山东省人群乙型肝炎病毒＂a＂抗原决定簇突变分析

目的 了解目前山东省社区人群乙型肝炎病毒（HBV）＂a＂抗原决定簇突变率和突变形式,探讨乙肝疫苗（HepB）接种对＂a＂抗原决定簇突变的影响.方法 在全省1～59岁社区人群中通过多阶段随机抽样确定调查对象,通过询问（15岁以上）或查阅接种记录（14岁以下）了解调查对象HepB免疫史;采集血标本,酶联免疫吸附方法 检测血清乙肝表面抗原（HBsAg）,阳性者提取血清DNA,采用巢式PCR方法 扩增HBV S基因,测序后与标准序列进行比较.结果 共对7601人进行调查和血标本采集,得到HBsAg阳性标本239份（3.14%）,可用于HBV DNA提取206份,扩增HBV S基因并成功测序102份.15份血清标本检测到13种HBV＂a＂抗原决定簇突变,突变率为14.70%（15/102）.新生儿普种HepB前、后出生调查对象间,以及有、无HepB免疫史调查对象间＂a＂抗原决定簇突变率差异均无统计学意义.结论 目前山东社区人群中＂a＂抗原决定簇突变率较低且突变位点比较分散;未发现HepB接种对人群＂a＂抗原决定簇突变产生影响.     

河北正定县某镇人群乙型肝炎病毒"α"抗原决定簇突变初步分析

目的 了解河北正定县某镇自然人群感染乙型肝炎病毒(HBV)的"α"抗原决定簇突变情况,分析新生儿乙肝疫苗计划免疫对其的影响.方法 为正定县某镇全体村民整群采集静脉血标本,用放射免疫法检测血清HBV-M,选取乙肝表面抗原(HBsAg)阳性者提取血清HBV DNA,扩增S基因,测序后与标准序列对比.结果 11 478份血清样品中,HBsAg检测阳性率4.78%.其中可用于HBV DNA提取的样品443份,扩增HBV S基因并成功测序434例.检测到该地区HBV"α"抗原决定簇氨基酸突变率6.7%,1986年前后出生人群HBV"α"抗原决定簇两个茎环的氨基酸突变率差异无统计学意义(P=1.0000,P=0.0877).结论 该镇存在HBV"α"抗原决定簇突变株,其在乙肝疫苗免疫出生后人群中感染率较低,尚不能说明该镇新生儿乙肝疫苗接种会引发突变株的流行.     

检测乙型肝炎病毒前S1抗原的临床价值

目的 通过检测乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒DNA以及乙肝两对半（HRV M）,探讨乙肝病毒前S1抗原用于临床诊断乙型肝炎的意义.方法 共检测276例乙肝患者血清标本,乙肝病毒前S1抗原和乙肝两对半采用酶联免疫方法进行检测,采用实时荧光定量PCR方法检测HBVDNA.结果 血清中HBeAg、前S1抗原和HBV DNA的阳性率分别为56.5％、73.9％和76.0％;HBeAg阳性的156份标本中,HBV DNA的阳性率（94.8％）与前S1的阳性率（92.3％）之间差异没有统计学意义,HBeAg阴性的120份标本中前S1的阳性率与HBV DNA差异无统计学意义;HBV DNA高拷贝组[1.0×（105～108）、1.0×（103～105）]前S1抗原的阳性率明显高于低拷贝组（＜1.0×103）结论 前S1抗原、HBeAg与HBV DNA符合率较高,对无条件检测HBV DNA而HBe Ag阴性的血清,检测前S1抗原可起到提示病毒是否复制的补充作用.     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测及其临床意义

为探讨检测乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1Ag)的临床意义,本文对338例各型乙型肝炎患者进行Pre-S1Ag检测,同时检测HBV标志物和HBV-DNA,对其阳性率及相互关系进行分析比较.结果表明:338例患者,Pre-S1Ag阳性检测率为63.02%,HBeAg阳性检测率为48.52%,HBV-DNA阳性检测率为68.05%.Pre-S1Ag阳性与HBV-DNA阳性的符合率为78.56%;Pre-S1Ag与HBeAg阳性的符合率为81.17%;Pre-S1Ag与HBeAg、HBV-DNA具有显著相关性(P＜0.01),提示Pre-S1Ag能够较好地反映病毒复制状况,有可能作为体内病毒复制存在的实验室指标.     

乙型肝炎病毒基因型与耐拉米夫定变异的研究进展

由于病毒自发变异的存在,人们将乙型肝炎病毒分成不同的基因型.各基因型HBV在区域分布、致病性和疗效反应等方面都具有一定的差异.拉米夫定是一种嘧啶类核苷类似物,它可以有效抑制乙型肝炎病毒的复制,但是长期使用容易产生耐药.关于乙型肝炎病毒基因型与耐拉米夫定变异之间的相关性,国内外的研究结果还尚不一致,本文将这方面的研究做一综述.     

湖州地区乙肝疫苗免疫失败儿童乙肝病毒S基因“a"决定簇变异分析

目的 了解湖州地区乙肝疫苗免疫失败儿童病毒S基因型变异情况.方法 应用聚合酶链反应(PCR)方法对29例HBV-DNA阳性乙肝疫苗免疫失败儿童乙肝病毒S基因进行扩增,PCR扩增产物进行序列分析.结果 29例样本中测序结果显示,B基因型26例,C基因型3例,有9例样本在S区“a”决定簇发生变异,变异主要存在“a”决定簇内127、129、131、133、141、142、144等氨基酸位点.结论 湖州地区乙肝疫苗免疫失败儿童在“a”决定簇区确实存在变异,可能是发生免疫失败的原因,但并未形成明显优势变异株.     

乙肝疫苗免疫失败儿童病毒S基因"a"决定簇变异研究

目的 探讨江苏常州地区乙型肝炎疫苗免疫失败儿童病毒S基因“a”决定簇的变异情况。方法 对15例乙肝疫苗接种后血清表面抗原(HBsAg)阳性的儿童,采用聚合酶链反应方法(PCR)扩增其血清中HBV DNA S基因区。并对PCR产物直接标记测序。结果 15例HBsAg阳性儿童有14例血清HBV DNA阳性,其中有4例出现了S基因“a”决定簇的变异,变异率为28．6％,第126位的异亮氨酸（Ile)被苏氨酸(Thr)替代1例,第134位苯丙氨酸(Phe)被异亮氨酸替代1例。第145位甘氨酸(Gly)被丙氨酸(Pha)替代2例。结论乙型肝炎疫苗免疫失败儿童中存在s基因“a”抗原决定簇变异,江苏常州地区存在HBVS基因“a”决定簇变异的新类型。     

乙型肝炎病毒基因变异研究现状

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在其复制过程中,可以发生基因变异.变异的发生与HBV本身的分子生物学特性、宿主的免疫压力、抗病毒药物的应用等因素有关,变异的发生及后果是病毒与宿主相互作用的结果.HBV的S、P、C、X基因都可以发生变异,变异可产生免疫逃逸株、耐药株等,还可影响病毒感染者的预后.现将乙肝病毒基因变异研究现状做一综述.     

乙型肝炎病毒核心抗原相关抗原(HBcrAg)的研究进展

HBcrAg包括HBcAg、HBeAg、p22cr蛋白,在HBV感染中具有重要的临床意义.本文旨在对近年来HBcrAg的概念、检测方法及其在乙型肝炎诊治中的检测意义等方面的进展作一综述.     

乙型肝炎病毒基因前C区热点变异及其意义

乙型肝炎病毒（HBV）基因组变异在病毒感染过程中扮演着非常重要的角色,曾经一度成为肝为研究的一个热点,其中前C区热眯变异是变异研究的重点,本文就HBV前C区基因的结构功能,热点变异发生的可能,机理与临床的关系等有关研究情况作一简述。     

Hepatitis B virus mutations associated with in situ expression of hepatitis B core antigen, viral load and prognosis in chronic hepatitis B patients

In this retrospective study, we investigated the prevalence and significance of mutations in part of the hepatitis B virus (HBV) x gene, and tried to clarify their relationship with clinicopathological or histopathological characteristics and prognosis in patients with chronic hepatitis B (CHB). A total of 83 consecutive CHB patients (1986-1994) were chosen for the present study. Sequence analysis was performed using polymerase chain reaction (PCR) and the direct sequencing method. The histological activity index was described using Scheuer scores. Two-step immunohistochemical staining showed the expression of viral antigens in situ. Tissue HBV DNA levels were determined by fluorescence quantitative real-time PCR. For the prognostic study, all the patients were followed up using clinical and laboratory data. Mutation at nt1726-1730 correlated significantly with decreased expression of HBcAg in situ (P = 0.006) and with lower HBV DNA levels in the liver (P = 0.004). In particular, the CTGAC mutation showed the strongest decrease of the viral load (P = 0.007). By contrast, nt1762/1764 mutation correlated with increased HBcAg (P = 0.005) and higher HBV DNA levels (P = 0.006). The mutants with the wild-type of nt1726-1730 or nt1762/1764 mutation were more prevalent in hepatocellular carcinoma (HCC) patients than in CHB patients. Although the mutations did not correlate with cirrhosis, the frequency of nt1762/1764 mutation in patients with hepatocarcinogenesis was significantly higher than in those without hepatocarcinogenesis (P = 0.011). Mutations at nt1726-1730 and nt1762/1764 are associated with in situ expression of HBcAg and viral load. Higher HBV DNA levels in the liver may be associated with hepatocarcinogenesis. Mutation at nt1762/1764 remarkably increases the risk of hepatocarcinogenesis.     

儿童乙型肝炎病毒感染状况临床分析

目的了解深圳市盐田区4—10岁儿童乙型肝炎病毒（HBV）感染状况及影响因素，为减少乙肝患病率提供帮助。方法所有儿童均抽空腹静脉血3ml采用酶联免疫吸附实验（ELISA法）检测HBsAg，抗-HBs，HBeAg，抗-HBe，抗-HBc谷丙转氨酶（CPT）及谷草转氨酶（ALT）。结果3455名儿童HBsAg阳性率为3．82％，HBsAg阳性儿童中，以HBsAg（＋），HBeAg（＋），抗-HBc（＋）伴GPT，ALT正常者所占比例最高，为76％。不同性别之间HBsAg阳性率比较无显著差异（P〉0．05）。6岁以下儿童HBsAg阳性率较低，6—10岁组阳性率明显升高。全程接种乙肝疫苗儿童的HBsAg阳性率明显低于未接种组，结果有显著性差异（P〈0．01）。父亲或母亲是HBsAg阳性者所占比例明显高于家庭成员中无HBsAg阳性者（132例中占105例，占79.3％）。结论儿童乙型肝炎病毒感染率较低，且年龄组越小其感染率越低，因乙肝疫苗全程免疫后抗体持续时间长，建议对儿童进行全面预防接种策略，进-步减少乙肝患病率。     

乙肝疫苗长期免疫地区低龄人群乙型肝炎病毒基因序列与突变现状

目的 通过乙型肝炎流行病学调查和病毒基因检测,了解乙肝疫苗长期免疫地区低年龄人群的基因序列与突变特征.方法 从乙肝监测点收集乙型肝炎病毒表面抗原阳性血清,取其中年龄小于16岁者,扩增包括preS和S基因在内的基因序列片段,共1100碱基,序列测定后与标准基因型别比较,确定病毒基因及血清型别,确定a抗原决定簇的氨基酸替代突变发生率,选取一株病毒进行全基因扩增、克隆和序列测定.结果 共检测样本35例,33例血清扩增出乙肝病毒基因序列,其中30例乙型肝炎病毒基因型为B型,占90.9%,3例乙型肝炎病毒基因型为C型,占9.0%,1例血清型为ayw,3例为adr,其余29例为adw,共有5例在a抗原决定簇发生氨基酸替代突变,发生率约为15.2%.其中5856号血清扩增乙型肝炎病毒全基因为B型,血清型为adw,共3215个碱基.结论 该地区乙型肝炎基因型主要为B型,血清型为adw,人群中a抗原决定簇某些位点已发生与疫苗免疫逃逸相关的突变.     

Overlapping gene mutations of hepatitis B virus in a chronic hepatitis B patient with hepatitis B surface antigen loss during lamivudine therapy

Disappearance of hepatitis B surface antigens (HBsAg) in chronic hepatitis B usually indicates clearance of hepatitis B virus (HBV) infection. However, false HBsAg negativity with mutations in pre-S2 and 'a' determinant has been reported. It is also known that YMDD mutations decrease the production of HBV and escape detection of serum HBsAg. Here, we report overlapping gene mutations in a patient with HBsAg loss during the lamivudine therapy. After 36 months of lamivudine therapy in a 44-yrold Korean chronic hepatitis B patient, serum HBsAg turned negative while HBV DNA remained positive by a DNA probe method. Nucleotide sequence of serum HBV DNA was compared with the HBV genotype C subtype adr registered in NCBI AF 286594. Deletion of nucleotides 23 to 55 (amino acids 12 to 22) was identified in the pre-S2 region. Sequencing of the 'a' determinant revealed amino acid substitutions as I126S, T131N, M133T, and S136Y. Methionine of rtM204 in the P gene was substituted for isoleucine indicating YIDD mutation (rtM204I). We identified a HBV mutant composed of pre-S2 deletions and 'a' determinant substitutions with YMDD mutation. Our result suggests that false HBsAg negativity can be induced by combination of overlapping gene mutations during the lamivudine therapy.     

重型乙型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因启动子变异的研究

目的　了解重型乙型肝炎（ 乙肝） 病人血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡＣ基因启动子（ＣＰ） 的变异。方法　对用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 法扩增的血清ＨＢＶＤＮＡ 直接测序。结果　７ 例亚急性重型肝炎病人的ＨＢＶ 分离株ＣＰ区分别有２～１２ 个替代变异，１ 例病人有１１ｂｐ 的碱基插入。ＣＰ变异主要发生于ＣＰ的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，ｎｔ１ ７６２ 和ｎｔ１ ７６４ 的替代变异见于７ 例亚急性重型肝炎病人的４ 例中，是ＣＰ变异的热点，其中３ 例ＨＢｅＡｇ 阴性，说明和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关。ＣＰ的第３ 个ＡＴ丰富区、ＨＢＶ逆转录起始位点（ＤＲ１） 和前Ｃ基因、前基因组转录起始位点未见变异。结论　重型肝炎病人的ＨＢＶＣＰ区存在较多的变异，ＣＰ变异主要发生于和前Ｃ基因相关的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，可能和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关     

母婴阻断失败乙型肝炎病毒基因序列分析

目的 通过随访调查和病毒基因检测,了解母婴阻断后的效果,并研究突破母婴阻断的乙型肝炎病毒基因序列特征,了解病毒母婴传播特点.方法 2003年开始收集临床乙型肝炎病毒表面抗原阳性母亲血清及婴儿血清75对,检测血清学感染指标,取其中母亲与婴儿皆为阳性的血清提取乙型肝炎病毒,扩增包括preS和S基因在内的基因序列片段,序列测定后与标准基因型别比较,确定病毒基因及血清型别,及母婴间病毒核苷酸差异率,及确定a抗原决定簇的氨基酸替代突变率,与免疫成功组进行比较.结果 经血清学检测后共得到母婴血清皆为阳性者4对,包括一对双胞胎,扩增出乙肝病毒基因序列,其中4个乙型肝炎病毒基因型为B型,1个乙型肝炎病毒基因型为C型,其中1对双胞胎婴儿在"a"抗原决定簇出现T143M变异,其余扩增母婴阻断成功病例43例,37例为B型,6例为C型,其中a抗原决定簇发生变异的有3例.结论 母婴阻断失败的儿童中大部分与母亲的基因序列相同,a抗原决定簇变异的比率高于成功组母亲,但差异无统计学意义.     

乙型肝炎病毒感染时的C基因热点变异

为了解乙型肝炎病毒感染在不同病变时的Ｃ基因热点变异，对９１名感染者以限制片段长度多态性技术检测前Ｃ终２８和Ｃ区Ｌ９７点突变。在急性乙型肝炎和慢性无症状携带者几无突变、在慢性持续性肝炎中罕见，而在慢性活动性肝炎和活动性肝硬变中分别达８０％和７８％，肝细胞癌中为６１％。ＨＢｅＡｇ（＋）的慢性活动性肝炎和活动性肝硬变１６例中，混合有终２８变异１１例，抗－ＨＢｅ（＋）病例中亦有野毒株混合。Ｃ区密码９７亮氨酸变异（Ｌ９７）亦见混合。野毒株和变异株在病程中有消长，Ｃ基因的热点变异与病变活动性密切相关。第一军医大学南方医院     

乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法研究

目的 建立简便、准确、实用的检测乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶(P)基因变异的方法。方法 根据HBV基因序列，设计5只寡核苷酸引物，用巢式聚合酶链反应(nested PCR)分别扩增HBVP基因B区和C区片段，产物用NdeⅠ或NIa Ⅲ酶切，琼脂糖胶电泳，分析酶切产物长度多态性(RFLP)，建立检测P基因变异的方法。对30例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者检测YMDD基序及526位点变异，16例未用拉米夫定的慢乙肝患者为对照。4份PCR产物作克隆测序以验证方法的准确、可靠。结果 所建的巢式PCR-RFLP方法操作简便、快速，从模板提取到酶切后电泳分析仅需11h；灵敏度高，可检测到10^3拷贝／ml的HBVDNA；结果准确，4份经酶切分别判断为野毒株或变异株的标本经测序证实。30例用拉米夫定的慢乙肝患者中，发现单纯YMDD变异8例(26．7％)，YMDD联合L526M变异3例(10．0％)，16例对照未检出上述位点的变异。结论 本方法简便、准确，适合较大样本检测。可用于临床筛检常见拉米夫定耐药性HBVP基因变异。     

Precore and core promoter mutations of the hepatitis B virus gene in chronic genotype C-infected children

The precore (G1896A) and core promoter (A1762T, G1764A) mutations of the hepatitis B virus gene are known to be associated with changes in immunologic phase or the progression to complicated liver disease in adults. We analyzed these mutations in chronically HBV-infected children. Serum was collected from 37 children with chronic HBV infection from March 2005 to September 2008. HBV DNA extraction and nested PCR were followed by sequencing of the PCR products. The children were 6.7 ± 4.6 yr old. All of 37 children had HBV genotype C. Of the cohort, 31 (83.8%) were HBeAg-positive and 6 (16.2%) were HBeAg-negative; the former group comprised 18 (48.6%) who were in the immune-tolerance phase (ITP) and 13 (35.2%) in the immune-clearance phase (ICP). Most of the patients had HBV DNA levels of > 1.0 × 10(8) copies/mL. In the ITP group, only 1 (5.5%) had core promoter mutations, and none had the precore mutation. In the ICP group, only 2 (15.4%) had core promoter mutations; the remaining 6 patients had HBV DNA levels of < 2.0 × 10(3) copies/mL and no core promoter/precore mutations. The very low incidence of the precore/core promoter gene mutation, in children, suggests that these mutations may be the result of life-long chronic HBV infection.