结核病血清学诊断抗原的研究进展

应用于结核病血清学诊断的理想抗原应具有种的特异性及强的免疫原性。目前已获得大量纯化和特异的抗原。本文综述了结核病血清学诊断抗原的现状和进展。     

结核分支杆菌MPT63抗原的表达及其血清学诊断价值的研究

目的：获得结核分支杆菌重组MPT63蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。寻找更有效的结核病诊断试剂,方法：应用基因工程技术表达,纯化MPT63蛋白,通过Western blotting和免疫双扩散试验春抗原性,通过斑点免疫试验,结明试验和结核病一步法检测血清中的抗结核抗体。结果：重组质粒pET24b-MPT63测序表明具有正确的编码序列,MPT63蛋白在大肠杆菌细胞内以可溶性蛋白的形式高效率表达,表达量占菌体总蛋白的40％左右,分子量的kDa,Western blotiing和免疫双扩散试验检测抗结核,抗体的阳性率分别为46．7％和50％,结核病一步法检测的阳性率为70％,结明试验的阳性率为80％,在34例正常血清中,MPT63和PPD斑点免疫试验检测抗结核抗体的阳性率分别为38．2％和35．3％,结论病一步法检测的阳性率也为23．5％,结论：pET24b-MPT63大杆菌工程菌能以可溶性蛋白的形式高效表达,重组的MPT63也许可作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。     

Span—1抗原血清学检测对胰腺癌诊断的临床意义

应用放射免疫法对２３例胰腺癌患者，１９例胰腺良性疾病患者及２１例正常人血清中胰腺癌相关抗原进行了检测。结果：正常人血清Ｓｐａｎ－１抗原含量极低，以药盒所规定的，界限值为标准，无１例阳性。     

免疫胶体金法检测MPB64抗原在结核病实验室诊断中的价值

目的通过与传统的结核病实验室诊断方法（直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养、PCR）的比较,评价免疫胶体金法检测结核杆菌MPB64抗原在结核病快速诊断中的应用价值。方法收集158例确诊为结核病患者的临床标本,分别用直接涂片抗酸染色、改良罗氏培养基培养、PCR、免疫胶体金法检测米氏7H9培养产物中的MPB64抗原检测结核分支杆菌,并对结果进行比较分析。结果涂片阳性率为10.76%,改良罗氏培养阳性率为20.89%,PCR检测阳性率为56.33%,免疫胶体金法检测阳性率为41.14%。结论免疫胶体金法检测米氏7H9液体培养产物中的MPB64抗原可以作为一种较为敏感、快速简便的检测结核分支杆菌感染的方法,有助于结核病临床快速诊断。     

接种卡介苗后小儿结核标志物的检测

对６２例接种卡介苗后的小儿进行结核标志物检测，并同时与结核菌素试验进行对比观察。结果表明，结核菌素试验阴性２９例阳性３３例（硬结直径≥５ｍｍ／４８～７２ｈ）；结核标志物检测阴性６１例，阳性１例。临床证实无活动性结核灶者，结核标志物均为阴性。提示小儿期接种卡介苗成功与否，对结核标志物的检测无影响。而对活动性结核病的诊断，结核标志物的检出更有意义。     

B淋巴细胞对卡介苗颗粒性抗原的递呈作用

The possibility of human B lymphocytes to process and present BCG particulate antigen to BCG specific T cell line was studied. It was found that about 6% of B cells after incubated with BCG for 24 h, showed BCG bacilli in their cytoplasm, by acid fast stain, and became obscure 48 h later. These results demonstrated that human B lymphocytes could phagocytose, process, and degrade BCG particulate antigen. The BCG pulsed B cells acted as antigen presenting cells to BCG specific T cell line. The proliferation and IL-2 production of specific T cell line were significantly enhanced by BCG pulsed B cell stimulation. It was evident that BCG antigen was presented to T cell lines by B cell. The activity of BCG pulsed B cell was time depending. By treating B lymphocytes with chloroquine which interferes with normal lysosome functions could completely inhibit the proliferation of BCG specific T cell line when B lymphocytes were pulsed with BCG or express of BCG. The results revealed that B cells must process antigen before presenting antigen to T cells. It is concluded that B lymphocytes can phagocytose, process and present relevant determinants of BCG particulate antigen to BCG specific T cell line, and that human B lymphocytes may play an important role in the anti-tuberculous immunity in vivo, at least as antigen presenting cells. To pursue the study of this problem, it is suggested to use B lymphocytes deficient mice as experimental models for further investigation.     

鸡尾酒抗原在结核病诊断中的价值

目的探讨多种结核特异性抗原联合应用在结核病诊断中的价值。方法分别以结核菌的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)和38kDa、16kDa特异蛋白做抗原,比较两种胶体金方法在结核病诊断上的敏感性和特异性。结果以脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)为抗原的方法的敏感性为51.6%,特异性为65%;采用三种结核菌特异蛋白做抗原的方法的敏感性为88.3%,特异性为91.7%。结论鸡尾酒抗原(即联合采用多种结核特异性抗原)可提高结核病诊断的敏感性和特异性。     

单抗N-35相关肿瘤抗原血清学分布的实验研究

目的 了解单抗N-35识别的肿瘤相关抗原在不同人群血清中分布的差异和意义.方法 分别采用免疫印迹法和免疫沉淀法用单抗N-35对60例恶性肿瘤患者,30例良性病变者和30例健康体检者的血清进行肿瘤相关抗原的检测.结果 免疫印迹法和免疫沉淀法检测的阳性率在下列组中分别为:早期恶性肿瘤63.33%、66.67%,中晚期恶性肿瘤均为56.67%,良性病变13.33%、16.67%,健康人0%;免疫印迹和免疫沉淀检测结果无明显差别;单抗N-35对应抗原在健康人、良性病变与肿瘤患者血清问的分布差异有显著性(P<0.01),在健康人和良性病变患者血清中的分布差异无显著性(P>0.05),在恶性肿瘤早期和中晚期患者血清中的分布差异无显著性(P>0.05).结论 单抗N-35识别的肿瘤相关抗原主要存在恶性肿瘤患者的血清中,很少存在于良性病变患者血清中,不存在于健康人血清中.提示单抗N-35可作为筛查恶性肿瘤的候选抗体而进行临床应用开发.使用免疫印迹法可减少操作步骤,达到检测目的.     

重组结核分枝杆菌38KDa蛋白抗原制备及其血清学诊断价值

目的通过基因工程技术获取纯化的结核分枝杆菌重组38KDa蛋白并评价其血清学诊断价值。方法在大肠杆菌中表达38KDa蛋白，通过亲和层析纯化并复性后用于ELISA检测结核患者血清中特异性抗结核抗体。结果38KDa蛋白表达量占总蛋白的22．80％，以包涵体的形式存在。纯化复性后的蛋白抗原检测54例肺结核患者敏感性为62．96％，其中检测痰涂阳性和痰涂阴性患者的敏感性分别为64.29％和62．50％，二者无显著性差异（X^2=0.02，P〉0．05），检测38KDa抗体特异性为84．38％。另外，通过与结核蛋白芯片检测，结果比较发现研制的重组38KDa蛋白免疫活性与国外进口的蛋白免疫活性相当。结论制备的重组38KDa蛋白抗原具有血清学诊断价值，可用于结核病诊断试剂的开发。     

三种血清学快速检测方法对肺外结核和结核感染诊断价值的评价

目的：为了评估三种种清学快速检测方法对肺外结核和结核感染的诊断价值。方法：用结明试验，一步法和ＩＣＴ－ＴＢ卡检测了６８例肺外结核和２０例结核感染者血清抗结核抗体，并与肺结核组，非结核对照组和正常对照组做比较。结果：结核感染组结明试验，一步法检测和ＩＣＴ－ＴＢ卡诊断阳性率分别为７０％、６０％和２０％，肺外结核组诊断阳性率分别为８３。８％、７６．４％和５２．９％。三种方法联合检测总阳性率达９６．５％，     

泰宁县584名儿童结核菌素试验结果分析

目的：了解我县儿童接种卡介苗接种的免疫情况。方法：1999年7－8月,以城区范围内卡介苗接种16周以后的1－4岁儿童为对象进行结核菌素试验,72小时后查验反应结果。注射部位硬结反应≥5mm为阳性反应,同时记录儿童接种卡俚苗后的卡痕大小。结果：我县城区1－4儿童结核菌素试验阳转率为45．9％,其中0－岁组儿童结核菌素是性转变达88．9％,对结核病的免疫水平较低。结核菌素试验阳性率性别间无显性差异。止痕＜5mm的儿童,1－4岁年龄组的结核菌素阳性转率逐渐增大,结论：城区中存在一定的传染源,对阳性转率较低的原因应进行探索并提出预防方法和措施。     

Ag85B-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗效果研究

目的评价Ag85B-卡介苗重组疫苗对结核病的预防及治疗效果。方法将小鼠随机分为6组,A、B、C为预防组,D、E、F为治疗组,A、D组为Ag85B-卡介苗重组疫苗免疫组,B、E组为BCG免疫组,C、F组为生理盐水对照组。通过研究各组小鼠在实验中的血清抗体水平、细胞免疫功能等指标以及体重变化、半数死亡时间、2个月死亡率、大体病变等,评价Ag85B-卡介苗重组疫苗在小鼠结核分枝杆菌感染的预防及治疗成效。结果在注射结核分枝杆菌后,各组小鼠体重平均增长明显减慢,C、F组增长最慢。A、B、D、E组与C、F组相比能延长半数死亡时间,降低一定时间内的死亡率。小鼠脏器大体病变各组之间无显著差别。A、B、D、E 4组小鼠,肺脏的结核分枝杆菌生长培养最低稀释度集中在105,肝脏、脾脏结核分枝杆菌生长培养最低稀释度集中在104。C、F组小鼠,肺脏结核分枝杆菌生长的培养最低稀释度集中在106,肝脏、脾脏结核分枝杆菌生长的培养最低稀释度集中在105。各组间的抗体检测及淋巴细胞增殖实验结果无显著差别。结论 Ag85B-卡介苗重组疫苗与卡介苗对于结核分枝杆菌感染的预防作用无显著区别,Ag85B-卡介苗重组疫苗和卡介苗对结核病无明显的治疗效果。     

T.spotTB联合结核抗体检测在结核病诊断中的应用价值

目的探讨T.spot TB联合结核抗体检测在结核病诊断中的应用价值。方法选择我院于2016年5月~2017年5月期间收治的结核病患者89例(结核组),非结核呼吸系统患者74例(非结核组);另选择我院2016年5月~2017年5月期间健康体检者50例作为对照组。观察采用T.spot TB、结核抗体检测结核病的阳性率及联合检测灵敏度和特异度。结果 T.spot TB检测结核组阳性率高于非结核组和对照组,非结核组阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);结核抗体检测结核组阳性率高于非结核组和对照组,非结核组阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);T.spot TB联合结核抗体检测结核组阳性率高于非结核组和对照组,非结核组阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);T.spot TB联合结核抗体检测灵敏度和特异度高于T.spot TB、结核抗体。结论T.spot TB联合结核抗体检测在结核病诊断中具有重要价值,诊断阳性率较高,且联合诊断灵敏度和特异度较高。     

BCG皮试对儿童结核病诊断价值的初步探讨

目的：探讨ＢＣＧ皮试对儿童结构病的诊断和辅助诊断价值。方法：对６８例肺结核、 １８例结核性脑膜炎、３８例伴有不同程度营养不良肺结核儿童进行了检测，并与ＰＰＤ皮试进行了比较。结果：ＢＣＧ皮试总阳性率为９１．１３％，明显高于ＰＰＤ皮试（Ｐ＜０．０１）。ＢＣＧ皮试不受年龄、营养状况、感染类型和感染部位的影响，亦未见任何并发症，同时经济、简便易行。结论：ＢＣＧ皮肤试验可作为儿童结核病的诊断和辅助诊断方法之一，特别是在基层医院的临床实践中。     

结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病

目的 研究结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果.方法 用结核分支杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成两组,第一组用Ag85A质粒DNA疫苗治疗12周,第二组用利福平、异烟肼和结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数.结果 小鼠感染1个月后,肺内菌量可达到109CFU,脾内菌量达到107CFU.治疗结束后4周,第二组小鼠体重均超过第一组,肺、肝、脾脏指数(0.013,0.047,0.011)明显低于第一组(0.017,0.062,0.017),但差异元显著性(P＞0.05).第二组肺脏病变程度较轻,有2/4未见明显病变,脾脏均未见明显病变;而第一组脾脏仅1例未见明显病变.第二组小鼠肺内无菌生长,而第一组肺菌落数为1.2×106 CFU;第二组小鼠脾菌落数为4.4×103 CFU,比第一组脾菌落数(1.9×105 CFU)减少了42倍.结论 结核分支杆菌Ag85A质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病比单纯疫苗治疗疗效明显.     

结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达,分子量（30.3kDa）与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%（45/48）和35.7%（30/84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。     

Ipr1重组卡介苗对小鼠结核病的治疗效果

目的 评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果.方法 BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2周后用人型Mtb H_(37),Rv标准株感染所有小鼠;感染后分别用PBS、BCG和重组BCG治疗7次;末次治疗后处死小鼠,检测肺脾荷菌量,肺脾脏器指数,血清IFN-γ、IL-10及TNF-α分泌水平和肺脾组织中Ipr1的表达,同时观察小鼠肺脾组织病理改变情况.结果 重组BCG组肺脾荷菌量比PBS组和BCG组显著降低(P<0.01);重组BCG组肺脾脏器指数比PBS组和BCG组显著降低(P<0.05);重组BCG组血清IFN-γ分泌水平比PBS组和BCG组显著升高(P<0.01).用免疫组化检测到小鼠肺睥组织中有Ipr1表达.PBS组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛;重组BCG组肺部病变最轻,肺泡结构基本正常;BCG组病变范围局限,病变程度界于PBS组与重组BCG组之间;各组间比较脾脏病理改变不明显.结论 携带小鼠Ipr1基因的重组BCG对结核分枝杆菌感染有一定的治疗作用.     

卡介菌多糖核酸辅助治疗复治肺结核的临床观察

目的探讨卡介菌多糖核酸对复治肺结核的治疗疗效。方法分析比较卡介菌多糖核酸加抗结核药物联用及单纯抗结核药物治疗复治肺结核的疗效。结果对照组痰菌阴转率72.5%,病灶吸收好转率50.0%,空洞闭合率52.2%;治疗组中痰菌阴转率χ2=5.9 968,P<0.05,病灶吸收好转率χ2=10.3 075,P<0.01,空洞闭合率χ2=6.1 940,P﹤0.05。抗结核药物加卡介菌多糖核酸较单纯抗结核药物的疗效好。结论卡介菌多糖核酸注射剂与化疗药物联合应用可提高治疗耐多药结核病及其他难治复治病例的疗效,使用安全,并可提高耐多药结核病患者的免疫功能。     

草分枝杆菌疫苗辅助治疗耐多药肺结核临床及免疫功能观察

目的 :观察草分枝杆菌疫苗对耐多药肺结核辅助治疗的临床疗效。方法 :采用配对的方法将 60例耐多药肺结核患者分为 :化疗 +草分枝杆菌疫苗组 ( M组 )及单纯化疗组 ( C组 )。 M组除化疗外 ,给予草分枝杆菌疫苗 :1 7.2μg,1次 /周 ,臀深部肌肉注射 ,共 1 0次。结果 :M组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞直径缩小率分别为 60 %、80 %、5 0 .2 % ,明显高于 C组的 30 %、47%、1 1 % ( P<0 .0 1 )。细胞免疫学指标 CD3+ 、CD4 + 、CD4 + /CD8+ 、IFN-γ、IL - 2水平比治疗前明显提高 ( P<0 .0 1 )。结论 :M组比 C组对耐多药肺结核患者治疗可改善患者细胞免疫功能 ,提高临床治疗效果     

结核分枝杆菌fbpB基因植物表达载体的构建及鉴定

目的:构建结核分枝杆菌fbpB基因的植物表达载体,为在植物中表达该基因奠定基础。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增fbpB编码基因,然后将其克隆到植物表达载体pBI121上,并进行鉴定。结果:重组载体经菌液PCR鉴定为阳性克隆后再经双酶切鉴定可见约13kb和1kb的2条特异性条带,与预期大小相一致,测序结果表明克隆的fbpB基因序列与Genbank上公布的相一致。结论:成功构建了fbpB基因的植物表达载体,为研制和开发新型的结核疫苗打下坚实的基础。