.培养24 h后采用免疫印迹法测定每组心肌细胞PDGF-β受体的含量.主要观察指标各组心肌细胞PDGF-β受体的含量.结果AngⅡ刺激培养24 h的乳鼠心肌细胞PDGF-β受体表达(432.41±54.08)和对照组(197.65±44.10)比较增强,差异有显著性意义(q=6.77,P<0.01),PD98059组PDGF-β受体表达(317.2±21.12)与AngⅡ组比较明显下降,差异有显著性意义(q=3.91,P<0.05),但并未完全恢复至对照组水平,两者比较差异有显著性意义(q=3.85,P<0.05).结论AngⅡ可以上调心肌细胞PDGF-β受体的表达,丝裂素活化蛋白激酶参与这一过程.这可能是AngⅡ促进心肌肥大的又一个重要机制.此研究结果可为心脏康复的一、二级预防提供实验学数据.     

参麦注射液对实验性心力衰竭大鼠左室舒缩性能及血浆AngⅡ、ET和ANP的影响

目的：研究参麦注射液对实验性心力衰竭（心衰）大鼠左室舒缩功能及血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET）和心钠素（ANP）的影响。方法：采用缩窄腹主动脉方法复制大鼠心衰模型。左心室插管术测定血液动力学指标;放免法测定血浆AngⅡ、ET和ANPⅡ浓度。结果：心大鼠左室舒缩功能减退,血浆AngⅡ、ET、ANP浓度分别升高56.21％、37.83%和44.42％。与模型组相比,参麦注射液高剂量组大鼠Vmax、＋dp/dtmax、-dp/dtmax、左心室内压峰值（LVSP）分别升高23.24％、10.60％、18.76％和17.31％,左心室舒张末压（LVEDP）降低56.15％,血浆AngⅡ、ET、ANP浓度分别降低32.65％、38.52％和9.44％,均有显著性差异（P均＜0.05）;参麦注射液中、低剂量组大鼠各项指标均有不同程度的改善。结论：参麦注射液能改善心衰大鼠左室舒缩功能,降低血浆AngⅡ、ET浓度,影响ANP分泌。     

肺动脉压力对先天性心脏病患者神经内分泌激素的影响

目的 探讨肺动脉压力（PAP）对先天性心脏病（CHD）患者神经内分泌激素的影响及意义。方法 选择2004年10月至2006年3月于我院住院并接受经导管封堵治疗的252例CHD患者为研究对象，其中PDA70例，ASD65例，VSD110例，VSD+PDA4例，VSD+ASD3例。252例患者中男112例、女140例，平均年龄19.2±15.0（4～76）岁；按术中测得的PAP分为3组：A组(PAP<30mmHg, n=92)；B组(30mmHg≤PAP≤50mmHg, n=126)；C组(PAP>50mmHg, n=34)。所有患者均于封堵术当日晨7时抽取静脉血5ml，检测血浆BNP、ANP、AngⅠ、AngⅡ及ET浓度。结果 ① 与对照组及A组比较，B、C两组的血浆ANP、AngⅠ、AngⅡ、ET浓度以及C组的血浆BNP浓度均显著增高（p<0.05，p<0.01）。② 与B组比较，C组的血浆BNP、AngⅡ及ET浓度也显著增高（p<0.01）。③ CHD患者的血浆BNP、ANP、AngⅠ、AngⅡ及ET浓度与PAP均呈正相关（p<0.01）；亚组分析显示PAP越高，其相关性越好。结论 先天性心脏病患者血浆BNP、ANP、AngⅠ、AngⅡ及ET浓度均较正常对照显著升高，与肺动脉压力呈正相关，且肺动脉压力越高，相关性越好。     

猪主动脉内皮细胞在血管紧张素作用下血管活性物质变化及丹参酮ⅡA的保护效应

背景:导致血管内皮细胞损伤的因素中,肾素-血管紧张素系统、尤其是局部肾素-血管紧张素系统所产生的血管紧张素Ⅱ起着重要的病理生理作用。目的:观察丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ作用下的血管内皮细胞分泌一氧化氮及其内皮型一氧化氮合酶基因表达的影响和细胞内游离钙离子浓度水平的改变,探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞的保护作用。设计:观察对比实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊内科。材料:实验于2006-03/10在华中科技大学同济医学院基础医学实验中心完成。实验用猪主动脉由同济医学院病理生理教研室提供。方法:采用硝酸还原法、逆转录聚合酶链反应,分别检测不同浓度(10-8～10-6mol/L)作用不同时间(1,6,24h)的血管紧张素Ⅱ对培养的猪主动脉内皮细胞产生一氧化氮及其内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响;然后比较在10-6mol/L的血管紧张素Ⅱ作用的不同点(0,6h)加入50mg/L浓度的丹参酮ⅡA,分别检测作用1,6,24h后内皮细胞的一氧化氮生成和内皮型一氧化氮合酶的基因表达变化。用激光共聚焦扫描显像系统检测内皮细胞内游离钙离子浓度水平的变化。主要观察指标:①一氧化氮含量。②内皮型一氧化氮合酶mRNA表达。③游离钙离子浓度。结果:①随着血管紧张素Ⅱ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达呈顺序下降(P<0.01)。②丹参酮ⅡA各组一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达明显高于血管紧张素Ⅱ组,在丹参酮ⅡA作用1,6h,血管紧张素Ⅱ 丹参酮ⅡA组一氧化氮的产生及内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达明显高于血管紧张素Ⅱ6h 丹参酮ⅡA组(P<0.05);随着作用时间延长至24h,两组间差异无显著性(P>0.05)。③主动脉内皮细胞游离钙离子浓度:血管紧张素Ⅱ组显著高于空白对照组(P<0.01),丹参酮 血管紧张素Ⅱ组显著低于血管紧张素Ⅱ组(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可抑制血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞分泌一氧化氮以及细胞内皮型一氧化氮合酶基因表达的负性作用,可能通过多种途径对血管内皮细胞及其功能起到保护作用。     

辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ刺激人单核细胞分泌白细胞介素6的影响

目的观察辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的人单核细胞分泌白细胞介素6（IL-6）的影响,探讨辛伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）可能的机制。方法培养人单核细胞型淋巴瘤（THP-1）细胞株,设空白对照组、AngⅡ刺激组、辛伐他汀低、中、高3个浓度组。辛伐他汀3组分别为辛伐他汀0．1、1、10μmol／L及对照组加入AngⅡ1μmol／L后孵育24小时,用免疫荧光法观察核因子KB（NF-κB）活化情况,SYBR Gteen I染料法实时荧光定量采用2^-△△Ct相对值观察IL-6基因表达水平。结果辛伐他汀3组均能够抑制核因子亚基p65由胞质转移至核内,辛伐他汀组均降低IL-6的表达,各组IL-6表达值为：空白组1．00±0．02,AngⅡ刺激组1．71±0．06,辛伐他汀高浓度组0．43±0．01,辛伐他汀中浓度组0．56±0．01。辛伐他汀低浓度组0．64±0．02,与空白组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。结论实时荧光定量检测结果显示辛伐他汀可减少AngⅡ引起的IL-6表达,辛伐他汀通过影响NF-κB的表达来影响IL-6的分泌,可能是辛伐他汀抗AS的机制。     

高血压大鼠心脏构型改变与癌基因、血管活性肽表达

目的：探讨高血压发生发展过程中左室构型超声参数、癌基因和血管活性肽表达的特点及其相互关系。方法：应用高频超声心动图、放免法和LSAB免疫组化法,动态观察肾性高血压大鼠左室重构的超声改变,心肌细胞癌基因c-myc、c-fos、血浆及心肌组织中血管活性肽内皮素（ET）、心钠素（ANP）的含量变化。结果：高血压大鼠心肌构型变化依据超声参数可分为正常左室构型、向心性肥厚、离心性肥厚等类型。正常构型及向心性肥厚组心肌细胞c-myc、c-fos阳性表达率明显高于对照组及防心性肥厚组（P＜0．05）,且c-myc、c-fos表达随血压升高逐渐增强（P＜0．05）。血浆和心肌组织中ET含量为离心性肥厚组＞向心性肥厚组＞正常构型组＞对照组。而ANP含量则为向心性肥厚组＞正常构型组＞离心性肥厚组＞对照组（P均＜0．05）。结论：LVPWd、ISVd、LVM／BW、EF％、FS％等超声参数与癌基因、血管活性肽表达有较强相关关系,后两者是心脏构型改变的分子生物学基础。     

丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响。 方法培养Wistar大鼠原代心肌成纤维细胞,分为对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组、丹参酮A组（0.01 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮B组（0.1 mmol/L丹参酮ⅡA）、丹参酮C组（1 mmol/L丹参酮ⅡA）。采用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖率;采用酶联免疫吸附试验检测羟脯氨酸含量;采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）法检测大鼠心肌成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、基质金属蛋白酶2（MMP-2）及金属蛋白酶特异性组织抑制2（TIMP-2）mRNA的表达水平;采用Western-blotting测定半乳糖凝集素3蛋白表达水平。 结果5组心肌成纤维细胞间细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 14.440、13.510、15.860、42.950、3.727、7.357、127.600,P均< 0.001）。且与对照组相比,AngⅡ组及丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率[（100.0 ± 2.8）%、（171.2 ± 11.4）%、（162.3 ± 15.9）%、（154.6 ± 17.5）%、（128.7 ± 13.2）%]、羟脯氨酸表达水平[（1.13 ± 0.14）、（2.07 ± 0.23）、（1.89 ± 0.17）、（1.74 ± 0.20）、（1.35 ± 0.16）μg/mg]、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均明显上升（P均< 0.05）。与AngⅡ组比较,丹参酮ⅡA各浓度组细胞增殖率、羟脯氨酸表达水平、胶原蛋白Ⅰ型、Ⅲ型、TIMP-2 mRNA表达水平、半乳糖凝集素3蛋白表达水平均显著下降,且丹参酮C组最低（P均< 0.05）。而MMP-2 mRNA表达水平在AngⅡ组与丹参酮ⅡA各浓度组间比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）,且丹参酮ⅡA各浓度组间MMP-2 mRNA表达水平比较,差异亦均无统计学意义（P均> 0.05）。 结论丹参酮ⅡA可有效抑制心肌成纤维细胞的增殖,其机制可能与抑制半乳糖凝集素3蛋白表达,降低TIMP-2表达相关。     

有氧训练大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a和肌细胞增强因子2的表达

背景:研究表明微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原可调解骨骼肌的分化与重塑。目的:观察有氧训练对腓肠肌微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组和有氧训练组,有氧训练组采用大鼠跑台运动模型,而对照组不进行运动训练。训练4,6周后采集各组大鼠腓肠肌组织,并称取腓肠肌的质量,实时定量PCR检测骨骼肌中肌球蛋白、微小RNA-133a、肌细胞增强因子2与成肌分化抗原mRNA的表达,并采用免疫组织化学的方法检测腓肠肌Ⅱ型肌纤截面积的改变。结果与结论:训练4,6周,有氧训练组大鼠腓肠肌的相对质量以及肌球蛋白重链-Ⅱa的表达水平较对照组显著增加(P<0.05或P<0.01),Ⅱ型肌纤维横截面积即显著增大(P<0.05),其微小RNA-133a和肌细胞增强因子2mRNA的表达较对照组显著升高(P<0.05,P<0.01),而成肌分化抗原mRNA的表达在各组间差异均无显著性意义。证实,有氧训练可上调大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a、肌细胞增强因子2mRNA的表达。     

JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激（ERS）在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组（N组）;AngⅡ组（A组）;AngⅡ＋SP600125组（A＋S组）,作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;A＋S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。