体外培养的血管内皮细胞低氧低糖损伤后tPA、PAI-1表达变化

目的：观察体外培养的血管内皮细胞低氧低糖损伤后组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)表达变化，探讨脑缺血后纤溶系统的变化及机制。材料和方法：制备体外内皮细胞低氧低糖损伤模型，利用HE染色、免疫细胞化学染色观察tPA、PAI-1表达变化。结果：低氧低糖损伤后，tPA、PAI-1表达均明显增强。结论：成功制备体外内皮细胞低氧低糖损伤模型。内皮细胞低氧低糖损伤可以诱导tPA、PAI-1表达增多，进一步说明脑缺血损伤后tPA、PAI-1表达增加并参与损伤过程。     

登革2型病毒调控血管内皮细胞纤溶系统相关蛋白的表达

目的观察登革2型病毒（DV2）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）表达组织纤溶酶原激活物（tPA）和纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）的影响。方法应用胰酶消化分离HUVEC并进行传代培养，用生长良好的第2．3代细胞进行试验。用cell counting kit-8（CCK-8）测定DV2感染后细胞活性变化；发色底物法测定感染DV2组和对照组培养液中tPA、PAI-1活性；RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平。结果DV2感染对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。感染DV2组培养液中tPA活性在12～72h显著升高（P〈0．05）；DV2诱导HUVEC表达tPA mRNA的水平显著上调，12h达到峰值，以后渐降，72h mRNA表达水平仍高于对照组（P〈0．01）。而DV2感染组培养液中PAI-1活性和PAI-1 mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论DV2感染可显著上调HUVEC的tPA mRNA转录，增强内皮细胞tPA蛋白的分泌，而不影响PAI-1 mRNA的转录或改变内皮细胞PAI-1的分泌。结果提示DV2可活化但并不损伤内皮细胞，诱发内皮细胞增强表达纤溶酶原激活物而致使纤溶系统失衡，引起纤溶亢进，这可能是诱发DHF／DSS患者急性期出血、低血容量性休克等体征的主要因素之一。     

辛伐他汀对尼古丁诱导脐静脉 内皮细胞分泌t-PA和PAI-1的影响

目的: 研究不同浓度辛伐他汀对尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌组织纤溶酶原激活物(t-PA)和1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)及其基因表达的影响。方法: 将3-6代体外培养的HUVECs随机分为对照组、尼古丁组及不同浓度辛伐他汀组,辛伐他汀组分别以1、10、100 μmol/L辛伐他汀预处理细胞2 h,再以100 μmol/L尼古丁孵育24 h。酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞上清液t-PA和PAI-1含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞t-PA和PAI-1 mRNA的表达。结果: 尼古丁组PAI-1分泌和mRNA表达较对照组显著升高(P<0.05)。不同浓度辛伐他汀组PAI-1分泌和mRNA表达均较尼古丁组显著降低,且PAI-1分泌和mRNA表达的降低呈浓度依赖性(均P<0.05),以100 μmol/L辛伐他汀组最为显著。100 μmol/L辛伐他汀组PAI-1分泌和mRNA表达与对照组比较,无显著差异(P>0.05)。尼古丁组t-PA mRNA表达较对照组显著降低(P<0.05)。10、100 μmol/L辛伐他汀组t-PA mRNA表达较尼古丁组显著升高(P<0.05),各组间t-PA分泌无显著差异(均P>0.05)。结论: 在体外,辛伐他汀可降低尼古丁所致的PAI-1分泌和mRNA的表达,并升高t-PA mRNA的表达,从而逆转尼古丁介导的HUVECs纤溶活性减低。     

LPS促进HUVECs表达纤溶酶原激活物抑制物1

目的：观察LPS对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响。 方法： 用生长良好的第2、3代HUVECs进行试验。用cell counting kit-8(CCK-8)测定LPS刺激后细胞活性变化；发色底物法测定LPS组和对照组培养液中tPA, PAI-1活性；RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平。 结果： 与对照组相比，LPS(10 mg/L)对细胞活性没有明显差异。LPS诱导PAI-1活性在24-72 h显著升高(P<0.05),且显著上调PAI-1 mRNA，24 h达到峰值，以后渐降，72 h达到正常水平。而LPS组与对照组tPA活性与tPA mRNA无明显差异(P>0.05)。 结论： LPS(10 mg/L)可显著上调PAI-1 mRNA转录和分泌而不影响tPA mRNA，结果提示LPS可活化内皮细胞，诱发PAI-1 mRNA表达和蛋白分泌而抑制纤溶系统，这有利于微血栓的形成、血栓稳定,血液凝固和DIC发生。     

纤溶酶原激活物抑制因子-1蛋白分子的结构与功能

纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿型纤溶酶原激活物(u-PA)的特异性抑制剂。对PAI-1分子的结构与功能的认识,有助于了解PAI-1发挥抑制 作用的机理。本文综述了近年来对PAI-1蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了PAI-1分子中一些区域的作用以及影响PAI-1抑制活性的一些因子。     

胰岛素和葡萄糖对缺氧血管内皮细胞分泌tPA和PAI-1抗原的影响

目的: 观察胰岛素和葡萄糖对缺氧血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物-1(PAI-1)的影响。 方法:培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304。分组实验:(1)常氧组;(2)在缺氧条件下又分为Ⅰ:缺氧对照组;Ⅱ:低浓度组:胰岛素150 mU/L、葡萄糖5.5 mmol/L;Ⅲ:中浓度组:胰岛素450 mU/L、葡萄糖15 mmol/L;Ⅳ:高浓度组:胰岛素900 mU/L、葡萄糖30 mmol/L;Ⅴ:渗透压对照组:甘露醇24.5 mmol/L。取培养4、8、12 h 3个时点,用ELISA法测定细胞培养上清液tPA、PAI-1抗原。结果:缺氧明显增加tPA和PAI-1抗原分泌,tPA/PAI-1值明显增加(P＜0.01)。胰岛素和葡萄糖能够刺激缺氧内皮细胞分泌tPA和PAI-1抗原,在缺氧8 h以内,tPA/PAI-1比值明显增加(P＜0.05)。随缺氧时间的延长,tPA/PAI-1值逐渐下降。结论:胰岛素和葡萄糖能够刺激内皮细胞分泌tPA和PAI-1抗原,在缺氧8 h以内,tPA/PAI-1值升高,纤溶活性升高,有利于局部自发性纤溶的发生。此作用可能是IGK治疗急性心肌梗死的机制之一。     

慢性肾脏疾病血清和尿液纤溶活性物质的改变及临床意义

目的探讨慢性肾脏疾病血清和尿液纤溶活性物质的改变及其临床意义。方法选择38例慢性肾小球肾炎(CGN),28例肾病综合征(NS),36例非透析治疗的慢性肾功能不全(CRF)和20例正常对照作为研究对象,应用ELISA法检测血清和尿液中组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的浓度,同时分析尿中t-PA和PAI-1的水平与血t-PA、PAI-1、血肌酐和24h尿蛋白总量之间相关性。结果慢性肾脏疾病出现血清t-PA、PAI-1升高,尿液t-PA、PAI-1降低,其中尿液t-PA、PAI-1的改变独立于血清,不受血肌酐和24h尿蛋白定量的影响。结论慢性肾脏疾病患者存在纤溶活性物质的异常,其中尿液纤溶活性物质的改变可反应肾脏内皮细胞损伤。     

ACI患者血浆ET-1和t—PA、PAI-1水平的相关性分析

内皮素（Endothelin－1,ET－1）为体内最强的缩血管多肽。纤溶系统在急性脑梗死（ACI）的发生发展中起着十分重要的作用,组织型纤溶酶原激活物（t-PA）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的水平是纤溶活性的重要检测指标,     

睾酮对人血管内皮细胞纤溶活性影响及机制

目的：观察睾酮对人血管内皮细胞分泌纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）的影响及其机制。方法： 将体外培养的人血管内皮细胞（HUVEC）分为5个浓度睾酮组及单纯培养基对照组，MTT实验观察睾酮对细胞生长及活性影响。ELISA 法测各组tPA、 PAI-1含量。用雄激素受体拮抗剂(flutamide)预处理细胞后重复实验。结果： 生理及略低于生理剂量睾酮（3×10-10 mol/L-3×10-8 mol/L）可明显促进tPA 分泌（P＜0.01）；而大剂量则使tPA 含量明显减少（P＜0.01）。各睾酮组PAI-1含量均明显低于对照组（P＜0.05）。Flutamide 能有效消除睾酮的上述作用。结论： 生理浓度睾酮通过雄激素受体促进tPA分泌，降低PAI-1浓度而增强纤溶系统活性，有利于防止血栓性疾病的发生。     

妊娠高血压综合征患者vWF、t-PA、PAI-1的检测分析

目的:探讨妊娠高血压综合征(妊高征)患者内皮细胞功能指标的变化及其临床意义。方法:应用ELISA法及发色底物法测定妊高征患者血浆血管性血友病因子(vWF)、织织型纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)活性。结果:妊高征患者vWF、t-PA、PAI-1较正常非孕组明显升高(P<0.05或P<0.01);妊高征各组患者vWF、PAI-1活性比正常晚孕组显著增高(P<0.05或P<0.01),且病情越重增高越明显;t-PA无明显改变。中、重度妊高征组血浆vWF与PAI-1水平呈直线正相关关系(r=0.723,P<0.05;r=0.765,P<0.05)。结论:妊高征患者内皮细胞功能异常,凝血及纤溶抑制功能亢进。测定血浆vWF和PAI-1水平,对于临床诊断妊高征有重要意义。     

米诺环素对缺氧缺血脑损伤未成熟新生大鼠TLR4、NF—κBp65和TNF—α表达的影响

目的观察米诺环素（Minocycline,MN）对缺氧缺血脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）未成熟新生大鼠Toll样受体4（Toll-1ike receptor4,TLR4）、核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF—κB）p65和TNF．仪表达的影响,探索米诺环素脑保护作用机制。方法将160只生后2d（P2）Sprague—Dawley（SD）新生大鼠随机分成正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD加MN组。通过结扎左侧颈总动脉及8％氮氧混合气缺氧4h,制备未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。HIBD加MN组大鼠缺氧后予腹腔注射1次MN45mg／kg,HIBD组予腹腔注射等剂量的无菌PBS（pH7．4）。HI后24h、48h、72h取材,Westernblotting检测TLR4、NF．KBp65和TNF—Ot蛋白表达,HI后72h、4周行脑组织HE染色及病理评分,HI后4周行行为学检测。结果HI后72h、4周HIBD加MN组脑组织病理损伤较HIBD组减轻,HIBD加MN组半定量病理评分低于HIBD组,差异有统计学意义（P〈0．05）。Western blotting显示HI后24、48和72hHIBD加MN组TLR4、NF—KBp65和TNF-α的表达低于HIBD组,较正常组及假手术组升高。HI后4周,在悬吊试验及斜坡试验中,HIBD加MN组与正常组、假手术组差异无统计学意义（Jp〉0．05）。旷场试验中,HIBD加MN组与正常组、假手术组对比,差异有统计学意义（P〈0．05）;与HIBD组比较,P=0．375,差异无统计学意义（P〉O．05）。圆筒实验中HIBD加MN组左侧上肢触壁百分比较HIBD组降低（P〈0．05）,与正常组、假手术组差异无统计学意义（P〉0．05）;右侧触壁百分比的比较中,HIBD加MN组与正常组、假手术组、HIBD组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论米诺环素对缺氧缺血脑损伤近期及远期具有良好的保护作用,其对缺氧缺血脑损伤的保护作用机制可能与抑制TLR4．NF—κBp65-TNF-α信号途径的激活有关。     

组织型纤溶酶原激活因子及其抑制因子在孕鼠子宫中的表达

本实验用原位杂交和免疫组织化学定位方法从ｍＲＮＡ和蛋白质水平研究组织型纤维溶酶原激活因子（ｔＰＡ）及其Ｉ型抑制因子（ＰＡＩ－１）在受孕第七天大鼠子宫中的表达，结果表明，在非着床点子宫腔上皮细胞，腔上皮附近的基质细胞和腺上皮细胞中ｔＰＡ和ＰＡＩ－ｍＲＮＡ都有表达，但ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ的量很低，ｔＰＡ抗原分布于了宫腔上皮和腺上皮，ＰＡＩ－１抗原只能在腺上皮和表层基质中微弱地检测到，在着床点，ｔＰＡ和Ｐ     

miR-9在阿魏酸钠改善缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆中的作用

目的:探讨miR-9在阿魏酸钠(SF)改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆中对海马神经元NMDAR1和NgR1的调节作用。方法:88只7日龄SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD)、阿魏酸钠治疗组(HIBD+SF)、miR-9抑制组(HIBD+LNA-miR-9),每组各22只。假手术组仅分离左侧颈总动脉,其余组结扎左侧颈总动脉进行缺氧后制作HIBD模型。于21日龄,阿魏酸钠治疗组连续5 d腹腔注射阿魏酸钠,miR-9抑制组经左侧脑室注射一次LNA-miR-9。于30日龄行Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力。于26日龄,real time RT-PCR检测各组大鼠左侧海马神经元miR-9、NMDAR1mRNA和NgR1mRNA的表达,Western Blot检测NMDAR1和NgR1蛋白的表达。结果:Morris水迷宫实验显示:与假手术组比较,HIBD组逃避潜伏期延长(P<0.05)、在目标象限逗留时间缩短(P<0.05);阿魏酸钠治疗组、miR-9抑制组较HIBD组均有逃避潜伏期缩短(P<0.05)、在目标象限逗留时间延长(P<0.05)。real time RT-PCR、Western Blot检测显示:HIBD组NMDAR1和NgR1的mRNA和蛋白表达以及miR-9表达较假手术组均明显上调(P<0.05);阿魏酸钠治疗组、miR-9抑制组较HIBD组各指标均明显下调(P<0.05)。结论:阿魏酸钠可能通过下调miR-9来抑制NMDAR1和NgR1的表达从而改善缺氧缺血大鼠的学习记忆能力。     

Endocrinology and Paracrinology: Hormonal regulation of tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor type-1 in cultured monkey Sertoli cells

Sertoli cells play a central role in the control and maintenanceof spermatogenesis. Isolated Sertoli cells of mouse and rattestes have been shown to secrete plasminogen activator (PA)and a plasminogen activator inhibitor type-1 (PAI-1) in culture.In this study, we have investigated the hormonal regulationof PA and PAI-1 activities in cultured monkey Sertoli cells.Sertoli cells (5x105 cells/well) isolated from infant rhesusmonkey testes were preincubated at 35°C for 16 h in 24-wellplates precoated with poly(D-lysine) (5 µg/cm²) in 0.5ml McCoy's 5a medium containing 5% of fetal calf serum and furtherincubated for 48 h in 0.5 ml serum-free medium with or withoutvarious hormones or other compounds. PA as well as PAI-1 activitiesin the conditioned media were assayed by fibrin overlay andreverse fibrin autography techniques respectively. The Sertolicells in vitro secreted only tissue-type PA (tPA), no detectableamount of urokinase-type PA (uPA) could be observed. MonkeySertoli cells were also capable of secreting PAI-1. Immunocytochemicalstudies indicated that both tPA and PAI-1 positive staininglocalized in the Sertoli cells, spermatids and residual bodiesof the seminiferous epithelium; Northern blot analysis furtherconfirmed the presence of both tPA and PAI-1 mRNA in monkeySertoli cells. Addition of follicle-stimulating hormone (FSH)or cyclic adenosine monophosphate (cAMP) derivatives or cAMP-generatingagents and gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) agonist orphorbol ester (PMA) to the cell culture significantly increasedtPA activity. PAI-1 activity in the culture was also enhancedby these reagents except 8-bromo-dibutyryl-cAMP, forskolin and3-isobutyl-1-methylxanthin (MIX) which greatly stimulated tPAactivity, whereas decreased PAI-1 activity, implying that neutralizationof PAI-1 activity by the high level of tPA in the conditionedmedia may occur. These data suggest that increased intracellularsignals which activate protein kinase A (PKA), or protein kinaseC (PKC) can modulate Sertoli cell tPA and PAI-1 activities.The concomitant induction of PA and PAI-1 by the same reagentsin the Sertoli cells may reflect a finely tuned regulatory mechanismin which PAI-1 could limit the excession of the proteolysis.