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1.
目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12~6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%~72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的最低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .  相似文献   

2.
刘峰  左媛  许文雅 《国际检验医学杂志》2012,33(22):2714-2716,2718
目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素(DSA)-γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测的酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体(McAb),经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线(ROC曲线)确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为(1.50±0.51)μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%(28/40)、特异度为91.8%(112/122)。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。  相似文献   

3.
目的利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽(anticyclic citrullinated peptide,CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物;生物素同兔抗人IgG抗体结合制备生物素化IgG抗体,后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗CCP抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3+-链霉亲和素在615nm的荧光值计算血清抗CCP抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围,其线性范围为0.58-9463U/ml,而应用ELISA试剂盒检测线性范围只有18.48-591.4U/ml。此外,该方法的抗CCP抗体检测限可达0.5U/mL。回收率为96.45-104.63%。用BAS-TRFIA和ELISA法测得的值具有很好的相关性(R2=0.892 7)。结论本研究数据表明我们的建立的BAS-TRFIA法在测定抗CCP抗体上较传统ELISA试剂盒有很大改进,为RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。  相似文献   

4.
结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.  相似文献   

5.
目的建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法用改良过碘酸钠氧化法制备c-erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物(A18-HRP),经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素(B io-WGA)及链霉亲和素(SA)的最适浓度(或稀释度),建立了检测p185糖链的凝集素ELISA,用所建立的方法检测血清p185糖链,免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性(P>0.05)。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86.7%,特异度为94.6%,准确度为91.9%。结论本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高,临床具有实用价值。  相似文献   

6.
BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1]。国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备。我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍。一、材料和方法1.材料 PSA及兔抗PSA血清见文献[2];活化生物素及链霉亲和素(SA),章谷生教授惠赠。2.方法(1)活化生物素标记兔抗PSA及最佳条件选择 活化生物素用二甲基酰胺法标记兔抗PSA。经多次棋盘滴定确定,每mg抗体标记150μg活化生物素最好,抗体最佳包被浓度为2.5μg/ml,Bio-Ab最适工作滴度为1∶300。(2)SA…  相似文献   

7.
目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析(biotin.streptavidinamplifiedELISA,BA.ELISA)法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0.12mg/mE,线性范围为0.12~20ng/mL,回收率为98.59%。分析内和分析间变异系数分别为4.9%~16.8%和7.1%~14.9%。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0.5ng/mL时,敏感性和特异性分别为100%和96.0%。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。  相似文献   

8.
笔者曾经成功地应用德国BoehringerManheim公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素-链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被,采用的是一种直接包被方法,即将链霉亲和素溶于去离子水,冰箱过液包被24h,并应用到地高辛的临床检测中,其灵敏度为0.0781μg/L,最低检测限为0.1952μg/L,测定三份低、中、高浓度血清标本,批内变异系数分别为8.7%  相似文献   

9.
前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1].国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备.我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍.  相似文献   

10.
目的 建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法 用改良过碘酸钠氧化法制备c—erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物(A18-HRP),经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素(Bio—WGA)及链霉亲和素(SA)的最适浓度(或稀释度),建立了检测p185糖链的凝集素ELISA,用所建立的方法检测血清p185糖链,免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果 乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照(P〈0.01),免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照(P〈0.01),乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性(P〉0.05)。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86.7%,特异度为94,6%,准确度为91.9%。结论 本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高,临床具有实用价值。  相似文献   

11.
目的 研究血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平与肝纤维化程度的关系。方法 采用放射免疫法对77例慢性乙型肝炎肝组织活检患的血清HA、PCⅢ、LN、Ⅳ-C水平进行检测,对肝组织进行纤维化分期,分析上述血清指标水平与肝组织学诊断和肝纤维化分期之间的关系。结果 四项指标水平与慢性肝炎发展的阶段一致,在肝硬变阶段处于最高水平,与肝组织纤维化程度亦一致,在纤维化分期S4水平最高,显示良好的正相关。结论 血清HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN可以作为反映肝纤维化程度的指标。  相似文献   

12.
目的研究内脂素(vaspin)水平与非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者肝纤维化指标及胰岛素抵抗指数(IRI)的关系。方法采用酶联免疫吸附检测(ELASA)法对NAFLD组和对照组的内脂素及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(PCⅣ)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)水平进行检测,采用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IRI)评估胰岛素抵抗。结果NAFLD组内脂素显著低于对照组(0.76±0.45)g/Lvs(1.31±0.82)g/L;肝纤维化指标PCⅢ、HA、PCⅣ、LN及HOMA-IRI显著高于对照组(136.42±36.32)μg/Lvs(98.16±23.71)μg/L,(95.33±37.63)μg/Lvs(69.26±29.16)μg/L,(75.52±32.56)μg/LVS(57.64±16.21)μg/L,(127.27±31.53)μg/Lvs(102.43±27.14)μg/L,3.19+1.23vs1.84±0.71(均P〈0.05);HOMA—IRI与PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著正相关(均P〈0.05),内脂素水平与WHR、BMI、FBG、TG、FINS、HOMA-IRI、PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著负相关(P〈0.01或〈0.05)。结论NAFLD患者血清内脂素水平降低,内脂素的表达在NAFLD患者肝纤维化与胰岛素抵抗进程中可能起抑制作用。  相似文献   

13.
目的探讨可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)检测在慢性乙肝(CHB)患者肝纤维化分期诊断中的应用价值。方法选择2018年4月至2020年4月我院收治的70例CHB患者作为研究组,另选同期我院70名体检健康者作为对照组。研究组均行肝穿刺活检,根据患者肝纤维化分期进行讨论。比较两组血清suPAR、PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平及不同肝纤维化分期CHB患者血清suPAR、PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平,采用Pearson相关性分析CHB患者血清suPAR水平与血清PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LB水平的相关性。结果研究组血清suPAR、PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平均显著高于对照组(P<0.05)。随着肝纤维化程度的加重,CHB患者血清suPAR、PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平均不断升高,不同肝纤维化分期CHB患者血清suPAR、PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平两两比较,差异显著(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,CHB患者血清suPAR水平与血清PⅢNP、Ⅳ-C、HA、LN水平呈正相关(P<0.05)。结论血清suPAR可作为CHB肝纤维化诊断的生物标志物,通过检测CHB患者的suPAR水平可在一定程度上反映肝纤维化程度。  相似文献   

14.
杨莉 《浙江临床医学》2011,13(12):1331-1334
目的 通过检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清TGF-β1、BMP-7水平在肝纤维化不同分期(S)和炎症分级(G)的表达情况,初步探讨其在慢性肝炎肝纤维化发生过程中可能发挥的作用.方法 分别采用ElISA、RIA法检测100例CHB患者、20例健康体检者血清中TGF-β1、BMP-7水平和透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、IV型胶原(IV-C)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)水平.结果 肝纤维化早期,TGF-β,即明显升高、BMP-7显著降低,灵敏度优于HA、LN、Ⅳ-C和PC Ⅲ;随肝纤维化程度的加重.TGF-β1.逐渐升高,与HA、LN、IV-C、PCⅢ均呈正相关(P<0.01),而BMP-7逐渐下降,与HA、LN、IV-C、PCⅢ均呈负相关(P<0.01);TGF-β1 与BMP-7呈负相关(P<0.01);Sperman相关分析显示,血清TGF-β1水平与肝纤维化、炎症分级分期呈正相关(P<0.01),BMP-7与肝纤维化、炎症分级分期呈负相关(P<0.01).结论 TGF-β1和BMP-7密切参与肝纤维化的形成过程,BMP-7可能通过抑制细胞中促纤维化生长因子TGF-β1 信号通道蛋白Smad2/3的活性,从而抑制TGF-β1的表达,二者均可作为早期肝纤维化的诊断指标.  相似文献   

15.
目的 评估血清基质金属蛋白酶抑制剂-1 (TIMP-1)在在肝纤维化诊断中的临床价值.方法 285例慢性乙型肝炎(CHB)患者,根据肝穿刺病理诊断结果分为无明显纤维化组(S0-S1)和明显纤维化组(S2-S4).将病理诊断结果作为金标准,使用ROC曲线评估TIMP-1诊断肝纤维化的敏感度、特异性和符合率,并和肝纤维化标记物HA、PCⅢ、CⅣ、LN比较其诊断性能,结果 对照组、S0-S1组、S2-S4组TIMP-1血清浓度分别为146,6±29.2、161.2±43.2、221.6±93.8 μg/L,对照组和S2-S4组及S0-S1组和S2-S4组间差异有统计学意义(t分别为5.32、4.98,P均小于0.01).TIMP-1区分慢性乙肝明显纤维化和轻度纤维化的ROC曲线下面积(AUC)为0.841(95%CI:0.762~0.920),TIMP-1在临界值为170.3 μg/L时,其敏感度、特异度分别为71.5%、82.4%,高于HA(75.6%、72.5%)、PCⅢ(70.5%、76.5%)、CⅣ(63.6%、78.4%)、LN(79.5%、64.7%).结论 血清TIMP-1诊断肝纤维化有较高的敏感度和特异性,血清TIMP-1可能是预测肝纤维化分期一个较好的指标.  相似文献   

16.
目的分析原发性肝癌患者血清可溶性肿瘤细胞坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平,以及其与肝纤维化指标的相关性。方法 52例原发性肝癌患者纳入原发性肝癌组,63例良性肿瘤患者纳入良性肿瘤组,39例健康体检者纳入对照组,比较各组血清sTRAIL、MMP-3及肝纤维化指标水平,并分析血清sTRAIL、MMP-3及肝纤维化指标[透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)]的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTRAIL、MMP-3水平对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌组血清sTRAIL、MMP-3水平高于良性肿瘤组及对照组,良性肿瘤组血清sTRAIL、MMP-3水平高于对照组,原发性肝癌组HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平高于良性肿瘤组及对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);良性肿瘤组与对照组的HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者血清sTRAIL、MMP-3、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平依次升高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,sTRAIL、MMP-3、sTRAIL+MMP-3的ROC曲线下面积分别为0.686、0.730、0.806。相关分析显示,原发性肝癌患者血清sTRAIL、MMP-3与HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C之间均呈正相关(r=0.501~0.651,P<0.05)。结论血清sTRAIL、MMP-3可能参与原发性肝癌的发生、发展,且与肝纤维化指标呈正相关,对原发性肝癌的早期诊断有重要价值。  相似文献   

17.
目的观察健肝胶囊对慢性乙型肝炎的疗效。方法68例中度慢性乙型肝炎随机分为两组,治疗组给予中药自拟方健肝胶囊口服,每日三次,每次6~8粒,连服1个月为一疗程,根据病情可连服2~3个疗程;对照组给服大黄蛰虫丸,疗程同前。在服药期间定期查肝功能、γ球蛋白、血清透明质酸、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原和层粘蛋白。结果治疗组丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和总胆红素下降速度明显快于对照组;自觉症状的改善情况也好于对照组:三个疗程后治疗组各项肝纤维化指标以及γ球蛋白均较治疗前显著下降(P<0.01),而对照组变化不甚明显。结论健肝胶囊对慢性肝炎有良好的抗纤维化和改善肝功能作用。  相似文献   

18.
目的 探讨血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)对自身免疫性肝病(ALD)患者肝纤维化诊断及鉴别的意义.方法 采用增强化学发光免疫分析法对37例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者、25例自身免疫性肝炎(AIH)患者、33例肝硬化患者、37例病毒性肝炎患者及20例健康体检者血清HA、PCⅢ、CⅣ、LN进行检测,并对部分患者在治疗6个月后再次检测上述指标,同时和部分肝功能指标进行相关性分析.结果 ALD患者4项肝纤维化指标均高于健康对照组(均P<0.05);AIH组4项指标均高于病毒性肝炎组(均P<0.01),ROC曲线下面积分别为0.823、0.849、0.824和0.830; PBC组CⅣ和LN低于肝硬化组(P<0.05);两组ALD患者在经治疗6个月后,上述指标均明显下降(均P<0.05).结论 肝纤维化血清标志物HA、PCⅢ、CⅣ和LN对于ALD患者肝纤维化的诊断及和病毒性肝炎的鉴别具有一定价值,并能间接反映肝脏炎症的情况.  相似文献   

19.
目的 观察阿德福韦酯联合安络化纤丸治疗慢性乙型肝炎(CrHB)肝纤维化的疗效.方法 选取115例CHB患者,随机分为中药组(38例),西药组(38例)和结合组(39例).中药组口服安络化纤丸;西药组单用阿德福韦酯(ADV);结合组给予两种药物联合使用.检测治疗前和治疗24周后3组的血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、血清透明质酸(HA)、血清层粘连蛋白(LN)和血清Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)的含量变化.结果 疗程结束后,结合组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和血清总胆红素(TBil)均显著低于中药组和西药组,白蛋白(Alb)显著高于中药组和西药组(P<0.05);结合组患者HBV-DNA转阴率为61.54%(24/39),与中药组和西药组比较,差异有统计学意义(P<0 05);3组的血清肝纤维化四项指标(PCⅢ、C-Ⅳ、LN及HA)均有不同程度地下降,与中药组和西药组比较,结合组治疗后肝纤维化四项指标显著下降(P<0.05或P<0.01).结论 中西医结合治疗可促进CHB患者肝功能恢复,降低肝纤维化程度,其疗效优于单用中药或单用西药治疗.  相似文献   

20.
目的:探讨兰州地区慢性乙型肝炎(CHB)患者肝纤维化四项指标:层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原 N 端肽(PⅢNP)与乙型肝炎病毒(HBV)DNA 复制的相关性。方法分别采用化学发光法和实时荧光定量 PCR (RT-PCR)法检测肝纤维化指标和 HBV-DNA,以不同临床分型和自然史分期为背景,对兰州地区724例 HBV 感染者的肝纤维化指标和病毒复制作量化检测研究。结果在所有临床类型中,肝纤维化指标和 HBV-DNA 数值均高于正常,且最高为乙型肝炎肝硬化组;CⅣ、PⅢNP 均以 HBeAg(+)CHB 组最高。按乙型肝炎自然史分期,P ⅢNP、CⅣ在免疫清除期最高且 CⅣ在HBeAg 及 HBV-DNA(+)组中均值都高于 HBeAg 及 HBV-DNA(-)组。四项指标均为 HBeAg(+)CHB 组高于 HBeAg(-) CHB 组,但仅有 HA 有统计学差异(P <0.01)。结论 CⅣ与 HBV-DNA 以及 HBV-M 具有一定相关性,提示其可以间接反映肝损害程度以及病毒复制水平。  相似文献   

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