云芝糖肽配合化疗对恶性肿瘤患者的评估

目的:系统评价云芝糖肽配合化疗对恶性肿瘤患者生活质量、血液系统及免疫功能的影响.方法:计算机检索MEDLINE、Pubmed等数据库.按Cochrane评价标准严格评价文献,纳入高质量研究.结果:共纳入7个研究,701例患者.Meta分析结果示:云芝糖肽具有一定改善恶性肿瘤病人化疗后生活质量的作用.云芝糖肽联合化疗药物组在改善白细胞、血红蛋白、血小板方面与单纯使用化疗药物或鲨肝醇联合化疗药物组之间无明显差异.云芝糖肽联合化疗药物组可提高CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_4~+/CD_8~+比值,而NK细胞无明显差异.结论:云芝糖肽配合化疗治疗恶性肿瘤有一定的疗效.但鉴于本系统评价纳入的研究大多质量低下,有必要进行更多的质量高、设计严谨、多中心的随机对照试验.     

基因芯片研究云芝糖肽对健康成人外周血单个核细胞Toll样蛋白受体信号转导通路的影响

目的 利用基因芯片技术检测PSP对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)Toll样蛋白信号转导通路的影响,探索云芝糖肽的免疫调节作用机制.方法 体外分离、培养健康成人外周血单个核细胞,摸索云芝糖肽的最佳作用浓度,再分为对照组、云芝糖肽组,72 h后收获细胞抽提总RNA,应用Toll样蛋白受体信号转导基因芯片检测PSP对健康成人外周血单个核细胞TIRs信号传导通路中相关基因的变化.结果 12.5 μg/mL的云芝糖肽可显著促进健康成人PBMC增殖转化(P＜0.01);经云芝糖肽作用后上调≥2倍的基因有22个,占18.8%(如y-干扰素、干扰素-y-诱导蛋白-10等),下调≥2倍的基因有23项,占19.7%(如Toll作用蛋白、共刺激分子CD86等).结论 云芝糖肽可以调节免疫细胞Toll样蛋白受体转导途径中相关基因的表达,为进一步探讨云芝糖肽的免疫调节作用机理提供了依据.     

MyD88依赖途径介导云芝糖肽对荷瘤小鼠免疫调节的机制研究

目的:通过探讨云芝糖肽(PSP)在荷瘤小鼠体内的免疫调节及信号转导机制,研究PSP对荷瘤小鼠My D88信号转导通路的调控作用,验证My D88依赖途径是PSP免疫调节抗肿瘤的重要信号通路。方法:用C57BL/6小鼠建立艾氏腹水癌(EAC)实体型荷瘤小鼠模型,分为2组:野生型(WT)组与基因缺陷型(My D88-/-)组,连续灌胃给药PSP 22天,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测My D88依赖途径与非依赖途径通路相关基因在小鼠脾脏中的表达;免疫印迹法(Western blot)检测通路中相关蛋白的表达;ELISA检测小鼠眼球血中终端效应因子变化。结果:野生型(WT)组与基因缺陷型(My D88-/-)组小鼠脾脏TLR4信号通路相关基因及蛋白表达均明显升高,My D88-/-组小鼠脾脏中My D88依赖途径的承接因子My D88为零;与WT组相比,My D88非依赖途径通路中TRAM,TRIF的基因及蛋白表达量均无明显变化(P>0.05),共同途径中TRAF6、NF-κB、AP-1的基因及蛋白表达量均明显降低(P<0.05);My D88-/-组眼球血中终端效应因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6及IL-10的分泌量较WT组明显降低(P<0.05)。结论:云芝糖肽对荷瘤小鼠的免疫调节作用可能是通过My D88依赖途径信号通路来实现的。     

云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用

目的：研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法：建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组：生理盐水对照组（NS）、阿霉素治疗组（ADM）、云芝糖肽组（PSP）、丹参酮Ⅱ组（TanⅡA）、复方组（PSP＋TanⅡA）和综合治疗组（PSP＋TanⅡA＋ADM）,并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果：云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组（P〈0.05）,各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组（P〈0.05）,复方组Bax高于NS组（P〈0.05）,云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组（P〈0.05）,云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组（P〈0.05）,各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用（P〈0.05）,复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组（P〈0.05）。结论：云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。     

APOE对鼠RAW264.7细胞系内TLR信号通路的调节

目的 分析载脂蛋白E基因(APOE)对RAW264.7细胞内的TLR信号通路的调节作用.方法 克隆鼠APOE基因并建立表达APOE的RAW264.7稳定细胞系,使用各种Toll样受体(Toll-llke receptors,TLR)配体进行刺激,用报告基因化学发光检测转录因子活性,流式细胞仪检测细胞表面免疫分子.结果 在LPS刺激下,APOE基因抑制NF-κB的活性(P＜0.05),但对AP-1活性有促进作用(P0.05);在PolyI:C刺激下,APOE促进NF-κB和AP-1两者的活性(P0.05).在PGN刺激时,APOE明显上调B7-H1的表达,但对CD86、PD-1、CDllc及Gr-1的表达有抑制作用.结论 APOE基因可以调节TLR信号通路中NF-κB的活性,也可调节多个具有免疫调节功能的表面分子的表达,这样APOE可能具有免疫调节功能.     

瑞香素对人PBMC的细胞因子和TLRs mRNA表达的影响

目的观察瑞香素对人外周血单个核细胞的细胞因子和Toll样受体表达的影响,研究瑞香素增强淋巴细胞功能的作用机制。方法分离人外周血T、B细胞和单核细胞,分别加入瑞香素,37℃,5%CO2培养48 h后,采用实时荧光定量PCR检测瑞香素对T细胞IL-2、IFN-γ,B细胞IL-12,单核细胞IL-1 mRNA及T、B细胞TLR1～10的mRNA表达的影响;同时检测先用抗TLR4单抗封闭,再用瑞香素处理细胞后上述细胞因子和TLRs的mRNA表达变化。结果瑞香素能明显上调T细胞IL-2及IFN-γ、B细胞IL-12、单核细胞IL-1 mRNA和T细胞TLR1、TLR4,B细胞TLR4、TLR9 mRNA的表达(P﹤0.05),其中T细胞IL-2、B细胞IL-12、单核细胞IL-1 mRNA的表达和T细胞TLR4,B细胞TLR4、TLR9 mRNA表达可被抗TLR4单抗部分阻断。结论瑞香素增强淋巴细胞的免疫功能的可能机制是通过上调T细胞TLR1、TLR4,B细胞TLR4、TLR9的表达,分别参与其细胞内信号转导,从基因转录水平促进T、B细胞分泌细胞因子。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。     

正畸对牙龈炎大鼠牙周组织TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的探讨正畸对牙龈炎大鼠牙周组织中TLR4/NF-κB信号通路相关分子表达的影响,为临床牙龈炎、牙周炎患者的正畸矫治提供实验依据。方法将100只大鼠随机分为4组,包括牙龈炎组、正常加力50 g组、正常对照组、牙龈炎加力50 g组(实验组),每组25只。丝线结扎法构建牙龈炎模型,正畸镍钛螺旋拉簧构建加力模型,分别于第1、3、5、7、14天处死,取大鼠双侧实验区近中侧牙周组织。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠牙周组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。Real-time PCR法、免疫组化测定大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达水平。结果实验组大鼠牙周组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR、免疫组化结果显示,实验组大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。TLR4、NF-κB p65含量变化呈正态分布,第5～7天为高峰期。结论正畸力可促进牙龈炎大鼠TLR4/NF-κB炎性信...     

Immunomodulatory effects of polysaccharopeptide (PSP) in human PBMC through regulation of TRAF6/TLR immunosignal-transduction pathways

Context: Polysaccharopeptide (PSP) was extracted from Coriolus versicolor, and has been proved to be a valuable adjuvant for the combination with chemotherapy or radiotherapy in the treatment of various cancers.

Objective: To understand the mechanism of PSP on immunomodulation, we examined gene expression and cytokine secretion associated with immunosignal-transduction signaling in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs).

Methods: cDNA microarray and cytokine antibody array were used to identify differential gene expression profiles and cytokines secretion of PBMCs in the presence or absence of PSP for 24?h. The expression of the key genes and proteins related to Toll-like receptor (TLR) signaling and its downstream pathway was determined by RT-PCR or Western blot.

Results: Compared with the control group, PSP up-regulated 22 genes expression (such as IFN-γ, CXCL10, TLR4, TLR5) in 117 genes associated with TLR signaling. Twenty-three of genes (e.g., TLR9, TLR10, SARM1, TOLLIP) related with TLR signaling pathway were down-regulated in PBMCs under PSP treatments. Five of cytokines (GCSF, GM-CSF, IL-1α, IL-6, IFN-γ) were up-regulated more than 1.3 times by PSP. The mRNA levels of TRAM, TRIF, and TRAF6, which are the key molecules of TLR signaling pathway, were markedly increased (P?<?0.05). Moreover, the protein level of TRAF6 was also markedly increased (P?<?0.01).

Conclusions: PSP-regulated gene expression and cytokine secretion related to TLR signaling pathway in human PBMCs. Especially, TRAM-TRIF-TRAF6 subsignaling pathway of TLR may be one of the key associated signaling pathways in the immunomodulation of PSP.     

Over-activation of TLR5 signaling by high-dose flagellin induces liver injury in mice

Flagellin is a potent activator of a broad range of cell types that are involved in innate and adaptive immunity. Therefore, it is a good adjuvant candidate for vaccines, and it might function as a biological protectant against both major acute radiation syndrome during cancer radiotherapy and a mitigator of radiation emergencies. However, accumulating evidence has implicated flagellin in the occurrence of some inflammatory diseases, such as acute lung inflammation, cardiovascular collapse and inflammatory bowel disease. The aim of this study was to elucidate whether only flagellin-TLR5 signaling activation plays a role in the pathophysiology of liver or whether some other flagellin activity also contributes to liver injury either via bacterial infections or during clinical applications. Recombinant flagellin proteins with or without TLR5-stimulating activity were used to evaluate the role of flagellin-TLR5 signaling in liver injury in wild-type and TLR5 KO mice. Gross lesions and large areas of hepatocellular necrosis were observed in liver tissue 12 h after the intraperitoneal administration of 100 or 200 µg flagellin (FliC) in a dose- and time-dependent manner in wild-type mice, but not in TLR5 KO mice. Deletion of the N-terminal or TLR5 binding domain of flagellin inhibited flagellin-induced inflammatory responses and the subsequent acute liver function abnormality and damage. These data confirmed that flagellin is an essential determinant of liver injury and demonstrated that the over-activation of TLR5 signaling by high-dose flagellin caused acute inflammatory responses, neutrophil accumulation and oxidative stress in the liver, which contributes to the progression and severity of flagellin-induced liver injury.     

Rapamycin和cyclosporin A对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响

目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和环孢素A(cyclosperin A,CsA)体内处理对同种移植小鼠急性排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响.方法:建立同种皮肤移植模型,术后给予RAPA或CsA,1次/d,连续14 d,同时设生理盐水对照组.每日观察移植物存活状况.术后选取1、7、10、14、21 d共5个时间点,提取受体小鼠脾细胞,RT-PCR检测TLR5及Foxp3 mRNA表达,探讨不同处理组基因表达与移植物生存的相关性.体外实验利用鞭毛蛋白(flagellin)联合RAPA和CsA处理正常小鼠T细胞6 h,RT-PCR检测TLR5表达.结果:RAPA和CsA可明显延长小鼠同种移植皮片存活期.RAPA可促进脾细胞TLR5 mRNA表达升高,停药后的第21天仍明显高于CsA组和对照组(P＜0.05);CsA组在第7、10天有显著升高,第21天降低(P＜0.05);3组中最高表达的时间点为移植后第10天,此时正值排斥高峰期.RAPA可引起Foxp3 mRNA的表达升高(P＜0.05),停药后仍维持较高水平;CsA组仅在移植后第7、10天短暂升高,第14天低于对照组(P＜0.05).移植后1、7、10、21 d 3组的TLR5与Foxp3 mRNA变化趋势正相关.体外实验中,RAPA或CsA与flagellin联合使用,可促进TLR5的表达,以前者的作用更为明显.结论:RAPA和CsA在同种移植急性排斥高峰期可引起TLR5和Foxp3表达的协同升高,且RAPA的作用更加明显和持久,鞭毛蛋白体外可以增强这种作用效果.     

TLR3对细胞凋亡相关信号通路的调控

Toll样受体3(TLR3)作为特异性模式识别受体(PRR)能特异性识别模式相关分子双链RNA(dsRNA)从而发挥免疫作用.最近研究表明TLR3还可以诱导多种细胞发生凋亡,特别是在肿瘤中TLR3信号通路更倾向诱导凋亡,这为进一步研究TLR3激动剂干预肿瘤提供了依据.     

活动性巨细胞病毒感染与反复自然流产的关系探讨

目的探讨活动性人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染与反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）的关系.方法采集反复自然流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞（PBMCs）和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV DNA,并比较2种方法的一致性.结果 65例RSA患者HCMV pp65抗原有20例阳性,阳性率30.8%,50例正常体检孕妇 HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8.0%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异（χ^2=8.87,P＜0.01）.孕妇HCMV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加（χ^2=7.53,P＜0.01）. 免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性（92.3%）.结论反复自然流产孕妇 HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测也许可作为RSA早期诊断指标之一.     

Prosaposin基因对TLR3信号途径的调节

目的 研究prosaposin基因对转录活性因子和免疫细胞表面分子表达的影响,分析该基因在各种Toll-like re-ceptor不同途径中的作用,初步探讨prosaposin基凼在免疫系统中的功能.方法 克隆prosaposin基因并建立prosaposin基因稳定转染的细胞系,通过检测报告基凶化学发光和用不同Toll-like receptor配体刺激后比较细胞表面分子的表达水平的方法 来探讨不同途径中该基因发挥的作用.结果 在TLR3配体PolyI:C刺激条件下,prosaposin基因能够明显促进对NF-IcB以及AP-1的活性,而且明显抑制细胞表面分子B7H1和PD1的表达.结论 prosaposin基因能够影响TLR3信号途径作用于免疫细胞,调节免疫相关细胞分子,可能在免疫系统方面起作用.     

精氨酸酶1在食管癌患者外周血的表达及其临床意义

目的检测精氨酸酶1(arginase1,Arg1)在食管癌中的表达,分析其与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressorcells,MDSCs)消长的关系,探讨癌症患者机体免疫抑制状态的可能机制。方法应用流式细胞术检测30例食管癌患者PBMC中的MDSCs比例;实时荧光定量PCR检测PBMC中Arg1、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Arg1,IL-6和TNF-α含量。结果食管癌患者外周血PBMC中MDSCs比例及Arg1的mRNA水平均明显高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-α的mRNA水平均低于健康对照组(P<0.05)。食管癌患者血浆Arg1含量高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-a含量与健康对照组相比无明显差异(P>0.05)。此外,食管癌患者Arg1 mRNA水平和蛋白水平均与MDSC含量呈正相关(P<0.01)。结论 Arg1在食管癌患者外周血中的高表达与MDSCs水平和食管癌的发生、发展有着密切的关系,其检测将有助于临床食管癌的辅助诊断和预后判断。